Результат интеллектуальной деятельности: СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РАСТЕНИЙ-РЕГЕНЕРАНТОВ ЗЕМЛЯНИКИ (IN VITRO)

Изобретение относится к сельскохозяйственной биотехнологии и может быть использовано для массового получения качественного посадочного материала ценных сортов и гибридов земляники в питомниководстве и селекционных работах.

Известен способ получения растений-регенерантов земляники (патент СССР №1658929 А1, МПК⁵ А01Н 4/00, Бюл. №24 - М., 1991), согласно которому эксплантами являлись верхушечные и латеральные почки. Растения подвергают суховоздушной терапии, а затем освобождают от патогенной микрофлоры путем обработки побегов горячей водой.

Недостатком данного способа (аналога) является сложность проведения стерилизации растительного материала. Земляника является почвопокровным растением, поэтому получение стерильного и жизнеспособного материала при введении в культуру in vitro почек вегетативного побега представляет большую трудность. Согласно данному способу гибель эксплантов после обработки составляет 23,5%.

Наиболее близким к предлагаемому является способ получения растений-регенерантов земляники методом дифференциации почек в ткани экспланта, где в качестве эксплантов используют листовые диски, полученные от растений, размножаемых in vitro (Sorvari S., Ulvinen S., Hietaranta Т., Hiirsalmi Н. Preculture medium promotes direct choot regeneration from mikropropagatied strawberry leaf disks// Hort Science, 1993, V.28, N.1, P.55-57). Данный способ позволяет исключить этап стерилизации эксплантов, так как исходные растения размножаются микроклонально. Для увеличения выхода регенерантов у земляники проводят предкультивирование на питательной среде, содержащей 6-бензиламинопурин (БАП) 0,5 мг/л, 3-индолилмасляную кислоту (ИМК) 0,5 мг/л. Это ускоряет морфогенез на листовых дисках и увеличивает количество сформировавшихся побегов от 1,5 до 9,9 на один эксплант.

Недостатками данного способа (прототипа) является низкий процент эксплантов (56,3-75%), регенерировавших побеги. При этом способе необходимо иметь введенные в культуру in vitro исходные растения.

Заявляемый способ получения растений-регенерантов земляники in vitro, за счет ускорения получения регенерантов, методом дифференциации почек в ткани экспланта, где в качестве эксплантов используются фрагменты цветоложа и цветоножки;

- упрощает этап стерилизации и увеличивает процент жизнеспособности эксплантов;

- увеличивает эффективность процесса, тиражируемость, высокая приживаемость, низкая инфицируемость эксплантов;

- увеличивает коэффициент размножения, что позволяет применять в промышленном размножении.

Сущность изобретения заключается в том, что в способе получения растений-регенерантов земляники in vitro используют в качестве эксплантов фрагменты цветоложа и цветоножки, взятых из цветов земляники, в фазе бутонизации, промывают 15-25 минут, стерилизуют 0,1% раствором сулемы 10 минут, затем трижды промывают стерильной дистиллированной водой, цветоложе освобождают от чашелистиков и лепестков, разрезают на фрагменты 5×5 мм, цветоножку отделяют от цветка, отрезают фрагмент длиной 5 мм, затем фрагменты помещают срезом на питательную среду.

Способ реализуют следующим образом:

Цветки земляники берут в фазе бутонизации. Перед стерилизацией промывают под проточной водой в течение 15-25 минут. Стерилизацию проводят в условиях ламинар-бокса 0,1% раствором сулемы 10 минут. Затем трижды промывают стерильной дистиллированной водой. Этот способ стерилизации позволяет получить 95% эксплантов «стерильными» и жизнеспособными. Цветоложе освобождают от чашелистиков и лепестков, разрезают на фрагменты 5×5 мм и помещают срезом на питательную среду. Цветоножку отделяют от цветка, отрезают фрагмент длиной 5 мм и также помещают на питательную среду. Питательные среды готовят по прописи Мурасиге-Скуга, содержащей 20 мкМ БАП и 1 мкМ ИМК. Через 20-30 суток на месте среза у эксплантов цветоножки появляются побеги (Фиг.1, Геммогенез у эксплантов цветоножки земляники). Побеги фрагментов регенерируют из завязей и тканей цветоложа (Фиг.2, Геммогенез у эксплантов цветоложа земляники). Образовавшийся конгломерат легко делится на одиночные побеги, которые пересаживают на среды размножения, содержащие 0,5-1 мкМ БАП. Укореняют побеги на безгормональной среде Мурасиге-Скуга. Число побегов на один эксплант составляет от 10 до 15 штук.

В результате использования данного способа получения растений-регенерантов земляники от одного экспланта за 3 месяца культивирования получают около 200 штук растений-регенерантов, морфологически идентичных материнским экземплярам.