Результат интеллектуальной деятельности: СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ИНФЕКЦИОННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ, ВЫЗВАННЫХ ВИРУСОМ ГРИППА С ТИПОМ ПОВЕРХНОСТНОГО АНТИГЕНА H5N1, И ЛЕКАРСТВЕННОЕ СРЕДСТВО ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ИНФЕКЦИОННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ, ВЫЗВАННЫХ ВИРУСОМ ГРИППА С ТИПОМ ПОВЕРХНОСТНОГО АНТИГЕНА H5N1

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для эффективного лечения и профилактики инфекционных заболеваний, вызванных вирусом гриппа с типом поверхностного антигена H5N1, у детей и взрослых, домашних животных и птиц.

Из уровня техники известен способ лечения гриппа путем использования препарата «Интерферон таблетки 4000 ME» (RU 2005132848 A, А61К 39/395, 2008). Однако этот способ малоэффективен при лечении инфекционных заболеваний, вызванных вирусом гриппа с типом поверхностного антигена H5N1.

Известно также противовирусное лекарственное средство препарат «Тамифлю» (международное непатентованное название действующего вещества: озельтамивира фосфат), производитель: F.HOFFMANN-LA ROCHE Ltd., рекомендованное Всемирной Организацией Здравоохранения для лечения гриппа А с типом поверхностного антигена H5N1 (см.. Птичий грипп. Информационный бюллетень. ВОЗ. Февраль 2006; http://www.who.int/mediacentre/factsheets/avian_influenza/ru/). К недостаткам данного препарата можно отнести наличие побочных эффектов.

Также известно противовирусное лекарственное средство в виде капель потенцированного водного раствора моноклональных антител к гамма-интерферону С 12, которое может быть использовано для лечения ОРВИ (RU 2181297 С2, А91К 39/395, 2002), но его эффективность для лечения гриппа с типом поверхностного антигена H5N1 как у человека, так и у домашних животных и птиц, не очевидна.

Кроме того, из уровня техники также известно лекарственное средство для лечения инфекционных заболеваний домашних животных и способ лечения (RU 2326694 C1, A61K 39/395, 2008). Однако данное решение при сложности приготовления лекарственного средства малоэффективно при лечении инфекционных заболеваний у животных, вызванных вирусом гриппа с типом поверхностного антигена H5N1, а его пригодность для лечения человека не очевидна.

Изобретение направлено на создание универсального, эффективного и безопасного способа лечения инфекционных заболеваний, вызванных вирусом гриппа А с типом поверхностного антигена H5N1, и препарата с противовирусной и иммуномодулирующей активностью, обеспечивающего эффективное лечение и профилактику инфекционных заболеваний, вызванных вирусом гриппа А с типом поверхностного антигена H5N1 как у детей и взрослых, так и у домашних животных и птиц.

Решение поставленной задачи обеспечивается тем, что в способе лечения и профилактики инфекционных заболеваний, вызванных вирусом гриппа с типом поверхностного антигена H5N1, у человека, домашних животных и птиц, согласно изобретению используют действующую субстанцию, в виде гомеопатически активированной - потенцированной формы, полученной путем многократного последовательного разведения матричного раствора аффинно очищенных антител к гамма-интерферону человека и промежуточного внешнего воздействия.

Кроме того в способе лечения используют активированную - потенцированную форму действующей субстанции, которая получена из матричного раствора аффинно очищенных антител к гамма-интерферону человека с концентрацией 0,3÷5,0 мг/мл.

При этом действующая субстанция включает смесь различных гомеопатических разведении, предпочтительно, сотенных С 12, С 30, С 50 или С 12, С 30, С 200.

Кроме того, решение поставленной задачи обеспечивается также тем, что лекарственное средство для лечения и профилактики инфекционных заболеваний, вызванных вирусом гриппа с типом поверхностного антигена H5N1, согласно изобретению включает действующую субстанцию в виде гомеопатически активированной - потенцированной формы аффинно очищенных антител к гамма-интерферону человека.

При этом гомеопатически активированная - потенцированная форма действующей субстанции лекарственного средства получена из матричного раствора аффинно очищенных антител к гамма-интерферону человека с концентрацией 0,3÷5,0 мг/мл.

Причем лекарственное средство может включать смесь различных гомеопатических разведении, предпочтительно, сотенных С 12, С 30, С 50. или С 12, С 30, С 200.

Терапевтическая эффективность заявленного решения в отношении вирусов гриппа с типом поверхностного антигена H5N1 как для лечения человека, так и для лечения животных и птиц, обусловлена иммуномодулирующим и противовирусным действием гомеопатически активированной - потенцированной формы аффинно очищенных антител к гамма-интерферону человека. При этом лекарственное средство заявленного состава снижает концентрацию вируса в пораженных тканях, влияет на систему эндогенных интерферонов и сопряженных с ними цитокинов, индуцирует образование эндогенных «ранних» интерферонов (ИФН α/β) и гамма-интерферонов (ИФН γ). Кроме того, препарат стимулирует гуморальный и клеточный иммунный ответ, повышает продукцию антител (включая секреторный IgA), активирует функции Т-эффектов, Т-хелперов (Tx), нормализует их соотношение, повышает функциональный резерв Tx и других клеток, участвующих в иммунном ответе, является индуктором смешанного Tx1 и Tx2-типа иммунного ответа: нормализует выработку цитокинов Tx1 (ИФН γ, ИЛ-2) и Tx2 (ИЛ-4, 10), нормализует (модулирует) баланс Tx1/Tx2 активностей., повышает активность фагоцитов и естественных клеток-киллеров (ЕК клеток), что обуславливает противовирусную активность препарата в отношении вирусов гриппа с типом поверхностного антигена H5N1.

Причем в отличие от действия терапевтических доз известных препаратов, в том числе и на основе интерферона, применение сверхмалых доз разведении активированной - потенцированной формы антител к гамма-интерферону человека не вызывает побочных эффектов, к заявленному препарату не развивается резистентность, что обуславливает возможность его использования для длительной безопасной и эффективной противовирусной профилактики. Кроме того, заявленный препарат характеризуется отсутствием побочных эффектов при сохранении терапевтического действия, экологической чистотой и низкой себестоимостью и расширяет арсенал лекарственных средств, предназначенных для лечения гриппа с типом поверхностного антигена H5N1 у человека, животных и птиц.

Лекарственный препарат может быть приготовлен на основе поликлональных или моноклональных антител к гамма-интерферону человека, полученным по известным методикам.

Методика получения поликлональных и моноклональных антител описана, например, в книге: Иммунологические методы/ под ред. Г. Фримеля, М., Медицина, 1987, с.9-33, или, например, в статье Laffly Е., Sodoyer R. Hum. Antibodies. Monoclonal and recombinant antibodies, 30 years after. - 2005 - Vol.14. - N 1-2. P.33-55.

Методика получения рекомбинантных антител описана, например, в статье Laffly Е., Sodoyer R. Hum. Antibodies. Monoclonal and recombinant antibodies, 30 years after. - 2005 - Vol.14. - N 1-2. P.33-55. Методика получения антител к гамма-интерферону человека описана, например, в статье Monoclonalantibodies to human-γ: production, affinity, purification and radioimmunoassay. - The EMBO Journal, Vol.2, No. 9, p.1527-1530, 1983.

Для получения поликлональных иммунных антител, а также в гибридомной технологии для получения рекомбинантных моноклональных антител в качестве иммуногена для иммунизации лабораторных животных может быть использован гамма-интерферон человека, в том числе рекомбинантный, или фрагмент или смесь различных фрагментов гамма - интерферона человека.

Полученные по известным методикам антитела к гамма-интерферону человека очищают, преимущественно, методом аффинной хроматографии.

Для реализации заявленного решения, например, для исследовательских целей могут быть также использованы готовые антитела к гамма-интерферону человека, производимые различными фирмами, например:

- Anti-Interferon-gamma antibody produced in goat; species reactivity: human (см. Каталог «Продукты для исследований в области естественных наук» (SIGMA) на 2008-2009 гг., стр.2153);

- Rabbit polyclonal antibodies to Interferon gamma (Immunogen: Highly pure (>98%) recombinant human Interferon-gamma (см. http://www.abcam.com/Interferon-gamma-antibody-ab9657.html);

- Mouse monoclonal antibodies to Interferon gamma (Immunogen: Recombinant full length protein (Human)) (см. http://www.abcam.comnnterferon-gamma-antibody-ab9658.html);

- Chicken Anti-Human Interferon gamma Polyclonal Antibody, Unconjugated (см. http://www.biocompare.com/ProductDetails/1269192/Chicken-Anti-Human-Interferon-gamma-Polyclonal-Antibody,-Unconjugated.html);

- Rabbit Anti-Human Interferon gamma Monoclonal Antibody, Unconjugated, Clone EP1109Y (см. http://www.biocompare.com/ProductDetails/880680/Rabbit-Anti-Human-Interferon-gamma-Monoclonal-Antibody.-Unconjugated,-Clone-EP1109Y.html) и др.

Предпочтительным для приготовления заявленного лекарственного препарата является использование поликлональных антител к гамма-интерферону человека.

Полученные после очистки методом аффинной хроматографии антитела в фосфатно-солевом буферном растворе с концентрацией 0,3÷5,0 мг/мл (предпочтительно 0,5÷3,0 мг/мл) используют в качестве матричного раствора для приготовления действующей субстанции в виде гомеопатически активированной - потенцированной формы, которую получают путем многократного последовательного разведения матричного раствора аффинно очищенных антител к гамма-интерферону человека и промежуточного внешнего воздействия, предпочтительно по гомеопатической технологии (см., например, Гомеопатические лекарственные средства. Руководство по описанию и изготовлению, В. Швабе, Москва, 1967, с.12-38).

При этом производят равномерное уменьшение концентрации путем последовательного разведения 1 объемной части матричного раствора аффинно очищенных антител к гамма-интерферону человека в 9 объемных частях (для десятичного разведения D) или в 99 объемных частях (для сотенного разведения С) или в 999 объемных частях (для тысячного разведения) нейтрального растворителя с многократным вертикальным встряхиванием каждого полученного разведения и использованием преимущественно отдельных емкостей для каждого последующего разведения до получения требуемой сверхмалой дозы (потенции). Причем первое гомеопатическое разведение производят на нейтральном растворителе: предпочтительно на 10÷15% водном растворе этилового спирта или дистиллированной воде, следующие разведения на 20÷30% водном растворе этилового спирта и конечные (последние два - три) разведения производят на 35÷75% водном растворе этилового спирта или дистиллированной воде.

При использовании в качестве действующей биологически активной - потенцированной субстанции смеси различных, преимущественно, сотенных, разведении (потенций), каждый компонент состава (например, С 12, С 30, С 50 или С 200) приготовляют по отдельности по приведенной выше технологии до их предпоследнего разведения (соответственно, до получения С 11, С29, С49, или С 199) и затем вносят в соответствии с составом смеси в одну емкость по одной части и смешивают с требуемым количеством растворителя (соответственно, с 97 частями для сотенного разведения).

Внешнее воздействие в процессе уменьшения концентрации можно осуществлять как в виде многократного вертикального встряхивания, так и ультразвуком, электромагнитным или иным подобным физическим действием.

Заявленный диапазон концентрации матричного раствора является оптимальным для получения лекарственного препарата с повышенной противовирусной активностью и обусловлен тем, что при концентрации матричного раствора менее 0,5 мг/мл антитела к гамма-интерферону человека при их дальнейшей обработки - потенцировании резко снижают свою специфическую активность (эффективность), стабильность и срок хранения, а использование антител с концентрацией выше 5,0 мг/мл технологически сложно и дорого.

Приготовленная таким образом действующая субстанция в виде гомеопатически активированной - потенцированной формы, может быть использована в общепринятых лекарственных формах, как в виде водоспиртовых растворов, так и для приготовления твердых лекарственных форм.

Пример 1.

Кур инфицировали штаммом гриппа A (H5N1), выделенным во время эпизоотии гриппа среди кур в Новосибирской области, интраназально дозой ЛД90 ВПГ в объеме 0,1 мл. Предварительно (в течение двух соток до инфицирования) и в течение семи суток после инфицирования вводили два раза в сутки действующую субстанцию - смесь водоспиртовых разведений С 12, С30, С200 (1 группа) кроличных поликлональных антител к гамма-интерферону человека, которые приготовлены из матричного раствора с концентрацией 0,5 мг/мл и с конечными разведениями на дистиллированной воде, и дистиллированную воду (2 группа) внутрижелудочно в свободном доступе в поилках вместо воды. После заражения вирусом действующий компонент и дистиллированную воду вводили в свободном доступе в сочетании с интрагастральным введением 2 раза в сутки по 10 мл/курица. Препарат сравнения Тамифлю (группа 3) вводили внутрижелудочно в дозе 4 мг/кг интрагастрально дважды в день за 2 суток до заражения и в течение 5 суток после заражения. Эффективность препаратов оценивали по числу погибших кур и на основании этих данных рассчитывали среднюю продолжительность жизни для каждой группы. В результате эксперимента выявлено, что заявленный препарат и Тамифлю уменьшают падеж кур на четвертый день исследования. При этом количество выживших кур (в группе 1 и группе 3) больше, чем в группе 2, получавшей дистиллированную воду, что подтверждает терапевтическую эффективность заявленного препарата.