СРЕДСТВО ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ ДИСТРОФИИ ПЕЧЕНИ У КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

Изобретение относится к ветеринарии и может быть использовано для профилактики и лечения дистрофии печени у крупного рогатого скота.

Известно средство лечения и профилактики дистрофии печени путем введения в рацион дилудина. После применения гепатопротектора у животных улучшается клинический статус, нормализуется уровень биохимических показателей и функционального состояния печени. (5)

Использование данного средства требует ежедневной дачи его с кормом, что значительно увеличивает стоимость рациона.

Известно средство профилактики и лечения дистрофии печени у коров путем ежедневного введения 200 мг кокарбоксилазы и 5 мл натриевой соли аденазинтрифосфорной кислоты.

При данной схеме нормализовывается белковообразовательная функция печени у всех подопытных коров. При этом повышается количество глюкозы в крови и понижается количество ацетона, ацетоуксусной и β-оксимасляной кислот. Свободные жирные кислоты подвергаются эстерификации и включаются в обменные процессы. (4)

Недостатком применения данных препаратов является их высокая стоимость и необходимость ежедневного введения.

Известен комплекс средств для профилактики и лечения гепатоза у коров. Он заключается в применении тетравита и кокарбоксилазы внутримышечно, аскорбиновой кислоты подкожно, смеси «Б» внутрибрюшинно по прописи Шарабрина и Шайхаманова, искусственной карловарской соли и минеральной подкормки внутрь в течение месяца.

После проведенного лечения количество общих липидов в сыворотке крови увеличилось до 451,87±12,66 мг %, что на 1 1,14% выше первоначальных данных, содержание свободного и эфиросвязанного холестерина до 26,5±1,7 и 207,85±11,47 мг %, что на 53,09 и 25,09% больше первоначальных данных. Данные изменения говорят о нормализации функции печени у коров. (3)

Недостаток данного комплекса средств в большом их количестве и трудности внутрибрюшинного введения.

Известен комплекс профилактических средств, заключающийся во введении в рацион диаммония фосфата в дозе 60-80 г в сутки и внутримышечного введения тривитамина но 15 мл 2 раза в месяц. (2)

Недостатком данного комплекса средств является наличие диаммония фосфата, что не позволяет сбалансировать рацион по фосфору и вызывает осложнение гепатоза.

Известно средство для профилактики и лечения дистрофии печени кур, основанное на применении аптигепатотоксической сыворотки. Применение малых доз сыворотки (0,2 ед.) однократно позволяет нормализовать нарушенное в результате патологического процесса функциональное состояние печени.(1)

Достоинством данного средства является однократное применение и низкая стоимость.

Данное средство, наиболее близкое по технической сущности и выбранное за прототип обладает следующим недостатком: для полноценной работы антигепатотоксической сыворотки необходимо определить иммунный статус поголовья и в зависимости от него корректировать дозу антигепатотоксической сыворотки.

Целью изобретения является средство профилактики и лечения гепатоза у крупного рогатого скота, позволяющее профилактировать заболевания печени и стимулировать органы иммунной системы. Поставленная цель достигается тем, что дополнительно к антигепатотоксической сыворотке добавляется антиспленотоксическая сыворотка, которая усиливает действие антигепатотоксической сыворотки и повышает естественную резистентность организма, что очень важно при гепатозе. Антигепатотоксическая и антиспленотоксическая сыворотки предварительно подвергаются кислотно-ферментному гидролизу. Полученный препарат именуется в дальнейшем «геприм» (гепатопротекториммуномодулятор) для крупного рогатого скота.

Техническим результатом изобретения является усиление действия средства «геприм» для крупного рогатого скота по сравнению с антигепатотоксической сывороткой и повышение естественной резистентности организма при генатозе.

Средство вводится крупному рогатому скоту в дозе 1,0 мл 50 кг массы тела подкожно или внутримышечно.

Средство представляет собой прозрачную жидкость с незначительным осадком, легко разбивающимся при встряхивании. Срок годности препарата при хранении в температуре +5 - +7°C - 2 года.

Предлагаемая схема получения препарата «геприм» для крупного рогатого скота состоит из следующих этапов:

1. Получение антигена из печени. Для приготовления антигена из печени используют печень здорового крупного рогатого скота. Кусочки печени 4-6 раз отмывают от крови 10-кратным объемом изотонического раствор натрия хлорида. Кусочки измельчают, растирают в ступке со стеклом и разводят 0,85% раствором натрия хлорида до 10%-ной концентрации. Полученную суспензию центрифугируют 9-10 минут при 2500-3000 об/мин и в качестве антигена используют надосадочную жидкость. Антиген осветляют пятикратным замораживанием и оттаиванием с последующим центрифугированием при 7000-8000 об/мин в течение 10 минут. Хранят антиген в замороженном состоянии.

2. Получение антигена из селезенки. Для приготовления антигена из селезенки используют селезенку здорового крупного рогатого скота. Кусочки селезенки 4-6 раз отмывают от крови 10-кратным объемом изотонического раствора натрия хлорида. Кусочки измельчают, растирают в ступке со стеклом и разводят 0,85% раствором натрия хлорида до 1 0%-ной концентрации. Полученную суспензию центрифугируют 9-10 минут при 2500-3000 об/мин и в качестве антигена используют надосадочную жидкость. Антиген осветляют пятикратным замораживанием и оттаиванием с последующим центрифугированием при 7000-8000 об/мин в течение 9-10 минут. Хранят антиген в замороженном состоянии.

3. Выбор животных-доноров. Для приготовления «геприм» в качестве доноров пригодны следующие виды животных: лошади, кролики, крупный и мелкий рогатый скот. Доноры должны быть свободны от инфекционных заболеваний и пройти карантинирование.

4. Получение антигепатотоксической сыворотки. Антигепатоток-сическую сыворотку получают путем гипериммунизации допоров по схеме: первое введение антигена проводят подкожно в области левой лопатки и правой подколенной ямки; второе введение - через 6-8 дней -подкожно в области правой лопатки и левой подколенной ямки; третье введение проводят через такой же срок, как и второе, - внутривенно и подкожно в выше перечисленные выше точки. Через 6-8 дней после третьего введения антигена делают пробный забор крови и определяют титр полученной антигепатотоксической сыворотки в реакции связывания комплемента. При наличии титра не менее 1:160-1:200 проводят забор крови. Полученную кровь помещают в термостат на 29-30 минут при 37-38°C, затем в стерильных условиях отделяют сгусток от стенок и оставляют пробирку в холодильнике для лучшей ретракции сгустка до следующего дня. Образовавшуюся сыворотку отсасывают и консервируют фенолом до 0,5%-ной концентрации вещества в сыворотке.

5. Получение антиспленотоксической сыворотки. Антиспленотоксическую сыворотку получают путем гипериммупизации доноров по схеме: первое введение антигена проводят подкожно в области левой лопатки и правой подколенной ямки; второе введение - через 6-8 дней - подкожно в области правой лопатки и левой подколенной ямки; третье введение проводят через такой же срок, как и второе, - внутривенно и подкожно в перечисленные выше точки. Через 6-8 дней после третьего введения антигена делают пробный забор крови и определяют титр полученной антиспленотоксической сыворотки в реакции связывания комплемента. При наличии титра не менее 1:160-1:200 проводят забор крови. Полученную кровь помещают в термостат на 29-30 минут при 37-38°C, затем в стерильных условиях отделяют сгусток от стенок и оставляют в холодильнике для лучшей ретракции сгустка до следующего дня. Образовавшуюся сыворотку отсасывают и консервируют фенолом до 0,5%-ной концентрации вещества в сыворотке.

6. Кислотно-ферментный гидролиз сывороток при pH 3,9-4,0 (устанавливают 0,1 н раствором соляной кислоты) и концентрации пепсина 49-51 мг на 100 г белка проводят в течение 17,5-18,5 часов при температуре 37-38°C. Гидролиз каждой сыворотки проводят отдельно. Адсорбцию фермента на гидроокиси алюминия (10-20 мл аммиачного геля на 1 литр сыворотки с содержанием Al₂O₃ 1,2-1,5 г в 100 мл) при pH 4,0-4,5 и температуре 20-25°C проводят в течение 59-61 минут. Комплекс гидроокись алюминия - пепсин удаляют осветляющей фильтрацией.

7. Получение препарата «геприм» для крупного рогатого скота. Для получения препарата «геприм» для крупного рогатого скота гидролизированные антигепатотоксическую и антиспленотоксическую сыворотки смешивают со стерильным физиологическим раствором, консервированным фенолом до 0,5%-ной концентрации с таким расчетом, чтобы в 1,0 мл его содержалось по 9,0-11,0 титровочных единиц антигепатотоксической и антиспленотоксической сывороток по реакции связывания комплемента.

Сравнительный анализ заявленного препарата со средством, выбранным за прототип, показал, что «геприм» для крупного рогатого скота обладает следующим отличительным признаком:

- дополнительно включает антиспленотоксическую сывотротку, которая как и антигепатотоксическая сыворотка была подвергнута предварительному кислотно-ферментному гидролизу.

Наличие отличительного от прототипа признака обеспечивает соответствие заявляемого технического решения критерию «новизна».

Проведенные испытания «геприм» для крупного рогатого скота подтверждают его преимущества перед препаратом-прототипом.

Пример выполнения. Получение «геприм» для крупного рогатого скота.

1. Получение антигена из печени. Для приготовления антигена из печени использовали печень здорового крупного рогатого скота. Кусочки печени 5 раз отмывали от крови 10-кратным объемом изотонического раствора натрия хлорида. Кусочки измельчали, растирали в ступке со стеклом и разводили 0,85% раствором натрия хлорида до 10%-ной концентрации. Полученную суспензию центрифугировали 10 минут при 3000 об/мин и в качестве антигена использовали надосадочную жидкость. Антиген осветляли пятикратным замораживанием и оттаиванием с последующим центрифугированием при 8000 об/мин в течение 10 минут. Хранили антиген в замороженном состоянии.

2. Получение антигена из селезенки. Для приготовления антигена из селезенки использовали селезенку здорового крупного рогатого скота. Кусочки селезенки 5 раз отмывали от крови 10-кратным объемом изотонического раствора натрия хлорида. Кусочки измельчали, растирали в ступке со стеклом и разводили 0,85% раствором натрия хлорида до 10%-ной концентрации. Полученную суспензию центрифугировали 10 минут при 3000 об/мин и в качестве антигена использовали надосадочную жидкость. Антиген осветляли пятикратным замораживанием и оттаиванием с последующим центрифугированием при 8000 об/мин в течение 10 минут. Хранили антиген в замороженном состоянии.

3. В качестве донора использовали здоровых животных, прошедших карантинирование, в частности, здоровых кроликов.

4. Получение антигепатотоксической сыворотки. Антигепатотоксическую сыворотку получали путем гипериммунизации доноров по схеме: первое введение антигена проводили подкожно в области левой лопатки и правой подколенной ямки в дозе 40 мг белка; второе введение - через 7 дней - подкожно в области правой лопатки и левой подколенной ямки в дозе 60 мг белка; третье введение проводили через такой же срок, как и второе, - внутривенно в дозе 80 мг белка и подкожно в дозе 50 мг в перечисленные выше точки. Через 7 дней после третьего введения антигена делали пробный забор крови и определяли титр полученной антигенатотоксической сыворотки в реакции связывания комплемента. При наличии титра не менее 1:160-1:200 проводили забор крови у кролика в количестве 50 мл. Полученную кровь помещали в термостат на 30 минут при 37°C, затем в стерильных условиях отделяли сгусток от стенок пробирки и оставляли пробирку с кровью в холодильнике для лучшей ретракции сгустка до следующего дня. Образовавшуюся сыворотку отсасывали и консервировали фенолом до 0,5%-ной концентрации вещества в сыворотке.

5. Получение антиспленотоксической сыворотки. Антиспленоток-сическую сыворотку получали путем гипериммунизации доноров по схеме: первое введение антигена проводили подкожно в области левой лопатки и правой подколенной ямки в дозе 40 мг белка; второе введение - через 7 дней - подкожно в области правой лопатки и левой подколенной ямки в дозе 60 мг белка; третье введение проводили через такой же срок, как и второе, - внутривенно в дозе 80 мг белка и подкожно в дозе 50 мг в перечисленные выше точки. Через 7 дней после третьего введения антигена делали пробный забор крови и определяли титр полученной антиспленотоксической сыворотки в реакции связывания комплемента. При наличии титра не менее 1:160-1:200 проводили забор крови у кролика в количестве 50 мл. Полученную кровь помещали в термостат на 30 минут при 37°С, затем в стерильных условиях отделяли сгусток от стенок пробирки и оставляли пробирку с кровью в холодильнике для лучшей ретракции сгустка до следующего дня. Образовавшуюся сыворотку отсасывали и консервировали фенолом до 0,5%-ной концентрации вещества в сыворотке.

6. Кислотно-ферментный гидролиз сывороток при pH 3,9-4,0 (устанавливают 0,1 н раствором соляной кислоты) и концентрации пепсина 50 мг на 100 г белка проводили в течение 18 часов при температуре 37°C. Гидролиз каждой сыворотки проводили отдельно. Адсорбцию фермента на гидроокиси алюминия (10-20 мл аммиачного геля на 1 литр сыворотки с содержанием Al₂O₃ 1,3 г в 100 мл) при pH 4,3 и температуре 25°C проводили в течение 1 часа. Комплекс гидроокись алюминия - пепсин удаляли осветляющей фильтрацией.

7. Получение препарата «геприм» для крупного рогатого скота. Для получения препарата «геприм» для крупного рогатого скота гидролизированные антигепатотоксическую и антиспленотоксическую сыворотки смешивали со стерильным физиологическим раствором, консервированным (фенолом до 0,5%-ной концентрации с таким расчетом, чтобы в 1,0 мл его содержалось по 10,0 титровочных единиц антигепатотоксической и антиспленотоксической сывороток но реакции связывания комплемента.

Сравнение эффективности действия «генрим» но отношению к антигепатотоксической сыворотке проводили в опыте на бычках возрастом 4 месяца и средней живой массой 150 кг.

С этой целью 20 бычков разделили по принципу пар-аналогов на две группы по 10 голов в каждой группе. Все животные находилась в одинаковых условиях кормления и содержания.

Животные первой группы служили контролем, им вводили антигепатотоксическую сыворотку в дозе 1 мл па 50 кг с содержанием антигепатотоксической сыворотки 10,0 титровочных единиц в 1 мл.

Животным второй группы вводили «геприм» в дозе 1 мл на 50 кг живой массы.

Наблюдение за животными проводили в течение 1 месяца.

Определение содержания общего белка и белковых фракций в сыворотке крови является наиболее простым способом оценки действия «геприм» на печень. Результаты исследования отражены в таблице.

Результаты проведенного опыта отражены в таблице 1.

При исследовании содержания общего белка в сыворотке крови установлено, что его содержание было больше у животных опытной группы на 0,7%. Содержание альбуминов больше в опытной, чем в контрольной на 7,6%, а содержание гамма-глобулинов, напротив, меньше на 11,5%. Показатель отношения альбуминов к глобулинам, позволяющий оценить функциональное состояние печени в опытной группе был больше, чем в контрольной на 16,7%.

Указанные изменения говорят об усилении белоксинтезирующей функции печени, повышении ее метаболической активности, снижении риска возникновения гепатоза и повышении естественной резистентности организма.

«Геприм» для крупного рогатого скота вводится крупному рогатому скоту в дозе 1 мл на 50 кг массы тела подкожно или внутримышечно.

«Геприм» для крупного рогатого скота представляет собой прозрачную жидкость с незначительным осадком, легко разбивающимся при встряхивании. Срок годности препарата при хранении в температуре +5 - +7°С - 2 года.

Список литературы

1. Действие специфических питотоксических сывороток на половые железы / Ю.А. Спасокукотский, Н.В. Ильчевич, Л.И. Барченко, О.В. Нищименко, Т.М. Зеленская, А.Г. Гоноровский. - К.: Наукова думка, 1977. - 216 с.

2. Диагностика и профилактика заболеваний печени у коров. / А.Т. Лабзина, М.А. Давыдчева, М.П. Артамонова // Профилактика и ликвидация болезней домашних животных и птиц / Ульяновский сельскохозяйственный институт.- Ульяновск. - 1977. - С.33-39.

3. Изменение липидного обмена в сыворотке крови высокопродуктивных коров при гепатозе. / B.C. Постников, Н.З. Зенухина // Вопросы ветеринарной биологии: Сб. науч. тр. - Москва, 1988. - С.22-23.

4. Предупреждение заболевания печени у коров. / A.M. Емельянов, А.Д. Шушарин, Л.И. Новоселова, Л.А. Просина, В.Г. Нехонов // Этиология и профилактика болезней сельскохозяйственных животных: Труды Свердловского и Кировского сельскохозяйственных институтов, том 56. - Пермь, 1976. - С.3-6.

5. Хазимухаметова, И.Ф. Диагностика и лечение гепатоза у крупного рогатого скота в зонах экологического неблагополучия / Хазимухаметова И.Ф. Актуальные проблемы ветеринарной медицины, животноводства, обществознания и подготовки кадров на Южном Урале: Материалы научно, научно методической и методической конференции УГИВМ (28-29.02.1996 и 1.03.1996, г.Челябинск) / Челябинск. - 1996. - С.68-70.