Результат интеллектуальной деятельности: СПОСОБ МОРФОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ ПРЕЭКЛАМПСИИ

Изобретение относится к области медицины, а именно к акушерству и гинекологии, связано с разработкой способа диагностики преэклампсии путем морфологического исследования плаценты, в том числе у пациенток с отсутствующими клинико-лабораторными данными. Преэклампсия относится к важнейшим и нерешенным проблемам акушерства и гинекологии, являясь одной из основных причин материнской и перинатальной заболеваемости и смертности. Развитие преэклампсии отмечается примерно у 5-10% первородящих беременных [Sibai В., Dekker G., Kupferminc M. Pre-eclampsia // Lancet. 2005. Vol.365. P.785-799]. Несмотря на многочисленные исследования данного заболевания, до настоящего времени не установлены точные причины возникновения и звенья патогенеза, а соответственно отсутствуют достоверные методы диагностики и патогенетически обоснованные методы лечения.

Известен способ морфологической диагностики преэклампсии путем иммуногистохимического выявления повышенного уровня активности ингибитора активатора плазминогена (plasminogen activator inhibitor -1, PAI-1) в структурах плаценты [Estelles A., Gilabert J., Keeton M., Eguchi Y., Aznar J., Grancha S., Espna F., Loskutoff D.J., Schleef R.R. Altered expression of plasminogen activator inhibitor type 1 in placentas from pregnant women with preeclampsia and/or intrauterine fetal growth retardation // Blood. 1994. Vol.84. P.143-150]. Другим способом морфологической диагностики преэклампсии является иммуногистохимическое выявление и определение соотношений фактора роста эндотелия сосудов (VEGF) и его трех рецепторов (VEGF-R1, VEGF-R2, VEGF-R3) [Tripathi R., Rath G., Jain A., Salhan S. Soluble and membranous vascular endothelial growth factor receptor-1 in pregnancies complicated by preeclampsia // Ann. Anat. 2008. Vol. 190. P.477-489; Tripathi R., Rath G., Ralhan R., Saxena S., Salhan S. Soluble and membranous vascular endothelial growth factor receptor-2 in pregnancies complicated by preeclampsia // Yonsei Med. J. 2009. Vol.50. P.656-666].

Однако эти способы достаточно продолжительные по времени и требуют использования большого количества дорогостоящих иммуногистохимических реактивов. Выявление продукта реакции зависит от четкого соблюдения методики, а оценка уровня реакции носит субъективный характер.

Целью изобретения является повышение объективности, а также упрощение и ускорение диагностики.

Цель достигается тем, что парафиновые гистологические препараты окрашивают гематоксилином и эозином, проводят морфометрию терминальных ворсин, определяют общую площадь их капилляров и площадь синцитиотрофобласта, рассчитывают отношение полученных значений площадей капилляров и синцитиотрофобласта терминальных ворсин и при значениях менее 2,5 диагностируют преэклампсию, а при значениях более 3 - ее отсутствие.

Способ осуществляют следующим образом. Полученные парафиновые гистологические препараты из парацентральной части плаценты подвергают депарафинизации общепринятым методом путем последовательной обработки срезов, включающей 3 смены ксилола (по 10 минут), 3 смены 96° этилового спирта (по 10 минут), 80° этиловый спирт (5 минут), 50° этиловый спирт (5 минут), 2 смены дистиллированной воды (по 3 минуты). После депарафинизации препараты подвергают окрашиванию гематоксилином и эозином.

1. Споласкивают срезы дистиллированной водой.

2. Окрашивают раствором гематоксилина в течение 10 минут при комнатной температуре.

3. Споласкивают срезы дистиллированной водой.

4. Помещают срезы в аммиачную воду на 30 секунд.

5. Споласкивают срезы в проточной водопроводной воде.

6. Окрашивают раствором эозина в течение 2 минут при комнатной температуре.

7. Проводят обезвоживание срезов: 50° этиловый спирт (3 минуты), 80° этиловый спирт (3 минуты), 2 смены 96° этилового спирта (3 минуты), 3 смены ксилола (по 3 минут).

8. На препарат капают синтетическую смолу и накрывают покровным стеклом.

На полученных окрашенных препаратах при помощи микроскопа проводят морфометрию 10-20 поперечно срезанных терминальных ворсин и определяют общую площадь их капилляров и площадь синцитиотрофобласта. Рассчитывают отношение полученного значения общей площади капилляров и площади синцитиотрофобласта. Если полученное значение менее 2,5, то диагностируют преэклампсию. Если значение более 3, то диагностируют нормальное развитие плаценты.

Пример 1. Пациентка Т., 35 лет, была родоразрешена на 39 неделе гестации. Из присланной плаценты вырезают кусочек размером 2×2×0,5 см, из которого по стандартной методике готовят парафиновые гистологические препараты. Полученные срезы после общепринятой методики депарафинизации окрашивают гематоксилином и эозином. На готовых препаратах проводят морфометрию терминальных ворсин и определяют общую площадь капилляров равную 843 мкм² и синцитиотрофобласта 357 мкм². Отношение площади капилляров к площади синцитиотрофобласта составляет 2,36, что свидетельствует о преэклампсии. При последующем получении и анализе истории родов установлено наличие признаков повышения артериального давления и повышенного содержания белка в моче, на основании чего сделано клиническое заключение о развитии у беременной преэклампсии.

Пример 2. Пациентка К., 34 лет, в связи с появлением эпизодов повышенного артериального давления и подозрением на развитие преэклампсии поступила для наблюдения и последующего родоразрешения. После операции кесарева сечения из присланной плаценты вырезают кусочек размером 2×2×05 см, из которого по стандартной методике готовят парафиновые гистологические препараты. Полученные срезы после общепринятой методики депарафинизации окрашивают гематоксилином и эозином. На готовых препаратах проводят морфометрию терминальных ворсин и определяют общую площадь капилляров равную 1439 мкм² и синцитиотрофобласта 444 мкм². Отношение площади капилляров к площади синцитиотрофобласта составляет 3,24, что свидетельствует об отсутствии преэклампсии. При анализе результатов клинического течения и лабораторных показателей мочи в истории родов сделано заключение о развитии у беременной артериальной гипертензии, но отсутствии преэклампсии.

Предлагаемый способ диагностики преэклампсии, отличаясь простотой и кратковременностью проведения (1-1,5 ч), а также высокой информативностью, позволяет улучшить результаты постановки диагноза, а, следовательно, и лечения данного контингента больных.

Диагностические возможности предлагаемого способа были проверены при сопоставлении результатов морфологического исследования материала плаценты и данных клинико-лабораторных обследований 33 беременных, находившихся на лечении в Научном центре акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова. У 19 из них была диагностирована преэклампсия, у 14 - нормальное течение беременности и развитие плаценты.