ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ РАЗМНОЖЕНИЯ ЯБЛОНИ И ГРУШИ IN VITRO

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в процессе клонального микроразмножения яблони и груши на этапе собственно микроразмножения.

Известно, что для пролиферации побегов яблони и груши in vitro используют питательные среды на основе прописи Мурасиге-Скуга (Туровская Н.И. Микроразмножение яблони и груши // Садоводство и виноградарство. - 1994. - №1. - С.10-12) и Кворина-Лепуавра (Минаев В.А., Верзилин А.В., Высоцкий В.А. Клональное микроразмножение слаборослых клоновых подвоев яблони селекции Мич. ГАУ // Садоводство и виноградрство. - 2003. - №5. - С.12-13). Однако процесс приготовления питательных сред трудоемок и требует значительных затрат времени, т.к. вышеуказанные среды содержат большое количество необходимых для роста и развития растений макро- и микроэлементов, которые группируются, в зависимости от химических свойств, в отдельные маточные растворы и используются, по мере надобности. При хранении маточных растворов возможно их инфицирование, что требует приготовления новых и увеличивает ресурсо- и энергозатраты на выращивание растений-регенерантов.

Задачей, на решение которой направлено изобретение, является упрощение технологического процесса приготовления питательных сред и оптимизация их состава для пролиферации побегов яблони и груши.

Сущность изобретения состоит в том, что в качестве базовой среды для пролиферации побегов яблони и груши используют водорастворимое удобрение Мастер марки 3.11.38+4, содержащее комплекс макро- и микроэлементов, %: азот (NO₃ ^-) - 3; фосфор (Р₂O₅) - 11; калий (K₂O) - 38; магний (MgO) - 4; бор (B) - 0,02; железо (Fe) - 0,07; марганец (Mn) - 0,03; цинк (Zn) - 0,01; медь (Cu) - 0,005; молибден (Mo) - 0,001. Микроэлементы (Mn, Zn, Cu, Fe) содержатся в хелатной форме. Данное комплексное вещество применяют вместо основных макро- и микрокомпонентов, входящих в состав питательных сред по прописям Мурасиге-Скуга (1962) и Кворина-Лепуавра (1997): аммония азотнокислого (NH₄NO₃), калия азотнокислого (KNO₃), магния сернокислого (MgSO₄·7H₂O), калия фосфорнокислого однозамещенного (КН₂РO₄), натрия ЭДТА (Na₂ ЭДТА), железа сернокислого (FeSO₄·7H₂O), борной кислоты (Н₃ВO₃), кобальта хлористого (СоСl₂·6Н₂O), меди сернокислой (CuSO₄·5H₂O), марганца сернокислого (MnSO₄·H₂O), калия йодистого (KI), цинка сернокислого (ZnSO₄·7H₂O), натрия молибденовокислого (Na₂MoO₄·2H₂O) (табл.1). Помимо комплексного водорастворимого удобрения Мастер марки 3.11.38+4 в состав предлагаемой питательной среды входят, мг/л: кальций азотнокислый (Са(NO₃)₂·4Н₂O) - 833,8; тиамин, пиридоксин, никотиновая кислота - по 0,5; аскорбиновая кислота - 1,5; мезоинозит - 100; сахароза - 30000, агар-агар - 8000; 6-бензиламинопурин - 1-2; вода дистиллированная - до 1 л.

Заявляемая питательная среда отличается от известных прототипов тем, что в ее состав входит комплексное водорастворимое удобрение Мастер марки 3.11.38+4. Это позволяет сделать вывод о соответствии заявляемого технического решения критерию «новизна».

Представленное техническое решение обладает изобретательским уровнем, т.к. предлагаемый состав питательной среды не был использован для размножения яблони и груши in vitro, т.е. предложен впервые.

Все компоненты предложенной питательной среды производятся промышленностью, поэтому изобретение может быть реализовано в условиях учреждений, работающих в области культуры тканей и органов растений.

Пример 1. Готовят агаризованную питательную среду, состоящую из следующих компонентов, мг/л: комплексное водорастворимое удобрение Мастер марки 3.11.38+4 - 4,0; кальций азотнокислый (Ca(NO₃)₂·4H₂O) - 833,8; тиамин, пиридоксин, никотиновая кислота - по 0,5; аскорбиновая кислота - 1,5; мезоинозит - 100; сахароза - 30000, агар-агар - 8000; 6-бензиламинопурин - 1,0-2,0. Объем доводят дистиллированной водой до 1 л, устанавливают pH 5,6-5,8 (табл.1, среда 1). Питательную среду разливают по культивационным сосудам и автоклавируют при давлении 1 атм. в течение 15-20 минут. После охлаждения питательной среды производят высадку побегов. Контрольные побеги высаживают на агаризованную питательную среду по прописи Кворина-Лепуавра (QL). Культивирование проводят в культуральной комнате при температуре 24±2°C, освещенности 3-5 тыс. люксов, длине светового периода 16 часов. Опыты выполняют в 3-кратной повторности. Учеты проводят через 5-6 недель.

Как видно из таблицы 2, на разработанной питательной среде увеличение коэффициента размножения в 2,5 раза отмечается у сорта яблони Лобо по сравнению с контролем, а у подвоев 76-8-13 и ПБ 9 по данному показателю существенных различий не наблюдается. Культивирование эксплантов на предлагаемой питательной среде улучшает качество и увеличивает количество побегов, оптимальной для укоренения длины на 10,7-23,7%.

Пример 2. Среду готовят и культивирование эксплантов проводят аналогично примеру 1. Компоненты питательной среды те же, за исключением комплексного водорастворимого удобрения Мастер марки 3.11.38+4, концентрацию которого увеличивают до 6,0 мг/л (табл.1, среда 2).

Как видно из таблицы 3, предлагаемая среда способствует увеличению количества побегов, пригодных для укоренения у подвоя яблони 57-545 на 13,4%, подвоев груши ПГ 12 и ПГ 2 на 22,5 и 43,6%, соответственно. Существенных различий по коэффициенту размножения не наблюдается. У сорта груши Осенняя Яковлева при культивировании эксплантов на разработанной питательной среде снижение регенерационной способности не отмечается.

Таким образом, на основании полученных данных можно сделать вывод, что использование в качестве базовой среды на этапе пролиферации водорастворимого удобрения Мастер марки 3.11.38+4 улучшает качество и увеличивает количество побегов, оптимальной для укоренения длины и не снижает регенерационную способность побегов яблони и груши. Предлагаемый компонент значительно упрощает технологию приготовления питательных сред за счет исключения приготовления маточных растворов, что существенно снижает ресурсо- и энергозатраты.

Используемая литература

1. Туровская, Н.И. Микроразмножение яблони и груши / Н.И.Туровская // Садоводство и виноградарство. - 1994. - №1. - С.10-12.

2. Минаев, В.А. и др. Клональное микроразмножение слаборослых клоновых подвоев яблони селекции Мич. ГАУ / В.А.Минаев, А.В.Верзилин, В.А.Высоцкий // Садоводство и виноградрство. - 2003. - №5. - С.12-13.