Вид РИД
Изобретение
Изобретение относится к медицине, а именно к созданию лекарственных средств природного происхождения, и может быть использовано для лечения доброкачественной гиперплазии предстательной железы (ДГПЖ).
ДГПЖ является одним из наиболее частых заболеваний мужчин пожилого возраста [Аляев Ю.Г., Винаров А.З., Локшин К.Л., Спивак Л.Г. Новое в консервативной терапии больных гиперплазией предстательной железы // Consilium medicum. - 2008. - №4. - С.45-49]. Гистологические признаки ДГПЖ обнаруживаются более чем у 40% мужчин старше 50 лет и 90% мужчин старше 80 лет. Клинические симптомы заболевания диагностируются у большинства мужчин старше 50 лет [Dhingra N., Bhagwat D. Benign prostatic hyperplasia: an overview of existing treatment // Ind. J. Pharmacol. - 2011. - Vol.43, N 1. - P.6-12]. По данным эпидемиологических исследований, проведенных в России, частота ДГПЖ увеличилась с 11,3% среди 40-50-летних до 81,4% у 80-летних мужчин [Рациональная фармакотерапия в урологии. / Под ред. Н.А.Лопаткина, Т.С.Перепановой. - М.: Литтерра, 2006. - С.30-42].
Известно применение гомеопатического препарата рододендрона для лечения доброкачественных опухолей [Пат. РФ №2207868]. Его недостатком является необходимость индивидуального подбора дозы для каждого больного, что затрудняет применение в амбулаторной практике.
Известно применение отвара корня солодки голой для лечения хронического простатита [Пат. РФ №2058152]. Недостатками данного средства являются нестойкая при хранении и неудобная для приготовления лекарственная форма, слабый симптоматический эффект при хроническом простатите без терапевтического воздействия на патогенез заболевания, что не исключает возникновение рецидивов.
Известно применение препарата растительного происхождения для лечения простатита и аденомы предстательной железы в виде комплексной терапии, включающей средства для перорального и ректального применения [Пат. РФ №2275929]. Данное средство оказывает противовоспалительное действие, но не тормозит пролиферативные процессы в предстательной железе. Лечебный эффект при доброкачественной гиперплазии предстательной железы наступает только при сочетанном приеме средства внутрь и ректальном введении в форме клизм, что создает неудобства для амбулаторных больных.
Известно лечебно-профилактическое средство «Простанорм» для лечения простатитов, уретритов и других воспалительных заболеваний мочеполовой сферы, включающее корень солодки голой, траву зверобоя продырявленного, траву золотарника канадского, корни с корневищами эхинацеи пурпурной, взятые в равных пропорциях [Пат РФ №2098119]. Это средство также оказывает только противовоспалительный эффект и не обладает антипролиферативным действием при доброкачественной гиперплазии предстательной железы.
Для лечения и профилактики ДГПЖ применяют более 10 групп лекарственных средств, хотя доказана терапевтическая эффективность только α-адреноблокаторов, ингибитора 5α-редуктазы финастерида и растительных средств - экстрактов американской вееролистной пальмы Serenoa repens (пермиксон, простамол) и камерунской сливы Pygeum africanum (трианол) [Рациональная фармакотерапия в урологии. / Под ред. Н.А.Лопаткина, Т.С.Перепановой. - М.: Литтерра, 2006. - С.30-42]. Пермиксон выбран нами в качестве прототипа.
Пермиксон является импортным лекарственным средством, проявляет недостаточно выраженную антипролиферативную активность, для получения терапевтического эффекта требуется проведение нескольких курсов терапии.
В свете сказанного актуальным является поиск препаратов, обладающих комплексным влиянием на регуляторные механизмы, запускающие каскад физиологических изменений, которые приводят к возникновению такой серьезной патологии как ДГПЖ.
Задача изобретения - расширение арсенала средств природного происхождения на основе отечественного сырья, эффективных при лечении ДГПЖ.
Технический результат достигается тем, что в качестве антипролиферативного средства используют липиды торфа.
Липиды торфа - вещества от темно-бурого до почти черного цвета, не растворимы в воде, растворяются в гексане, бензоле, бензине, ацетоне, этаноле, метаноле, диэтиловом и петролейном эфирах, еще лучше - в хлороформе, содержат фосфолипиды, каротиноиды хлорофиллы, стерины, жирные кислоты.
Средство получают следующим образом.
Торф верховой влажностью 25-30% измельчают в шаровых мельницах планетарного или виброцентробежного типов, обеспечивающих ускорение воздействующих тел, например шаров, 300 м/с2. Время пребывания сырья в зоне обработки составляет 1-4 минуты. Механическую обработку проводят в воздушной среде. Измельченный торф экстрагируют смесью этилового спирта и хлороформа при соотношении 1:1 в течение 1 ч, фильтруют, упаривают и сушат в вакууме. В полученных липидах определяют содержание жирных кислот и β-ситостерина.
Пример 1. Торф верховой влажностью 25-30% экстрагируют смесью этилового спирта и хлороформа при соотношении 1:1 в течение 1 ч, фильтруют, упаривают и сушат в вакууме. В полученных липидах определяют содержание липидов, жирных кислот и β-ситостерина (табл.1).
Пример 2. Торф верховой влажностью 25-30% измельчают в шаровой мельнице планетарного типа, обеспечивающей ускорение воздействующих тел, например шаров, 300 м/с2. Время пребывания сырья в зоне обработки составляет 1 минуты. Механическую обработку проводят в воздушной среде. Измельченный торф экстрагируют смесью этилового спирта и хлороформа при соотношении 1:1 в течение 1 ч, фильтруют, упаривают и сушат в вакууме. Содержание липидов, жирных кислот и β-ситостерина незначительно повышается по сравнению с примером №1, (табл.1).
Пример 3. Торф верховой влажностью 25-30% измельчают в шаровой мельнице планетарного типа, обеспечивающей ускорение воздействующих тел, например шаров, 300 м/с2. Время пребывания сырья в зоне обработки составляет 2 минуты. Механическую обработку проводят в воздушной среде. Измельченный торф экстрагируют смесью этилового спирта и хлороформа при соотношении 1:1 в течение 1 ч, фильтруют, упаривают и сушат в вакууме. Содержание липидов возросло почти в 2 раза и существенно повысился выход жирных кислот и β-ситостерина по сравнению с примером №1 (табл.1).
Пример 4. Торф верховой влажностью 25-30% измельчают в шаровой мельнице планетарного типа, обеспечивающей ускорение воздействующих тел, например шаров, 300 м/с2. Время пребывания сырья в зоне обработки составляет 4 минуты. Механическую обработку проводят в воздушной среде. Измельченный торф экстрагируют смесью этилового спирта и хлороформа при соотношении 1:1 в течение 1 ч, фильтруют, упаривают и сушат в вакууме. Содержание липидов, жирных кислот и β-ситостерина возросло по сравнению с примером №1, но снизилось по сравнению с примером №3 (табл.1).
Эксперименты по антипролиферативному действию липидов торфа проводили на 120 аутбредных белых крысах самцах позднего репродуктивного возраста (8-10 мес) массой 500-550 г, выращенных в конвенциональных условиях в клинике лабораторных животных НИИ фармакологии СО РАМН. Антипролиферативное влияние липидов торфа оценивали на модели ДГПЖ, вызванной ежедневным внутрибрюшинным введением сульпирида (эглонил, раствор в ампулах, Sanofi-Winthrop Industrie, Франция) в дозе 40 мг/кг в течение 60 сут [9, 11]. На протяжении эксперимента крысам вводили в желудок липиды торфа в виде суспензии на 1% крахмальной слизи в дозах 10, 30, 60 мг/кг. В качестве референтного препарата применяли экстракт Serenoa repens пермиксон (Pierre Fabre Medicament Production, Франция) в дозе 50 мг/кг (по экстракту Serenoa repens) [19]. Контрольные животные получали 1% крахмальную слизь. Через 60 сут крыс декапитировали под эфирным наркозом. Взвешивали переднюю, боковую и заднюю доли предстательной железы. Для гистологического исследования боковую и заднюю доли фиксировали 10% нейтральным формалином, депарафинированные срезы окрашивали гематоксилином-эозином. В гомогенатах боковой и задней долей предстательной железы определяли содержание белка, диеновых конъюгатов, скорость образования малонового диальдегида, количество восстановленного глутатиона, активность селензависимой глутатионпероксиазы и супероксиддисмутазы. В плазме крови анализировали содержание пролактина, тестостерона и 5α-дигидротестостерона иммунофлуоресцентным методом (наборы DRG International, США).
Статистическую обработку результатов проводили методом парных сравнений с использованием непараметрического критерия Вилкоксона-Манна-Уитни при вероятности ошибочного вывода, не превышающей 5% (p≤0,05).
Сульпирид, блокируя рецепторы D2 дофамина в тубероинфундибулярной системе, значительно увеличивает секрецию стимулятора пролиферации предстательной железы пролактина с развитием экспериментальной ДГПЖ. При введении сульпирида в течение 60 сут масса передней доли предстательной железы не изменялась, масса боковой и задней долей и весовые коэффициенты (отношение массы железы к массе тела животных) становились в 1,8-2,1 раза больше, чем у интактных животных (табл.2). При гистологическом исследовании предстательной железы определялись увеличенное число ацинусов с папиллярным разрастанием эпителия в форме сосочков. Строма между ацинусами содержала большое количество гипертрофированных гладких мышц, грубых коллагеновых волокон, была инфильтрирована нейтрофилами, лимфоцитами, макрофагами, тучными клетками. Расширенный просвет ацинусов заполнялся ацидофильной массой и нейтрофилами. В гомогенатах боковой и задней долей предстательной железы в 1,6 раза увеличивалось содержание белка и активировалось перекисное окисление липидов на фоне ингибирования антиперекисной защиты. Содержание диеновых конъюгатов повышалось в 2,1 раза по сравнению с их количеством в норме, продукция малонового диальдегида в присутствии аскорбата ускорялась в 2,2 раза, после добавления NADP·H - в 2,7 раза. Содержание восстановленного глутатиона, активность глутатионпероксидазы и супероксиддисмутазы уменьшались в 1,7-2,2 раза. В сыворотке крови крыс с экспериментальной ДГПЖ содержание пролактина возрастало в 5,8 раза, 5α-дигидротестостерона - в 1,5 раза, количество тестостерона снижалось в 3,2 раза (табл.2).
Липиды торфа в дозах 10, 30 и 60 мг/кг и экстракт Serenoa repens в дозе 50 мг/кг эффективно препятствовали прогрессированию экспериментальной ДГПЖ, вызванной инъекциями сульпирида у крыс самцов позднего репродуктивного возраста. В дозе 10 мг/кг липиды торфа и экстракт Serenoa repens снижали массу боковой и задней долей предстательной железы в 1,3-1,4 раза, хотя она оставалась в 1,4-1,5 раза больше, чем в норме. В дозах 30 и 60 мг/кг липиды торфа уменьшали массу боковой и задней долей в 1,8-2 раза, при этом масса становилась такой же, как у интактных животных. Весовые коэффициенты снижались в 1,8-2 раза. Антипролиферативное действие липидов торфа в дозах 30 и 60 мг/кг превосходило эффект экстракта Serenoa repens (табл.2).
Для углубленного исследования антипролиферативного действия при модели ДГПЖ липиды торфа вводили в дозе 30 мг/кг. Под влиянием экспериментальной терапии липидами торфа в ткани боковой и задней долей предстательной железы сокращалась площадь эпителиальных структур на фоне расширения просвета ацинусов. Ткань предстательной железы состояла из отдельных железок, разделенных узкими пучками соединительной ткани с гладкомышечными клетками, коллагеновыми и эластическими волокнами нормального строения. Клеточная инфильтрация интерстиция отсутствовала, в ацинусах не определялись лейкоциты. При введении экстракта Serenoa repens сохранялась умеренная лимфоцитарно-макрофагальная инфильтрация. В гомогенатах боковой и задней долей предстательной железы экспериментальная терапия липидами торфа сопровождалась снижением содержания белка в 1,6 раза, при действии экстракта Serenoa repens - в значительно меньшей степени, в 1,3 раза (табл.3).
Липиды торфа оказывали выраженное антиоксидантное действие. В гомогенатах боковой и задней долей предстательной железы содержание продуктов перекисного окисления липидов и показатели антиперекисной защиты - количество восстановленного глутатиона, активность глутатионпероксидазы и супероксиддисмутазы нормализовались. Содержание диеновых конъюгатов уменьшалось в 1,7 раза, продукция аскорбат- и NADP·H-зависимого малонового диальдегида замедлялась в 2-2,3 раза, содержание глутатиона, активность глутатионпероксидазы и супероксиддисмутазы повышались в 1,5-2 раза по сравнению с показателями при модели ДГПЖ. При введении экстракта Serenoa repens интенсивность липопероксидации снижалась в 1,4-1,8 раза, активность антиперекисной защиты возрастала в 1,3-1,4 раза (различия с эффектами липидов торфа недостоверны). Скорость продукции малонового диальдегида превышала скорость в норме в 1,4-1,5 раза, содержание восстановленного глутатиона, активность глутатионпероксидазы и супероксиддисмутазы оставались сниженными в 1,4 раза (табл.3).
В крови крыс, получавших липиды торфа, содержание пролактина снижалось в 2,6 раза по сравнению с уровнем гормона у крыс, которым вводили только сульпирид, но оно в 2,2 раза превышало норму. При введении экстракта Serenoa repens содержание в крови пролактина уменьшалось в меньшей степени - в 1,5 раза, оставаясь в 3,8 раза выше нормы и в 1,7 раза больше, чем при введении липидов торфа. Содержание мужских половых гормонов в крови крыс, защищенных липидами торфа и экстрактом Serenoa repens, изменялось в одинаковой степени и становилось близким к количеству гормонов у интактных животных - содержание тестостерона повышалось в 2,2-2,7 раза, 5α-дигидротестостерона - снижалось в 1,6-1,7 раза по сравнению с количеством этих гормонов, измеренном при введении одного сульпирида (табл.3).
Таким образом, при модели ДГПЖ, вызванной введением стимулятора секреции пролактина сульпиридом крысам самцам позднего репродуктивного возраста, липиды торфа в эффективной дозе 30 мг/кг и экстракт Serenoa repens в дозе 50 мг/кг, препятствовали развитию гиперплазии боковой и задней долей предстательной железы, разрастанию ее эпителия и воспалительной инфильтрации. Оба препарата оказывали выраженное антиоксидантное действие и изменяли в сторону нормы гормональный баланс. При экспериментальной ДГПЖ липиды в большей степени, чем экстракт Serenoa repens, сдерживали увеличение массы боковой и задней долей предстательной железы и развитие гиперпролактинемии.
Судя по росту уровня тестостерона и снижению количества 5α-дигидротестостерона, в крови крыс, получавших на фоне инъекций сульпирида липиды торфа, этот препарат ингибирует 5α-редуктазу и тормозит восстановление тестостерона в 5α-дигидротестостерон - стимулятор пролиферации ткани предстательной железы. В механизме антипролиферативного эффекта липидов торфа большое значение имеет антиоксидантное действие, так как продукты липопероксидации стимулируют пролиферацию эпителия и соединительной ткани в предстательной железе.
Предложенное средство по лечебному действию превосходит прототип не менее чем в 1,5 раза.
|
|
|