Результат интеллектуальной деятельности: СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ РИСКА ОТТОРЖЕНИЯ ТРАНСПЛАНТАТА ПРИ КСЕНОПЛАСТИКЕ

Предлагаемый способ относится к медицине, а именно к хирургии, и может быть применен для оценки степени риска отторжения ксеноперикардиальной пластины при трансплантации ее в переднюю брюшную стенку.

Способ формирования лапаростомы с помощью ксеноперикардиальной пластины разработан на кафедре хирургии Медицинского института Пензенского государственного университета и опробован сначала в эксперименте, а затем в клинической практике (разрешение локального этического комитета, протокол №8 заседания от 24 апреля 2010 года) [1, 2].

Проблема приживления возникает при использовании ксеноперикарда так же, как и при использовании любого другого имплантата. В частности, на 7-10 сутки в операционной ране в зоне имплантации ксеноперикардиальной пластины продолжаются процессы экссудации: миграция нейтрофильных лейкоцитов, моноцитов, дегрануляция тучных клеток, но уже активны и пролиферативные процессы: фибробласты мигрируют к имплантату, образуются коллагеновые волокна, развивается грануляционная ткань. Если в ране преобладают процессы пролиферации, в дальнейшем происходит заживление, и ксеноперикардиальная пластина выполняет свою функцию - укрепляет переднюю стенку живота, препятствует эвентрации петель кишечника и формированию послеоперационной грыжи. Однако, если процессы экссудации преобладают над пролиферативными, происходит нагноение и отторжение имплантата. Таким образом, на 7-10 сутки после операции важно определиться с прогнозом и дальнейшей тактикой - оставлять ли имеющуюся пластину до заживления или заменить ее на новую во избежание развития гнойных осложнений.

Известен способ прогнозирования репаративной регенерации при заживлении с помощью определения ДНК фибробластов и адвентициальных клеток в операционной ране. При показателях соответственно менее 0,14±0,015‰ и 0,13±0,011‰ прогнозируется замедление репаративной регенерации и осложненное течение раневого процесса [3].

Однако определение ДНК требует специализированной аппаратуры и людей, обученных на ней работать, что можно встретить не в каждой клинике. Кроме того, ДНК фибробластов и адвентициальных клеток идентична ДНК других клеток организма, что может привести к неточностям в определении этих показателей.

Техническим результатом предлагаемого способа является повышение точности прогнозирования риска отторжения трансплантата при ксенопластике.

Это достигается тем, что забирают и исследуют материал из операционной раны, согласно предлагаемому изобретению для оценки активности репаративных процессов определяют площадь новообразованных кровеносных сосудов из фрагментов ткани, полученных при перевязке на 7 сутки после операции, изготавливают микропрепараты, в которых с помощью компьютерных программ подсчитывают площадь новообразованных кровеносных сосудов, и при показателе 1500±3 мкм²/мм² и больше прогнозируют благоприятный прогноз для приживления имплантата, при показателе менее 1500±3 мкм²/мм² прогнозируют осложнение процесса заживления вплоть до отторжения ксеноперикардиальной пластины, в этом случае пластину заменяют на новую.

Сущность предлагаемого способа прогнозирования риска отторжения трансплантата заключается в определении площади новообразованных сосудов в тканях, прилежащих к ксеноперикарду. Молодые кровеносные сосуды с располагающимися между ними коллагеновыми и эластическими волокнами составляют так называемую грануляционную ткань. Эта ткань является предшественницей зрелой соединительной ткани, и оценка темпов ее развития позволяет судить о выраженности регенераторных процессов в операционной ране.

Способ осуществляется следующим образом: на 7 сутки после операции во время перевязки производят забор фрагментов ткани из области операционной раны на границе ксеноперикардиальной пластины и собственных тканей. Из забранных фрагментов выкраивают кусочки размером примерно 1×1 см и производят их фиксацию раствором нейтрального формалина в течение 1 суток. Затем осуществляют отмывку фиксатора с помощью буферного раствора и постепенное обезвоживание препарата в спиртовых растворах возрастающей концентрации (50%, 70%, 96%, 100%). Обезвоженный препарат пропитывают сначала смесью растворителя (ксилол или ацетон) и заливочной среды (парафин) в соотношении 1:1, а затем чистой заливочной средой, после чего препарат помещают в чистую заливочную среду и оставляют до затвердения в термостате. Эти процедуры занимают еще сутки, таким образом, на 9 сутки после операции получают готовые блоки.

С полученных блоков с помощью санного микротома изготавливают срезы толщиной до 10 мкм и помещают их на предметное стекло. После депарафинирования производят окраску срезов гематоксилином и эозином по стандартной методике. Окрашенные препараты просветляют и заключают в канадский бальзам под покровное стекло.

При изучении микропрепаратов с каждого из них получают по 10 микрофотографий, с использованием микроскопа фирмы «Carl Zeiss» и фотографической насадки на микроскоп «Axioskop». Посредством программы «Axiovision» на каждой фотографии» измеряют общую площадь поперечного сечения новообразованных сосудов в прилежащих к ксеноперикарду тканях. С помощью программы статистической обработки данных «Micromed» вычисляют среднюю площадь сечения сосудов на всех микрофотографиях, ошибку средней и производят пересчет площади на 1 мм². Если результат составляет 1500±3 мкм²/мм² или больше, это говорит о благоприятном прогнозе для приживления имплантата. Если общая площадь сосудов на 7 сутки после операции менее 1500±3 мкм²/мм², прогнозируют осложнение процесса, ведущее к отторжению имплантата.

Пример 1. Больной П., 56 лет, находился на лечении в кардиохирургическом центре, где ему выполнялось абдоминальное шунтирование аорты с протезированием висцеральных ветвей. Послеоперационный период осложнился формированием тазового абсцесса с прорывом его в брюшную полость, распространенным перитонитом. Выполнена операция: лапаротомия, санация, дренирование брюшной полости. Интубация кишечника. Состояние больного в динамике с ухудшением. Мониторирование внутрибрюшного давления выявило его рост. Диагностирован абдоминальный компартмент синдром. В экстренном порядке наложена лапаростома с использованием ксеноперикарда. В послеоперационном периоде проводились перевязки, мониторирование внутрибрюшного давления. Состояние с улучшением. Было проведено исследование площади новообразованных сосудов в зоне операционной раны. Площадь сосудов составила 1850±3 мкм²/мм², что позволило прогнозировать благоприятное течение раневого процесса. Прогноз подтвердился - явления перитонита купировались, внутрибрюшное давление нормализовалось. После иссечения краев раны и наложения вторичных швов больной выписан в удовлетворительном состоянии.

Пример 2. Больной С., 58 лет, оперирован по поводу продолжающегося перитонита на фоне несосотятельности культи двенадцатиперстной кишки после резекции желудка. Больному наложена лапаростома. В качестве эндопротеза использована перфорированная ксеноперикардиальная пластина. В послеоперационном периоде больному ежедневно выполняли перевязки, во время которых забирали участки ксеноперикарда для морфологического исследования. На 8 сутки проведено исследование площади новообразованных сосудов, показатель составил 920±3 мкм²/мм², было прогнозировано неблагоприятное течение процесса заживления. В дальнейшем прогноз подтвердился - возникла необходимость замены импланта, т.к. произошло его гнойное расплавление.

Предлагаемый способ является более доступным, чем уже известные, так как не требует специализированного оборудования, а может быть осуществлен в любом патологоанатомическом отделении. Кроме того, повышается точность прогнозирования риска отторжения трансплантата, так как увеличение площади новообразованных сосудов однозначно говорит о протекающем заживлении.

Источники информации

1. Е.В.Титова. Сравнительные физические характеристики материалов для герниопластики и морфологические особенности ксеноперикарда. Медицинский академический журнал, №5, том 10, 2010.

2. Патент РФ №2400160. Способ протезирующей герниопластики срединных вентральных грыж.

3. Патент РФ №2225982. Способ прогнозирования репаративной регенерации при заживлении операционной раны вторичным натяжением.