Результат интеллектуальной деятельности: Способ трансплантации фрагмента опухоли рака яичника человека в яичник самки иммунодефицитной мыши

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной онкологии, и касается способа трансплантации фрагмента рака яичника человека в яичник самки иммунодефицитной мыши для получения пациентоподобной модели, достоверно передающей особенности опухоли и наиболее адекватно отражающей картину развития рака яичников у человека.

Рак яичников является вторым по частоте гинекологическим злокачественным новообразованием. Более чем в 60% случаев заболевание диагностируется на III-IV стадии, когда в процесс вовлекаются органы брюшной полости, малого таза или ретроперитонеальные лимфоузлы, (см. К.Д. Гусейнов, И.В. Берлев, A.M. Беляев, А.Ф. Урманчеева, Т.В. Городнова, Г.С. Киреева, М.Г. Яковлева, М.Г. Шихзадаева. Возможности гипертермической интраперитонеальной интраоперационной химиоперфузии в лечении рецидивирующего рака яичников // Гинекологическая онкология. 2020. Т 19. №1 С. 62).

Для изучения особенностей механизмов развития рака яичников и новых терапевтических препаратов необходимо создание моделей данного заболевания, наиболее адекватно отражающие индивидуальные черты патологического процесса.

Данному требованию может отвечать ортотопическая пациентоподобная модель рака яичников, клеточный состав которой является гетерогенным сходным реальным опухолям, а ортотопическое микроокружение оказывает влияние на онкогенез (см. Хохлова С.В. Новое в лечении high grade серозного рака яичников // Эффективная фармакотерапия. 2019. Т. 15. №38. С. 24-29.; An Advanced Orthotopic Ovarian Cancer Model in Mice for Therapeutic Trials).

Известен способ ортотопической имплантации рака яичников, включающий рассечение кожи и брюшной стенки мыши, инъекцию опухолевой суспензии в яичник самки иммунодефицитной мыши, полученной из фрагмента человеческой опухоли рака яичников. Недостатком данного способа является имплантация опухолевой взвеси, а не целого участка опухоли, взятого от пациента (см. Ying Zhang, Li Luo, Xueling Zheng et al. An Advanced Orthotopic Ovarian Cancer Model in Mice for Therapeutic Trials // BioMed Research International. - 2016. №4. Р.1.).

Известен способ трансплантации культуры клеток карциномы яичников ES-2 и OVCA 429 методом внутрибрюшинной инъекции. Недостатком данного способа является имплантация культуры клеток в несоответствующий сайт трансплантации. Из технических трудностей метода является потенциальная утечка клеток в брюшную полость (см. Elizabeth Magnotti, Wayne A. Marasco. The latest animal models of ovarian cancer for novel drug discovery // Expert Opin Drug Discov. 2018. №13(3). P. 249-257).

В качестве прототипа нами выбран «Способ моделирования лимфогенного и гематогенного метастазирования мышиной меланомы В16 у белых нелинейных крыс» (см. патент RU 2615908 С1, опубл. 11.04.2017, Бюл. №11), заключавшийся в выведении селезенки под кожу животного с последующей инъекцией в нее взвеси опухолевых клеток. Способ обладал существенным недостатком. Он не предполагал пересадку в орган части опухоли, что позволило бы создать как местный опухолевый процесс (в самой селезенке), так и его метастазы в других внутренних органах.

Техническим результатом предлагаемого изобретения является разработка способа трансплантации фрагмента опухоли рака яичника человека в яичник самки иммунодифицитной мыши, что позволяет создать ортотопическую модель опухолевого роста, достоверно отражающую особенности онкогенеза данного заболевания у человека.

Технический результат изобретения достигается тем, что пересаживают фрагмент опухоли рака яичника человека в яичник самки иммунодифицитной мыши, для чего располагают иммунодефицитную мышь на операционном столике в положении на животе, рассекают кожу, подкожную клетчатку, брюшину животного параллельно позвоночнику, ниже реберной дуги, выводят яичник под кожу, фиксируют яичник к брюшине проксимально непосредственно за ткань яичника, дистально - за маточную трубу отдельными лигатурами, не передавливая сосуды, кровоснабжающие яичник, рассекают яичник по краю, противоположному сосудистой ножке на протяжении 2 мм, фиксируют опухолевый материал непосредственно в ране яичника, ушивают кожу над яичником.

Способ осуществляют следующим образом.

Фрагмент опухоли рака яичников после иссечения сразу же помещают в среду Хенкса. Перед трансплантацией вырезают кусочки объемом 15 мм³. Время от момента резекции опухолевого материала у человека до имплантации в яичник иммунодефицитной мыши не должно превышать 20 минут. В качестве реципиента опухолевого материала служат самки иммунодефицитных мышей. При премедикации используют ксилазин концентрацией 20 мг/мл. Животных наркотизируют при помощи золетила концентрацией 22,57 мг/мл. Располагают иммунодефицитную мышь на операционном столике в положении на животе. Затем рассекают кожу, подкожную клетчатку, брюшину животного параллельно позвоночнику, ниже реберной дуги. Выводят яичник под кожу. Фиксируют яичник к брюшине проксимально непосредственно за его ткань отдельной лигатурой. Фиксируют яичник дистально за маточную трубу отдельной лигатурой. В ходе вмешательства при прошивании маточной трубы с помощью операционного микроскопа следят за целостностью сосудов, кровоснабжающих яичник. Рассекают яичник по краю, противоположному сосудистой ножке на протяжении 2 мм. Фиксируют опухолевый материал непосредственно в ране яичника отдельной лигатурой 6-0 под контролем операционного микроскопа. Ушивают кожу над яичником.

Изобретение иллюстрируется фигурами 1-2.

На Фиг. 1 изображена фиксация яичника к брюшине отдельной лигатурой по проксимальному углу раны непосредственно за верхний полюс яичника.

На Фиг. 2. изображен яичник с опухолью, зафиксированный к брюшине, кожа ушита над яичником.

Данным способом произведена трансплантация фрагмента опухоли яичников человека в яичники самок иммунодефицитных мышей в нескольких сериях экспериментов. Нами использовались мыши Balb/c Nude. Всего исследование проведено на 60 мышах, в 10% случаев был получен рост опухоли яичника.

Приводим пример применения способа.

Данным способом была прооперирована самка иммунодефицитной мыши Balb/c Nude возрастом 6 недель массой 24,5 г. Трансплантантом служил фрагмент опухоли яичников объемом 12 мм³, который после выделения из организма человека был незамедлительно помещен в среду Хенкса. Время от момента резекции опухолевого материала у человека до имплантации в яичник самки иммунодефицитной мыши составило 11 минут. Проводили премедикацию с использованием ксилазина концентрацией 20 мг/мл. Наркоз животных осуществляли при помощи золетила концентрацией 22,57 мг/мл. Пересаживают фрагмент опухоли рака яичника человека в яичник самки иммунодифицитной мыши, для чего располагают иммунодефицитную мышь на операционном столике в положении на животе, рассекают кожу, подкожную клетчатку, брюшину животного параллельно позвоночнику, ниже реберной дуги, выводят яичник под кожу, фиксируют яичник к брюшине проксимально непосредственно за ткань яичника (см. Фиг. 1), дистально - за маточную трубу отдельными лигатурами, не передавливая сосуды, кровоснабжающие яичник, рассекают яичник по краю, противоположному сосудистой ножке на протяжении 2 мм, фиксируют опухолевый материал непосредственно в ране яичника, ушивают кожу над яичником (см. Фиг. 2). Через 6 недель при вскрытии животного обнаружен опухолевый инфильтрат, исходящий из яичника, прорастающий в почку. При морфологическом исследовании опухоли - рак яичников.

Технико-экономическая эффективность данного способа заключается в том, что он позволяет получить пациентоподобную модель рака яичников наиболее достоверно отражающую особенности онкогенеза, и являющуюся важной тест-системой для доклинических исследований различных способов лечения рака яичников. Размещение яичников под кожей при сохранении его сосудистой ножки позволяет получить уникальные условия, когда ортотопическая опухоль (размещена в яичнике) доступна для ежедневного контроля в ходе проведения эксперимента.