СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ НАТИВНОЙ СЫВОРОТКИ КРОВИ ЖИВОТНЫХ

Изобретение относится к ветеринарной медицине и может быть использовано при производстве нативной сыворотки крови животных для увеличения выхода сыворотки от объема взятой крови.

Известен способ получения сыворотки крови взрослого крупного рогатого скота для культивирования клеток животных и человека, включающий забор крови в стерильные стеклянные 10 или 20 литровые емкости, предварительно смоченные 100-200 мл 5%-ным раствором натрия хлористого, 2-х часовую выдержку взятой крови при комнатной температуре при дальнейшем размещении емкостей с кровью в наклонном положении в холодильной камере на 72 часа при температуре +1…+2°С (Патент РФ №2460786, МПК А61К 33/00, опубликован 27.10.2003).

Известен классический способ получения нативной сыворотки крови реконвалесцентов, которую изготавливают областные, межрайонные ветеринарные лаборатории и ветлечебницы, включающий забор крови в емкости с физиологическим раствором (из расчета 50 см³ раствора на 1 л крови), после чего кровь ставят в помещение с температурой +25°С на 5-6 часов, при последующей обводки сгустка фламбированной стеклянной палочкой для отрыва сгустка от стенок емкости и после слива сыворотки проводят ее консервацию. (Наставление по изготовлению и применению сыворотки из крови реконвалесцентов при ящуре: Ветеринарное законодательство, т. 1, под редакцией А.Д. Третьякова 1972. - с. 628-630).

Недостатком данных способов получения сывороток является следующее. На практике выход сыворотки составляет от 25 до 40%, а количество сгустка крови, соответственно 60-75% от объема полученной крови. В то же время в сгустке крови содержится большое количество не извлеченной сыворотки, однако данные способы не учитывают этого обстоятельства, утилизируя сгусток, что приводит к большим потерям нативной сыворотки.

Известен способ получения нативной сыворотки использующий сгусток крови в качестве дополнительного источника сыворотки отраженный в патенте №2196591 МПК А61К 33/14 «Препарат и способ профилактики и лечения диареи у телят», включающем забор крови, отслаивание крови на водяной бане при температуре +37…+38°С в течение 30-40 минут или при комнатной температуре в течение 12-15 часов при дальнейшей выдержке субстрата в холодильнике при температуре +4…+5°С до наступления максимальной ретракции, после слива сыворотки сгусток крови подвергали отжатию путем его смешивания с гипохлоритом натрия концентрацией 350-300 мг/л из расчета 300 мл гипохлорита на 1 л сгустка при выдержке субстрата в течение 24 часов в прохладном месте. Объединение всех партий сыворотки, которые были получены методом отсоса (слива) - основная партия и отжатая из сгустков крови с добавлением гипохлорита натрия осуществляли после раздельного центрифугирования и консервирования сывороток. (Патент РФ №2196591 МПК А61К 33/14, А61К 35/16, опубликован 2003.01.20 - прототип).

Недостатком данного способа является то, что он не позволяет получить цельную сыворотку в связи с тем, что во время переработки сгустка вводится большое количество гипохлорита натрия, снижающее активность сыворотки, то есть снижается титр антител.

Задачей, на решение которой направлено заявленное изобретение, является разработка способа, обеспечивающего получение цельной сыворотки при высоком ее выходе от объема взятой крови.

Указанный технический результат достигается тем, что в способе получения нативной сыворотки крови животных, включающем взятие крови, в емкости, ее отслаивание при температуре +37…+38°С при последующей ретракции сгустка в холодильнике при температуре +4…+6°С, отсос сыворотки и отжатие сгустков крови, центрифугирование, консервирование и объединение сывороток, согласно заявленному изобретению, взятие крови осуществляют после предварительного смачивания стенок емкости гипохлоритом натрия концентрацией 350-300 мг/л из расчета 3,0-3,5 мл гипохлорита натрия на 1 л объема емкости, используемой для взятия крови, а процесс отслаивания проводят в течение 2-3 часов при последующей ретракции сгустка в холодильнике в течение 16-18 часов, при этом перед размещением емкости с кровью в холодильник производят отделение сформировавшегося сгустка путем встряхивания емкости при закрытой крышке, а после отсоса основной партии сыворотки сгусток измельчают до частиц 4-6 см³ и выдерживают в холодильнике при температуре +2…+4°С в течение не менее 24 часов для осуществления ретракции измельченного сгустка и после слива сыворотки ее центрифугируют, консервируют и объединяют с основной партией.

На первом этапе исследований определялась оптимальная длительность процесса ретракции при получения основной партии сыворотки (без отжатия сгустка) в сравнительном варианте по заявленному способу и способу по прототипу, при этом по прототипу кровь отслаивали при температуре +37…+38°С в течение 30-40 минут, а по заявленному способу при той же температуре в течение 2-3 часов. Как показали исследования, максимальный выход нативной сыворотки во время ретракции отстоявшегося сгустка в холодильнике при температуре +4…+6°С по заявленному способу наблюдался при длительности процесса ретракции от 16 до 18 часов при количественном выходе нативной сыворотки на уровень 350-355 мл из одного литра исходной крови, в то время как длительность процесса ретракции по прототипу была на уровне 22-24 часов при максимальном выходе сыворотки 317-319 мл.

Таким образом, увеличение времени отслаивания сгустка крови до 2-3 часов сокращало не только длительность процесса ретракции сгустка в холодильнике, но и увеличивало выход нативной сыворотки на 10,7%. Результаты исследований представлены в таблице 1.

На следующем этапе исследований выявлялась оптимальная степень измельчения сгустков крови после окончательной ретракции при получении основной партии сыворотки. Процесс ретракции данных сгустков проводился при предварительно отработанных параметрах процесса, а именно, при выдержке измельченных сгустков в холодильнике при температуре +2…+4°С в течение не менее 24 часов. Для проведения опыта сгустки массой 1 кг измельчали: до гомогенного состояния, до состояния фарша и на частицы размером от 1 до 7 см³ и выдерживали в холодильнике при температуре+2…+4°С в течение 25 часов. Результаты исследований представлены в таблице 2.

Таким образом, оптимальной степенью измельчения сгустка, полученного после извлечения основной партии сыворотки следует считать размер частиц сгустка от 4 до 6 см³, что обеспечивает дополнительно от 39,5 до 41,0 мл нативной качественной (без разбавления) сыворотки крови, и составляет 11,3% дополнительно к основной партии, а в целом по сравнению с прототипом превышение выхода сыворотки было на уровне 22,0%.

Заявленный способ осуществляется следующим образом. Взятие крови производили в 5 литровые емкости после предварительного смачивания внутренних стенок емкости 15 мл гипохлорита натрия концентрацией 350 мг/л, что позволяет свести до минимума риск развития случайно попавшей облигатной микрофлоры при взятии крови в производственных условиях Использование более концентрированного гипохлорита натрия и увеличение вносимого объема приводит к гемолизу эритроцитов, уплотнение сгустка не происходит, он очень рыхлый, полученная сыворотка темно красного цвета, не пригодная для дальнейшего использования. Данный прием позволяет обеспечить антисептику в процессе взятия, отслаивания, а так же легкое последующее отделение сгустка от стенок емкости путем ее встряхивания при закрытой крышке сосуда, не нарушая антисептики субстрата при постановке его в холодильник. Взятую кровь отслаивали, выдерживая в термостате при температуре +37°С в течение 3 часов, и после встряхивания емкости и отделения сгустка от стенок помещали в холодильник с температурой +5°С на 18 часов (до окончательной ретракции), далее производили отсос сыворотки, а сгусток измельчали до размера частиц 4-6 см³ и выдерживали при в холодильнике при температуре +2…+4°С в течение 24 часов. После слива сыворотки ее центрифугировали, консервировали и объединяли с основной партией.

Использование заявленного способа получения нативной сыворотки крови животных позволяет получить цельную (не разбавленную) сыворотку при высоком ее выходе от объема взятой крови.