Результат интеллектуальной деятельности: Способ диагностики степени тяжести вегетативных нарушений при болезни Паркинсона

Изобретение относится к области медицины, в частности к неврологии, а именно к лабораторной диагностике вегетативных нарушений, и может быть использовано в качестве объективного метода определения степени тяжести вегетативных нарушений при болезни Паркинсона.

Вегетативные нарушения могут встречаться на любой стадии болезни Паркинсона (БП), в том числе предшествовать развернутому классическому симптомокомплексу и не всегда зависят от формы и тяжести моторных проявлений. Данные о частоте встречаемости вегетативных расстройств при болезни Паркинсона рознятся, но в целом, актуальность проблемы немоторных, а именно, вегетативных симптомов ярко иллюстрируют следующие данные: 62% пациентов с БП не говорят своему лечащему врачу-неврологу о таких проблемах, как апатия, боль, сексуальная дисфункция, недержание кала, нарушение сна, головокружения, падения артериального давления, не предполагая их связи с БП [Катунина Е.А., Бездольный Ю.Н. Эпидемиологические исследования паркинсонизма: Методические рекомендации. Москва: Российский государственный медицинский университет. 2010; с. 43]. На премоторных стадиях вегетативная дисфункция может протекать субклинически, что делает невозможным применение существующих методов диагностики (например, нагрузочные и фармакологические пробы) и ведет к несвоевременному выявлению этих нарушений. Позднее выявление вегетативных расстройств обуславливает затруднение возможности их коррекции и наряду с двигательным дефицитом, ведет к прогрессированию и инвалидизации [Титова Н.В., Чаудури К.Р. Немоторные симптомы болезни Паркинсона: подводная часть айсберга. Анналы неврологии. 2017. Т.П. №4. С. 1-14]. Наиболее распространенные методы диагностики - ортостатические пробы, исследование вариабельности сердечного ритма, вегетативных рефлексов, терморегуляции, тестирование по специальным опросникам применяются при появлении соответствующих жалоб, что, как правило, характерно для далекозашедших стадий заболевания. Несмотря на целый ряд положительных характеристик, многие методы не имеют четких границ нормы и патологии, зачастую носят субъективный характер, требуют использования специального оборудования, значительных временных затрат. Все это обусловливает необходимость разработки общедоступных методов своевременной объективной диагностики вегетативной дисфункции при БП.

Известен способ лабораторной диагностики ранних клинических проявлений болезни Паркинсона [Патент РФ №2606591 Угрюмов М.В., Нигматуллина P.P., Залялова З.А., Ким А.Р., Кудрин B.C. Способ ранней доклинической диагностики болезни Паркинсона], основанный на определении в плазме крови с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) концентрации норадреналина (НА), дофамина (ДА), 3,4-диоксифениоаланина (L-ДОФА), 3,4-диоксифенилуксусной кислоты (ДОУФК), и сравнении полученных результатов с концентрацией, предварительно измеренной у здоровых людей. При снижении концентрации НА на 57-67% диагностируют дрожательную форму. При снижении концентрации норадреналина НА на 80-90% диагностируют ригидную форму. При снижении концентрации ДА в плазме крови на 69-79% диагностируют ригидную форму. При снижении концентрации L-ДОФА на 57-67% диагностируют дрожательную форму болезни Паркинсона. При снижении L-ДОФА на 78-88% диагностируют ригидную форму. При снижении концентрации ДОФУК на 69-79% диагностируют ригидную форму болезни Паркинсона. Преимущество способа: высокая точность и ранняя диагностика различных форм болезни Паркинсона. Недостатки: высокая трудоемкость процесса, поскольку способ требует исследования нескольких биомаркеров; постановка акцента на моторных симптомах, в то время как вегетативные проявления не учитываются.

Известен способ верификации и вегетативных расстройств и определение их степени тяжести при помощи шкалы, разработанной Н.В.Федоровой и А.Ю.Яблонской на базе кафедры неврологии ГОУ ДПО РМАПО [Н.В. Федорова, А.Ю. Яблонская. Шкала для оценки вегетативных нарушений у пациентов с болезнью Паркинсона. Методическая разработка. Москва, 2011]. Способ основан на рейтинговой оценке выраженности вегетативных симптомов в баллах с использованием подшкал и опросников, включающих критерии диагностики сердечно-сосудистых, желудочно-кишечных, урологических, кожно-трофических, сексуальных расстройств, нарушений терморегуляции. Недостатком такого метода является длительность тестирования, субъективизм оценки состояния, требующий значительных временных затрат со стороны пациента и врача, что приводит к быстрой истощаемости больного, часто к отказу от данного исследования.

Способов лабораторной диагностики степени тяжести вегетативных нарушений в изученных нами патентных источниках и научной медицинской литературе не обнаружено.

Технический результат: повышение специфичности и точности диагностики степени тяжести вегетативных нарушений, доступность, объективизация способа диагностики. Результат достигается путем определения концентрации пептида галанина в сыворотке крови пациента БП. При количественном содержании галанина от 16 нг/мл и выше делают вывод об отсутствии вегетативных нарушений, при значении галанина от 10 до 16 нг/мл диагностируется легкий уровень вегетативных нарушений, 3-10 нг/мл - умеренные нарушения, 2 и ниже нг/мл - тяжелые вегетативные нарушения.

Способ осуществляют следующим образом:

У обследуемого больного из вены в стеклянную центрифужную пробирку забирают 5,0 мл крови утром натощак. Сыворотку получают центрифугированием при 1000 оборотах в течение 20 минут. Отделенную сыворотку можно хранить 2 часа при комнатной температуре и в течение длительного периода при -20 градусах и ниже [Инструкция к набору CEB084Hu "Elisa Kit for galanin (GAL)", США, для определения Галанина методом иммуноферментного анализа (ИФА)]. Технология определения сывороточного уровня галанина базируется на проведении конкурентного твердофазного ИФА с использованием специализированных стандартных тест-систем. Необходимые реактивы: иммуноферментный набор для количественного определения галанина методом конкурентного ИФА в сыворотке, плазме, тромбоцитах, моче, тканевых гомогенатах, клеточных лизатах, в супернатантах клеточных культур и других биологических жидкостях организма ("Elisa Kit for galanin (GAL)", страна-производитель - США), микропланшетный ридер с фильтром 450±10 нм, прецизионная одноканальная или многоканальная пипетки со сменными наконечниками, пробирки Эппендорфа для разведения образцов, деионизированная или дистиллированная вода, фильтрационная бумага для подсушивания планшета, ванночка для промывающего раствора. Микропланшет в наборе сорбирован моноклональными антителами специфичными к галанину. Конкурентная реакция происходит между галанином, меченным биотином, немеченным галанином (в образцах или контроле) и сорбированными антителами специфичными к галанину. После 6 инкубации несвязавшийся конъюгат удаляют отмывкой. Затем авидин, конъюгированный с пероксидазой хрена (HRP) добавляется в каждую лунку планшета и проводится инкубация. Количество связанного конъюгата пероксидазы хрена обратно пропорционально концентрации галанина в образце. После добавления тетраметилбензидина (ТМБ) интенсивность окрашивания обратно пропорциональна концентрации галанина в образце. Конкретные показатели, дифференцирующие степень тяжести вегетативных нарушений, высчитывались с использованием R-квадрата путем регрессионного анализа и сравнивались с результатами тестирования по Шкале для оценки вегетативных нарушений у пациентов с болезнью Паркинсона (Н.В. Федорова, А.Ю. Яблонская).

Способ обеспечивает точность диагностики степени тяжести вегетативных нарушений при БП, значительно сокращает диагностические сроки, а также повышает достоверность субъективных симптомов вегетативных проявлений, что позволяет проводить своевременную адекватную терапию. Исследуют кровь больного, при этом проводят определение количественного содержания галанина в сыворотке крови, при его значении от 16 нг/мл и выше делают вывод об отсутствии вегетативных нарушений, при значении галанина от 10 до 16 нг/мл диагностируется легкий уровень вегетативных нарушений, 3-10 нг/мл - умеренные нарушения, 2 и ниже нг/мл - тяжелые вегетативные нарушения.

Данный способ был апробирован при обследовании 73 человек с болезнью Паркинсона в возрасте от 42 до 81 года, 34 мужчин и 39 женщин. Группу контроля составили 15 практически здоровых лиц, сопоставимых по полу и возрасту с основной группой.

Примеры конкретного выполнения.

Пример №1. Пациент В., 74 года. Болезнь Паркинсона в течение 2 лет. Предъявляет жалобы на тремор в левых конечностях, скованность, замедленность и неловкость движений в них, также отмечает частые запоры, головокружения при вертикализации, эпизодические падения артериального давления до 85/55 мм рт ст., усиленное потоотделение, плохую переносимость жары/холода, сухость кожных покровов, ощущение неполного опорожнения мочевого пузыря при мочеиспускании. С помощью иммуноферментного анализа по вышеописанной методике определен сывороточный уровень галанина - 7,6 нг/мл, что соответствует умеренной степени выраженности вегетативных нарушений. При этом степень вегетативных нарушений по Яблонской-Федоровой составила 17 баллов (умеренные вегетативные расстройства)

Пример №2. Пациент В. 77 лет. Жалобы на шаркающую походку, общую замедленность движений, больше слева, скованность. Первые проявления БП появились в возрасте 74 лет. Субъективных жалоб на проявления вегетативной дисфункции пациент не предъявлял. По шкале Яблонской-Фёдоровой общий балл был равен 1, что означает отсутствие вегетативных нарушений. Сывороточный уровень галанина составил 56,8 баллов, что объективизирует отсутствие вегетативных расстройств.

Пример №3. Пациент С, 65 лет. Жалобы на замедленность и скованность, тремор, возникающий в покое, сильнее в правых конечностях, наклон туловища вперед, шаркающую походку. Субъективно жалобы на проявления вегетативной дисфункции отсутствовали.

При проведении иммуноферментного анализа был получен сывороточный уровень галанина 1,2 нг/мл, что указывает на наличие тяжелых вегетативных нарушений. При более углубленном исследовании вегетативной функции была выявлена ортостатическая гипотензия, никтурия, склонность к стойким запорам, выраженные терморегуляционные, трофические нарушения, что по шкале Яблонской-Федоровой соответствовало 34 баллам (тяжелые вегетативные нарушения).