×
19.11.2019
219.017.e36d

Способ лечения онкологических заболеваний с помощью инъекций лекарственного препарата

Вид РИД

Изобретение

Юридическая информация Свернуть Развернуть
Краткое описание РИД Свернуть Развернуть
Аннотация: Изобретение относится к медицине и может быть использовано для лечения онкологических заболеваний. Для этого вводят водосодержащую суспензию липосом одинакового диаметра с инкапсулированным противоопухолевым лекарственным препаратом. Перед введением суспензии липосом одинакового диаметра с инкапсулированным противоопухолевым лекарственным препаратом вводят три суспензии липосом различного диаметра с йодсодержащим рентгеноконтрастным средством. Первую суспензию получают путем пропускания через экструдер, снабженный мембраной с диаметром пор 200 нм. Вторую суспензию получают путем пропускания через экструдер, снабженный мембраной с диаметром пор 100 нм. Третью суспензию получают путем пропускания через экструдер, снабженный мембраной с диаметром пор 50 нм. После введения каждой суспензии липосом методом компьютерной томографии определяют степень накопления липосом в опухолевой ткани в зависимости от диаметра липосом. Затем выбирают диаметр липосом с наибольшей степенью накопления в опухолевой ткани. Лекарственный препарат вводят внутривенно инкапсулированным в липосомы с тем же диаметром, который обеспечивает их наибольшую степень накопления в опухоли. Изобретение повышает эффективность лечения онкологического заболевания. 3 пр.
Реферат Свернуть Развернуть

Изобретение относится к области медицины и ветеринарии, и может быть использовано при лечении онкологических заболеваний у человека и животных с помощью инъекций противоопухолевого лекарственного препарата, предварительно инкапсулированного в липосомы.

Известен способ лечения онкологических заболеваний с помощью внутривенных инъекций раствора лекарственного противоопухолевого препарата - Доксорубицина пациенту с онкологическим заболеванием [Doxorubicin hydrochloride // European Pharmacopoeia. Sixth Edition: монография. 2005. С. 1389-1390.].

Данный способ содержит признаки, совпадающие с существенными признаками предлагаемого технического решения, такие, как использование внутривенных инъекций раствора лекарственного препарата для лечения онкологических заболеваний.

Известен способ лечения онкологических заболеваний людей с помощью внутривенных инъекций суспензии липосом с инкапсулированным противоопухолевым лекарственным препаратом (Цисплатином) [Boulikas Т., Clinical overview on Lipoplatin™: a successful liposomal formulation of cisplatin // Expert Opinion on Investigational Drugs. 2009. V. 18(8). P. 1197-1218. doi: l0.1517/13543780903114168].

Данный способ содержит признаки, совпадающие с существенными признаками предлагаемого технического решения, такие, как лечение онкологических заболеваний с помощью инъекций лекарственного препарата путем внутривенного введения суспензии липосом с инкапсулированным противоопухолевым лекарственным препаратом.

Наиболее близким к заявляемому является известный способ лечения онкологических заболеваний с помощью инъекций лекарственного препарата путем введения водосодержащей суспензии липосом одинакового диаметра с инкапсулированным противоопухолевым лекарственным препаратом [Mikhaylov G., Mikac U., Magaeva A.A., Itin V.I., Naiden E.P., Psakhye I., Babes L., Reinheckel Т., Peters C, Zeiser R., Bogyo M, Turk V., Psakhye S.G., Turk В., Vasiljeva O.. Ferri-liposomes as an MRI-visible drug delivery system for targeting tumours and their microenviroment // Nat. Nanotechnol. 2011. V. 6(9). P. 594-602. см. стр. 600, Фиг. 4 (С)] - прототип.

В данном способе осуществляют лечение онкологического заболевания рака молочной железы in vivo на ортотопически трансплантированной мышиной модели вышеуказанной опухоли (опухолевые клетки линии MMTV-PyMT, полученные из трансгенных мышей) с помощью инъекций противоопухолевого лекарственного препарата JPM 565, являющегося ингибитором цистеиновой протеазы катепсина и замедляющего скорость роста опухоли, предварительно инкапсулированного в липосомы со средним диаметром 92,3 нанометров (нм), имеющие липидный состав, при котором содержание яичного фосфатидилхолина составляет 95% и содержание 1,2-дистеароил-sn-глицеро-3-фосфоэтаноламин-N-[метокси-(полиэтиленгликоля)-2000] равно 5%. В данном способе лечение проводят в течение 20 дней путем внутрибрюшинного введения лекарственного препарата в количестве 100 мг/кг тела животного каждые два дня при содержании препарата JPM 565 в водосодержащей суспензии липосом 12,5 мг/мл. При этом используют липосомы, которые кроме лекарственного препарата дополнительно содержат магнитные наночастицы магнетита, имеющие средний диаметр 5-7 нм, используемые для визуализации опухоли и фокусировки (концентрирования) препарата в опухоли с помощью наложения (воздействия) внешнего постоянного магнитного поля. В данном способе об эффективности лечения судят по замедлению скорости роста опухоли. Так, для опухоли, имеющей объем 125 мм3 на момент начала лечения, спустя 18 дней после начала лечения объем опухоли составил 400 мм3, в то время, как без использования противоопухолевого препарата (контрольная группа мышей) объем опухоли возрастал до 950 мм3. Таким образом, известный способ лечения за 18 дней замедлял скорость роста опухоли в 2,4 раза.

Недостатком известного способа является то, что он не позволяет обеспечить достаточно высокую эффективность лечения онкологического заболевания. Кроме того, данный способ неизбежно приводит к появлению побочного эффекта, обусловленного комбинацией относительной длительности противоопухолевого лечения и присутствием во всех липосомах кроме лекарственного препарата также наночастиц магнетита, медленно выводящихся из организма, накапливающихся в печени и требующих для их выведения из организма использования дополнительных препаратов.

Техническая проблема изобретения заключается в разработке способа лечения онкологических заболеваний с помощью инъекций лекарственного препарата, лишенного вышеуказанного недостатка.

Технический результат изобретения состоит в повышении эффективности лечения онкологических заболеваний.

Предварительно были проведены эксперименты с различными способами лечения онкологических заболеваний, которые показали, что указанный технический результат достигается в том случае, когда в способе лечения онкологических заболеваний с помощью инъекций лекарственного препарата, включающем введение водосодержащей суспензии липосом одинакового диаметра с инкапсулированным противоопухолевым лекарственным препаратом, перед введением суспензии липосом одинакового диаметра с инкапсулированным противоопухолевым лекарственным препаратом вводят три суспензии липосом различного диаметра, с йодсодержащим рентгеноконтрастным средством, первую

суспензию получают путем пропускания через экструдер, снабженный мембраной с диаметром пор 200 нм, вторую суспензию получают путем пропускания через экструдер, снабженный мембраной с диаметром пор 100 нм, третью суспензию получают путем пропускания через экструдер, снабженный мембраной с диаметром пор 50 нм, введение каждой последующей суспензии липосом с йодсодержащим рентгеноконтрастным средством осуществляют через 1-4 ч после введения предыдущей суспензии липосом, после введения каждой суспензии липосом методом компьютерной томографии (КТ) определяют степень накопления липосом в опухолевой ткани в зависимости от диаметра липосом, затем выбирают диаметр липосом с наибольшей степенью накопления в опухолевой ткани, и лекарственный препарат вводят внутривенно, инкапсулированным в липосомы с тем же липидным составом и диаметром, обеспечивающим их наибольшую степень накопления в опухолевой ткани.

Предлагаемый способ является новым и не описан в патентной и научно-технической литературе.

Предлагаемый способ может быть использован для лечения различных онкологических заболеваний поверхностной или глубокой локализации, например, таких, как рак молочной железы, глиома, рак простаты и т.д. При этом при лечении могут быть использованы различные лекарственные препараты, например, такие как JPM 565, Цисплатин, Иринотекан и т.д. Следует отметить, что в предлагаемом способе используемые лекарственные препараты обязательно должны селективно (избирательно) действовать на подлежащий лечению тип опухоли и быть предварительно инкапсулированы в липосомы, причем для лечения онкологических заболеваний пациенту или больному животному внутривенно необходимо вводить водосодержащую суспензию таких липосом, поскольку механизм всасывания липосом из желудочно-кишечного тракта при пероральном их введении до конца не ясен. При этом липосмы могут быстро деградировать под действием желудочного сока, либо ферментов желчи, в результате чего лекарственный препарат, не обладающий селективностью (избирательностью) по отношению к клеткам опухоли, но обладающий высокой токсичностью (например, Доксорубицин), неизбежно будет воздействовать как на опухолевые клетки, так и на здоровые клетки организма. Внутримышечное введение используемых липосом также может быть нецелесообразным ввиду того, что при этом создается депо липосом в месте введения, а скорость элиминации из депо зависит от размера липосом и составляет от нескольких часов (при диаметре липосом менее 50 нм) до нескольких дней (при диаметре липосом более 50 нм), что замедляет процесс лечения, а в некоторых случаях даже при минимальном диаметре липосом 30-50 нм такие липосомы ввиду малого диаметра капилляров организма могут вообще не дойти из мышцы до пораженного опухолью органа.

В предлагаемом техническом решении, так же, как и в прототипе, используют водосодержащую суспензию липосом, которая в качестве дисперсионной среды может содержать воду или водные растворы различных добавок, например, таких как компоненты буфера, соли, например, NaCl, сахара и т.д. При этом концентрация липосом с инкапсулированным в них лекарственным препаратом в каждом курсе лечения может быть различна.

Следует отметить, что получение липосом с инкапсулированным в них лекарственным препаратом описано в литературе [см. прототип]. Кроме того, коммерчески доступен ряд противоопухолевых препаратов, которые уже инкапсулированны в липосомы [Upendra Bulbake, Sindhu Doppalapudi, Nagavendra Kommineni and Wahid Khan. Liposomal Formulations in Clinical Use: An Updated Review // Pharmaceutics. 2017. V. 9. Р. 1-33].

Липидный состав используемых липосом может быть различен и определяется качественным и количественным соотношением смеси липидов, используемых в процессе получения липосом, однако в пределах одного курса лечения липидный состав всегда должен быть одинаков, поскольку степень и скорость накопления липосом зависят от их липидного состава. В предлагаемом способе перед курсом лечения больного человека или животного им предварительно необходимо внутривенно ввести три суспензии липосом различного диаметра, которые могут быть получены путем пропускания суспенизии липосом через экструдер, снабженный мембраной с круглыми порами, диаметр которых выбран из группы, включающей 200, 100 и 50 нм. Экспериментально было показано, что полученные липосомы имеют сферическую форму и достаточно узкое распределение по размеру, причем их средний диаметр близок к диаметру пор в использованной мембране. Вводимые липосомы не должны содержать лекарственного препарата, но должны содержать внутри одинаковую мольную концентрацию рентгеноконтрастного средства.

При реализации способа исходная суспензия липосом может быть получена методом обращения фаз с последующей гомогенизацией суспензии методом экструзии. В качестве ЙРС можно использовать различные коммерчески доступные водорастворимые средства, содержащие неионогенный йод, например, такие препараты, как Йогексол, Йопромид, Йопамидол и т.д. При этом концентрация ЙРС внутри липосом может быть различной, однако перед началом конкретного курса лечения концентрация ЙРС в липосомах всегда должна быть одинакова. Используемый ЙРС малотоксичны и выводятся из организма в неизменном виде.

Загрузку ЙРС в липосомы проводят на стадии получения липосом. В круглодонной колбе диспергируют необходимую смесь липидов в смеси, содержащей 75 об. % хлороформа и 25 об. % метанола, затем к этому раствору добавляют предварительно сконцентрированный водный раствор йодсодержащего препарата. Смесь обрабатывают ультразвуком на ультразвуковой бане до образования устойчивого коллоидного раствора, затем колбу присоединяют к роторному испарителю для отгонки органических растворителей. К образовавшемуся гелю добавляют аликвоту водосодержащего натрий-фосфатного буфера и встряхивают до получения суспензии. Для получения гомогенизированных по размеру липосом полученную суспензию последовательно пропускают через экструдер, снабженный мембраной с диаметром пор 200, 100 и 50 нм. Способ получения липосом с различным диаметром и достаточно узким распределением по размеру известен [Ong S., Chitneni М., Lee K., Ming L., Yuen K. Evaluation of Extrusion Technique for Nanosizing Liposomes // Pharmaceutics. 2016. V. 8(4), P. 1-12. doi:10.3390/pharmaceutics8040036]. Мембраны с диаметром пор 50, 100 и 200 нм коммерчески доступны [https://avantilipids.com/divisions/equipment-products].

В предлагаемом способе перед началом лечения используют три типа липосом с различным диаметром, не содержащих инкапсулированного противоопухолевого препарата, но содержащих внутри одинаковую мольную концентрацию одного из ЙРС.

В предложенном способе после каждой инъекции суспензии липосом с ЙРС методом КТ с помощью специальной программы определяют наибольшую степень накопления липосом в зависимости от диаметра используемых липосом. Определять степень накопления липосом в опухолевой ткани можно начинать непосредственно после инъекции суспензии липосом, содержащей ЙРС. Осуществлять последующие инъекции суспензии липосом с другим диаметром можно через 1-4 ч после введения предыдущей суспензии. Указанный оптимальный интервал времени между инъекциями липосом был определен экспериментально.

Накопление липосом в опухолевой ткани обусловлено известным эффектом повышенной проницаемости кровеносных сосудов опухоли и удерживания наночастиц (EPR-эффектом) [Nichols J.W.; Bae Y.Н. EPR: Evidence and fallacy // Journal of Controlled Release. 2014. V. 190. P. 451-464]. После этого выбирают диаметр липосом с наибольшей степенью накопления в опухолевой ткани и лекарственный препарат вводят инкапсулированным в липосомы с тем же липидным составом и диаметром, обеспечивающим их наибольшую степень накопления в опухолевой ткани.

Из научно-технической литературы известно, что накопление липосом зависит как от размеров самих липосом, так и от размера пор сосудов в опухолевой ткани и стадии онкологического заболевания. Поскольку накопление липосом варьируется от пациента к пациенту, заранее нельзя достоверно предсказать оптимальную методику лечения [Гуревич Д.Г., Меерович И.Г., Меерович Г.А., Воробьев С.И., Певгов В.Г., Смирнова З.С, Оборотова Н.А., Лукьянец Е.А., Барышников А.Ю. Влияние размеров липосом на уровень и селективность накопления тиосенса в опухоли // Российский биотерапевтический журнал. 2007. Т. 2. С. 45-49]. При использовании описанного в прототипе способа в клинической практике могут наблюдаться случаи нерационального введения лекарственного препарата, инкапсулированного в липосомы, одновременно содержащие магнитные наночастицы. Учитывая относительную длительность курса лечения вышеописанными противоопухолевыми препаратами это неизбежно может приводить к накоплению в организме критических концентраций железа и лекарственного препарата, требующих дополнительных манипуляций по их выведению из организма, что осложняет известный способ лечения. В предложенном способе липосомы не содержат наночастиц железа и, следовательно, не требуют дополнительного введения препаратов для выведения железа из организма.

При реализации предлагаемого способа диаметр и степень полидисперсности используемых липосом контролируют методом динамического светорассеяния. Концентрация неиногенного йода в липосомах при необходимости может быть определена рентгенофлуоресцентным методом. Степень накопления липосом в опухоли определяют методом КТ по отношению модуля разности усредненного сигнала для ткани до и после введения суспензии липосом с ИРС к стандартному отклонению шума фона изображения.

Об эффективности лечения судят либо по уменьшению скорости роста опухоли в процессе лечения, либо по уменьшению объема опухоли в процессе лечения. При этом объем опухоли рассчитывают по формуле V=(a×b2)/2, где а и b - это самый большой и самый маленький диаметры опухоли. Начинать лечение целесообразно после выхода липосом с ЙРС из организма.

Преимущества предлагаемого способа иллюстрируют следующие примеры.

Пример 1.

В опыте используют подопытных животных - иммунокомпетентных FVB/N мышей с привитой опухолью молочной железы мыши (опухолевые клетки линии MMTV-PyMT, полученные из трансгенной мыши). Подопытных животных с привитой опухолью делят на две группы по 6 особей в каждой - контрольную (мыши, которых не лечат) и опытную (мыши, которых лечат). Об эффективности лечения заболевания следят по замедлению скорости роста опухоли.

В качестве ЙРС в примере используют препарат Йогексол. Липосомы с тем же липидным составом, что и в прототипе, получают методом обращения фаз путем диспергирования в круглодонной колбе 95 мг фосфатидилхолина и 5 мг 1,2-дистеароил-зп-глицеро-3-фосфоэтаноламин-N-[метокси-(полиэтиленгликоля)-2000] в смеси, содержащей 7,5 мл хлороформа и 2,5 мл метанола, после чего в полученный раствор добавляют 2 мл предварительно сконцентрированного водного раствора Йогексола, содержащего 500 мг йода/мл раствора. Полученную смесь в течение 5 мин обрабатывают ультразвуком с частотой 15 кГц на ультразвуковой бане до образования устойчивого коллоидного раствора, затем на роторном испарителе отгоняют использованные органические растворители. К полученному гелю добавляют 3 мл водосодержащего 10 мМ натрий-фосфатного буфера (рН=7,4) и перемешивают до получения суспензии. Для получения трех суспензий липосом с различным диаметром весь объем исходной суспензии липосом, предварительно загруженных ЙРС, вначале пропускают через экструдер с мембраной с диаметром пор 200 нм. Треть прошедшей через мембрану суспензии оставляют для проведения эксперимента, а оставшиеся две трети прошедшей через мембрану суспензии повторно пропускают через экструдер с мембраной с другим диаметром пор 100 нм. Половину прошедшей через мембрану суспензии оставляют для проведения эксперимента, а оставшуюся половину суспензии снова пропускают через экструдер с мембраной с другим диаметром пор 50 нм. Прошедшую через мембрану суспензию также используют для проведения эксперимента. Неинкапсулированный ЙРС отделяют от суспензии липосом путем диализа в течение 10 ч в диализном мешке с размером пор 100 килодальтон (кДа) против 10 мМ натрий-фосфатного буфера (рН=7,4). Методом динамического светорассеяния было показано, что в опыте были получены три различные дисперсии липосом, имеющие средние диаметры 210, 105 и 55 нм, с индексом полидисперсности, равном или меньшем 0,1.

На 5-й день после привития опухоли животным из опытной группы внутривенно вводят 150 мкл суспензии липосом со средним диаметром 210 нм, содержащей ЙРС, после чего методом КТ определяют степень накопления липосом в опухоли. При этом максимальную степень накопления, равную 9%, наблюдают через 50 мин после введения суспензии липосом. Через 1 ч после введения вышеуказанной суспензии липосом внутривенно вводят другую суспензию липосом со средним диаметром 105 нм, содержащую Йогексол. Максимальное значение степени накопления суспензии липосом в опухоли, равное 13%, наблюдают через 30 мин после инъекции. Через 1 ч после введения второй суспензии липосом внутривенно вводят третью суспензию липосом со средним диаметром 55 нм. Максимальное значение степени накопления суспензии липосом в опухоли, равное 25%, наблюдают через 30 мин после инъекции.

Сравнение полученных результатов показало, что наибольшей степенью накопления в опухолевой ткани обладают липосомы, имеющие средний диаметр 55 нм.

После этого получают липосомы с вышеописанным липидным составом и оптимальным средним диаметром, близким к 50 нм, не содержащие ЙРС, но содержащие внутри противоопухолевый препарат - ингибитор цистеиновой протеазы катепсина JPM-565. Получение данных липосом осуществляют путем упаривания на роторном испарителе раствора липидов в смеси хлороформ-метанол в соотношении 3:1 по объему до образования на стенках колбы равномерной пленки. Полученную пленку суспендируют в водном растворе противоопухолевого препарата, содержащего 12,5 мг JPM-565 в 1 мл раствора, до образования суспензии липосом, которую после этого пропускают через экструдер с мембраной с диаметром пор 50 нм. Для очистки от незагрузившегося в липосомы противоопухолевого препарата полученную суспензию пропускают через обессоливающую колонку марки NAP-25 (GE Healthcare illustra™ NAP™ Columns) с подвижной фазой, представляющей собой 10 мМ натрий-фосфатный буфер (рН=7,4).

Лечение подопытных животных так же, как и в прототипе, проводят после того, как объем опухоли достигнет 125 мм3 и начинают через 3 ч после последней инъекции суспензии липосом с ЙРС. Лечение проводят путем внутривенного введения водосодержащей суспензии липосом, содержащих противоопухолевый препарат в дозе 100 мг/кг тела мыши (по количеству JPM-565). Контрольной группе мышей вместо суспензии липосом с лекарственным препаратом внутривенно вводят вышеописанный раствор 10 мМ натрий-фосфатного буфера. Внутривенные инъекции проводят каждые два дня, при этом общее количество инъекций в каждой группе мышей было равно 10. Объем опухоли у мышей измеряют каждый день и об эффективности лечения судят по изменению скорости роста опухоли.

Опыт показал, что в экспериментальной группе мышей объем опухоли на 18-й день лечения составлял 310 мм3, что в 4 раза меньше, чем у контрольной группы мышей, не получающих лекарство. При этом достигнутый в прототипе эффект замедления скорости роста опухоли в 2,4 раза в нашем случае наблюдают уже на 12-й день лечения.

Пример 2.

В опыте используют подопытных животных - мышей с привитой опухолью предстательной железы человека (клеточная линия 22Rv1). Подопытных животных с привитой опухолью делят на две группы по 6 особей в каждой - контрольную (мыши, которых не лечат) и опытную (мыши, которых лечат). Об эффективности лечения заболевания следят по замедлению скорости роста опухоли. В качестве ЙРС используют препарат Йопромид.

Липосомы получают методом обращения фаз путем диспергирования в круглодонной колбе 80 мг лецитина, 15 мг холестерина и 5 мг 1,2-дистеароил-sn-глицеро-3-фосфоэтаноламин-N-[метокси-(полиэтиленгликоля)-2000] в смеси, содержащей 7,5 мл хлороформа и 2,5 мл метанола, после чего в полученный раствор добавляют 2 мл предварительно сконцентрированного водного раствора Йопромида, содержащие 450 мг йода/мл раствора. Полученную смесь в течение 5 мин обрабатывают ультразвуком с частотой 20 кГц на ультразвуковой бане до образования устойчивого коллоидного раствора, затем на роторном испарителе отгоняют использованные органические растворители. К полученному гелю добавляют 3 мл водосодержащего 10 мМ натрий-фосфатного буфера (рН=7,4), перемешивают до получения суспензии. Для получения трех суспензий липосом с различным диаметром весь объем исходной суспензии липосом, предварительно загруженных ЙРС, вначале пропускают через экструдер с мембраной с диаметром пор 200 нм. Треть прошедшей через мембрану суспензии оставляют для проведения эксперимента, а оставшиеся две трети прошедшей через мембрану суспензии повторно пропускают через экструдер с мембраной с другим диаметром пор 100 нм. Половину прошедшей через мембрану суспензии оставляют для проведения эксперимента, а оставшуюся половину суспензии снова пропускают через экструдер с мембраной с другим диаметром пор 50 нм. Прошедшую через мембрану суспензию также используют для проведения эксперимента. Неинкапсулированное ЙРС отделяют от суспензии липосом путем диализа в течение 10 ч в диализном мешке с размером пор 100 кДа против 10 мМ натрий-фосфатного буфера (рН=7,4). Методом динамического светорассеяния было показано, что в опыте были получены три различные дисперсии липосом, имеющие средние диаметры 198, 113 и 49 нм, с индексом полидисперсности, равном или меньшем 0,1.

На 7-й день после привития опухоли животным из опытной группы внутривенно вводят 150 мкл суспензии липосом со средним диаметром 198 нм, после чего методом КТ определяют степень накопления липосом в опухоли. При этом максимальную степень накопления, равную 7%, наблюдают через 1 ч после введения (инъекции) суспензии липосом с ЙРС. Через 1,5 ч после введения вышеуказанной суспензии липосом внутривенно вводят другую суспензию липосом со средним диаметром 113 нм, содержащую ЙРС. Максимальное значение степени накопления суспензии липосом в опухоли, равное 17%, наблюдают через 1 ч после внутривенной инъекции суспензии. Через 1,5 ч после введения второй суспензии липосом внутривенно вводят третью суспензию липосом со средним диаметром 49 нм. Максимальное значение степени накопления суспензии липосом в опухоли, равное 9%, наблюдают через 30 мин после инъекции суспензии.

Сравнение полученных результатов показало, что наибольшей степенью накопления в опухолевой ткани обладают липосомы, имеющие средний диаметр 113 нм.

После этого получают липосомы с вышеописанным липидным составом и оптимальным средним диаметром, близким к 100 нм, не содержащие ЙРС, но содержащие внутри противоопухолевый препарат - доксорубицин. Получение данных липосом осуществляют путем упаривания на роторном испарителе раствора липидов в смеси хлороформ-метанол, взятых в соотношении 3:1 по объему, до образования на стенках колбы равномерной пленки. Полученную пленку суспендируют 120 мМ водным раствором (NH4)2SO4, до образования суспензии липосом, которую после этого пропускают через экструдер, снабженный мембраной с диаметром пор 100 нм. Далее полученную суспензию очищают от сульфата аммония во внешнем буфере с помощью обессоливающей колонки марки NAP-25 (GE Healthcare illustra™ NAP™ Columns), затем к ней добавляют водный раствор Доксорубицина с концентрацией 12 мг/мл и инкубируют в течение 2 ч. Для очистки от незагрузившегося в липосомы противоопухолевого препарата полученную суспензию пропускают через обессоливающую колонку марки NAP-25 (GE Healthcare illustra™ NAP™ Columns) с подвижной фазой, представляющей собой 10 мМ натрий-фосфатный буфер (рН=7,4).

Лечения подопытных животных начинают через 4 ч после последней инъекции суспензии липосом с ЙРС. Лечение проводят путем внутривенного введения водосодержащей суспензии липосом, содержащих противоопухолевый препарат в дозе 9 мг/кг тела животного (по концентрации Доксорубицина). Суспензию липосом внутривенно вводят на 7, 12 и 17 дни после имплантации опухоли. Контрольной группе мышей вместо суспензии липосом с лекарственным препаратом внутривенно вводят вышеописанный раствор натрий-фосфатного буфера. Объем опухоли у мышей измеряют каждый день и об эффективности лечения судят по изменению скорости роста опухоли.

Опыт показал, что в экспериментальной группе мышей объем опухоли на 17-й день лечения оказался в 4 раза меньше, чем у контрольной группы мышей. При этом в среднем опухоль у мышей, получающих противоопухолевый препарат, с момента лечения уменьшилась на 80%.

Пример 3.

В опыте используют подопытных животных - крыс с привитой опухолью глиомы головного мозга (клеточная линия С6). Подопытных животных с привитой опухолью делят на две группы по 6 особей в каждой - контрольную (крысы, которых не лечат) и опытную (крысы, которых лечат). Об эффективности лечения заболевания следят по замедлению скорости роста опухоли. В качестве ЙРС используют Йопамидол.

Липосомы получают методом обращения фаз путем диспергирования в кругло донной колбе 250 мг фосфатидилхолина, 125 мг дипальмитоилфосфатидилхолина и 25 мг 1,2-дистеароил-sn-глицеро-3-фосфоэтаноламин-N-[метокси-(полиэтиленгликоля)-2000] в смеси, содержащей 37,5 мл хлороформа и 12,5 мл метанола, после чего в полученный раствор добавляют 10 мл предварительно сконцентрированного водного раствора препарата Йопамидол, содержащие 520 мг йода/мл раствора. Полученную смесь в течение 10 мин обрабатывают ультразвуком с частотой 14 кГц на ультразвуковой бане до образования устойчивого коллоидного раствора, затем на роторном испарителе отгоняют использованные органические растворители. К полученному гелю добавляют 15 мл водосодержащего 10 мМ натрий-фосфатного буфера (рН=7,4) и перемешивают до получения суспензии. Для получения трех суспензий липосом с различным диаметром весь объем исходной суспензии липосом, предварительно загруженных ЙРС, вначале пропускают через экструдер с мембраной с диаметром пор 200 нм. Треть прошедшей через мембрану суспензии оставляют для проведения эксперимента, а оставшиеся две трети прошедшей через мембрану суспензии повторно пропускают через экструдер с мембраной с другим диаметром пор 100 нм. Половину прошедшей через мембрану суспензии оставляют для проведения эксперимента, а оставшуюся половину суспензии снова пропускают через экструдер с мембраной с другим диаметром пор 50 нм. Прошедшую через мембрану суспензию также используют для проведения эксперимента. Неинкапсулированный ЙРС отделяют от суспензии липосом путем диализа в течение 10 ч в диализном мешке с размером пор 100 кДа против 10 мМ натрий-фосфатного буфера (рН=7,4). Методом динамического светорассеяния было показано, что в опыте были получены три различные дисперсии липосом, имеющие средние диаметры 187, 94 и 50 нм, с индексом полидисперсности, равном или меньшем 0,1.

На 7-й день после привития опухоли животным из опытной группы внутривенно вводят 1 мл суспензии липосом со средним диаметром 187 нм, содержащей ЙРС, после чего методом КТ определяют степень накопления липосом в опухоли. При этом максимальную степень накопления, равную 5%, наблюдают через 70 мин после введения суспензии липосом. Через 4 ч после введения вышеуказанной суспензии липосом внутривенно вводят другую суспензию липосом со средним диаметром 94 нм. Максимальное значение степени накопления суспензии липосом в опухоли, равное 20%, наблюдают через 1 ч после инъекции суспензии. Через 4 ч после введения второй суспензии липосом внутривенно вводят третью суспензию липосом со средним диаметром 50 нм. Максимальное значение степени накопления суспензии липосом в опухоли, равное 21%, наблюдают через 50 мин после инъекции.

Сравнение полученных результатов показало, что наибольшей степенью накопления в опухолевой ткани обладают липосомы, имеющие средний диаметр 50 нм.

После этого получают липосомы с вышеописанным липидным составом и оптимальным средним диаметром, близким к 50 нм, не содержащие ЙРС, но содержащие внутри противоопухолевый препарат - Йринотекан. Получение данных липосом осуществляют путем упаривания на роторном испарителе раствора вышеуказанных липидов с общей массой липидов 4,0 г в смеси хлороформ - метанол, взятых в соотношении 3:1 по объему, до образования на стенках колбы равномерной пленки. Полученную пленку суспендируют в водном раствором противоопухолевого препарата, содержащего 750 мг Йринотекана в 50 мл водного 5% раствора декстрозы с рН=6,2. При этом проводят три цикла, каждый из которых включает заморозку и разморозку смеси, до образования суспензии липосом, которую после этого пропускают через экструдер, снабженный мембраной с диаметром пор 50 нм. Для очистки от незагрузившегося в липосомы противоопухолевого препарата полученную суспензию пропускают через обессоливающую колонку марки NAP-25 (GE Healthcare illustra™ NAP™ Columns) с подвижной фазой, представляющей собой 10 мМ натрий-фосфатный буфер (рН=7,4).

Лечения подопытных животных начинают через 4 ч после последней инъекции суспензии липосом с ЙРС. Лечение проводят путем внутривенного введения водосодержащей суспензии липосом, содержащих противоопухолевый препарат в дозе 50 мг/кг тела (по концентрации Йринотекана). Суспензию липосом вводят по схеме 2 раза в неделю в течение 4-х недель. Контрольной группе крыс вместо суспензии липосом с лекарственным препаратом внутривенно вводят вышеописанный раствор натрий-фосфатного буфера. Объем опухоли у крыс измеряют каждый день и об эффективности лечения судят по изменению скорости роста опухоли.

Объем опухоли у леченых крыс на 28-й день лечения оказался в 4 раза меньше, чем у контрольных нелеченных крыс.

Таким образом, из приведенных примеров видно, что предложенный способ по сравнению с прототипом на 18-й день лечения замедляет рост опухоли с 400 мм3 (в прототипе) до 310 мм3, действительно повышая тем самым эффективность лечения онкологического заболевания в 1,5 раза. При этом в предложенном способе стадия подготовки к лечению занимает несколько часов.

Способ лечения онкологических заболеваний с помощью инъекций лекарственного препарата, включающий введение водосодержащей суспензии липосом одинакового диаметра с инкапсулированным противоопухолевым лекарственным препаратом, отличающийся тем, что перед введением суспензии липосом одинакового диаметра с инкапсулированным противоопухолевым лекарственным препаратом вводят три суспензии липосом различного диаметра с йодсодержащим рентгеноконтрастным средством, первую суспензию получают путем пропускания через экструдер, снабженный мембраной с диаметром пор 200 нм, вторую суспензию получают путем пропускания через экструдер, снабженный мембраной с диаметром пор 100 нм, третью суспензию получают путем пропускания через экструдер, снабженный мембраной с диаметром пор 50 нм, введение каждой последующей суспензии липосом с йодсодержащим рентгеноконтрастным средством осуществляют через 1-4 ч после введения предыдущей суспензии липосом, после введения каждой суспензии липосом методом компьютерной томографии определяют степень накопления липосом в опухолевой ткани в зависимости от диаметра липосом, затем выбирают диаметр липосом с наибольшей степенью накопления в опухолевой ткани, и лекарственный препарат вводят внутривенно инкапсулированным в липосомы с тем же липидным составом и диаметром, обеспечивающим их наибольшую степень накопления в опухолевой ткани.
Источник поступления информации: Роспатент

Showing 1-10 of 322 items.
20.06.2016
№217.015.03df

Оправка прошивного стана

Изобретение относится к области обработки металлов давлением на станах винтовой прокатки. Оправка имеет переменный профиль. Возможность удаления дефектов непрерывнолитой заготовки, уменьшение разностенности получаемых гильз обеспечивается за счет того, что в оправке с переднего торца,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002587702
Дата охранного документа: 20.06.2016
10.04.2016
№216.015.2b53

Способ изготовления струеформирующих сопел

Изобретение относится к области производства струеформирующих сопел, которые могут быть использованы для очистки поверхностей, удаления покрытий, создания шероховатости на поверхности, для резки и разделения материалов. Способ включает формирование рабочего отверстия в композиционном алмазном...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002579598
Дата охранного документа: 10.04.2016
10.04.2016
№216.015.2b79

Усиливающий сверхпроводящий метаматериал

Использование: для сверхмалошумящего усиления слабых радиотехнических сигналов. Сущность изобретения заключается в том, что усиливающий сверхпроводящий метаматериал состоит из гальванически связанных элементарных ячеек, смещенных постоянным током и проявляющих эффект квантовой интерференции с...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002579813
Дата охранного документа: 10.04.2016
10.04.2016
№216.015.2c52

Способ акустического каротажа

Изобретение относится к горному делу и предназначено для определения координат трещиноватых зон, пересекающих измерительную скважину, пробуренную в кровле выработки. Способ основан на экспериментально установленной закономерности влияния трещиноватой зоны на корреляционные характеристики...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002579820
Дата охранного документа: 10.04.2016
10.04.2016
№216.015.2cca

Способ извлечения золота из руд

Изобретение относится к области цветной металлургии. Способ извлечения золота включает цианирование руды при измельчении. В мельницу последовательно подают при соотношении твердой фазы к жидкой фазе от 3:2 до 2:1 предварительно дробленную до крупности фракций от 2 мм до 4 мм руду, добавку...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002579858
Дата охранного документа: 10.04.2016
10.04.2016
№216.015.2cd6

Способ защиты поверхности сляба из низколегированной стали перед его нагревом в методической печи под прокатку

Изобретение относится к области металлургии и может быть использовано при подготовке слябов из низколегированных сталей перед нагревом под прокатку. Способ защиты поверхности сляба из низколегированной стали при прокатке включает напыление алюминиевого газотермического покрытия на широкие грани...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002579866
Дата охранного документа: 10.04.2016
10.04.2016
№216.015.2d7d

Способ получения деформированных полуфабрикатов из сплава на основе алюминия

Изобретение относится к области металлургии, в частности к деформируемым сплавам на основе алюминия системы Al-Fe-Si в виде тонколистового проката, фольги, листов, плит, прессованных профилей, проволоки и др. Из деформированных полуфабрикатов могут быть получены изделия, предназначенные для...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002579861
Дата охранного документа: 10.04.2016
10.04.2016
№216.015.2e9d

Способ определения количества незамерзшей воды в мерзлых грунтах

Изобретение относится к геологии и может быть использовано при проектировании зданий и сооружений для определения количества незамерзшей воды в мерзлых грунтах. Для этого осуществляют бурение скважин с отбором керна, оттаивают полученный образец замороженного грунта и определяют суммарное...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002580316
Дата охранного документа: 10.04.2016
10.04.2016
№216.015.3217

Способ получения биоактивного покрытия с антибактериальным эффектом

Изобретение относится к медицине. Описан способ получения биоактивного покрытия с антибактериальным эффектом, который включает электроискровую обработку поверхности подложки обрабатывающим электродом, следующего состава (вес. %):биоактивная добавка - 5-40,антибактериальная металлическая добавка...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002580628
Дата охранного документа: 10.04.2016
10.04.2016
№216.015.321e

Способ получения биоактивного покрытия с антибактериальным эффектом

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу получения биоактивного покрытия с антибактериальным эффектом, включающий электроискровую обработку поверхности токопроводящей подложки обрабатывающим электродом, состоящим из биоактивной добавки в количестве 5-40 вес.%;...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002580627
Дата охранного документа: 10.04.2016
Showing 1-10 of 41 items.
10.10.2014
№216.012.fd94

Способ диагностики мультиформной глиобластомы с помощью мрт

Изобретение относится к медицине, в частности к способу диагностики мультиформной глиобластомы методом магнитно-резонансной томографии(МРТ).Способ включает МРТ-исследование до и после внутривенного введения контрастного вещества. В качестве последнего используют магнитные наночастицы оксида...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002530762
Дата охранного документа: 10.10.2014
27.02.2015
№216.013.2db6

Способ получения наногибридного функционального сепарационного материала на основе модифицированного носителя и модифицированных наночастиц металла

Изобретение относится к области материаловедения и аналитической химии. Наногибридный функциональный сепарационный материал содержит ковалентно закрепленные на носителе наночастицы золота и ковалентно закрепленные серосодержащие органические лиганды на поверхности наночастиц золота. Изобретение...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002543170
Дата охранного документа: 27.02.2015
10.07.2015
№216.013.5bc1

Наногибридный функциональный сепарационный материал на основе модифицированного носителя и модифицированных наночастиц металла

Изобретение относится к области аналитической химии. Предложен способ получения сепарационного материала, содержащего носитель на основе диоксида кремния и наночастицы золота. Носитель модифицируют кремнийорганическим соединением, содержащим группу -SH или -NH, обрабатывают коллоидным раствором...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002555030
Дата охранного документа: 10.07.2015
10.08.2016
№216.015.559e

Устройство для исследования воздействия низкочастотного магнитного поля на кинетику биохимических процессов в биологических системах, содержащих магнитные наночастицы

Изобретение относится к медицинской технике. Устройство для исследования биохимических систем, содержащих магнитные наночастицы, при воздействии низкочастотного негреющего магнитного поля, включающее источник питания, соединенный с генератором, питающим обмотки электромагнита. При этом...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002593238
Дата охранного документа: 10.08.2016
25.08.2017
№217.015.ca4c

Способ покрытия наночастиц магнетита слоем золота

Изобретение относится к способам получения наночастиц магнетита (FeO), покрытых слоем золота, которые могут быть использованы в качестве контрастного агента для магнитно-резонансной томографии, магнитной сепарации, адресной доставки лекарств и т.д. Изобретение увеличивает выход покрытых золотом...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002620166
Дата охранного документа: 23.05.2017
29.12.2017
№217.015.f8cc

Композиция, ингибирующая теломеразу

Изобретение относится к композиции, ингибирующей теломеразу. Указанная композиция включает блок-сополимер полиоксиэтилена и полиоксипропилена, а также координационное соединение производного имидизол-4-она, ингибирующее теломеразу, общей формулы При этом координационное соединение производного...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002639819
Дата охранного документа: 22.12.2017
19.01.2018
№218.016.011f

Новые диспиро-индолиноны, ингибиторы mdm2/p53 взаимодействия, способ получения и применения

Изобретение относится к области органической химии, а именно к новым производным диспиро-индолинонам формулы 1 или к их фармацевтически приемлемым солям, или оптическим изомерам, где R выбран из группы, включающей фенил, возможно замещенный 1-2 заместителями, выбранными из атома галогена,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002629750
Дата охранного документа: 01.09.2017
10.05.2018
№218.016.3aae

Способ определения цитотоксичности веществ

Изобретение относится к биомедицине и может быть использовано для определения цитотоксичности веществ путем обработки клетки веществом с последующим определением токсичности вещества по изменению уровня внутриклеточных активных форм кислорода. Определение уровня внутриклеточных активных форм...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002647464
Дата охранного документа: 15.03.2018
09.06.2018
№218.016.5f84

Способ получения модифицированных кристаллов магнетита

Изобретение относится к области неорганической химии и касается способа получения модифицированных кристаллов магнетита FeO, содержащих на поверхности флуоресцентный краситель, что дает возможность визуализировать и отслеживать их поведение как в живой клетке, так и в живом организме in vivo....
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002656667
Дата охранного документа: 06.06.2018
16.06.2018
№218.016.62ab

Способ получения системы для доставки противоопухолевого препарата в клетки опухоли

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и представляет собой способ получения системы для доставки противоопухолевого препарата в клетки опухоли, включающий смешение в присутствии воды модифицированных полимером наночастиц магнетита, эпитаксиально выращенных на...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002657835
Дата охранного документа: 15.06.2018
+ добавить свой РИД