×
15.11.2019
219.017.e232

Мутантная рекомбинантная термостабильная фитаза

Вид РИД

Изобретение

Юридическая информация Свернуть Развернуть
Краткое описание РИД Свернуть Развернуть
Аннотация: Изобретение относится к области биотехнологии. Мутантная рекомбинантная термостабильная фитаза PhyCf-t, зрелая часть которой имеет аминокислотную последовательность, приведенную в перечне последовательностей под номером SEQ ID NO: 3, начиная с 23 аминокислотного остатка, отличается от последовательности фитазы PhyCf из Citrobacter freundii заменой аминокислотного остатка лизина в положении 46, соответствующего в зрелой части белка положению 24, на аминокислотный остаток метионина, и заменой аминокислотного остатка лизина в положении 138, соответствующего в зрелой части белка положению 116, на аминокислотный остаток глутаминовой кислоты. Изобретение обеспечивает расширение арсенала термостабильных фитаз. 3 пр.
Реферат Свернуть Развернуть

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к получению новых термостабильных фитаз методами генетической инженерии.

Фитазы представляют собой ферменты, катализирующие последовательный гидролиз фитатов до мио-инозитола и неорганического фосфата.

Известно, что более 70% фосфора, содержащегося в растительных кормах для цыплят бройлеров, находится в форме фитиновой кислоты и ее солей фитатов. Так как животные с однокамерным желудком не способны усваивать фитатный фосфор, то не усвоенные фитаты, попадая в почву и водоемы, вызывают загрязнение окружающей среды. Кроме того, фитаты уменьшают доступность белков и микроэлементов в кормах.

В связи с этим, фитазы, отщепляющие фосфатные группы от фитатов, с успехом используют в животноводстве в качестве кормовой добавки, значительно повышая усвояемость фосфора.

Для практического использования препараты фитаз должны быть устойчивы к высушиванию и действию высоких температур (60-80°С) в процессе приготовления комбикормов, а также обладать высокой удельной активностью и эффективно функционировать при температуре, соответствующей физиологической температуре животных.

Получить термостабильные варианты фитаз можно путем замены аминокислотных остатков в последовательности ферментов, применяя различные методы мутагенеза.

Известно [J. Mol. Biol, 1998, v. 278, р. 279-289], что вклад аминокислоты в формирование третичной структуры фермента определяется не только ее природой, но и ее положением в аминокислотной последовательности и, следовательно, осуществляя точечные замены аминокислот, находящихся в значимых положениях аминокислотной последовательности, можно добиться изменения структурных свойств белка (и его термостабильности). Однако, увеличение термостабильности белка приводит к снижению его удельной активности, поэтому создание ферментов с оптимальным соотношением значений активности и термостабильности является актуальной задачей.

Так, методом насыщающего мутагенеза были заменены некоторые аминокислотные остатки в аминокислотной последовательности фитазы Escherichia coli и была получена мутантная термостабильная фитаза [US 20060183213]. Такая фитаза способна работать в условиях низких рН в гастроэнтеральном тракте животных, однако имеет небольшую удельную активность (800 ед/мг белка при 37°С) и термостабильность (сохраняет 40% активности после воздействия на нее температуры 60°С в течение 30 минут).

Известна мутантная термостабильная фитаза [Appl Microbiol Biotechnol, 2008, v. 79, p. 69-75], полученная путем применения метода error-prone PCR к гену, кодирующему фитазу аррА E.coli. Фитаза сохраняет 60% активности после воздействия на нее температуры 80°С в течение 10 минут, однако также имеет небольшую удельную активность (905 ед/мг белка при 37°С), и способна работать только в очень узком диапазоне рН (2,5-4,0).

Известна [Биотехнология, 2003, №2, с. 3-10, AAR89622.1, GenBank] фитаза PhyCf, выделенная из бактерий Citrobacter freundii. Удельная активность рекомбинантного фермента, экспрессированного в дрожжах Pichia pastoris, составляет 2770 ед/мг белка Определение устойчивости такой фитазы к действию высокой температуры показало, что после прогрева в течение 10 минут при 60°С фермент сохраняет около 10% активности, а после прогрева в течение 10 минут при 80°С фермент инактивируется полностью, т.е. термостабильность фермента низка [Гордеева Т.Л. Разработка молекулярно-генетических подходов для оптимизации промышленно-важных характеристик фитазы Citrobacter freundii. Автореферат на соискание ученой степени кандидата биологических наук, Москва, 2010, с. 17.].

Путем замены некоторых аминокислотных остатков в аминокислотной последовательности фитазы из Citrobacter freundii методом мутагенеза были получены различные варианты этой фитазы с повышенной термостабильностью [Патент №2472855, US 9.273,295 В2 DuPont Nutrition Biosciences APS]. Была получена мутантная фитаза с аминокислотными заменами V41D/K46M/P128S остаточная активность которой после прогрева при 80°С в течение 10 минут составляла 35% [Гордеева Т.Л. Разработка молекулярно-генетических подходов для оптимизации промышленно-важных характеристик фитазы Citrobacter freundii. Автореферат на соискание ученой степени кандидата биологических наук, Москва, 2010, с. 17].

Задачей заявляемого изобретения является расширение арсенала термостабильных фитаз.

Поставленная задача решена тем, что получена мутантная рекомбинантная термостабильная фитаза PhyCf-t, имеющая аминокислотную последовательность, соответствующую аминокислотной последовательности фитазы PhyCf из Citrobacter freundii [AAR89622.1, GenBank],, в которой аминокислотный остаток лизина в положении 46, соответствующий в зрелой части белка положению 24, заменен на аминокислотный остаток метионина, а аминокислотный остаток лизина в положении 138, соответствующий в зрелой части белка положению 116, заменен на аминокислотный остаток глутаминовой кислоты.

Для получения мутантной фитазы синтетический ген phyCf-mod, имеющий нуклеотидную последовательность, приведенную в перечне последовательностей под номером SEQ ID NO: 1, и кодирующий фитазу PhyCf из бактерий Citrobacter freundii, подвергают сайт-направленному мутагенезу [Archives of Biochemistry and Biophysics, 2000, v. 382, №1, p. 105-112], и получают мутантный синтетический ген phyCf-t SEQ ID NO: 2 кодирующий мутантную рекомбинантную фитазу PhyCf-t, начиная с 23 аминокислотного остатка последовательности SEQ ID NO: 3.

Полученный ген phyCf-t клонируют в вектор, подходящий для ее трансформации в клетки Pichia pastor is. Так как в силу «вырожденности» генетического кода одна и та же аминокислотная последовательность может кодироваться большим числом нуклеотидных последовательностей, для клонирования может быть использована не только сама вышеуказанная нуклеотидная последовательность (ген phyCf-t), но и все ее формы, определяемые вырожденностью генетического кода.

Полученной рекомбинантной плазмидой осуществляют трансформацию штамма-реципиента и получают трансформанты. Отбирают клон, продуцирующий термостабильную фитазу, наличие которой определяют в культуральной жидкости по методу Фиске-Суббароу [J. Biol. Chem., v. 66, p. 376-400].

Пример 1. Конструирование рекомбинантной плазмиды pP10-PhyCf-ts

1. Получение мутантного гена phyCf-ts

Мутантный ген phyCf-ts, содержащий нуклеотидные замены в положениях А71/Т и A346/G, получают применяя метод сайт-направленного мутагенеза к синтетическому гену phyCf-mod, кодирующему фитазу PhyCf.

Для этого ПЦР методом синтезируют три фрагмента ДНК, используя следующие праймеры (нуклеотидные замены в приведенных последовательностях подчеркнуты):

а) Для синтеза первого фрагмента

прямой -PhyCf-ts-D (5'-aggaattcGAAGAACAAAATGGTATGAA-3')

обратный - А71/Т-r (5'-TCATGATTGGAGTGAATATGGTA-3')

в) Для синтеза второго фрагмента

прямой - А71/T-f (5'-GTTCGTGCACCTACCATATTCA-3')

обратный - A346/G-r (5'-GTCTTTTCCTCGTCCTCTTGGTA-3')

с) Для синтеза третьего фрагмента

прямой - A346/G-f (5'-ATTCAAGTACACTACCAAGAGGA-3')

обратный - PhyCf-ts-R (5'-agcggccgcAGTGTGCAGTAACGGAATAA-3').

В качестве матрицы для проведения полимеразной цепной реакции используют синтетическую ДНК последовательность, приведенную в перечне последовательностей под номером SEQ ID NO: 1, имеющую размер 1236 п.н.

Для проведения полимеразной цепной реакции используют 100 мкл реакционной смеси содержащей 0,5 нг ДНК-матрицы, по 1 мкМ соответствующего прямого и обратного праймеров, 2,5 ед. Pfu-полимеразы, 10 мкл 10х Pfu-буфера, 0,8 мМ dNTP. Реакцию осуществляют по следующей схеме: 94°С - денатурирование (1 мин.), 57°С -отжиг (1 мин.), 72°С - полимеризация (50 сек.). Всего проводят 30 циклов амплификации. Амплифицированные фрагменты ДНК очищают в агарозном геле и затем при помощи «DNA extraction KIT» (Thermd Scientific). Наработанные фрагменты имеют следующие размеры:

- первый фрагмент 88 пар нуклеотидов;

- второй фрагмент 308 пар нуклеотидов;

- третий фрагмент 909 пар нуклеотидов

Мутантный ген phyCf-t синтезируют методом полимеразной цепной реакции из трех вышеописанных фрагментов. Для проведения ПЦР используют 100 мкл реакционной смеси содержащей 0,2 нг каждого ДНК-фрагмента, по 2 мкМ соответствующего прямого PhyCf-t-D и обратного PhyCf-t-R праймеров, 2,5ед. Pfu-полимеразы, 10 мкл 10x Pfu-буфера, 0,8 мМ dNTP. Реакцию осуществляют по следующей схеме: 94°С - денатурирование (1 мин.), 57°С - отжиг (1 мин.), 72°С - полимеризация (1 мин.). Всего проведено 30 циклов амплификации. Из агарозного геля выделен амплифицированный фрагмент ДНК, размером 1236 пар нуклеотидов, соответствующий мутантному гену phyCf-ts, который очищен при помощи «DNA extraction KIT»

2. Конструирование плазмиды pP10-PhyCf-ts.

Полученный фрагмент ДНК phyCf-t гидролизуют эндонуклеазами рестрикции EcoR1 и Not1 (Thermo Scientific), очищают в агарозном геле и лигируют с вектором рР10 (описан в RU 2388823), который в качестве сайта интеграции содержит последовательность ДНК, кодирующую область 18S рРНК, в качестве селективного маркера для отбора трансформантов в клетках Escherichia coli содержит селективный маркер bla, в качестве сайта начала репликации содержит pUC ori, в состав экспрессионной кассеты входит промотор GAP, терминатор транскрипции АОХ1, селективный маркер HIS4, а в качестве сигнального пептида вектор содержит -амилазный сигнальный пептид.

Предварительно вектор рР10 расщепляют ферментами рестрикции по сайтам EcoR1-Not1. Лигазной смесью трансформируют компетентные клетки E.coli С600 [Т.Маниатис, Э.Фрич, Дж.Сэмбрук, Молекулярное клонирование, Москва, "Мир", 1984, с. 84], приготовленные накануне обработкой хлористым кальцием. После стандартной процедуры трансформации (0°С - 40 мин, 42°С - 2 мин, 0°С - 5 мин) клетки разводят в 10 раз средой LB [Т.Маниатис, Э.Фрич, Дж.Сэмбрук, Молекулярное клонирование, Москва, "Мир", 1984, с. 84], подращивают в течение одного часа и высевают на плотную агаризованную среду LB [Т.Маниатис, Э.Фрич, Дж.Сэмбрук, Молекулярное клонирование, Москва, "Мир", 1984, с. 84], содержащую ампициллин в концентрации 50 мкг/мл. Посевы инкубируют при 37°С.

На следующие сутки выросшие устойчивые к ампициллину колонии тестируют с помощью вышеприведенных праймеров и отбирают позитивные клоны, из которых выделяют плазмидную ДНК по стандартной методике (Т.Маниатис, Э.Фрич, Дж.Сэмбрук, Молекулярное клонирование, Москва, "Мир", 1984, с. 89). Выделенные плазмидные ДНК гидролизуют эндонуклеазами рестрикции EcoR1 и Not1, размер полученных фрагментов определяют с помощью гель-электрофореза. Затем отбирают клон, плазмидная ДНК которого содержит последовательность, соответствующую размеру последовательности (1236 пар нуклеотидов), кодирующей ген phyCf-t.

Из отобранного клона выделяют рекомбинантную плазмиду рР10-PhyCf-t. Ген phyCf-t секвенируют. Нуклеотидная последовательность гена phyCf-t соответствует последовательности, приведенной в перечне последовательностей под номером SEQ ID NO: 2, и кодирует аминокислотную последовательность, соответствующую зрелой части фитазы PhyCf-t (с 23 аминокислотного остатка), приведенную в перечне последовательностей под номером SEQ ID NO: 3, отличающуюся от последовательности фитазы из Citrobacter freundii заменой в позициях 46 и 138.

Пример 2. Конструирование штамма Pichia pas tor is PhyCf-ts - продуцента заявляемой фитазы

Для получения штамма Pichia pastoris PhyCf-t, клетки штамма Pichia pastoris GS115 (his4-) ВКПМ Y-2837 трансформируют плазмидой рР10-PhyCf-t которую предварительно гидролизуют рестриктазой Bglll.

1 мл ночной культуры клеток Pichia pastoris Y-2837 выращивают в 100 мл среды YEPD [https://ru.wikipedia.org/wiki/YEPD] при 30°С до достижения культурой оптической плотности, соответствующей 2 ед. поглощения при длине волны 600 нм. Клетки дважды промывают стерильной водой, после чего суспендируют в 0,3 мл 100 мМ раствора ацетата лития и инкубируют при 30°С в течение 30 мин. К 50 мкл полученной суспензии клеток добавляют 1 мкг плазмидной ДНК, 50 мкг ДНК спермы лосося, предварительно денатурированной нагреванием (10 мин при 100°С), и 0,3 мл раствора 100 мМ ацетата лития, содержащего 40% полиэтиленгликоля 4000. Далее пробу инкубируют 30 мин при 30°С и 20 минут при 42°С, помещают на 15 секунд в ледяную баню и отделяют клетки центрифугированием в течение 10 секунд при 10000 об/мин. Клетки суспендируют в 1 мл стерильной воды и высевают на твердую среду М9 [Т.Маниатис, Э.Фрич, Дж.Сэмбрук, Молекулярное клонирование, Москва, "Мир", 1984, с. 84] без источника гистидина с добавлением 0,3 об. % микроэлементов). Клоны трансформантов выращивают 2 суток.

Полученные трансформанты высевают в жидкую среду YEPD и выращивают при 30°С до стационарной фазы роста в течение 2 суток. Далее клетки осаждают центрифугированием при 10000 об/мин в течение 5 минут, отбирают 100 мкл супернатанта и определяют фитазную активность по накоплению в реакционной среде свободного фосфат-иона, детектируемого методом Фиске-Субарроу. Одна единица активности фермента соответствует высвобождению 1 мкМоль фосфата за 1 минуту. Активность фермента измеряют при помощи спектрофотометра при длине волны 700 нм.

Трансформант, показавший наибольшую фитазную активность культуральной жидкости 11-3, выбран для наработки фермента фитазы с целью определения ее термостабильности.

Пример 3. Оценка свойств заявляемой фитазы

Посевную культуру трансформанта 11-3 выращивают в 5 мл жидкой среды YEPD при 30°С в течение ночи. Полученную ночную культуру переносят в колбу Эрленмейера, объемом 750 мл, содержащую 100 мл среды YEPD, в соотношении 1:100. Культуру инкубируют при 30°С и интенсивном встряхивании (240 об/мин) до достижения стационарной фазы в течение 2 суток. Фитазную активность трансформанта измеряют как описано выше. Активность составляет 200 ед/мл культуральной жидкости.

Для определения удельной активности фитазу PhyCf-t очищают, используя метод гель-хроматографии [Юркевич В.В., Малый практикум по биохимии. Издательство МГУ, 1979. стр. 159-175.]. Образцы готовят с помощью диализа против буфера (50 тМ Tris-HCl, рН 7.0, 1М NaCl) в течение ночи и наносят на колонку Superdex 75-HR, уравновешенную при помощи того же буфера. Колонку предварительно калибруют с использованием белковых маркеров #SM0431 (Thermo Scientific). Количество белка на выходе колонки измеряют при помощи УФ-детектора при длине волны 280 нм. От солей буфера образец фитазы очищают диализом против воды в течение ночи. Количество белка определяют по методу Бредфорда согласно инструкции к Bradford Reagent В 6916 (Sigma) [https://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/b6916?lang=en&region=RU].

Затем отбирают аликвоту, содержащую 30 мкг очищенного фермента и измеряют его фитазную активность по методу Фиске-Субарроу.

Активность отобранного образца составила 69,1 единиц, т.е. удельная активность фермента PhyCf-t равна 2303 ед/мг белка.

Для определения устойчивости к действию высокой температуры образец фитазы PhyCf-t инкубируют при температуре 80°С в течение 10 мин, а затем при 5°С в течение 30 мин с целью ренатурации белка. Остаточная удельная активность составляет 875 ед/мг белка, т.е. мутантная термостабильная фитаза PhyCf-t после прогрева при температуре 80°С в течение 10 минут сохраняет 38% активности.

Мутантная рекомбинантная термостабильная фитаза PhyCf-t, зрелая часть которой имеет аминокислотную последовательность, приведенную в перечне последовательностей под номером SEQ ID NO: 3, начиная с 23 аминокислотного остатка, отличающуюся от последовательности фитазы PhyCf из Citrobacter freundii заменой аминокислотного остатка лизина в положении 46, соответствующего в зрелой части белка положению 24, на аминокислотный остаток метионина, и заменой аминокислотного остатка лизина в положении 138, соответствующего в зрелой части белка положению 116, на аминокислотный остаток глутаминовой кислоты.
Мутантная рекомбинантная термостабильная фитаза
Мутантная рекомбинантная термостабильная фитаза
Мутантная рекомбинантная термостабильная фитаза
Мутантная рекомбинантная термостабильная фитаза
Источник поступления информации: Роспатент

Showing 1-10 of 35 items.
29.12.2017
№217.015.f6e4

L-лизин-продуцирующая коринеформная бактерия с инактивированным геном ltbr и способ получения l-лизина с использованием этой бактерии

Настоящее изобретение относится к биотехнологии и микробиологии и представляет собой L-лизин-продуцирующую бактерию, принадлежащую к роду Corynebacterium или роду Brevibacterium и модифицированную таким образом, что ген ltbR, кодирующий транскрипционный регулятор, инактивирован. Настоящее...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002639247
Дата охранного документа: 20.12.2017
29.12.2017
№217.015.f6f6

Применение домена белка s-слоя из lactobacillus brevis в качестве компонента системы для экспонирования слитых белков на поверхности клеток молочнокислых бактерий

Изобретение относится к биотехнологии. Предложено применение полипептида, соответствующего SEQ ID NO 1, в качестве компонента системы для экспонирования слитых белков на поверхности клеток молочнокислых бактерий. Полипептид представляет собой N-концевой домен присоединения к клеточной стенке...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002639246
Дата охранного документа: 20.12.2017
29.12.2017
№217.015.f710

Рекомбинантный штамм дрожжей pichia pastoris - продуцент секретируемой ксилоглюканазы из гриба aspergillus cervinus и способ микробиологического синтеза ксилоглюканазы на основе этого штамма

Группа изобретений относится к области биотехнологии. Предложен рекомбинантный штамм дрожжей Pichia pastoris ВКПМ Y-4299 – продуцент секретируемой ксилоглюканазы, кодируемой геном AsCeGH12b (SEQ ID NO: 1), клонированным из Aspergillus cervinus ВКПМ F-612. Предложен способ микробиологического...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002639248
Дата охранного документа: 20.12.2017
19.01.2018
№218.016.096f

Штамм дрожжей yarrowia lipolytica - продуцент янтарной кислоты (варианты)

Группа изобретений относится к микробиологической промышленности. Заявлены штамм дрожжей Yarrowia lipolytica Y-3753ch и штамм дрожжей Yarrowia lipolytica Y4215Leu+, обладающие способностью продуцировать янтарную кислоту. Штаммы дрожжей Yarrowia lipolytica депонированы во Всероссийской...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002631922
Дата охранного документа: 28.09.2017
13.02.2018
№218.016.2225

Полипептид для понижения уровня сахара в крови на основе глюкагоноподобного пептида-1 человека, рекомбинантный штамм-продуцент e. coli и способ получения этого полипептида

Группа изобретений относится к биотехнологии. Предложены рекомбинантный модифицированный глюкагоноподобный пептид-1 человека (рмГПП-1), способ его получения и штамм-продуцент E.coli ВКПМ В-12555. рмГПП-1 имеет последовательность SEQ ID NO 1. рмГПП-1 получают путем культивирования...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002642260
Дата охранного документа: 24.01.2018
10.05.2018
№218.016.47b5

Штамм schizosaccharomyces pombe - продуцент молочной кислоты

Изобретение относится к микробиологии и биотехнологии. Предложен штамм дрожжей Schizosaccharomyces pombe, являющийся продуцент молочной кислоты. Штамм получен путем последовательного трехкратного введения гена лактатдегидрогеназы из Lactobacillus plantarum в состав хромосомы дрожжей S. pombe, в...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002650669
Дата охранного документа: 16.04.2018
10.05.2018
№218.016.47ed

Мутантная рекомбинантная гепариназа i с повышенной удельной активностью из pedobacter heparinus, фрагмент днк, кодирующий указанную гепариназу

Группа изобретений относится к области биотехнологии. Предложен вариант мутантной рекомбинантной гепариназы I из Pedobacter heparinus, содержащий следующие аминокислотные замены по сравнению с аминокислотной последовательностью исходной гепариназы I: E117Q, Q118P, Е362Р, Y363P. Предложен...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002650667
Дата охранного документа: 16.04.2018
10.05.2018
№218.016.4815

Способ получения гетерогенного биокатализатора на основе липазы дрожжей candida antarctica фракции в

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано при получении гетерогенных биокатализаторов для процессов биокаталитической трансформации органических соединений. Способ получения гетерогенного биокатализатора предусматривает избирательную адсорбцию липазы из Candida...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002650668
Дата охранного документа: 16.04.2018
10.05.2018
№218.016.5026

Способ модификации дрожжей schizosaccharomyces pombe с помощью cre-lox системы бактериофага р1, трансформант, полученный таким способом

Изобретение относится к микробиологии и биотехнологии. Предложен способ модификации дрожжей S. pombe, включающий трансформацию в клетку гена, кодирующего Cre-рекомбиназу, под контролем индуцибельного промотора совместно с маркерным геном, интеграцию экспрессионной кассеты, содержащей фрагмент...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002652877
Дата охранного документа: 03.05.2018
05.09.2018
№218.016.831d

Способ оценки продуктивности рекомбинантных трансформантов дрожжей pichia pastoris, секретирующих фитазы, относящиеся к кислым гистидиновым фосфатазам

Изобретение относится к биотехнологии. Предложен способ оценки продуктивности рекомбинантных трансформантов дрожжей Pichia pastoris, секретирующих фитазы. Способ включает точечное высевание колоний оцениваемых трансформантов на модифицированную диагностическую среду, представляющую собой...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002665836
Дата охранного документа: 04.09.2018
Showing 1-10 of 50 items.
20.01.2013
№216.012.1cc1

Мутантная рекомбинантная термостабильная фитаза (варианты), фрагмент днк, кодирующий указанную фитазу (варианты), штамм pichia pastoris - продуцент указанной фитазы (варианты)

Изобретение относится к области биотехнологии. Предложены варианты мутантных рекомбинантных фитаз PhyA-Cf из бактерий Citrobacter freundii: 1) вариант, содержащий аминокислотную замену D144N или D144R, или D144Q, или D144K; 2) вариант, содержащий аминокислотную замену V226A или V226G; 3)...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002472855
Дата охранного документа: 20.01.2013
20.02.2013
№216.012.271c

Штамм дрожжей yarrowia lipolytica - продуцент клеточно-связанной липазы

Изобретение относится к области микробиологии и генной инженерии. Получен новый штамм дрожжей Yarrowia lipolytica ВКПМ Y-3600 - продуцент клеточно-связанной липазы. Штамм позволяет получить активность до 2700 единиц/г сухого веса и может быть использован для ферментации в промышленных...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002475532
Дата охранного документа: 20.02.2013
20.07.2013
№216.012.5733

Штамм дрожжей yarrowia lipolytica вкпм y-3753 - продуцент янтарной кислоты

Изобретение относится к микробиологической промышленности. Предложен штамм Yarrowia lipolytica ВКПМ Y-3753 - продуцент янтарной кислоты. Штамм способен продуцировать на питательной среде, содержащей глюкозу в качестве расходуемого источника углерода, в отсутствии веществ, стабилизирующих рН,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002487931
Дата охранного документа: 20.07.2013
10.12.2013
№216.012.8939

Рекомбинантный штамм бактерий bacillus subtilis - продуцент фосфолипазы с

Изобретение относится к области биотехнологии и представляет собой штамм бактерий Bacillus subtilis ВКПМ В-11270 - продуцент фермента фосфолипазы C. При ферментации полученного штамма в 3 л лабораторном ферментере в минимальной среде при температуре 30°C, активность фермента в культуральной...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002500811
Дата охранного документа: 10.12.2013
10.12.2013
№216.012.893a

Рекомбинантный штамм бактерий bacillus licheniformis - продуцент термостабильной липазы

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой штамм бактерий Bacillus licheniformis ВКПМ В-11302 - продуцент термостабильной липазы. При ферментации полученного штамма в 3 л лабораторном ферментере активность фермента в культуральной жидкости достигает уровня 500 ЕД/мл. Изобретение...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002500812
Дата охранного документа: 10.12.2013
20.01.2014
№216.012.97e0

Рекомбинантный штамм дрожжей yarrowia lipolytica - продуцент фитазы

Изобретение относится к области биотехнологии и касается штамма дрожжей Yarrowia lipolytica ВКПМ Y-3852 - продуцента фитазы. Рекомбинантный штамм получен путем трансформации штамма Yarrowia lipolytica Polf ATCC MYA-2613 и содержит ген фитазы PhyA Obesumbacterium proteus. Штамм может быть...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002504579
Дата охранного документа: 20.01.2014
10.03.2014
№216.012.a9ac

Способ получения спорового материала бактерий рода clostridium

Изобретение относится к биотехнологии. Способ получения спорового материала бактерий рода Clostridium предусматривает получение инокулята бактерий в полноценной синтетической питательной среде, засев инокулята и культивирования в подходящих условиях в питательной среде, включающей картофель,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002509151
Дата охранного документа: 10.03.2014
10.05.2014
№216.012.c0c2

Бактерия рода escherichia - продуцент l-треонина и способ микробиологического синтеза l-треонина с ее использованием

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой способ микробиологического синтеза L-треонина с использованием бактерии, принадлежащей к роду Escherichia, в которой ген fumA инактивирован. Изобретение позволяет получать L-треонин с высокой степенью эффективности. 2 н.п. ф-лы, 1...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002515095
Дата охранного документа: 10.05.2014
10.01.2015
№216.013.1df0

Рекомбинантный штамм дрожжей schizosaccharomyces pombe - продуцент молочной кислоты

Изобретение относится к биотехнологии. Предложен рекомбинантный штамм дрожжей Schizosaccharomyces pombe ВКПМ Y-4041, являющийся продуцентом молочной кислоты. Штамм получен путем трансформации штамма Schizosaccharomyces pombe ВКПМ Y-3106 интегративной плазмидой pcDNA-Km-leu1-pla,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002539092
Дата охранного документа: 10.01.2015
27.01.2015
№216.013.2068

Дрожжи рода yarrowia, обладающие способностью внутриклеточно накапливать сложные эфиры жирных кислот, и способ микробиологического синтеза таких эфиров

Изобретение относится к биотехнологии и представляет способ получения сложных эфиров жирных кислот с использованием дрожжей, принадлежащих к роду Yarrowia, обладающих способностью внутриклеточно накапливать сложные эфиры жирных кислот в условиях лимита по азоту или фосфору при добавлении в...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002539744
Дата охранного документа: 27.01.2015
+ добавить свой РИД