×
18.10.2019
219.017.d784

Способ выявления и генотипирования РНК вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней

Вид РИД

Изобретение

Юридическая информация Свернуть Развернуть
Краткое описание РИД Свернуть Развернуть
Аннотация: Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой способ выявления и генотипирования РНК вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней, включающий выделение РНК из биологического материала инфицированных свиней сорбционным методом, синтез кДНК на матрице РНК путем постановки одноэтапной мультиплексной реакции обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции с добавлением внутреннего контрольного образца на основе бактериофага MS2 и положительного контрольного образца, состоящего из внутреннего контрольного образца на основе бактериофага MS2, европейского и американского генотипов вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней, проведение 40 циклов амплификации с детекцией в реальном времени с использованием специфичных для участка генома вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней олигонуклеотидных праймеров, флуоресцентно-меченных зондов и контрольных образцов, измерение накопления флуоресцентного сигнала по каналам соответствующих флуоресцентных красителей и интерпретацию результатов на основании наличия или отсутствия пересечения кривой флуоресценции с пороговой линией, согласно изобретению для внутреннего контрольного образца используют суспензию бактериофага MS2 с концентрацией 5×10 копий нуклеотидных последовательностей на 1 мкл, а для положительного контрольного образца используют смесь, содержащую фрагменты нуклеиновых кислот европейского и американского генотипов вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней и фрагмент генома нативного бактериофага MS2, взятых в соотношении 1:1:1, при этом накопление флуоресцентного сигнала измеряют по каналам: FAM/Green для специфического сигнала европейского генотипа вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней; JOE/Yellow для специфического сигнала американского генотипа этого же вируса и Cy5/Red для сигнала внутреннего контроля, если кривые накопления флуоресцентного сигнала выходят до 35 цикла, то результат реакции считают положительным, а если кривые не пересекают пороговую линию или пересекают ее после 35 цикла, то результат реакции отрицательный. Изобретение позволяет обеспечить достоверную диагностику репродуктивно-респираторного синдрома свиней и выявление различных серотипов вируса. 3 ил., 4 табл.
Реферат Свернуть Развернуть

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии, а именно к средствам диагностики вирусных и инфекционных заболеваний у животных, в частности к методам выявления РНК вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней (РРСС).

Известно использование метода ПЦР для генотипирования в способе определения нуклеотидной последовательности представляющей интерес нуклеиновой кислоты в образце, включающем получение п образцов, амплификацию, где пару или множество пар индексированных праймеров используют для каждого образца, причем каждая пара индексированных праймеров состоит из прямого индексированного праймера и обратного индексированного праймера, представляющие собой вырожденные праймеры и/или где метод секвенирования второго поколения представляет собой парно-концевой метод (патент РФ 2587606, кл. C12Q 1/68, C12N 15/11, 2016 г.).

Известен способ диагностики вирусных заболеваний методом ПЦР, известный из документа WO/2012/053666, в котором для проведения ПЦР используют так называемые «вырожденные», или «дегенеративные» праймеры, которые фактически представляют собой смесь олигонуклеотидов различной структуры, в той или иной степени специфичных к вирусной ДНК различных генотипов.

Наиболее близким по технической сущности является техническое решение (КОЗЛОВА А.Д., автореферат «Разработка ПЦР-тест-систем для идентификации парвовируса и генотипирования вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней, Москва, 2014 г., стр. 10-13) включающее выделение РНК из биологического материала инфицированных свиней сорбционным методом, синтез кДНК на матрице РНК путем постановки одноэтапной мультиплексной реакции обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции с добавлением внутреннего контрольного образца на основе бактериофага MS2 и положительного контрольного образца, состоящего из внутреннего контрольного образца на основе бактериофага MS2, европейского и американского генотипов вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней, проведение 40 циклов амплификации с детекцией в реальном времени с использованием специфичных для участка генома вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней олигонуклеотидных праймеров, флуоресцентно-меченных зондов и контрольных образцов, измерение накопления флуоресцентного сигнала по каналам соответствующих флуоресцентных красителей и интерпретацию результатов на основании наличия или отсутствия пересечения кривой флуоресценции с пороговой линией.

Недостатком известного технического решения является отсутствие возможности получения достоверной диагностики репродуктивно-респираторного синдрома свиней и выявление различных серотипов вируса.

Техническим результатом является обеспечение достоверной диагностики репродуктивно-респираторного синдрома свиней и выявление различных серотипов вируса.

Технический результат достигается тем, что в способе выявления и генотипирования РНК вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней, включающем выделение РНК из биологического материала инфицированных свиней сорбционным методом, синтез кДНК на матрице РНК путем постановки одноэтапной мультиплексной реакции обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции с добавлением внутреннего контрольного образца на основе бактериофага MS2 и положительного контрольного образца, состоящего из внутреннего контрольного образца на основе бактериофага MS2, европейского и американского генотипов вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней, проведение 40 циклов амплификации с детекцией в реальном времени с использованием специфичных для участка генома вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней олигонуклеотидных праймеров, флуоресцентно-меченных зондов и контрольных образцов, измерение накопления флуоресцентного сигнала по каналам соответствующих флуоресцентных красителей и интерпретацию результатов на основании наличия или отсутствия пересечения кривой флуоресценции с пороговой линией, согласно изобретению для внутреннего контрольного образца используют суспензию бактериофага MS2 с концентрацией 5×103 копий нуклеотидных последовательностей на 1 мкл, а для положительного контрольного образца используют смесь содержащую фрагменты нуклеиновых кислот европейского и американского генотипов вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней и фрагмент генома нативного бактериофага MS2 взятых в соотношении 1:1:1, со следующими нуклеотидными последовательностями:

EU-F: 5'-GCTGCYGAAGAYGAYATYCG-3' - прямой праймер

EU-R: 5'-AAGCRACGCAGTYCCYGC-3' - обратный праймер

EU-P: FAM-5'-CTGYTTGCAATCGATYCAGACDGC-3' - BHQ1

NA-F: 5'-GCTGGCRTTCTTSAGRCATCYC-3' - прямой праймер

NA-R: 5'-GRTCRCCCTAAMTGAATAGGTG-3' - обратный праймер

NA-P: НЕХ-5'-TGTGGTKAAYGGCACTGATTGACA-3' - BHQ1

MS2F: 5'-TGGCACTACCCCTCTCCGTATTCAC-3' - прямой праймер

MS2R: 5'-GTACGGGCGACCCCACGATGAC-3' - обратный праймер

MS2P: Су5-5'-CACATCGATAGATCAAGGTGCCTACAAGC-3' - BHQ2,

при этом накопление флуоресцентного сигнала измеряют по каналам: FAM/Green для специфического сигнала европейского генотипа вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней; JOE/Yellow для специфического сигнала американского генотипа этого же вируса и Cy5/Red для сигнала внутреннего контроля, если кривые накопления флуоресцентного сигнала выходят до 35 цикла, то результат реакции считают положительным, а если кривые не пересекают пороговую линию или пересекают ее после 35 цикла, то результат реакции - отрицательный.

Новизна заявляемого технического решения заключается в том, что для получения достоверной диагностики репродуктивно-респираторного синдрома свиней, инфекции, вызываемой вирусом PRRSV используют метод ПЦР с использованием вырожденных праймеров и зондов, что позволяет выявлять различные серотипы вируса. Также для получения достоверной диагностики вируса РРСС используют две последовательные реакции: обратной транскрипции вирусной РНК для получения кДНК и полимеразной цепной реакции для амплификации фрагмента полученной кДНК матрицы. Обе реакции проводятся последовательно в одной ПЦР-пробирке (one-tube) с применением разных видов контроля для которых используют различные формы материала бактериофага MS2: суспензия и фрагмент генома со специфическими к нему праймерами и зондом. Такая постановка ОТ-ПЦР в реальном времени сокращает и упрощает процедуру анализа, снижает риск контаминации и возможность ошибки при переносе кДНК в другую пробирку для ПЦР. Кроме того, детекция продуктов амплификации осуществляется с использованием принципа выщепления флуоресцентной метки на 5' конце олигонук-леотидного зонда.

Признаки, отличающие заявляемое техническое решение от прототипа, направлены на достижение технического результата и не выявлены при изучении данной и смежной областей науки и техники и, следовательно, соответствуют критерию «изобретательский уровень».

Заявляемый способ рекомендовано использовать в ветеринарной вирусологии, а именно к средствам выявления и генотипирования вируса РРСС, что соответствует критерию «промышленная применимость».

Сущность изобретения поясняется чертежом, где представлены скриншоты графиков: на фиг. 1 - представлен канал JOE/Yellow для специфического сигнала американского генотипа (тип 1) вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней; на фиг. 2 представлен канал Cy5/Red - для тестирования сигнала внутреннего контрольного образца (ВКО); на фиг. 3 - FAM/Green для специфического сигнала европейского генотипа (тип 2) этого же вируса.

Способ выявления и генотипирования РНК вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней осуществляется следующим образом Предварительно выделяют РНК из биологического материала инфицированных свиней сорбционным методом. В качестве биологического материала по выбору могут быть использованы:

плазма крови, сыворотка крови;

мазки со слизистой глотки;

сперма;

плацента и плодовые оболочки от абортировавших животных;

фрагменты тканей и органов павших животных (миндалины, селезенка, легкие, печень и др.).

Далее осуществляют синтез кДНК на матрице РНК путем постановки одноэтапной мультиплексной реакции обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции с добавлением внутреннего контрольного образца на основе бактериофага MS2 и положительного контрольного образца, состоящего из внутреннего контрольного образца, европейского и американского генотипов вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней. Для внутреннего контрольного образца используют суспензию бактериофага MS2 с концентрацией 5×103 копий нуклеотидных последовательностей на 1 мкл, если концентрация копий нуклеотидных последовательностей отклоняется в большую или меньшую сторону, то наблюдаются повторности сомнительных образцов. Для положительного контрольного образца используют смесь содержащую фрагменты нуклеиновых кислот европейского и американского генотипов вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней и фрагмент генома нативного бактериофага MS2 взятых в соотношении 1:1:1, если не будут соблюдаться данные соотношения, то будут наблюдаться повторности сомнительных образцов. Фрагменты нуклеиновых кислот европейского и американского генотипов вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней и фрагмент генома нативного бактериофага MS2 представлены следующими нуклеотидными последовательностями:

EU-F: 5'-GCTGCYGAAGAYGAYATYCG-3' - прямой праймер

EU-R: 5'-AAGCRACGCAGTYCCYGC-3' - обратный праймер

EU-P: FAM-5'-CTGYTTGCAATCGATYCAGACDGC-3' - BHQ1

NA-F: 5'-GCTGGCRTTCTTSAGRCATCYC-3' - прямой праймер

NA-R: 5'-GRTCRCCCTAAMTGAATAGGTG-3' - обратный праймер

NA-P: НЕХ-5'-TGTGGTKAAYGGCACTGATTGACA-3' - BHQ1

MS2F: 5'-TGGCACTACCCCTCTCCGTATTCAC-3' - прямой праймер

MS2R: 5'-GTACGGGCGACCCCACGATGAC-3' - обратный праймер

MS2P: Су5-5'-CACATCGATAGATCAAGGTGCCTACAAGC-3' - BHQ2.

Использование нативного бактериофага MS2, т.е. неповрежденного при исследовании обеспечивает стабильное состояние РНК, что улучшает синтез кДНК.

Проводят 40 циклов амплификации с детекцией в реальном времени с использованием специфичных для участка генома вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней олигонуклеотидных праймеров, флуоресцентно-меченных зондов и контрольных образцов. Накопление флуоресцентного сигнала измеряют по каналам: FAM/Green для специфического сигнала европейского генотипа вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней; JOE/Yellow для специфического сигнала американского генотипа этого же вируса и Cy5/Red для сигнала внутреннего контроля, если кривые накопления флуоресцентного сигнала выходят до 35 цикла, то результат реакции считают положительным (РНК вируса репродуктивно-респираторный синдрома свиней присутствует), а если кривые не пересекают пороговую линию или пересекают ее после 35 цикла, то результат реакции - отрицательный.

Пример конкретного осуществления способ выявления и генотипирования

РНК вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней

Для исследования по выбору используют следующий материал:

Плазма крови, сыворотка крови. Кровь забирается в пробирку с 6% ЭДТА из расчета 50 мкл раствора ЭДТА на 1 мл крови, закрытую пробирку с кровью несколько раз переворачивают. Для получения сыворотки забирают кровь в пробирку без антикоагулянта;

Мазки со слизистой глотки и трахеи берут сухими ватными зондами. Зонд с материалом помещают для транспортировки в пробирки со стерильным физиологическим раствором (конец отламывают, что бы пробирку можно было закрыть);

Сперму в объеме не менее 2 мл, в стерильную посуду;

Плацента и плодовые оболочки от абортировавших животных берут на исследование целиком;

Фрагменты тканей и органов павших животных (миндалины, селезенка, легкие, печень и др.) отбирают в стерильный контейнер.

Мазки и смывы, цельную кровь используют для выделения РНК без предварительной подготовки.

Для получения плазмы пробирку с цельной кровью центрифугируют в течение 10 мин при 1000 g (если кровь стояла при температуре от 2°С до 8°С более 1 ч после ее взятия, то пробирку следует аккуратно несколько раз перевернуть для равномерного перемешивания крови). Переносят плазму в количестве не менее 1 мл одноразовыми наконечниками с фильтром в стерильные пробирки объемом 1,5 мл.

Для получения сыворотки пробирки с кровью (без антикоагулянта) отстаивают при комнатной температуре в течение 30 минут до полного образования сгустка. Затем центрифугируют при 600-1600 g (3000 об./мин на центрифуге «MiniSpin», Eppendorf, Германия) в течение 10 минут при комнатной температуре. Сыворотку переносят отдельными наконечниками с фильтром в стерильные пробирки объемом 1,5 мл.

К образцу спермы добавляют 4 объема стерильного физиологического раствора, тщательно перемешивают и центрифугируют 5 мин при 10000 тыс/оборотов (на центрифуге MiniSpin, Eppendorf, Германия). Для экстракции РНК используют 100 мкл надосадочной жидкости.

Исследуемые пробы тканей и органов (небольшие кусочки до 1 г весом) гомогенизируют с использованием стерильных фарфоровых ступок и пестиков или автоматических гомогенизаторов. Затем готовят 10% суспензию на стерильном физиологическом растворе или фосфатном буфере. Суспензию переносят в пробирку объемом 1,5 мл и центрифугируют при 600-1600 g (3000 об./мин на центрифуге «MiniSpin», Eppendorf, Германия) в течение 2 мин. Аликвоту надосадочной жидкости (0,1 мл) используют для экстракции РНК.

Для проведения анализа используют набора реагентов «ПЦР-РРСС-ФАКТОР».

Исследование состоит из трех этапов:

экстракция нуклеиновых кислот (НК), на этом этапе дополнительно используют реактивы для экстракции, например набор «ДНК/РНК-С-ФАКТОР»;

проведение ОТ-ПЦР РВ;

учет результатов анализа.

Набор позволяет специфически амплифицировать фрагмент генома вируса РРСС и генома внутреннего положительного контроля (бактериофага MS2) в мультиплексной полимеразной цепной реакции.

Набор состоит из комплекта реагентов для проведения мультиплексной ПЦР (комплект №1) и комплекта контрольных образцов (комплект №2).

Набор выпускается в двух вариантах:

1) Для анализа 55 образцов (включая контрольные образцы)

2) Для анализа 110 образцов (включая контрольные образцы). Состав набора приведен в Таблицах 1 и 2.

Наборы используются в соответствии с инструкцией по применению набора реагентов «ПЦР-РРСС-ФАКТОР» для выявления РНК вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней в биологическом материале методом совмещенной реакции обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции (ПЦР) с флуоресцентной детекцией в режиме реального времени (ОТ ПЦР РВ) ТУ 21.10.60-131-51062356-2017, для диагностики in vitro http://www.vetfaktor.ru/.

* Возможна легкая опалесценция

Реакция ОТ-ПЦР РВ проводится в одной пробирке.

Экстракция (выделение) НК из исследуемых проб

Отбирают необходимое количество одноразовых пробирок объемом 1,5 мл, включая отрицательный контроль выделения. Вносят во все пробирки с исследуемыми образцами, включая пробирку для отрицательного контрольного образца (ОКО), по 10 мкл внутреннего контрольного образца (ВКО), в качестве которого используют суспензию бактериофага MS2 с концентраци-ей 5×103 копий нуклеотидных последовательностей на 1 мкл РРСС.

Вносят исследуемые пробы в объеме согласно инструкции к набору для выделения НК, в пробирку отрицательного контроля выделения вместо исследуемой пробы вносят ОКО (пробирку обозначить как ВК-).

Выделяют НК из анализируемых и контрольных образцов согласно протоколу инструкции производителя набора для выделения НК.

Выделенную РНК можно хранить до 3 часов при температуре от 2°С до 8°С или в течение месяца при температуре не выше минус 70°С.

Подготовка образцов к проведению ПЦР

Общий объем реакционной смеси - 25 мкл, объем РНК-пробы - 10 мкл.

Успешное прохождение реакции контролируют использованием положительного контрольного образца (ПКО) РРСС, ВКО РРСС и РНК буфера.

В отдельной пробирке смешивают компоненты набора из расчета на каждую реакцию:

10 мкл ПЦР БУФЕР РРСС

5 мкл ПЦР СМЕСЬ РРСС

0,75 мкл RT PCR ENZ.

Перемешивают смесь на вортексе и сбрасывают капли кратковременным центрифугированием. Отбирают необходимое количество пробирок для амплификации НК исследуемых и контрольных проб и вносят по 15 мкл приготовленной реакционной смеси.

Используя наконечники с фильтром в подготовленные пробирки вносят:

а) в пробирку отрицательного контроля ПЦР (К-) 10 мкл РНК буфера;

б) в ряд пробирок для исследуемых проб - в каждую вносят по 10 мкл НК соответствующей пробы (включая пробу ВК-);

в) в пробирку с положительным контролем ПЦР (К+) 10 мкл ПКО РРСС.

Проведение реакции ПЦР РВ с флуоресцентной детекцией осуществляют с помощью прибора «Rotor-Gene Q»

Параметры температурно-временного режима амплификации на этом приборе представлены в таблице 3.

Далее помещают подготовленные для проведения ПЦР пробирки в ячейки амплификатора, программируют прибор согласно инструкции производителя.

Интерпретация результатов анализа

Полученные данные - кривые накопления флуоресцентного сигнала анализируются с помощью программного обеспечения используемого прибора для проведения ПЦР в соответствии с инструкцией производителя к прибору.

Накопление флуоресцентного сигнала измеряли по каналам: FAM/Green для специфического сигнала европейского генотипа (тип 1) вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней; JOE/Yellow для специфического сигнала американского генотипа (тип 2) этого же вируса и Су5/Red для сигнала внутреннего контроля. Учет результатов ОТ-ПЦР РРСС РВ проводится по наличию или отсутствию пересечения кривой флуоресценции с установленной на соответствующем уровне пороговой линией (что соответствует наличию или отсутствию значения порогового цикла «Ct» для исследуемого образца), если кривые накопления флуоресцентного сигнала выходят до 35 цикла, то результат реакции считают положительным, а если кривые не пересекают пороговую линию или пересекают ее после 35 цикла, то результат реакции - отрицательный.

Результат считается достоверным в случае корректного прохождения положительных и отрицательных контролей амплификации и экстракции НК в соответствии с таблицей 4 и фиг. 1, 2, 3).

Появление любого значения Ct в таблице результатов для отрицательного контроля этапа экстракции ВК- на каналах FAM/Green, JOE (HEX)/Yellow и для отрицательного контроля этапа ПЦР К - на любом из каналов свидетельствует о наличии контаминации реактивов или образцов. В этом случае результаты анализа по всем пробам считаются недействительными. Требуется повторить анализ всех проб, а также предпринять меры по выявлению и ликвидации источника контаминации.

Образцы, для которых по каналу Cy5/Red значение Ct отсутствует или превышает 35 цикл (при этом по всем каналам FAM/Green, JOE (HEX)/Yellow и отсутствует значение Ct) требуют повторного проведения исследования. Задержка в значениях пороговых циклов для исследуемых образцов на канале Cy5/Red указывает на присутствие ингибиторов в пробе(ах) или на ошибки при постановке реакции ОТ-ПЦР РРСС РВ. Требуется провести исследование, начиная с этапа экстракции НК.

Результат амплификации кДНК вируса РРСС европейского генотипа (тип 1) регистрируется на канале FAM/Green, результат амплификации кДНК вируса РРСС американского генотипа (тип 2) регистрируется на канале JOE/Yellow, результат амплификации экзогенного ВКО регистрируется на канале Cy5/Red.

Образец считается положительным (РНК вируса репродуктивно-респираторный синдрома свиней присутствует) если наблюдается экспотенциальный рост сигнала на хотя бы одном из каналов FAM/Green, JOE (HEX)/Yellow, при этом значение Ct на данном канале, соответствующем амплификации кДНК вируса РРСС, определяется не позднее 37 цикла, a Ct контрольных образцов находятся в пределах нормы (табл. 4, фиг. 1, 2, 3).

Если для исследуемого образца по каналу (каналам) детектирующим наличие вируса РРРС (FAM/Green, JOE (HEX)/Yellow) значение Ct определяется позднее 37 цикла при корректном прохождении положительных и отрицательных контролей - он считается спорным и исследуется повторно с этапа выделения НК. Если при повторной постановке наблюдается схожий результат (Ct), тогда требуется повторное взятие материала от того же животного для проведения ПЦР-исследования и (или) использование альтернативных методов диагностики.

При получении сомнительных результатов рекомендуется исследование смывов с поверхностей в лаборатории для исключения риска внутри лабораторной контаминации.

Образец считается отрицательным (НК вируса репродуктивно-респираторный синдрома свиней отсутствует) если не наблюдается рост сигнала флуоресценции ни на одном из каналов - FAM/Green, JOE (HEX)/Yellow, при этом значения Ct контрольных образцов находятся в пределах нормы (см. Табл. 4, фиг. 1, 2, 3).

Для доказательства эффективности использования ПЦР с флуоресцентной детекцией в режиме реального времени с применением разных видов контроля с различными формами материала бактериофага MS2: суспензии и фрагмента генома со специфическими к нему праймерами и зондом проводился сравнительный анализ чувствительности и специфичности заявляемого с прототипом. В результате исследований чувствительность и специфичность заявляемого способа на 1,5-2% выше, чем у прототипа, а именно имеет чувствительность 104 коп/мл РНК вируса РРСС в крови, сыворотке крови, суспензии внутренних органов и 7×103 коп/мл в сперме.


Способ выявления и генотипирования РНК вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней
Источник поступления информации: Роспатент

Showing 61-70 of 465 items.
04.04.2018
№218.016.357f

Способ производства белково-жировой эмульсии для группы вареных колбасных изделий

Изобретение относится к мясной промышленности, а именно к производству белково-жировых эмульсий и мясопродуктов с ее использованием. Способ предусматривает обработку в устройстве для тонкого измельчения клейковины белка пшеницы и жирного сырья с добавлением воды. В качестве жирного сырья...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002645908
Дата охранного документа: 28.02.2018
10.05.2018
№218.016.38fb

Устройство для акустической и магнитной обработки топлива в двигателе внутреннего сгорания

Изобретение относится к устройству для акустической и магнитной обработки топлива в двигателе внутреннего сгорания. Устройство включает источник питания, электромагнитную систему (4) с электрическими обмотками (6) с выводами, которые подключены к источнику питания, и ферритовый магнитопровод...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002646989
Дата охранного документа: 13.03.2018
10.05.2018
№218.016.3c8b

Способ формирования пчелиной семьи (варианты)

Группа изобретений относится к области сельского хозяйства, а именно к пчеловодству, и может быть использована на крупных пасеках фермеров и приусадебных пасеках пчеловодов-любителей при формировании пчелиной семьи. В первом варианте способа формирования пчелиной семьи осуществляют подсадку...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002647903
Дата охранного документа: 21.03.2018
10.05.2018
№218.016.3db2

Способ прогнозирования яичной продуктивности кур

Изобретение относится к биотехнологии. Способ предусматривает содержание кур яичных пород в возрасте 160 дней в индивидуальных клетках батарей, фиксацию времени снесения яиц круглосуточно в течение 3-х дней с последующим отбором яиц и учетом их массы со времени включения света в птичнике....
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002648149
Дата охранного документа: 22.03.2018
10.05.2018
№218.016.3e68

Початкоотделяющий аппарат

Изобретение относится к области сельскохозяйственного машиностроения, преимущественно к кукурузоуборочным комбайнам, и предназначено для повышения степени очистки початков от обертки. Аппарат для отделения початков кукурузы от стеблей содержит два рифленых вальца 1, установленных с возможностью...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002648416
Дата охранного документа: 26.03.2018
10.05.2018
№218.016.3e90

Раздатчик-измельчитель кормов, заготовленных в рулоны

Изобретение относится к области сельского хозяйства. Устройство содержит установленный на мобильной раме бункер, в донной части которого смонтировано подающее устройство и фиксирующий механизм, на боковой стороне - загрузочный механизм, выполненный в виде вильчатого захвата, с противоположной...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002648408
Дата охранного документа: 26.03.2018
10.05.2018
№218.016.3e99

Способ защиты вегетирующих растений подсолнечника от повреждающего действия 2,4-д

Изобретение относится к сельскому хозяйству. Для защиты вегетирующих растений подсолнечника от повреждающего действия 2,4-Д их обрабатывают 2-(4-R-бензилсульфанил)-4,6-диметил-5-R-никотинонитрилом формулы: где 1a R=СН, R=CI; 1b R=Н, R=CI; 1c R=CI, R=Н; в количестве 30 г/га через 1 сутки после...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002648419
Дата охранного документа: 26.03.2018
10.05.2018
№218.016.3ebf

Способ раннего прогнозирования яичной продуктивности перепелок

Изобретение относится к сельскому хозяйству, а именно к селекции сельскохозяйственной птицы. Производят оценку перепелок по экстерьерному показателю. Отбор перепелок осуществляют в 31-дневном возрасте. В качестве экстерьерного показателя используют длину плюсны с размерами равными 2,8-3,2 см и...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002648417
Дата охранного документа: 26.03.2018
10.05.2018
№218.016.3ef0

Измельчитель-смеситель-раздатчик кормов

Изобретение относится к сельскохозяйственному машиностроению. Устройство содержит установленный на мобильной раме конический бункер. Внутри бункера размещен конический шнек (3) с винтовой навивкой, на кромке которой установлены горизонтальные ножи. Шнек (3) имеет дополнительные вертикальные...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002648405
Дата охранного документа: 26.03.2018
10.05.2018
№218.016.3f1b

Измельчитель белкового корма

Изобретение относится к устройствам для измельчения и может быть применено для измельчения белковых кормов. Измельчитель содержит загрузочный бункер, заслонку, корпус, раму, электродвигатель, ротор с дисками и ножевые блоки с ножами в виде плоских геометрических фигур. Измельчитель имеет четное...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002648392
Дата охранного документа: 26.03.2018
Showing 61-70 of 268 items.
25.08.2017
№217.015.bd10

Способ приготовления функциональной кормовой добавки из зерна ячменя

Изобретение относится к области сельского хозяйства. Предложен способ приготовления функциональной кормовой добавки из зерна ячменя, включающий замачивание зерна в электроактивированной воде, проращивание и выгон ростков. При этом в качестве электроактивированной воды использовали анолит с рН...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002616410
Дата охранного документа: 14.04.2017
25.08.2017
№217.015.bd30

Способ получения белково-витаминной кормовой добавки из семян сои

Изобретение относится к области сельского хозяйства. Способ получения белково-витаминной кормовой добавки из сои, включающий замачивание семян в электроактивированной воде, проращивание и выгон проростков. При этом промывку семян сои осуществляют водопроводной водой в течение 4-8 мин, после...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002616406
Дата охранного документа: 14.04.2017
25.08.2017
№217.015.bd50

Способ получения витаминного зеленого корма

Изобретение относится к области сельского хозяйства. Способ получения витаминного зеленого корма, включающий замачивание зерна в электроактивированной воде, проращивание и выгон проростков. В качестве исходного зерна используют зерно тритикале, промывку которого осуществляют водопроводной...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002616401
Дата охранного документа: 14.04.2017
25.08.2017
№217.015.bd63

Способ изготовления белковой биологически активной кормовой добавки

Изобретение относится к сельскому хозяйству. Способ изготовления белковой биологически активной кормовой добавки, включающий замачивание семян в электроактивированной воде, проращивание и выгон проростков. В качестве исходных семян используют семена люцерны. Промывку семян люцерны осуществляют...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002616412
Дата охранного документа: 14.04.2017
25.08.2017
№217.015.bd81

Способ производства витаминной кормовой добавки

Изобретение относится к области сельского хозяйства, в частности к кормопроизводству. Способ производства витаминной кормовой добавки включает промывку зерна ржи водопроводной водой в течение 4-8 мин. После чего промытое зерно замачивают анолитом с рН 3,0-10,5 и окислительно-восстановительным...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002616403
Дата охранного документа: 14.04.2017
25.08.2017
№217.015.bd89

Способ получения белково-витаминной кормовой добавки из семян люпина

Изобретение относится к области сельского хозяйства - кормопроизводству, в частности к способу получения белково-витаминной кормовой добавки из семян люпина. Способ получения кормовой добавки включает промывку семян люпина водопроводной водой в течение 4-8 мин. Затем промытые семена замачивают...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002616408
Дата охранного документа: 14.04.2017
25.08.2017
№217.015.be3d

Способ изготовления биологически активной кормовой добавки

Изобретение относится к области сельского хозяйства, к кормопроизводству, в частности к способу изготовления биологически активной кормовой добавки. Способ включает промывку зерна чины водопроводной водой в течение 4-8 мин. Затем промытое зерно замачивают анолитом с pH 3,0-11,2 ед. и...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002616832
Дата охранного документа: 18.04.2017
25.08.2017
№217.015.be51

Способ изготовления витаминного зеленого корма

Изобретение относится к области сельского хозяйства, а именно к кормопроизводству. Способ изготовления витаминного зеленого корма включает промывку зерна чины водопроводной водой в течение 4-8 мин. После чего промытое зерно замачивают анолитом с pH 2,4-7,8 ед. и окислительно-восстановительным...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002616828
Дата охранного документа: 18.04.2017
25.08.2017
№217.015.be8f

Способ производства витаминной кормовой добавки

Изобретение относится к области сельского хозяйства, а именно к кормопроизводству. Способ производства витаминной кормовой добавки включает промывку зерна чины водопроводной водой в течение 4-8 мин. После чего промытое зерно замачивают анолитом с pH 3,0-10,5 и окислительно-восстановительным...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002616826
Дата охранного документа: 18.04.2017
25.08.2017
№217.015.be96

Способ приготовления белковой биологически активной кормовой добавки

Изобретение относится к области сельского хозяйства - кормопроизводству, в частности к способу приготовления белковой биологически активной кормовой добавки. Способ включает промывку семян амаранта водопроводной водой в течение 4-8 мин. Затем промытое зерно замачивают анолитом с pH 3,0-11,2 ед....
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002616824
Дата охранного документа: 18.04.2017
+ добавить свой РИД