×
02.10.2019
219.017.d008

Способ выявления РНК возбудителя вируса артериита у лошадей

Вид РИД

Изобретение

Юридическая информация Свернуть Развернуть
Краткое описание РИД Свернуть Развернуть
Аннотация: Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой способ выявления РНК возбудителя вируса артериита у лошадей, включающий выделение РНК из биологического материала инфицированных особей сорбционным методом, синтез кДНК на матрице РНК путем постановки одноэтапной с добавлением внутреннего и положительного контролей образцов мультиплексной реакции обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции с проведением 45 циклов амплификации с детекцией в реальном времени с использованием специфичных для участка генома вирусного возбудителя олигонуклеотидных праймеров, флуоресцентно-меченного зонда и контрольных образцов, измерение накопления флуоресцентного сигнала по каналам соответствующих флуоресцентных красителей и интерпретацию результатов на основании наличия или отсутствия пересечения кривой флуоресценции с пороговой линией - Threshold, согласно изобретению для выделения РНК используют биологический материал животных по выбору: в виде выделений из носа, глаз, фекалий, крови, спермы и фрагментов внутренних органов и тканей, взятых от лошадей, инфицированных возбудителем вируса артериита (Equine arteritis virus), при этом для внутреннего контрольного образца используют суспензию бактериофага MS2 с концентрацией 5×10 копий нуклеотидных последовательностей на 1 мкл, а для положительного контрольного образца используют смесь рекомбинантных плазмидных ДНК, содержащих фрагмент генома возбудителя вируса артериита лошадей (Equine arteritis virus) и фрагмент генома бактериофага MS2, взятых в соотношении 1:1, FAM/Green для специфического сигнала; Cy5/Red для сигнала внутреннего контроля, если кривые накопления флуоресцентного сигнала выходят до 35 цикла, то результат реакции считают положительным, а если кривые не пересекают пороговую линию или пересекают ее после 35 цикла, то результат реакции – отрицательный. Изобретение позволяет расширить функциональные возможности и провести достоверную диагностику заболевания. 3 ил., 4 табл.
Реферат Свернуть Развернуть

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии, а именно к средствам диагностики вирусных и инфекционных заболеваний у животных, в частности к методам выявления ДНК возбудителя вируса артериита у лошадей.

Вирусный артериит лошадей (Arteriitis viralis equorum, Equine viral arteritis) - контагиозное заболевание, характеризующееся некрозами стенки кровеносных сосудов, катаральным воспалением органов дыхания и пищеварения у жеребят, абортами у кобыл и нарушением воспроизводительной функции у жеребцов.

Известно, что диагноз на вирусный артериит устанавливают на основании эпизоотологических, клинических данных и, в случае гибели животных, патоморфологических исследований. Лабораторные методы диагностики включают выделение вируса в культуре клеток, ретроспективные серологические исследования. Для выделения вируса используют культуры клеток лошади, перевиваемых линии ВНК-21, Веро и др. Идентификацию вируса проводят в реакции нейтрализации со специфической сывороткой. Альтернативными (вспомогательными) методами лабораторных исследований являются РСК, ИФА. Полимеразная цепная реакция для диагностики вирусного артериита лошадей, находится на стадии изучения. http://www.liveanimal.ru/loshadi/veterinariya/zaraznye-zabolevaniya/infektsionnye-zabolevaniya/virusnyi-arteriit-loshadej

Также известен способ выявления инфекций методом мультиплексной ПЦР с детекцией в режиме реального времени (патент РФ №2460803, C12Q 1/68, 2014 г. - прототип), включающий выделение РНК из биологического материала инфицированных особей сорбционным методом, синтез кДНК на матрице РНК путем постановки одноэтапной с добавлением внутреннего и положительного контролей образцов мультиплексной реакции обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции с проведением 45 циклов амплификации с детекцией в реальном времени с использованием специфичных для участка генома вирусного возбудителя олигонуклеотидных праймеров, флуоресцентно-меченного зонда и контрольных образцов, измерение накопления флуоресцентного сигнала по каналам соответствующих флуоресцентных красителей и интерпретацию результатов на основании наличия или отсутствия пересечения кривой флуоресценции с пороговой линией -Threshold.

Недостатком прототипа является отсутствие возможности получения достоверной диагностики вируса артериита у лошадей.

Техническим результатом является получение достоверной диагностики заболевания и расширение функциональных возможностей.

Технический результат достигается тем, что в способе выявления РНК возбудителя вируса артериита у лошадей, включающем выделение РНК из биологического материала инфицированных особей сорбционным методом, синтез кДНК на матрице РНК путем постановки одноэтапной с добавлением внутреннего и положительного контролей образцов мультиплексной реакции обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции с проведением 45 циклов амплификации с детекцией в реальном времени с использованием специфичных для участка генома вирусного возбудителя олигонуклеотидных праймеров, флуоресцентно-меченного зонда и контрольных образцов, измерение накопления флуоресцентного сигнала по каналам соответствующих флуоресцентных красителей и интерпретацию результатов на основании наличия или отсутствия пересечения кривой флуоресценции с пороговой линией - Threshold, согласно изобретению для выделения РНК используют биологический материал лошадей по выбору: в виде выделений из носа, глаз, фекалий, крови, спермы и фрагментов внутренних органов и тканей взятые от лошадей инфицированных возбудителем вируса артериита (Equine arteritis virus), при этом для внутреннего контрольного образца используют суспензию бактериофага MS2 с концентрацией 5×103 копий нуклеотидных последовательностей на 1 мкл, а для положительного контрольного образца используют смесь рекомбинантных плазмидных ДНК, содержащих фрагмент генома возбудителя вируса артериита лошадей (Equine arteritis virus) и фрагмент генома бактериофага MS2 взятых в соотношении 1:1, со следующими нуклеотидными последовательностями:

при этом накопление флуоресцентного сигнала измеряют по каналам: FAM/Green для специфического сигнала; Cy5/Red для сигнала внутреннего контроля, если кривые накопления флуоресцентного сигнала выходят до 35 цикла, то результат реакции считают положительным, а если кривые не пересекают пороговую линию или пересекают ее после 35 цикла, то результат реакции - отрицательный.

Новизна заявляемого технического решения заключается в том, что для получения достоверной диагностики вируса артериита лошадей используют две последовательные реакции: обратной транскрипции вирусной РНК для получения кДНК и полимеразной цепной реакции для амплификации фрагмента полученной кДНК матрицы. Обе реакции проводятся последовательно в одной ПЦР-пробирке (one-tube) с использованием специфичных для участка генома артериита олигонуклеотидных праймеров, флуоресцентно-меченного зонда и разных видов контроля для которых используют различные формы материала бактериофага MS2: суспензия и фрагмент генома со специфическими к нему праймерами и зондом. Такая постановка ОТ-ПЦР в реальном времени сокращает и упрощает процедуру анализа, снижает риск контаминации и возможность ошибки при переносе кДНК в другую пробирку для ПЦР. Кроме того, детекция продуктов амплификации осуществляется с использованием принципа выщепления флуоресцентной метки на 5' конце олигонуклеотидного зонда.

Признаки, отличающие заявляемое техническое решение от прототипа, направлены на достижение технического результата и не выявлены при изучении данной и смежной областей науки и техники и, следовательно, соответствуют критерию «изобретательский уровень».

Заявляемый способ рекомендовано использовать в ветеринарной вирусологии, а именно к средствам диагностики возбудителя вируса артериита лошадей, что соответствует критерию «промышленная применимость».

Сущность изобретения поясняется чертежом, где представлены скриншоты графиков и таблицы, на фиг. 1 - представлен канал FAM /Green - для тестирования наличия ДНК возбудителя вируса артериита у лошадей; на фиг. 2 представлен канал Cy5/Red - для тестирования сигнала внутреннего контрольного образца (ВКО), на рис. 3 - таблица количественных данных для Cycling A.Green (Equine arteritis virus) и A.Red (ВКО).

Способ выявления РНК возбудителя вируса артериита у лошадей осуществляется следующим образом

Для исследования с целью выделения РНК используют биологический материал животных по выбору: в виде выделений из носа, глаз, фекалий, крови, спермы и фрагментов внутренних органов и тканей взятые от лошадей инфицированных возбудителем вируса артериита (Equine arteritis virus). Для внутреннего контрольного образца используют суспензию бактериофага MS2 с концентрацией 5×10 копий нуклеотидных последовательностей на 1 мкл, а для положительного контрольного образца используют смесь рекомбинантных плазмидных ДНК, содержащих фрагмент генома возбудителя вируса артериита лошадей (Equine arteritis virus) и фрагмент генома бактериофага MS2 взятых в соотношении 1:1, со следующими нуклеотидными последовательностями:

Затем измеряют накопление флуоресцентного сигнала по каналам: FAM/Green для специфического сигнала; Cy5/Red для сигнала внутреннего контроля и интерпретируют результаты на основании наличия/отсутствия пересечения кривой флуоресценции с пороговой линией (Threshold). Если кривые накопления флуоресцентного сигнала выходят до 35 цикла, то результат реакции считается положительным, а если кривые не пересекают пороговую линию или пересекают ее после 35 цикла, то результат реакции - отрицательный.

Использование для разных видов контроля различные формы материала бактериофага MS2: суспензии и фрагмента генома со специфическими к нему праймерами и зондом обусловлено тем, что это позволяет контролировать корректное прохождение реакции в каждой пробирки, а также контролируется этап выделения РНК из образцов.

Выбор последовательности и расчет первичной структуры олигонуклеотидных праймеров и зондов.

Вирус артериита входит в семейство Arteriviridae, род Arierivirus. Вирионы размером около 60 нм, сферической формы. Тип симметрии кубический, некоторые из них имеют хвостоподобные выступы. Состоят из нуклеокапсида и липидсодержащей суперкапсидной оболочки клеточного происхождения, на поверхности которой имеются выступы длиной 12-15 нм. Геном представлен 10 фрагментами 2-нитевой РНК, Белковый капсид его состоит из 7 структурных белков (36-120 кД).

Праймеры высокоспецифичны к коротким консервативным участкам гена ORF5 (Equine arteritis virus strain SER-1 large envelope protein (ORF5) gene, partial cds, код доступа KX645659.1, участок между 70 и 390) и не комплементарны каким-либо участкам геномов других вирусов. Праймеры были спроектированы с использованием Primer Express Software v3.0 (Applied Biosystems) и исследованы с использованием BLAST, чтобы подтвердить их специфичность. Для детекции продуктов амплификации был подобран олигонуклеотидный флуоресцентно-меченный зонд EAVP (комплементарный участку нуклеотидной последовательности, ограниченной позициями отжига праймеров EAVF и EAVR). Зонд был помечен красителем FAM. Для гашения самопроизвольной флуоресценции на 3'-конце олигонуклеотидного зонда прикреплен гаситель BHQ-1.

Используя программу "Oligo 6.0" описаны основные свойства рассчитанных олигонуклеотидов, определившие возможность их использования в ПЦР.

С помощью программы «Oligo 6.0» проанализирована нуклеотидная последовательность бактериофага MS2 (Enterobacteria phage MS2 isolate ST4, complete genome. ACCESSION EF204940). Бактериофаг MS2 содержит однонитевую позитивно ориентрованную РНК размером 3569 оснований. В результате анализа внутри гена белка `созревания` (maturation protein) выбран участок между 200 и 350 нуклеотидами, содержащий уникальные нуклеотиные последовательности, рассчитаны первичные структуры олигонуклеотидных праймеров, фланкирующих выбранный участок генома. Для детекции продуктов амплификации подобран олигонуклеотидный флуоресцентно-меченный зонд MS2P, комплементарный участку нуклеотидной последовательности, ограниченной позициями отжига праймеров MS2F и MS2R. Используя программу «Oligo 6.0» описаны основные свойства рассчитанных олигонуклеотидов, определившие возможность их использования в ПЦР.

Пример конкретного осуществления способа выявления РНК возбудителя вируса артериита у лошадей.

Для исследования используют следующий материал:

- Соскобы со слизистых конъюнктивы глаз и ротоглотки берут сухими ватными зондами;

- Фекалии весом 5 г отбирают в стерильный пластиковый контейнер;

- Сперму, отбирают в пластиковую микропробирку объемом 1,5 мл

- Для получения сыворотки забирают кровь в пробирку без антикоагулянта;

- Фрагменты внутренних органов и ткани (трахея, легкие, селезенка, мозг, воздухоносные мешки, кишечник, лимфоузлы) помещают в стерильный контейнер.

Соскобы со слизистых конъюнктивы и ротоглотки в физиологическом растворе исследуют без предварительной подготовки.

Сперму разводят физиологическим раствором 1:3, тщательно перемешивают на вортексе. Для экстракции используют аликвоту 0,1 мл суспензии.

Для получения сыворотки пробирки с кровью (без антикоагулянта) отстаивают при комнатной температуре в течение 30 минут до полного образования сгустка. Затем центрифугируют при 600-1600 g (3000 об./мин на центрифуге «MiniSpin», Eppendorf, Германия) в течение 10 минут при комнатной температуре. Сыворотку переносят отдельными наконечниками с фильтром в стерильные пробирки объемом 1,5 мл.

Из тканей и органов вырезают небольшие кусочки до 1 г весом. Растирают пробы в отдельных фарфоровых ступках или гомогенизируют на автоматических гомогенизаторах. Затем готовят 10% суспензию на стерильном физиологическом растворе или фосфатном буфере. Суспензию переносят в пробирку объемом 1,5 мл и центрифугируют при 9000 об./мин на центрифуге «MiniSpin», Eppendorf, в течение 1 мин. Аликвоту надосадочной жидкости (0,1 мл) используют для экстракции РНК.

Из фекалий (1-5 г) готовят 10% суспензию на стерильном физиологическом растворе. Взвесь фекалий декантируют в течении 5-10 минут. Отбирают 1 мл надосадочной жидкости и переносят в чистую пробирку 1,5 мл, центрифугируют при 5000 об./мин на центрифуге «MiniSpin», Eppendorf, в течение 5 мин. Экстракцию РНК из осветленного экстракта фекалий проводят по возможности, сразу. При необходимости хранения замораживают.

Анализ проводят с помощью набора реагентов «ПЦР-АРТЕРИИТ-ФАКТОР» методом ОТ-ПЦР РВ:

Набор состоит из комплекта реагентов для проведения мультиплексной ОТ-ПЦР РВ (Комплект №1) и контрольных образцов (Комплект №2).

Набор выпускается в двух вариантах:

1) Для анализа 55 образцов (включая контрольные образцы)

2) Для анализа 110 образцов (включая контрольные образцы).

Состав набора приведен в Таблицах 1 и 2.

*Возможна легкая опалесценция

Наборы используют в соответствии с инструкцией по применению набора реагентов «ПЦР-АРТЕРИИТ-ФАКТОР» для выявления РНК вируса артериита лошадей (Equine arteritis virus) в биологическом материале от животных методом совмещенной реакции обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции с флуоресцентной детекцией в режиме реального времени (ОТ ПЦР РВ), ТУ 21.10.60-126-51062356-2017 (для диагностики in vitro) http://www. vetfaktor.ru/.

В набор не входят реактивы для экстракции НК. Выделение РНК может проводиться, например, с помощью наборов на основе сорбционного метода, в состав которых входит силика или микроцентрифужные колонки, наборов на основе фенол-хлороформной экстракции и т.п. Рекомендуется использовать набор «ДНК/РНК-С-ФАКТОР» либо аналогичный.

Анализ состоит из трех этапов:

- экстракция НК (на этом этапе дополнительно используют реактивы для экстракции, например набор «ДНК/РНК-С-ФАКТОР»);

- проведение реакции ОТ-ПЦР РВ;

- учет результатов анализа.

Экстракцию (выделение) нуклеиновых кислот (НК) из исследуемых проб проводят следующим образом.

Отбирают необходимое количество одноразовых пробирок объемом 1,5 мл, включая отрицательный контроль выделения. Вносят во все пробирки, включая пробирку для отрицательного контрольного образца (ОКО), по 10 мкл внутреннего контрольного образца (ВКО EAV) в качестве которого используют суспензию бактериофага MS2 с концентрацией 5×103 копий нуклеотидных последовательностей на 1 мкл, а для положительного контрольного образца (ПКО EAV) используют смесь рекомбинантных плазмидных ДНК, содержащих фрагмент генома возбудителя вируса артериита лошадей (Equine arteritis virus) и фрагмент генома бактериофага MS2 взятых в соотношении 1:1, со следующими нуклеотидными последовательностями:

Выделяют НК из анализируемых и контрольных образцов согласно инструкции производителя набора для выделения НК.

Для подготовка образцов к проведению ПНР Общий объем реакционной смеси - 25 мкл, объем РНК-пробы - 10 мкл.

Успешное прохождение реакции контролируют использованием компонентов из комплектов 1 и 2 набора ПКО EAV, ВКО EAV и РНК Буфер.

В отдельной пробирке смешать компоненты набора из расчета на каждую реакцию: 10 мкл ПЦР БУФЕР EAV 5 мкл ПЦР СМЕСЬ EAV 0,75 мкл RT PCR ENZ

Перемешивают смесь на вортексе и сбрасывают капли кратковременным центрифугированием. Отбирают необходимое количество пробирок для амплификации НК исследуемых и контрольных проб и вносят в них по 15 мкл приготовленной реакционной смеси.

Используя наконечники с фильтром в подготовленные пробирки вносят:

а) в пробирку отрицательного контроля ПЦР (К-) 10 мкл РНК буфера;

б) в ряд пробирок для исследуемых проб - в каждую вносят по 10 мкл НК соответствующей пробы;

в) в пробирку с положительным контролем ПЦР (К+) вносят 10 мкл ПКO ЕАV.

Далее проводят ПЦР РВ с флуоресцентной детекцией с помощью прибора - амплификатора типа «Rotor-Gene Q» при следующих режимах представленных в таблице 3.

Помещают подготовленные для проведения ПЦР пробирки в ячейки амплификатора, программируют прибор согласно инструкции производителя и осуществляют интерпретацию результатов анализа

Полученные данные - кривые накопления флуоресцентного сигнала анализируются с помощью программного обеспечения используемого прибора для проведения ПЦР в соответствии с инструкцией производителя к прибору. Учет результатов ОТ-ПЦР РВ проводится по наличию или отсутствию пересечения кривой флуоресценции с установленной на соответствующем уровне пороговой линией (что соответствует наличию или отсутствию значения порогового цикла «Ct» для исследуемого образца).

Результат считается достоверным в случае корректного прохождения положительных и отрицательных контролей амплификации и экстракции НК в соответствии с таблицей 4.

Появление любого значения Ct в таблице результатов для отрицательного контроля этапа экстракции ВК- на канале Fam/Green и для отрицательного контроля этапа ПЦР К- на любом из каналов свидетельствует о наличии контаминации реактивов или образцов. В этом случае результаты анализа по всем пробам считаются недействительными. Требуется повторить анализ всех проб, а также предпринять меры по выявлению и ликвидации источника контаминации.

Образцы, для которых по каналу Cy5/Red значение Ct отсутствует или превышает 35 цикл (при этом по каналу Fam/Green отсутствует значение Ct) требуют повторного проведения исследования (рис. 2, 3). Задержка в значениях пороговых циклов для исследуемых образцов на канале Cy5/Red указывает на присутствие ингибиторов в пробе(ах) или на ошибки при постановке реакции ОТ-ПЦР РВ. Требуется провести исследование, начиная с этапа экстракции НК.

Образец считается положительным, РНК вируса артериита лошадей присутствует, если наблюдается экспоненциальный рост сигнала на канале Fam/Green, при этом значения Ct контрольных образцов находятся в пределах нормы (см. Табл. 3, рис. 1,3). Если для исследуемого образца по каналу Fam/Green значение Ct определяется позднее 37 цикла при корректном прохождении положительных и отрицательных контролей - он считается спорным и исследуется повторно с этапа выделения НК. Если при повторной постановке наблюдается схожий результат (Ct на канале Fam/Green более 37), требуется повторное взятие материала от того же животного для проведения ПЦР-исследования и (или) использование альтернативных методов диагностики.

Источник поступления информации: Роспатент

Showing 51-60 of 465 items.
04.04.2018
№218.016.323d

Способ обнаружения днк вируса африканской чумы свиней методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии, а именно к средствам диагностики африканской чумы свиней (АЧС). Изобретение позволяет повысить точность обнаружения ДНК вируса африканской чумы свиней методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени. Способ обнаружения ДНК вируса...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002645262
Дата охранного документа: 19.02.2018
04.04.2018
№218.016.349f

Способ приготовления хлеба функционального назначения

Изобретение относится к пищевой промышленности, в частности к производству хлебобулочных изделий, предназначенных для профилактического питания. Способ приготовления хлеба функционального назначения включает замес теста из муки пшеничной 1-го сорта, дрожжей прессованных хлебопекарных, соли...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002646089
Дата охранного документа: 01.03.2018
04.04.2018
№218.016.34b7

Початкоотделяющий модуль кукурузоуборочного комбайна

Изобретение относится к сельскохозяйственному машиностроению. Початкоотделяющий модуль кукурузоуборочного комбайна содержит верхнюю, среднюю и нижнюю пары транспортирующих лент, расположенных в одной вертикальной плоскости и выполненных в виде бесконечных контуров. Верхняя и нижняя пары...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002646093
Дата охранного документа: 01.03.2018
04.04.2018
№218.016.34b9

Линия для получения белкового корма

Изобретение относится к кормовой промышленности. Линия для получения белкового корма, включающая бункер для хранения продукта переработки масличных культур и бункер для его обогащения питательными микроэлементами, экструдер с бункером, мешалку, емкость для хранения корма. Линия содержит...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002646092
Дата охранного документа: 01.03.2018
04.04.2018
№218.016.34d3

Устройство для обработки гидропонного питательного раствора

Изобретение относится к сельскохозяйственному производству. Предложено устройство для обработки гидропонного питательного раствора, состоящее из емкости для размещения питательного раствора, с входными трубопроводами и выходным трубопроводом, подающим раствор растениям, с узлом обработки...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002646091
Дата охранного документа: 01.03.2018
04.04.2018
№218.016.34d4

Способ стимулирования корнеобразовательной способности черенков винограда

Изобретение относится к сельскому хозяйству. Способ предусматривает предпосадочное замачивание черенков в течение 24 часов в воде. После чего осуществляют их замачивание в 0,001%-ном водном растворе Фармайода в течение суток. Обеспечивается увеличение доли укоренившихся черенков, а также...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002646094
Дата охранного документа: 01.03.2018
04.04.2018
№218.016.34db

Способ создания моносортного яблоневого насаждения

Изобретение относится к области сельского хозяйства, в частности к садоводству и плодоводству. Способ включает использование сортов-кребов с учетом сроков цветения и эффективности опыления основного сорта сортом-кребом и его посадку в ряду основного сорта. При этом выявляют единые сроки...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002646046
Дата охранного документа: 01.03.2018
04.04.2018
№218.016.34e2

Влагозащитное парафиновое покрытие плодовых прививок и черенков яблони

Изобретение относится к области сельского хозяйства, в частности к плодоводству, и химии. Влагозащитное парафиновое покрытие включает парафин, пластификатор, диспергатор и поверхностно-активное вещество. При этом в качестве пластификатора, диспергатора и поверхностно-активного вещества...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002646090
Дата охранного документа: 01.03.2018
04.04.2018
№218.016.354a

Способ получения мясосодержащего суфле для диетического питания людей с гастроэнтерологическими заболеваниями

Изобретение относится к мясной и птицеперерабатывающей промышленности, а именно к приготовлению суфле из мяса птицы для диетического питания людей с гастроэнтерологическими заболеваниями. Способ получения мясосодержащего суфле включает измельчение филе куриной грудки, добавление яйца куриного,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002645924
Дата охранного документа: 28.02.2018
04.04.2018
№218.016.356a

Способ сортирования семян подсолнечника

Изобретение относится к области сельского хозяйства. Предложен способ сортирования семян подсолнечника, согласно которому после первичной очистки осуществляют формирование слоя вороха семян подсолнечника с влажностью не более 16% и с толщиной, не превышающей размеры семян подсолнечника в...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002645869
Дата охранного документа: 28.02.2018
Showing 51-60 of 291 items.
13.01.2017
№217.015.8fe6

Способ приготовления ячменно-ржаного солода

Изобретение относится к способу приготовления ячменно-ржаного солода. Способ включает составление смеси из зерна ячменя и ржи в соотношении 1:1, промывку зерновой смеси водопроводной водой в течение 4-8 минут, замачивание ее анолитом с pH 3,0-6,0 ед. и окислительно-восстановительным потенциалом...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002605320
Дата охранного документа: 20.12.2016
13.01.2017
№217.015.917e

Способ профилактики и лечения респираторных заболеваний у телят

Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для профилактики и лечения респираторных заболеваниях у телят. Способ включает использование водно-спиртовой настойки, содержащей траву эхинацеи пурпурной, корневище девясила, приготовленной на основе 70 об.% этилового спирта....
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002605620
Дата охранного документа: 27.12.2016
13.01.2017
№217.015.9226

Способ получения пшеничного солода

Изобретение относится к способу получения солода из зерна пшеницы. Способ включает промывку зерна водопроводной водой в течение 4-8 минут, замачивание промытого зерна анолитом с рН 3,0-6,0 и окислительно-восстановительным потенциалом 970-1110 мВ, концентрацией кислорода 8,3-12,0 мг/л и хлора...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002605632
Дата охранного документа: 27.12.2016
25.08.2017
№217.015.98d2

Способ приготовления мясного полуфабриката кнели из мяса индейки

Изобретение относится к пищевой промышленности, в частности к производству мясных полуфабрикатов из мяса птицы, выращенных в условиях малого крестьянского хозяйства. Способ приготовления мясного полуфабриката кнели из мяса индейки включает подготовку и измельчение филе птицы, приготовление...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002609279
Дата охранного документа: 01.02.2017
25.08.2017
№217.015.99b3

Способ повышения иммунобиологической реактивности и воспроизводительной функции у телок в период наступления физиологического созревания

Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для профилактики иммунодефицита, повышения иммунобиологической реактивности и воспроизводительной функции у телок в период наступления физиологической зрелости. Способ включает использование иммуностимулирующего препарата в виде смеси...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002609869
Дата охранного документа: 06.02.2017
25.08.2017
№217.015.9e1f

Способ приготовления жидкофазной формы маточного мицелия для получения плодовых тел шляпочных пластинчатых грибов

Изобретение относится к области биотехнологии и сельского хозяйства. Способ включает приготовление стерильной жидкой питательной среды, содержащей источник углерода, азота, калия дигидрофосфат и магния сульфат, засев чистой культурой гриба и его культивирование. При этом в качестве гриба...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002610707
Дата охранного документа: 14.02.2017
25.08.2017
№217.015.9f2c

Способ производства пшенично-ржаного солода

Изобретение относится к способу получения солода из пшеницы и ржи. Способ предусматривает составление солодовой смеси из зерна пшеницы и ржи в соотношении 1:1, промывку зерна пшеницы и ржи водопроводной водой в течение 4-8 минут, замачивание в анолите с рН 3,0-6,0 ед. и...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002606024
Дата охранного документа: 10.01.2017
25.08.2017
№217.015.9f47

Способ получения ячменно-пшеничного солода

Изобретение относится к способу получения солода из смеси зерна ячменя и пшеницы. Способ включает составление смеси из зерна ячменя и пшеницы в соотношении 1:1, промывку смеси водопроводной водой в течение 4-8 минут, замачивание смеси анолитом с рН 3,0-6,0 ед. и окислительно-восстановительным...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002606029
Дата охранного документа: 10.01.2017
25.08.2017
№217.015.9f97

Способ получения ячменного солода

Изобретение относится к способу получения солода из зерна ячменя. Способ предусматривает промывку зерна водопроводной водой в течение 4-8 минут, замачивание в анолите с рН 3,0-6,0 и окислительно-восстановительным потенциалом 970-1110 мВ, концентрацией кислорода 8,3-12,0 мг/л и хлора 0,006-0,01...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002606020
Дата охранного документа: 10.01.2017
25.08.2017
№217.015.a18a

Способ профилактики и лечения желудочно-кишечных заболеваний у телят

Заявленное изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для профилактики и лечения желудочно-кишечных заболеваний у телят. Способ включает использование смеси водно-спиртовой настойки из травы эхинацеи пурпурной и корневища девясила при приготовленной на основе 70% этилового...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002606849
Дата охранного документа: 10.01.2017
+ добавить свой РИД