×
02.10.2019
219.017.ccf1

Питательная среда для культивирования бруцеллезного микроба

Вид РИД

Изобретение

Юридическая информация Свернуть Развернуть
Краткое описание РИД Свернуть Развернуть
Аннотация: Изобретение относится к биотехнологии. Питательная среда для культивирования бруцеллезного микроба содержит пептон, натрия хлорид, мясную воду, стерильную сыворотку крупного рогатого скота, декстрозу, агар-агар и геотермальную воду при заданном соотношении компонентов. Изобретение позволяет сократить сроки культивирования бруцелл. 1 табл.
Реферат Свернуть Развернуть

Среда для культивирования бруцеллезного микроба

Изобретение относится к ветеринарии и медицине, в частности, выделению бруцеллезного микроба при бактериологической диагностике бруцеллеза.

К настоящему времени для культивирования бруцеллезного микроба предложены многочисленные варианты сред, обязательными компонентами для них являются углерод, минеральные соли, источники азота - аминокислоты, стимуляторы роста - витамины [3,6].

Для выделения и поддержания культур используют мясопептонный печеночный бульон, печеночно-глюкозо-глицериновый бульон, мясо-пептонный печеночно-глюкозо-глицериновый агар, печеночно-глюкозо-глицериновый агар, сывороточно-декстрозный агар, эритрит-агар, и др. [4.5].

Анализ данных испытания указанных сред не позволяет определить оптимальную среду, обеспечивающую количественный выход и качественный рост бактерий. Поэтому в лабораторной практике приходится дублировать посев на различных средах, что представляет определенные трудности. Недостатком их, является медленный рост и низкая продуктивность, что в конечном итоге удлиняет диагностические сроки. При этом результаты бактериологического исследования при бруцеллезе не всегда совпадают с серологическими (РА и РСК). Все это создают не только определенные трудности при культивировании бруцелл, но и заметно сказывается на качестве диагностики бруцеллеза.

Наиболее близким к заявляемой среде по результативности является сывороточно - декстрозный агар.

Состав:

Агар-агар - 20 г
Пептон - 10 г
Натрия хлорид - 5 г
Мясная вода -165 мл
Стерильная сыворотка КРС - 10%
Декстроза - 1%
Дистиллированная вода - 835 мл

рH 7,4

Для приготовления среды к 835 мл дистиллированной воды добавляют 20 г агар-агара, 10 г пептона, 5 г натрия хлорида, 165 мл мясной воды. Кипятят до расплавления агара. Фильтруют, устанавливают pH 7,4. Разливают в колбы и стерилизуют 15 минут при 115°С. Перед использованием в расплавленный и охлажденный до 45°С агар, вносят 10% стерильной сыворотки крови крупного рогатого скота и 1% декстрозы.

Основой данной среды является мясная вода, где под действием пептона белки разлагаются до усвояемых полипептидов и аминокислот - факторы роста культуры. Однако белки при экстракции водой растворяются не одинаково, и при этом азот переходит в мясную воду в недостаточном количестве для обеспечения вегетирующей культуры белком, в связи, с чем обнаружить рост бруцелл из патологического материала не удается раньше чем через 3-4 недели. Кроме того, быстрому росту препятствует и недостаточное количество в среде углеводородов. Указанные причины придают среде существенные недостатки.

Целью изобретения является повышение эффективности культивирования бруцелл в лабораторных условиях на среде с измененным химическим составом.

Поставленная цель достигается тем, что сывороточно-декстрозный агар для выделения и культивирования бруцелл состоящий из агар - агара, пептона, натрия хлорид, мясной воды и декстрозы, готовится на основе 100% замены дистиллированной воды геотермальной.

Для достижения поставленной цели к 835 мл геотермальной воды добавили поочередно, перемешивая 20 г агара, 10 г пептона, 5 г химически чистого хлорида натрия и 165 мл мясной воды. После, содержимое колбы объемом (с учетом разной плотности компонентов) примерно 1035 мл обработали текущим паром в течение 1 ч, установили рН 7,8. Затем среду автоклавировали в течение 30 мин при 127°С (0,2 М/Па) для осаждения фосфора, фильтровали через бумажный фильтр, регулировали рН до 7,4, разлили смесь в мерную посуду, стерилизовали при 116°С в течение 15 мин. После соответствующей обработки (текущим паром, автоклавированием и стерилизацией) объем среды умещается до 1000 мл. Перед употреблением среду расплавили, остудили до 50°С, добавили 100 мл (10%) нормальной лошадиной сыворотки (можно бычью) и раствор декстрозы в количестве - 10 мл (1%), после чего фильтровали через фильтр Зейтца. При этом объем готовой среды составляет 1110 мл.

Предлагаемая среда отличается тем, что геотермальная вода, заменяющая дистиллированную воду как растворитель, является еще и дополнительным источником минеральных солей.

Сопоставительный анализ с прототипом позволяет сделать вывод, что заявляемый состав среды отличается от известной заменой дистиллированной воды геотермальной, и расширением солевого состава за счет большего содержания микро и макроэлементов, а также углеводородов, способствующими ускоренному росту бруцелл и, соответственно, быстрому накоплению бактериальной массы, повышению информативности выделения при хороших ингибирующих постороннюю микрофлору свойствах. Таким образом, заявленное техническое решение соответствует критерию «новизна»

Сделанный расширенный лабораторный анализ геотермальной воды (фотометрия, потенциометрия, атомно-абсорбционная спектрометрия, комплексометрия и т.д.) показал качественное и количественное отличие данной воды от дистиллированной по микро- и макроэлементам [2].

Суммарное значение анионов в исследуемой воде составляло - 1,6771 г/л (NH4, Na, K, Mg, Са, Sr, Fe, Mn, Zn, Cu, Ni), катионов - 3,4732 г/л (Cl, Br, I, SO4, HCO3, HPO4, NO3). Кроме того, в геотермальной воде содержится нейтральные и кислые битумы (2,5 мг/л), гумусовые вещества (7,1 мг/л) состоящие из углеводородов, для улучшения ростовых свойств, предлагаемой среды [1].

Экспериментально были испытаны наиболее часто используемые среды для культивирования бруцелл: картофельный агар; мясопептонный печеночно-глюкозо-глицериновый агар; печеночно-глюкозо-глицериновый агар и сывороточно-декстрозный агар.

Оценку сред проводили посевом свежевыделенных культур из объектов внешней среды (почва, корма, навоз) и биоматериала (кровь крупного рогатого скота, лимфоузлы, паренхиматозные органы) Brucella abortus - 3 штамма, Brucella melitensis - 2 штамма. В качестве музейного штамма использовали Brucella abortus 19 ВА. 104М, Brucella melitensis 16М, 753. Исследуемую культуру высевали в 6 чашках Петри каждой среды.

Для соблюдения равнозначности опыта материал высевали равными дозами (300 клеток в 0,1 мл). Скорость роста, интенсивность и величину колоний учитывали через 7 суток, 21 день и 35 дней после посева. Опыты повторялись трехкратно (Табл. 1).

Результаты исследования показали низкие ростовые свойства картофельного агара, колонии в количестве до 2-х обнаружили как в пробах с тест-штаммами, так и с нативным материалом через 21 сутки. На 35-е сутки колонии в количестве 8 единиц обнаружили в пробах с тест - штаммами, с нативным материалом картина не изменилась.

Мясопептонный печеночно-глюкозо-глицериновый агар показал незначительные ростовые свойства, через 7 суток в пробах с тест-штаммами - 2 колонии. Через 21 сутки, картина аналогичная и в пробах с нативным материалом. На третьем этапе исследования (35 суток) появился умеренный рост в обоих случаях - 6-8 колоний соответственно.

Аналогичные результаты на всех этапах исследования и в пробах с печеночно-глюкозо-глицериновым агаром.

В сывороточно-декстрозном агаре по 8 колоний обнаружили в исследуемых пробах через 21 сутки, к третьему этапу исследования значительных изменений в росте не выявили.

Заметные ростовые свойства показала предлагаемая среда. На 7 сутки культивирования 6 колонии с тест-штаммами, и 16 колонии на 21 сутки. К третьему этапу исследования количество колоний не изменилось. В пробах с нативным материалом картина резко не отличалась, несмотря на скудный рост на первом этапе исследования. Рост отличался не только числом, но и характером и размером колонии. Колонии S-формы, мелкие, выпуклые, гладкие, в основном с перламутровым оттенком.

Выводы. Таким образом, исследования показали, что предлагаемая среда для выделения бруцелл, обладает лучшими ростовыми свойствами и характеризуется ускоренным ростом эпизоотических и тестовых штаммов, что значительно сокращает сроки культивирования.

Литература.

1. Баратов М.О., Ахмедов М.М. Питательная среда для культивирования коринебактерий. Патент №2588670 Государственный реестр изобретений Российской Федерации, 07 июня 2016 г.

2. Баратов М.О., Сакидибиров О.П. Совершенствование питательной среды для культивирования коринебактерий. Ветеринария. - №11. - 2017. Москва - С. 62-65/

3. Костенко Т.С., Скаршевская Е.И., Гительсон С.С.Практикум по ветеринарной микробиологии и иммунологии. Москва: ВО «Агропромиздат» - 1989. - С. 187-189.

4. Асонов Н. Р. Микробиология. Москва: «Колос». «Колос-Пресс» 2002. С. 230/

5. Кисленко В.Н.Ветеринарная микробиология и иммунология. Практикум. Санкт-Петербург: Москва-Краснодар. - 2012. - С. 264-266/

6. Кисленко В.Н. Практикум по ветеринарной микробиологии и иммунологии. Москва: «Колос» - 2005. - С. 157-158.

Источник поступления информации: Роспатент

Showing 1-10 of 14 items.
09.09.2018
№218.016.8564

Аппарат для нагрева плодов и овощей в банках

Изобретение относится к консервной промышленности, а именно к аппаратам для предварительного нагрева плодов и овощей в банках перед консервированием. Аппарат состоит из подводящего и отводящего транспортеров, приемного столика для тары, над которым расположен объемный дозатор. Для обеспечения...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002666371
Дата охранного документа: 07.09.2018
27.01.2020
№220.017.fa53

Дезинфицирующее средство

Изобретение относится к ветеринарной санитарии и может быть использовано в промышленном и индивидуальном животноводстве, птицеводстве, звероводстве, предприятиях пищевой и перерабатывающей промышленности и транспорте для побелки профилактической и текущей влажной дезинфекции методом орошения...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002712076
Дата охранного документа: 24.01.2020
17.02.2020
№220.018.0337

Способ изготовления бруцеллезного эритроцитарного антигена для реакции непрямой гемагглютинации (рнга)

Изобретение относится к области ветеринарии, в частности к получению эритроцитарного антигена для серологической диагностики бруцеллеза животных в реакции непрямой гемагглютинации (РНГА). Способ изготовления бруцеллезного эритроцитарного антигена для реакции непрямой гемагглютинации (РНГА)...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002714305
Дата охранного документа: 14.02.2020
17.02.2020
№220.018.0338

Способ групповой профилактики и лечения ассоциированных трематодозов крупного рогатого скота

Изобретение относится к ветеринарной медицине, в частности к области ветеринарной паразитологии. Предлагается способ лечения и профилактики ассоциированных трематодозов крупного рогатого скота, где животным задают групповым методом однократно микронизированный порошок бентонита размером частиц...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002714321
Дата охранного документа: 14.02.2020
23.02.2020
№220.018.060f

Аппарат для обработки растительного сырья в электромагнитном поле сверхвысокой частоты

Аппарат включает СВЧ-камеру с транспортирующим устройством и стекатель. Транспортирующее устройство выполнено в виде роликового конвейера. Перед входом в СВЧ-камеру установлен шибер, выполненный с возможностью перемещения в вертикальной плоскости. Стекатель для сока-самотека установлен между...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002714715
Дата охранного документа: 19.02.2020
19.03.2020
№220.018.0d71

Средство для экспресс-диагностики субклинического мастита у овцематок

Изобретение относится к ветеринарии, в частности к средству для экспресс-диагностики субклинического мастита у овец и коз, характеризуется тем, что оно представляет собой реактив, полученный путем смешивания 0,02 мг крезолового красного со 100 мл 4%-ного водного сульфанола. Использование...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002716994
Дата охранного документа: 17.03.2020
25.04.2020
№220.018.195e

Способ укладки внутрипочвенных увлажнителей

Изобретение относится к области сельского хозяйства. Способ состоит в укладке внутрипочвенных увлажнителей. Укладку увлажнителей производят одним проходом агрегата непосредственно при вспашке плантажным плугом. Углубление в плужной подошве, образуемое долотом, увеличивают на величину,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002719785
Дата охранного документа: 23.04.2020
05.06.2020
№220.018.247e

Способ производства компота грушевого с ксилитом

Изобретение относится к пищевой промышленности. Способ производства компота грушевого с ксилитом характеризуется тем, что в банки с расфасованными плодами заливают половину ксилитного сиропа, от предусмотренной технологической инструкцией при температуре 80°С с последующей доливкой остальной...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002722722
Дата охранного документа: 03.06.2020
25.06.2020
№220.018.2ac7

Способ производства компота грушевого с ксилитом

Изобретение относится пищевой промышленности, а именно к консервированным компотам для функционального питания. Способ производства компота из груш с ксилитом предусматривает расфасовку в банки подготовленных плодов, далее в банки заливают половину ксилитного сиропа от предусмотренной...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002724535
Дата охранного документа: 23.06.2020
04.07.2020
№220.018.2e65

Способ производства компота из груш

Изобретение относится к пищевой промышленности. Способ производства компота из груш характеризуется тем, что в банки с расфасованными плодами заливают половину сиропа, от предусмотренной технологической инструкцией, при температуре 80°С с последующей доливкой остальной части сиропа с...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002725481
Дата охранного документа: 02.07.2020
Showing 1-10 of 10 items.
27.09.2013
№216.012.6e3c

Способ получения эритроцитарного антительного диагностикума для реакции непрямой гемагглютинации (рнга) с целью индикации бруцелл в патматериале

Изобретение относится к области ветеринарии, а именно к получению эритроцитарного антительного диагностикума для индикации бруцелл в патматериале. Сущность изобретения включает способ получения эритроцитарного антительного диагностикума для реакции непрямой гемагглютинации (РНГА) с целью...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002493871
Дата охранного документа: 27.09.2013
20.12.2015
№216.013.9bff

Экспресс-метод диагностики бруцеллеза овец и коз в реакции непрямой гемагглютинации (рнга) для исследования молока

Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для диагностики бруцеллеза овец и коз. Изобретение заключается в применении молока в реакции непрямой агглютинации для диагностики бруцеллеза овец и коз. Заявленное изобретение позволяет выявлять бруцеллезные гемагглютинины в молоке...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002571560
Дата охранного документа: 20.12.2015
20.04.2016
№216.015.32fc

Способ пролонгированной химиопрофилактики пироплазмидозов овец и коз

Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для профилактики пироплазмидозов овец и коз. Животным вводят водный раствор ДАЦа с глицерином при следующем соотношении компонентов в 100 мл раствора, г: ДАЦ - 5 г, глицерин - 15 мл и вода дистиллированная - 80 мл. Способ эффективно...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002582288
Дата охранного документа: 20.04.2016
12.01.2017
№217.015.6157

Питательная среда для культивирования коринебактерий

Изобретение относится к биотехнологии. Питательная среда для культивирования коринебактерий содержит панкреатический гидролизат кильки, натрия хлорид, D-глюкозу, водный голубой, натрий углекислый, агар микробиологический, геотермальную воду и стерильную дефибринированную кровь человека или...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002588670
Дата охранного документа: 10.07.2016
13.01.2017
№217.015.6620

Способ диагностики коринебактериоза и ассоциативных с коринебактериями инфекций у животных

Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для диагностики коринебактериоза и ассоциативных с коринебактериями инфекций. Способ включает внутрикожное введение коринебактериозного аллергена, который вводят внутрикожно в дозе 0,2 мл. Учет и оценку реакции проводят через 72 часа....
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002592372
Дата охранного документа: 20.07.2016
13.01.2017
№217.015.8770

Комплексный метод лечения тейлериоза мелкого рогатого скота

Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для лечения тейлериоза овец и коз. Животным с лечебной целью вводят водный раствор ДАЦ в сочетании с противомалярийным препаратом делагил при следующем соотношении компонентов, мг/кг: ДАЦ в дозе 2,5 мг/кг в 5%-водном растворе, один раз...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002603622
Дата охранного документа: 27.11.2016
13.02.2018
№218.016.24e4

Способ изготовления вакцины против бруцеллеза мелкого рогатого скота

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для изготовления вакцины против бруцеллеза мелкого рогатого скота из штамма Brucella melitensis Rev-1. Способ изготовления вакцины против бруцеллеза мелкого рогатого скота предусматривает посев и выращивание штамма Brucella...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002642316
Дата охранного документа: 24.01.2018
13.02.2018
№218.016.272b

Универсальная питательная среда для изолирования микобактериоподобных микроорганизмов

Изобретение относится к биотехнологии. Универсальная питательная среда для культивирования коринебакетрий, нокардий и родококков содержит панкреатический гидролизат кильки, Д- глюкозу, KHPO, MgSO, водный голубой, натрий углекислый, агар микробиологический, геотермальная вода, стерильная...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002644347
Дата охранного документа: 08.02.2018
16.09.2018
№218.016.885f

Способ получения бруцеллезного эритроцитарного диагностикума для реакции непрямой гемагглютинации (рнга)

Изобретение относится к области ветеринарии, в частности к получению бруцеллезного эритроцитарного диагностикума для реакции непрямой гемагглютинации (РНГА). Способ включает изготовление формалинизированных эритроцитов барана с их последующей сенсибилизацией бруцеллезным антигеном....
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002667121
Дата охранного документа: 14.09.2018
14.11.2018
№218.016.9cca

Среда для выделения и культивирования микобактерий

Изобретение относится к биотехнологии. Питательная среда для выделения и культивирования микобактерий содержит железа аммонийного цитрат, L-аспарагин, лимонную кислоту, магния сульфат, калия гидрофосфат, натрия хлорид, твин-80, агар-агар и геотермальную воду при заданном соотношении...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002672325
Дата охранного документа: 13.11.2018
+ добавить свой РИД