×
03.08.2019
219.017.bca1

Способ выявления РНК вируса болезни Шмалленберга у сельскохозяйственных животных

Вид РИД

Изобретение

Юридическая информация Свернуть Развернуть
Краткое описание РИД Свернуть Развернуть
Аннотация: Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой способ выделения РНК из биологического материала по выбору: цельная кровь, сыворотка крови, фрагменты тканей и органов сорбционным методом, синтез кДНК на матрице РНК путем постановки одноэтапной с добавлением внутреннего и положительного контрольных образцов мультиплексной реакции обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции - с проведением 45 циклов амплификации с детекцией в реальном времени с использованием специфичных для участка генома возбудителя вируса Шмалленберга олигонуклеотидных праймеров флуоресцентно-меченого зонда и контрольных образцов, измерение накопления флуоресцентного сигнала по каналам соответствующих флуоресцентных красителей и интерпретацию результатов на основании наличия/отсутствия пересечения кривой флуоресценции с пороговой линией Threshold, согласно изобретению для внутреннего контрольного образца используют суспензию бактериофага MS2 с концентрацией 5×10 копий нуклеотидных последовательностей на 1 мкл, а для положительного контрольного образца используют смесь рекомбинантных плазмидных ДНК, содержащих фрагмент генома возбудителя вируса Шмалленберга и фрагмент генома бактериофага MS2, взятых в соотношении 1:1, со следующими нуклеотидными последовательностями: при этом накопление флуоресцентного сигнала измеряют по каналам: JOE/Yellow для специфического сигнала возбудителя вируса Шмалленберга; Cy5/Red для сигнала внутреннего контроля, если кривые накопления флуоресцентного сигнала выходят до 35 цикла, то результат реакции считают положительным, а если кривые не пересекают пороговую линию или пересекают ее после 35 цикла, то результат реакции - отрицательный. Изобретение позволяет повысить точность диагностики в способе выявления РНК вируса болезни Шмалленберга у сельскохозяйственных животных. 4 табл., 3 ил.
Реферат Свернуть Развернуть

Изобретение откосится к ветеринарной вирусологии, а именно к средствам диагностики вирусных и инфекционных заболеваний у животных, в частности к методам выявления РНК вируса болезни Шмалленберга у животных.

Известен способ выявления инфекций методом мультиплексной ПЦР с детекцией в режиме реального времени (патент РФ №2460803, C12Q 1/68, 2014 г), включающий выделение РНК из биологического материала инфицированных особей сорбционным методом, синтез кДНК на матрице РНК путем постановки одноэтапной с добавлением внутреннего и положительного контролей образцов мультиплексной реакции обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции с проведением 45 циклов амплификации с детекцией в реальном времени с использованием специфичных для участка генома вирусного возбудителя олигонуклеотидных праймеров, флуоресцентно-меченого зонда и контрольных образцов, измерение накопления флуоресцентного сигнала по каналам соответствующих флуоресцентных красителей и интерпретацию результатов на основании наличия или отсутствия пересечения кривой флуоресценции с пороговой линией - Threshold.

Наиболее близким потехнической сущности является способ выявления РНК вируса болезни Шмалленберга у животных, включающий выделение РНК из биологического материала по выбору: цельная кровь, сыворотка крови, фрагменты тканей и органов сорбционным методом, синтез кДНК на матрице РНК путем постановки одноэтапной с добавлением внутреннего и положительного контрольных образцов мультиплексной реакции обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции - с проведением 45 циклов амплификации с детекцией в реальном времени с использованием специфичных для участка генома возбудителя вируса Шмалленберга олигонуклеотидных праймеров флуоресцентно-меченого зонда и контрольных образцов, измерение накопления флуоресцентного сигнала по каналам соответствующих флуоресцентных красителей и интерпретацию результатов на основании наличия/отсутствия пересечения кривой флуоресценции с пороговой линией Threshold (патент РФ №2515916, C12Q 1/68, 2014 г. - прототип

Недостатком прототипа является недостаточная специфичность и чувствительность, олигонуклеотидных праймеров, флуоресцентно-меченого зонда и контрольных образцов, что влияет на точность диагностики.

Техническим результатом является повышение точности диагностики.

Технический результат достигается тем, что в способе выявления РНК вируса болезни Шмалленберга у сельскохозяйственных животных, включающем выделение РНК из биологического материала по выбору: цельная кровь, сыворотка крови, фрагменты тканей и органов сорбционным методом, синтез кДНК на матрице РНК путем постановки одноэтапной с добавлением внутреннего и положительного контрольных образцов мультиплексной реакции обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции - с проведением 45 циклов амплификации с детекцией в реальном времени с использованием специфичных для участка генома возбудителя вируса Шмалленберга олигонуклеотидных праймеров флуоресцентно-меченого зонда и контрольных образцов, измерение накопления флуоресцентного сигнала по каналам соответствующих флуоресцентных красителей и интерпретацию результатов на основании наличия/отсутствия пересечения кривой флуоресценции с пороговой линией Threshold, согласно изобретению для внутреннего контрольного образца используют суспензию бактериофага MS2 с концентрацией 5×103 копий нуклеотидных последовательностей на 1 мкл, а для положительного контрольного образца используют смесь рекомбинантных плазмидных ДНК, содержащих фрагмент генома возбудителя вируса Шмалленберга и фрагмент генома бактериофага MS2 взятых в соотношении 1:1 со следующими нуклеотидными последовательностями:

при этом накопление флуоресцентного сигнала измеряют по каналам:

JOE/ Yellow для специфического сигнала возбудителя вируса Шмалленберга;

Cy5/Red для сигнала внутреннего контроля, если кривые накопления флуоресцентного сигнала выходят до 35 цикла, то результат реакции считают положительным, а если кривые не пересекают пороговую линию или пересекают ее после 35 цикла, то результат реакции - отрицательный.

Новизна заявляемого технического решения заключается в том, что для получения достоверной диагностики вируса болезни Шмалленберга используют две последовательные реакции: обратной транскрипции вирусной РНК для получения кДНК и полимеразной цепной реакции для амплификации фрагмента полученной кДНК матрицы. Обе реакции проводятся последовательно в одной ПЦР-пробирке (one-tube) с использованием специфичных для участка генома артериита олигонуклеотидных праймеров, флуоресцентно-меченого зонда и разных видов контроля для которых используют различные формы материала бактериофага MS2: суспензия и фрагмент генома со специфическими к нему праймерами и зондом. Такая постановка ОТ-ПЦР в реальном времени сокращает и упрощает процедуру анализа, снижает риск контаминации и возможность ошибки при переносе кДНК в другую пробирку для ПЦР. Кроме того, детекция продуктов амплификации осуществляется с использованием принципа выщепления флуоресцентной метки на 5' конце олигонуклеотидного зонда.

Признаки, отличающие заявляемое техническое решение от прототипа, направлены на достижение технического результата и не выявлены при изучении данной и смежной областей науки и техники и, следовательно, соответствуют критерию «изобретательский уровень».

Заявляемый способ рекомендовано использовать в ветеринарной вирусологии, а именно к средствам диагностики возбудителя вируса болезни Шмалленберга, что соответствует критерию «промышленная применимость».

Сущность изобретения поясняется чертежом, где представлены скриншоты графиков и таблицы, на рис. 1 - представлен канал Cy5/Red - для тестирования сигнала внутреннего контрольного образца (ВКО), на рис. 2 представлен канал JOE/Yellow для специфического сигнала возбудителя вируса Шмалленберга; на рис. 3 - таблица количественных данных для Cycling A. A.Yellow (вирус Шмалленберга) и A.Red (ВКО).

Способ выявления РНК вируса болезни Шмалленберга у сельскохозяйственных животных осуществляется следующим образом.

Для исследования с целью выделения РНК используют биологический материал животных по выбору: цельная кровь, сыворотка крови, фрагменты тканей и органов взятые от животных инфицированных возбудителем вируса болезни Шмалленберга. Для внутреннего контрольного образца используют суспензию бактериофага MS2 с концентрацией 5×103 копий нуклеотидных последовательностей на 1 мкл, а для положительного контрольного образца используют смесь рекомбинантных плазмидных ДНК, содержащих фрагмент генома возбудителя вируса болезни Шмалленберга и фрагмент генома бактериофага MS2 взятых в соотношении 1:1, со следующими нуклеотидными последовательностями:

Затем измеряют накопление флуоресцентного сигнала измеряют по каналам: JOE/ Yellow для специфического сигнала возбудителя вируса Шмалленберга; Cy5/Red для сигнала внутреннего контроля, если кривые накопления флуоресцентного сигнала выходят до 35 цикла, то результат реакции считают положительным, а если кривые не пересекают пороговую линию или пересекают ее после 35 цикла, то результат реакции - отрицательный.

Вирус болезни Шмалленберг является представителем семейства буньявирусы (Bunyaviridae), рода ортобуньявирусы (Orthobunyavirus), серогруппы Симбу (Simbu serogroup). Вирус состоит из трех сегментов, называемых S (короткая), М (средняя) и L (длинная) и передается через кровососущих насекомых. Праймеры комплементарны консервативной области гена нуклеокапсидного белка N вируса болезни Шмалленберг (Schmallenberg virus N, NSs genes for nucleocapsid protein, non-structural protein, complete cds, strain: 167/Wiltshire/2012, код доступа LC309157.1, участок между 360 и 446) и не комплементарны каким-либо участкам геномов других вирусов. Праймеры были спроектированы с использованием Primer Express Software v3.0 (Applied Biosystems) и исследованы с использованием BLAST, чтобы подтвердить их специфичность. Для детекции продуктов амплификации был подобран олигонуклеотидный флуоресцентно-меченый зонд Shm-Z (комплементарный участку нуклеотидной последовательности, ограниченной позициями отжига праймеров Shm-F и Shm-R). Зонд был помечен красителем HEX. Для гашения самопроизвольной флуоресценции на 3'-конце олигонуклеотидного зонда прикреплен гаситель BHQ-1 Используя программу "Oligo 6.0" описаны основные свойства рассчитанных олигонуклеотидов, определившие возможность их использования в ПЦР.

С помощью программы «O1igo 6.0» проанализирована нуклеотидная последовательность бактериофага MS2 (Enterobacteria phage MS2 isolate ST4, complete genome. ACCESSION EF204940). Бактериофаг MS2 содержит однонитевую позитивно ориентрованную РНК размером 3569 оснований. В результате анализа внутри гена белка `созревания` (maturation protein) выбран участок между 200 и 350 нуклеотидами, содержащий уникальные нуклеотидные последовательности, рассчитаны первичные структуры олигонуклеотидных праймеров, фланкирующих выбранный участок генома. Для детекции продуктов амплификации подобран олигонуклеотидный флуоресцентно-меченый зонд MS2P, комплементарный участку нуклеотидной последовательности, ограниченной позициями отжига праймеров MS2F и MS2R. Используя программу «Oligo 6.0» описаны основные свойства рассчитанных олигонуклеотидов, определившие возможность их использования в ПЦР.

Пример конкретного осуществления способа выявления РНК вируса болезни Шмалленберга у сельскохозяйственных животных.

Для исследования используют следующий материал:

- Цельную кровь забирают в пробирку с ЭДТА, желательно использовать одноразовые системы взятия крови. Закрытую пробирку с кровью несколько раз переворачивают.

- Сыворотку крови для ее получения берут 5 мл крови в пробирку без антикоагулянта. Желательно использовать одноразовые системы взятия крови.

- Фрагменты тканей и органов павших животных (головной мозг, спинной мозг, плацента, пуповина), отбирают в стерильный контейнер.

- Околоплодную жидкость новорожденных животных с пороками развития и мертворожденных плодов, берут в объеме не менее 1 мл в стерильные пробирки.

- Кровососущие насекомые, переносчики вируса (комары, мокрецы), отбирают не менее 20 особей в контейнер.

Исследуемые образцы подготавливают следующим образом.

Пробы цельной крови с ЭДТА, сыворотки крови, околоплодной жидкости используют без предварительной подготовки. Для экстракции РНК используют 50 мкл цельной крови, околоплодной жидкости или 100 мкл сыворотки.

Из тканей и органов вырезают небольшие кусочки до 1 г весом. Растирают в отдельных фарфоровых ступках, добавляют по 5-10 мл стерильного физиологического раствора и тщательно перемешивают. Смесь отстаивают при комнатной температуре в течение 3 мин, после чего переносят 50 мкл верхней фазы в пробирки типа «Эппендорф» и используют для экстракции РНК.

Пробу комаров (используют 20-40 особей) растирают в 1 мл стерильного физиологического раствора с использованием стерильных фарфоровых ступок и пестиков Полученные суспензии центрифугируют при 12 тыс об/мин в течение 1 мин. Для экстракции РНК используют 100 мкл надосадочной жидкости.

Далее проводят анализ с помощью набора реагентов «ПЦР-ШМАЛЛЕНБЕРГ-ФАКТОР»

Набор состоит из комплектов 1 и 2 реагентов для проведения обратной транскрипции и мультиплексной ПЦР РВ и контрольных образцов.

Наборы используют в соответствии с инструкцией по применению набора реагентов «ПЦР-ШМАЛЛЕНБЕРГ-ФАКТОР» для выявления РНК вируса Шмалленберга в биологическом материале методом обратной транскрипции и полимеразной цепной реакцией (ПЦР) с флуоресцентной детекцией в режиме реального времени (ОТ ПЦР РВ) ТУ 21.10.60-122-51062356-2016 (для диагностики in vitro) http://www.vetfaktor.ru/.

Состав набора приведен в таблицах 1 и 2.

* Возможна легкая опалесценция

Анализ состоит из трех этапов:

- экстракция (нуклеиновых кислот) НК;

- проведение ОТ-ПЦР РВ;

- учет результатов анализа.

Реакция ОТ-ПЦР РВ проводится в одной пробирке.

Экстракция (выделение) НК из клинического материала

Отбирают необходимое количество одноразовых пробирок объемом 1,5 мл, включая отрицательный контроль выделения. Вносят во все пробирки, включая пробирку для отрицательного контрольного образца (ОКО), внутренний контрольный образец (ВКО SHMAL) по 10 мкл.

Внести исследуемые пробы в объеме согласно инструкции к набору для выделения НК, в пробирку отрицательного контроля выделения вместо исследуемой пробы внести ОКО (пробирку обозначают как ВК-).

Выделять НК из анализируемых и контрольных образцов согласно протоколу инструкции производителя набора для выделения НК.

Выделенную РНК можно хранил, до 3 часов при температуре от 2°C до 8°C или в течение месяца при температуре не выше минус 68°C.

Подготовка образцов к проведению ОТ-ПЦР РВ

Общий объем реакционной смеси - 25 мкл, объем РНК-пробы - 10 мкл.

Успешное прохождение реакции контролируют использованием положительного контрольного образца (ПКО SCHMAL), ВКО SCHMAL и РНК буфера.

В отдельной пробирке смешивают компоненты набора из расчета на каждую реакцию:

5 мкл ПЦР СМЕСЬ SCHMAL

10 мкл ПЦР БУФЕР SCHMAL

0,75 мкл RT PCR ENZ

Перемешивают смесь на вортексе и сбрасывают капли кратковременным центрифугированием. Отбирают необходимое количество пробирок для амплификации НК исследуемых и контрольных проб. Затем вносят по 15 мкл приготовленной реакционной смеси, используя наконечники с фильтром в подготовленные пробирки:

а) в пробирку отрицательного контроля ПЦР (К-) 10 мкл РНК буфера;

б) в ряд пробирок для исследуемых проб - в каждую внести по 10 мкл НК соответствующей пробы, (включая пробу ВК-);

в) в пробирку с положительным контролем ПЦР (К+) 10 мкл ПКО SCHMAL.

Проведение ОТ-ПЦР РВ с флуоресцентной детекцией

Параметры температурно-временного режима амплификации на приборе «Rotor-Gene Q», представлены в таблице 3.

Поместить подготовленные для проведения ПЦР пробирки в ячейки амплификатора. Запрограммировать прибор согласно инструкции производителя.

После завершения программы амплификации отработанные пробирки утилизируют в соответствии с МУ 1.3. 2569 -09.

Учет результатов анализа

Полученные данные - кривые накопления флуоресцентного сигнала анализируются с помощью программного обеспечения используемого прибора для проведения ПЦР в соответствии с инструкцией производителя к прибору и в соответствии с Приложениями 2, 3, 4 и 5 Инструкции.

Учет результатов ОТ-ПЦР РВ проводится по наличию или отсутствию пересечения кривой флуоресценции с установленной на соответствующем уровне пороговой линией (что соответствует наличию или отсутствию значения порогового цикла «Ct» для исследуемого образца).

Результат считается достоверным в случае корректного прохождения положительных и отрицательных контролей амплификации и экстракции НК в соответствии с таблицей 4 и рис. 1, 2, 3.

Появление любого значения Ct (см. таблице 4, рис. 1,2) результатов для отрицательного контроля этапа экстракции ВК- на канале JOE (HEX)/Yellow и для отрицательного контроля этапа ОТ-ПЦР К- на любом из каналов свидетельствует о наличии контаминации реактивов или образцов. В этом случае результаты анализа по всем пробам считаются недействительными. Требуется повторить анализ всех проб, а также предпринять меры по выявлению и ликвидации источника контаминации.

Образцы, для которых по каналу Cy5/Red значение Ct отсутствует или превышает 35 цикл (при этом по каналу JOE (HEX)/Yellow значение Ct также отсутствует) требуют повторного проведения исследования с этапа ПЦР (таблица 4. Задержка в значениях пороговых циклов для исследуемых образцов на канале Cy5/Red указывает на присутствие ингибиторов в пробах или на ошибки при постановке реакции ОТ-ПЦР РВ. Требуется провести исследование, начиная с этапа экстракции НК.

Образец считается положительным (РНК вируса Шмалленберга обнаружена) если наблюдается экспоненциальный рост сигнала на канале JOE(HEX)/Yellow, при этом значения Ct контрольных образцов находятся в пределах нормы (табл. 4, рис. 2, 3). Если для исследуемого образца по каналу JOE(HEX)/ Yellow значение Ct определяется позднее 37 цикла при корректном прохождении положительных и отрицательных контролей - он считается спорным и исследуется повторно с этапа выделения НК. Если при повторной постановке наблюдается схожий результат (Ct на канале JOE(HEX)/Yellow > 37), требуется повторное взятие материала от того же животного для проведения ПЦР-исследования и (или) использование альтернативных методов диагностики.

Для оценки специфичности предлагаемых внутреннего и положительного контрольных образцов для метода обратной транскрипции и полимеразной цепной реакцией (ПЦР) с флуоресцентной детекцией в режиме реального времени (ОТ ПЦР РВ)ОТ-ПЦР РВ» для выявления РНК вируса Шмалленберга в биологическом материале исследовали препараты РНК, выделенной из образцов, содержащих гетерологичные вирусы и кровь от интактных животных.

Показано отсутствие неспецифических реакций компонентов набора в отношении НК следующих вирусов и микроорганизмов: Bovine coronavirus, Bovine leukemia virus, Bovine respiratory syncytial virus, Bovine viral diarrhoea virus, Rotavirus, Brucella abortus, Pasteurella multocida, Leptospira interrogans, Listeria monocytogenes, Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium paratuberculosis, Escherichia coli, Campylobacter fetus, Clostridium perfringens, Salmonella dublin, Staphylococcus aureus, Yersinia enterocolitica, Yersinia pseudotuberculosis. Также показано отсутствие неспецифических реакций компонентов набора в отношении образцов ДНК КРС, овец, свиньи, курицы, человека, а также комаров рода Culex.

Для оценки чувствительности ОТ-ПЦР РВ проводили постановку реакции с использованием в качестве матрицы титрованного препарата транкрипта, полученного на рекомбинантной плазмиде, содержащей ограниченный праймерами ShmF и ShmR фрагмент генома вируса болезни Шмалленберг. Чувствительность системы составила 105 г-экв/мл.


Способ выявления РНК вируса болезни Шмалленберга у сельскохозяйственных животных
Способ выявления РНК вируса болезни Шмалленберга у сельскохозяйственных животных
Способ выявления РНК вируса болезни Шмалленберга у сельскохозяйственных животных
Способ выявления РНК вируса болезни Шмалленберга у сельскохозяйственных животных
Источник поступления информации: Роспатент

Showing 21-30 of 465 items.
20.01.2018
№218.016.11d8

Способ предпосевной обработки семян озимой пшеницы

Изобретение относится к области сельского хозяйства. Предложен способ предпосевной обработки семян озимой пшеницы, включающий покрытие семян гидрофобным пленкообразователем. В качестве гидрофобного пленкообразователя используют сплав парафина с подсолнечным воском при следующем соотношении...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002634278
Дата охранного документа: 24.10.2017
20.01.2018
№218.016.122e

Способ активации стартовых культур для приготовления сырокопченых колбас

Изобретение относится к мясной промышленности, а именно к активации стартовых культур при помощи электромагнитного поля низких частот. Стартовые культуры Альми 2 в количестве от 5 до 9,5 г растворяют в воде с температурой от 15 до 24°C в количестве 50 см и добавляют 10 г декстрозы. Тщательно...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002634273
Дата охранного документа: 24.10.2017
20.01.2018
№218.016.1242

Способ контроля развития эмбриона сельскохозяйственной птицы

Изобретение относится к птицеводству, а именно к инкубации яиц сельскохозяйственной птицы. Включает отбор яиц, закладку в инкубатор и инкубацию при регулировании температуры. Для регулирования температуры используют частоту сердечных сокращений эмбриона, которую измеряют, начиная с 6-го дня...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002634274
Дата охранного документа: 24.10.2017
20.01.2018
№218.016.124e

Способ борьбы с сорной растительностью

Изобретение относится к области сельского хозяйства. При осуществлении способа борьбы с сорной растительностью обрабатывают воду в проточном активаторе. Полученный анолит перемешивают с гербицидом. Осуществляют опрыскивание почвы полученным гербицидным раствором. Опрыскивание проводят в...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002634277
Дата охранного документа: 24.10.2017
20.01.2018
№218.016.1273

Способ стимулирования укоренения черенков винограда

Изобретение относится к области сельского хозяйства, а именно к виноградарству. Способ включает нарезку черенков с глазками и их последующее замачивание в водной среде. При этом двуглазковые черенки винограда толщиной 7-9 мм и длиной около 40 см в горизонтальном положении замачивают в емкости с...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002634280
Дата охранного документа: 24.10.2017
20.01.2018
№218.016.12ea

Способ получения производных 2-арил(гетарил)-7-метил-1,2,3,4-тетрагидропиридо[3',2':4,5]тиено[3,2-d]пиримидин-4-она

Изобретение относится к синтезу замещенных 1,2,3,4-тетрагидропиридо[3',2':4,5]тиено[3,2-d]пиримидин-4-онов общей формулы 1, включающему взаимодействие между 3-амино-6-метилтиено[2,3-b]пиридин-2-карбоксамидами 2а,б и ароматическими альдегидами 3а,в или...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002634351
Дата охранного документа: 26.10.2017
20.01.2018
№218.016.16d9

Устройство для защиты от образования отложений на поверхностях трубопроводов систем теплоснабжения

Изобретение относится к области защиты металлов от коррозии и образования отложений на поверхностях трубопроводов систем теплоснабжения и водоснабжения. Устройство включает циркуляционный насос, сообщенный через соединительный трубопровод с котлом, трубопровод подачи воды, обратный трубопровод...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002635591
Дата охранного документа: 14.11.2017
20.01.2018
№218.016.16e6

Аппарат для инструментального осеменения пчелиных маток

Изобретение относится к пчеловодству и предназначено для осуществления высокоэффективного инструментального осеменения пчелиных маток. Аппарат для инструментального осеменения пчелиных маток состоит из платформы 1 с закрепленной на ней подставкой 2 с возможностью перемещения вдоль продольной...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002635691
Дата охранного документа: 15.11.2017
20.01.2018
№218.016.170b

Способ производства рубленых мясорастительных полуфабрикатов функционального назначения

Изобретение относится к пищевой промышленности и может быть использовано при производстве рубленых мясорастительных полуфабрикатов для диетического питания. На волчке измельчают мясо кролика, затем к нему добавляют более жирное куриное мясо и продолжают измельчать до получения однородной массы....
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002635677
Дата охранного документа: 15.11.2017
20.01.2018
№218.016.175f

Сеялка рядкового высева семян

Сеялка рядкового высева семян состоит из станины и бака с мешалкой, имеющей привод. Мешалка имеет кольцо со штоком, на котором расположены горизонтальные лопасти и лопасти-спирали. Последние выполнены в виде ленточной винтовой поверхности и установлены против друг друга. Горизонтальные...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002635693
Дата охранного документа: 15.11.2017
Showing 21-30 of 324 items.
10.07.2015
№216.013.5d05

Способ профилактики микотоксикозов при выращивании бройлеров

Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к птицеводству, и может быть использовано при выращивании бройлеров как на птицефабриках, так и в личных или фермерских хозяйствах. Изобретение представляет собой способ профилактики микотоксикозов при выращивании бройлеров,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002555354
Дата охранного документа: 10.07.2015
27.07.2015
№216.013.684b

Способ обнаружения провируса лейкоза крупного рогатого скота

Представленное изобретение относится к области биотехнологии и касается способа обнаружения провируса лейкоза крупного рогатого скота. Охарактеризованный способ включает выявление фрагмента LTR (Long Terminal Repeat) - последовательности провируса лейкоза. Определение размера амплифицированного...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002558252
Дата охранного документа: 27.07.2015
10.09.2015
№216.013.7a7a

Способ выращивания телят

Изобретение относится к ветеринарной медицине. Для выращивания телят вводят в рацион стимулирующую минеральную кормовую добавку, в качестве которой используют препарат мицеллат углекислого кальция «Алексанат Зоо». Раствор препарата выпаивают ежедневно в течение 60 дней в дозе 10 мл на голову....
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002562943
Дата охранного документа: 10.09.2015
20.09.2015
№216.013.7cc9

Антирабическая вакцина для пероральной иммунизации диких и бродячих плотоядных животных и способ получения ее

Изобретения касаются антирабической вакцины для пероральной иммунизации против бешенства диких плотоядных животных и способа ее получения. Предложенная вакцина включает иммунизирующий антиген бешенства с инфекционной активностью 6,0-8,5 lg МЛД/мл, цеолит природный или синтетический и...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002563542
Дата охранного документа: 20.09.2015
20.09.2015
№216.013.7d3c

Способ кормления первотелок при раздое

Изобретение относится к сельскохозяйственному производству, а именно к способу кормления первотелок при раздое. Способ включает ежедневное введение в течение 1 месяца в рацион комбикорма, содержащего сухой ихтиогомогенизат в количестве 5% по массе комбикорма, приготовленный из представителей...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002563657
Дата охранного документа: 20.09.2015
20.10.2015
№216.013.86a4

Способ подготовки биоматериала для пцр диагностики вируса лейкоза крупного рогатого скота (вл крс)

Изобретение относится к области ветеринарии. Предложен способ подготовки биоматериала для ПЦР диагностики вируса лейкоза крупного рогатого скота (ВЛ КРС). Осуществляют взятие образцов крови животного. Для подготовки к ПЦР диагностике используют образцы биоматериала в виде клеточной культуры...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002566071
Дата охранного документа: 20.10.2015
27.11.2015
№216.013.94fb

Способ подготовки нетелей к отелу

Изобретение относится к области сельского хозяйства и предназначено для повышение эффективности выращивания нетелей. Способ включает ежедневное выпаивание телятам препарата мицеллат углекислого кальция «Алексанат Зоо». Препарат вводят в дозе 150 мл на голову в течение 60 дней до отела и 60 дней...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002569758
Дата охранного документа: 27.11.2015
10.12.2015
№216.013.9735

Способ приготовления копчено-вареных свиных языков

Изобретение относится к мясной промышленности и может быть использовано при производстве деликатесных продуктов из свиных языков. Язык перед выдержкой инъецируют рассолом в количестве 30-35% от массы языка. После выдержки в рассоле проводят обсыпку языка смесью пряностей и после обсушивания...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002570329
Дата охранного документа: 10.12.2015
10.12.2015
№216.013.98cf

Способ термохимической дезинфекции животноводческих помещений при ликвидации африканской чумы свиней

Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для дезинфекции животноводческих помещений, дезинфекции и дезинсекции внутренних поверхностей, воздуха и оборудования в животноводческих помещениях, санитарной обработки помещений для содержания животных, птицы. Вначале осуществляют...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002570739
Дата охранного документа: 10.12.2015
20.12.2015
№216.013.9a6c

Защитная среда высушивания для получения симбиотического препарата

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано при промышленном производстве симбиотических препаратов. Защитная среда высушивания для получения симбиотического препарата содержит желатин, сахарозу, пищевой хитозан и калий фосфатный буфер в заданных соотношениях. Изобретение...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002571157
Дата охранного документа: 20.12.2015
+ добавить свой РИД