×
01.08.2019
219.017.bb0b

Результат интеллектуальной деятельности: Способ выявления генома возбудителя вируса парагриппа 3 типа у крупного рогатого скота

Вид РИД

Изобретение

Аннотация: Изобретение относится к области биохимии. Описан способ выявления генома возбудителя вируса парагриппа 3 типа у крупного рогатого скота, включающий выделение РНК из биологического материала сорбционным методом, синтез кДНК на матрице РНК путем постановки одноэтапной с добавлением внутреннего и положительного контрольных образцов мультиплексной реакции обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции - с проведением 45 циклов амплификации с детекцией в реальном времени с использованием специфичных для участка генома вирусного возбудителя олигонуклеотидных праймеров флуоресцентно-меченного зонда и контрольных образцов. Фрагмент генома возбудителя вируса парагриппа-3 типа имеет следующие нуклеотидные последовательности: BPIF 5'-TCGACATCATTGAATTCATAC-3' - прямой праймер; BPIR 5'-TCAAGTTGGTAGATTGTCGTGC-3' - обратный праймер; BPI-z 5'-JOE-TGCCGTGTTCTCTTGGGAGTCG-BHQ1 - зонд. Изобретение расширяет арсенал способов выявления генома возбудителя вируса парагриппа 3 у крупного рогатого скота. 5 табл., 1 пр.

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии, а именно к средствам диагностики, возбудителей респираторных вирусных инфекций вирусов парагриппа 3 типа, как в практике ветеринарной службы, так и для научных исследований.

Известно техническое решение, в котором вирус парагриппа 3 типа определяют методом ПЦР с детекцией в режиме реального времени (патент РФ №2515911, C12Q 1/68, 2014 г.), продукты ПЦР разделяли методом электрофореза в 2% агарозном геле в присутствии бромистого этидия. Детекцию интенсивности флуоресценции проводили по каналам - по каналам FAM (470/510 нм) и Су5 (625/660 нм) с помощью приборов «Rot or Gene 6000» (Corbe t Researc h, Австралия) и iQ5 (BioRad, США). Результаты оценивали по наличию флюоресценции до 30 цикла.

Также известен способ выявления вирусных инфекций парагриппа 3 типа методом мультиплексной ПЦР с детекцией в режиме реального времени (патент РФ №2460803, C12Q 1/68, 2014 г.- прототип), включающий выделение РНК из биологического материала по выбору: мазки из носа, горла, носоглотки, носоглоточные аспираты, назальные смывы, мокроту, бронхоальвеолярный лаваж, секционный материал, образцы культуральной жидкости от инфицированных особей сорбционным методом, синтез кДНК на матрице РНК путем постановки одноэтапной с добавлением внутреннего положительного контроля мультиплексной реакции обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции - с проведением 45 циклов амплификации с детекцией в реальном времени с использованием специфичных для участка генома вирусного возбудителя олигонуклеотидных праймеров флуоресцентно-меченного зонда и контрольных образцов, измерение накопления флуоресцентного сигнала по каналам соответствующих флуоресцентных красителей и интерпретацию результатов на основании наличия/отсутствия пересечения кривой флуоресценции с пороговой линией Threshold.

Общим недостатком известных технических решений является отсутствие возможности получения достоверной диагностики инфекции парагриппа 3 типа у КРС.

Техническим результатом является получение достоверной диагностики инфекции парагриппа-3 типа у КРС с помощью ОТ - ПЦР в реальном времени.

Технический результат достигается тем, что в способе выявления генома возбудителя вируса парагриппа 3 типа у крупного рогатого скота, включающем выделение РНК из биологического материала по выбору: мазки из носа, горла, носоглотки, носоглоточные аспираты, назальные смывы, мокроту сорбционным методом, синтез кДНК на матрице РНК путем постановки одноэтапной с добавлением внутреннего и положительного контрольных образцов мультиплексной реакции обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции - с проведением 45 циклов амплификации с детекцией в реальном времени с использованием специфичных для участка генома вирусного возбудителя олигонуклеотидных праймеров флуоресцентно-меченного зонда и контрольных образцов, измерение накопления флуоресцентного сигнала по каналам соответствующих флуоресцентных красителей и интерпретацию результатов на основании наличия/отсутствия пересечения кривой флуоресценции с пороговой линией Threshold, согласно изобретению для выделения РНК используют биологический материал, взятый от животных инфицированных возбудителем вируса парагриппа 3 типа, а для внутреннего контрольного образца - суспензию бактериофага MS2 с концентрацией 5×103/мл, а для положительного контрольного образца используют смесь рекомбинантных плазмидных ДНК, содержащих фрагмент генома вируса парагриппа 3 типа BPI и фрагмент генома бактериофага MS2, взятых в соотношении 1:1, со следующими нуклеотидными последовательностями:

BPIF 5'-TCGACATCATTGAATTCATAC-3' - прямой праймер

BPIR 5'-TCAAGTTGGTAGATTGTCGTGC-3' - обратный праймер

BPI-z 5'-JOE-TGCCGTGTTCTCTTGGGAGTCG-BHQ1-зонд

MS2F, 5'-TGGCACTACCCCTCTCCGTATTCAC-3' - прямой праймер

MS2R, 5'-GTACGGGCGACCCCACGATGAC-3' - обратный праймер

MS2P, 5'-Су5-CACATCGATAGATCAAGGTGCCTACAAGC-3' BHQ2-зонд, при этом накопление флуоресцентного сигнала измеряют по каналам: JOE/ Yellow для специфического сигнала; Су5/Red для сигнала внутреннего контроля, если кривые накопления флуоресцентного сигнала выходят до 35 цикла, то результат реакции считают положительным, а если кривые не пересекают пороговую линию или пересекают ее после 35 цикла, то результат реакции - отрицательный.

Новизна заявляемого технического решения заключается в том, что для получения достоверной диагностики инфекции парагриппа 3 типа у животных используют две последовательные реакции: обратной транскрипции вирусной РНК для получения кДНК и полимеразной цепной реакции для амплификации фрагмента полученной кДНК матрицы. Обе реакции проводятся последовательно в одной ПЦР-пробирке (one-tube) с использованием специфичных для участка генома возбудителя парагриппа-3 типа олигонуклеотидных праймеров флуоресцентно-меченного зонда и разных видов контроля для которых используют различные формы материала бактериофага MS2: суспензия и фрагмент генома со специфическими к нему праймерами и зондом. Такая постановка ОТ-ПЦР в реальном времени сокращает и упрощает процедуру анализа, снижает риск контаминации и возможность ошибки при переносе кДНК в другую пробирку для ПЦР. Кроме того, детекция продуктов амплификации осуществляется с использованием принципа выщепления флуоресцентной метки на 5' конце олигонуклеотидного зонда.

Признаки, отличающие заявляемое техническое решение от прототипа, направлены на достижение технического результата и не выявлены при изучении данной и смежной областей науки и техники и, следовательно, соответствуют критерию «изобретательский уровень».

Заявляемый способ рекомендовано использовать в ветеринарной вирусологии, а именно к средствам диагностики инфекции парагриппа 3 типа у животных, как в практике ветеринарной службы, так и для научных исследований, что соответствует критерию «промышленная применимость».

Способ выявления генома возбудителя вируса парагриппа 3 типа у крупного рогатого скота осуществляется следующим образом. Предварительно выделяют РНК от инфицированных животных биологический материал по выбору: мазки из носа, горла, носоглотки, носоглоточные аспираты, назальные смывы, мокроту сорбционным методом. Проводят синтез кДНК на матрице РНК путем постановки одноэтапной мультиплексной реакции обратной транскрипции с использованием внутреннего контрольного образца - суспензию бактериофага MS2 и положительного контрольного образца в качестве, которого используют смесь рекомбинантных плазмидных ДНК, содержащих фрагмент генома вируса парагриппа-3 типа и фрагмент генома бактериофага MS2 со следующими нуклеотидными последовательностями:

BPIF 5'-TCGACATCATTGAATTCATAC-3' - прямой праймер

BPIR 5'-TCAAGTTGGTAGATTGTCGTGC-3' - обратный праймер

BPIP 5'-JOE-TGCCGTGTTCTCTTGGGAGTCG-BHQ1 - зонд

MS2F, 5'-TGGCACTACCCCTCTCCGTATTCAC-3' - прямой праймер

MS2R, 5'-GTACGGGCGACCCCACGATGAC-3' - обратный праймер

MS2P, 5'-Су5-CACATCGATAGATCAAGGTGCCTACAAGC-3' - BHQ2-зонд и полимеразной цепной реакции - с проведением 40 циклов амплификации с детекцией в реальном времени с использованием специфичных для участка генома возбудителя парагриппа 3 типа олигонуклеотидных праймеров и флуоресцентно-меченного зонда.

Затем измеряют накопление флуоресцентного сигнала по каналам: JOE/ Yellow для специфического сигнала; Су5/Red для сигнала внутреннего контроля и интерпретируют результаты на основании наличия/отсутствия пересечения кривой флуоресценции с пороговой линией (Threshold). Если кривые накопления флуоресцентного сигнала выходят до 35 цикла, то результат реакции считается положительным, а если кривые не пересекают пороговую линию или пересекают ее после 35 цикла, то результат реакции - отрицательный.

Использование заявляемых олигонуклеотидных праймеров BPIF и BPIR флуоресцентно-меченного зонда BPIP обеспечивает специфическое выявление РНК парагриппа 3 типа у животных.

Использование для разных видов контроля различные формы материала бактериофага MS2: суспензии и фрагмента генома со специфическими к нему праймерами и зондом обусловлено тем, что это позволяет контролировать корректное прохождение реакции в каждой пробирки, а также контролируется этап выделения РНК из образцов.

Выбор последовательности и расчет первичной структуры олигонуклеотидных праймеров и зондов.

Проведен сравнительный анализ доступных в базе данных GenBank нуклеотидных последовательностей Р гена BPI, кодирующего один из шести главных структурных белков вирусов (Phosphoprotein Р) парагриппа, относящихся к роду Respirovirus. Как и другие представители этого семейства Paramyxoviridae, геном BPI представлен однонитевой нефрагментированной РНК негативной полярности, размером порядка 15500 оснований. Р белок является фосфопротеином размером 596 аминокимлотных остатков, который взаимодействуя с геномной РНК образует вирусный нуклеокапсид.

С помощью программы «Bio Edit 7.0» выравнены нуклеотидные последовательности Р гена BPI-представителей рода Respirovirus (1-5 типов) нуклеотидной последовательностью гена Р генома парогриппа изолята 910N (Bovine parainfluenza virus 3 DNA, complete genome (код доступа D84095). В результате анализа построенного элайнмента внутри гена белка Р выбран участок между 1800 и 2000 нуклеотидами, содержащий уникальные нуклеотидные последовательности.

С помощью программы «Oligo 6.0» рассчитаны первичные структуры олигонуклеотидных праймеров, фланкирующих выбранный участок генома. Для детекции продуктов амплификации подобран олигонуклеотидный флуоресцентно-меченный зонд BPIP, комплементарный участку нуклеотидной последовательности, ограниченной позициями отжига праймеров BPIF, и BPIR. Используя программу «Oligo 6.0» описаны основные свойства рассчитанных олигонуклеотидов, определившие возможность их использования в ПЦР.

С помощью программы «Oligo 6.0» проанализирована нуклеотидная последовательность бактериофага MS2 (Enterobacteria phage MS2 isolate ST4, complete genome. ACCESSION EF204940). Бактериофаг MS2 содержит однонитевую позитивно ориентрованную РНК размером 3569 оснований. В результате анализа внутри гена белка "созревания" (maturation protein) выбран участок между 200 и 350 нуклеотидами, содержащий уникальные нуклеотидные последовательности, рассчитаны первичные структуры олигонуклеотидных праймеров, фланкирующих выбранный участок генома. Для детекции продуктов амплификации подобран олигонуклеотидный флуоресцентно-меченный зонд MS2P, комплементарный участку нуклеотидной последовательности, ограниченной позициями отжига праймеров MS2F и MS2R. Используя программу «Oligo 6.0» описаны основные свойства рассчитанных олигонуклеотидов, определившие возможность их использования в ПЦР.

Пример конкретного осуществления способа выявления генома возбудителя вируса парагриппа-3 типа у животных

Для осуществления способа используют набор (ИНСТРУКЦИЯ по применению «ПЦР-ПАРАГРИПП-3-КРС-ФАКТОР», набора реагентов для выявления РНК вируса парагриппа-3 крупного рогатого скота (Bovine parainfluenza virus 3) в биологическом материале методом обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции с флуоресцентной детекцией в режиме реального времени (ОТ-ПЦР-РВ), ТУ 21 10.60-133-51062356-2017, http://www.vetfaktor.ru/), который позволяет специфически амплифицировать фрагмент генома вируса парагриппа-3 и внутреннего положительного контроля (бактериофага MS2) в мультиплексной полимеразной цепной реакции.

Набор состоит из комплекта реагентов для проведения мультиплексной ОТ-ПЦР РВ (Таблица 1, Комплект №1) и контрольных образцов (Таблица 2, Комплект №2). Набор выпускается в двух вариантах:

1) Для анализа 55 образцов (включая контрольные образцы)

2) Для анализа 110 образцов (включая контрольные образцы). Состав набора приведен в таблицах 1 и 2.

В набор не входят реактивы для экстракции НК. Выделение РНК может проводиться, например, с помощью наборов на основе сорбционного метода, в состав которых входит силика или микроцентрифужные колонки, наборов на основе фенол-хлороформной экстракции и т.п.Рекомендуется использовать набор «ДНК/РНК-С-ФАКТОР» либо аналогичный. Для исследования используют следующий биологический материал:

• Выделения из носоглотки и трахеи, мазки со слизистой носовой полости, снимают с помощью стерильного зонда, зонд помещают в пластиковую микропробирку объемом 1,5 мл с 0,5 мл стерильного физиологического раствора/фосфатного буфера/транспортной среды.

• Фарингеальные смывы помещают в стерильный контейнер. Смывы, мазки берут на исследование без предварительной подготовки.

Вязкую по консистенции мокроту обрабатывают реагентами типа муколизин, с целью снижения вязкости.

Далее проводят анализ с помощью набора реагентов «ПЦР-ПАРАГРИПП-3-КРС-ФАКТОР» состоящий из трех этапов:

• экстракция НК;

• проведение реакции ОТ-ПЦР РВ с флуоресцентной детекцией в режиме реального времени;

• учет результатов анализа.

Реакция ОТ-ПЦР РВ проводится в одной пробирке.

Для экстракции (выделения) РНК из исследуемых проб отбирают необходимое количество одноразовых пробирок объемом 1,5 мл, включая отрицательный контроль выделения. Вносят во все пробирки с исследуемыми образцами, включая пробирку для ОКО (отрицательный контрольный образец), по 10 мкл ВКО (внутренний контрольный образец - суспензия бактериофага MS2) BPI.

Далее подготавливают образцы к проведению ПЦР

Общий объем реакционной смеси - 25 мкл, объем РНК-пробы - 10 мкл.

Успешное прохождение реакции контролируют использованием ПКО BPI, ВКО BPI и РНК буфера.

Буфер для проведения ОТ-ПЦР, ПЦР буфер BPI; состав: 2,5х ПЦР-буфер (хлорид калия, 100 мМ, Трис-HCl, рН 8,8 100 мМ, глицерол 1%, Tween-20 0.02%); хлорид магния, 5 мМ; деионизированная вода.

Смесь для проведения ПЦР, ПЦР-смесь BPI состав: эквимолярная смесь дезоксинуклеозидтрифосфатов (дНТФ) в концентрации 0,25 мМ; деионизированная вода, смесь праймеров и флуоресцентного зонда на парагрипп 3 типа (прямой и обратный праймеры BPIF и BPIR в концентрации 0,2 мкМ, зонд BPIP - FAM в концентрации 0,1 мкМ, взятых в соотношении 1:1:0,5), смесь праймеров и флуоресцентного зонда на ПКО (прямой и обратный праймеры MS2F и MS2R в концентрации 0,2 мкМ, зонд MS2P-Су5 в концентрации 0,1 мкМ, взятых в соотношении 1:1:0,5).

Смесь ферментов, RT PCR ENZ, состав: ДНК полимераза с антителами, ингибирующими активность фермента, TAQ POLYMERASE (5 ед/мкл), обратная транскриптаза MMLV REVERSE TRANSCRIPTASE (100 ед/мкл).

Буфер для разведения РНК, РНК буфер, состав: деионизованная вода.

Внутренний контрольный образец, ВКО BPI состав: суспензия бактериофага MS2 (5×103/мл)

- Отрицательный контрольный образец, ОКО (ТЕ буфер); состав: ТЕ буфер (10 мМ Tris-HCl, 0,5 мМ EDTA, рН 8,0)

- Положительный контрольный образец, ПКО BPI; состав: смесь рекомбинантных плазмидных ДНК, содержащих фрагмент генома вируса BPI и фрагмент генома бактериофага MS2, взяты в соотношении 1:1.

В отдельной пробирке смешивают компоненты набора из расчета на каждую реакцию:

В отдельной пробирке смешивают компоненты набора из расчета на каждую реакцию:

5 мкл ПЦР СМЕСЬ BPI;

10 мкл ПЦР БУФЕР BPI;

0,75 мкл смеси ферментов RT PCR ENZ

Перемешивают смесь на вортексе и сбрасывают капли кратковременным центрифугированием. Расчет объемов реагентов на различное количество реакций указан в Таблице 3.

Отбирают необходимое количество пробирок для амплификации НК исследуемых и контрольных проб. Вносят по 15 мкл приготовленной реакционной смеси.

Используя наконечники с фильтром в подготовленные пробирки вносят

а) в пробирку отрицательного контроля ПЦР (К-) 10 мкл РНК буфера;

б) в ряд пробирок для исследуемых проб - в каждую внести по 10 мкл НК соответствующей пробы, включая пробу ВК;

в) в пробирку с положительным контролем ПЦР (К+) 10 мкл ПКО BPI.

Проведение реакции ПЦР с флюоресцентной детекцией

Параметры температурно-временного режима амплификации на приборах «Rotor-Gene Q» и «ДТ-96» указаны в таблице 4.

Интерпретация результатов анализа.

Полученные данные - кривые накопления флуоресцентного сигнала анализируются с помощью программного обеспечения используемого прибора для проведения ПЦР в режиме «реального времени» в соответствии с инструкцией производи геля к прибору. Учет результатов ОТ-ПЦР проводится по наличию или отсутствию пересечения кривой флуоресценции с установленной на соответствующем уровне пороговой линией (что соответствует наличию или отсутствию значения порогового цикла «Ct» для исследуемого образца).

Результат считается достоверным в случае корректного прохождения положительных и отрицательных контролей амплификации и экстракции НК в соответствии с таблицей 5.

Появление любого значения Ct в таблице результатов для отрицательного контроля этапа экстракции ВК- на канале JOE (HEX)/Yellow и для отрицательного контроля это па ОТ-ПЦР К- на любом из каналов свидетельствует о наличии контаминации реактивов или образцов.

В этом случае результаты анализа по всем пробам считаются недействительными. Требуется повторить анализ всех проб, а также предпринять меры по выявлению и ликвидации источника контаминации.

Образцы, для которых по каналу Су5/Red значение Ct отсутствует или превышает 35 цикл (при этом по каналу JOE (HEX)/Yellow значение Ct также отсутствует) требуют повторного проведения исследования с этапа ПЦР. Задержка в значениях пороговых циклов для исследуемых образцов на канале Су5/Red указывает на присутствие ингибиторов в пробах или на ошибки при постановке реакции ОТ-ПЦР. Требуется провести исследование, начиная с этапа экстракции НК.

Образец считается положительным, РНК вируса парагриппа 3 присутствует, если наблюдается экспоненциальный рост сигнала на канале JOE (HEX)/Yellow, при этом значения Ct контрольных образцов находятся в пределах нормы (см. Табл. 5). Если для исследуемого образца по каналу JOE (HEX)/Yellow значение Ct определяется позднее 37 цикла при корректном прохождении положительных и отрицательных контролей - он считается спорным и исследуется повторно с этапа выделения НК. Если при повторной постановке наблюдается схожий результат (Ct на канале JOE (HEX)/Yellow более 37), требуется повторное взятие материала от того же животного для проведения ОТ-ПЦР-исследования и (или) использование альтернативных методов диагностики. Образец считается отрицательным (РНК вируса пара-гриппа-3 КРС отсутствует) если не определяется значение Ct (не наблюдается рост специфического сигнала) на канале JOE (HEX)/Yellow, при этом значения Ct по каналу Су5/Rcd и Ct контрольных образцов находятся в пределах нормы (Табл. 5).

Источник поступления информации: Роспатент

Showing 101-110 of 465 items.
09.06.2018
№218.016.6055

Ведущее колесо транспортного средства

Изобретение относится к области тракторного и транспортного машиностроения, в частности к средствам повышения проходимости транспортного средства. Ведущее колесо транспортного средства содержит приводной вал 1 с закрепленной на нем безвоздушной шиной 2 в виде диска 7 и эластичного кольца 8,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002656927
Дата охранного документа: 07.06.2018
25.06.2018
№218.016.6689

Способ производства винного напитка из ягод

Изобретение относится к винодельческой промышленности. Из ягод получают криопорошок путем протирания их, замораживания в среде жидкого азота и СВЧ-сушки до влажности 1,4-1,9%. Готовят сусло регидратацией криопорошка, проводят его энзимацию, вносят диоксид серы в количестве 75 мг/дм и разводку...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002658780
Дата охранного документа: 22.06.2018
25.06.2018
№218.016.66c6

Ведущее колесо транспортного средства

Изобретение относится к области тракторного и транспортного машиностроения, в частности к средствам повышения проходимости транспортного средства. Ведущее колесо транспортного средства состоит из приводного вала 1 с закрепленной на нем безвоздушной шиной 2, состоящей из диска 6 и эластичного...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002658464
Дата охранного документа: 21.06.2018
08.07.2018
№218.016.6e57

Устройство для электролиза водно-солевых растворов

Изобретение относится к устройству для электролиза водно-солевых растворов, содержащему корпус, диафрагменный электрохимический реактор, разделенный мелкопористой диафрагмой на анодную и катодную камеры, снабженному входным и выходными патрубками. Устройство характеризуется тем, что имеет...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002660440
Дата охранного документа: 06.07.2018
12.07.2018
№218.016.705e

Способ профилактики бактериозов пчел в условиях умеренно-континентального климата

Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к пчеловодству, и может быть использовано для обработки ульев с пчелиными семьями. Способ профилактики бактериозов пчел в условиях умеренно-континентального климата включает подачу в ульи с пчелами озоно-воздушной смеси в газообразном...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002660934
Дата охранного документа: 11.07.2018
18.07.2018
№218.016.7207

Устройство для предпосевной обработки почвы

Изобретение относится к области сельскохозяйственного машиностроения и может быть использовано для предпосевной обработки почвы. Устройство для предпосевной обработки почвы содержит двухбрусную раму с приваренными в шахматном порядке кронштейнами, в которых закреплены рабочие органы в виде...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002661370
Дата охранного документа: 16.07.2018
09.08.2018
№218.016.78f6

Электроактиватор воды

Изобретение относится к электрохимии и может быть использовано в сельском хозяйстве, медицине, пищевой промышленности и других областях народного хозяйства при получении экологически чистых растворов. Электроактиватор воды содержит диэлектрический корпус 1, катодную 2 и анодную 3 камеры, анод 8...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002663153
Дата охранного документа: 01.08.2018
09.08.2018
№218.016.7935

Способ лечения кроликов при миксоматозе

Изобретение относится к ветеринарной медицине, а именно к способу лечения кроликов, больных миксоматозом. Способ предусматривает комплексное использование 1 раз в сутки в течение 10 дней анандина 10% в дозе 0,2 мл/кг, лозеваля в дозе 0,2 мл/кг и пихтоина. Использование данной схемы позволяет...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002663324
Дата охранного документа: 03.08.2018
17.08.2018
№218.016.7cce

Центробежный рабочий орган для рассева сыпучих материалов

Изобретение относится к сельскохозяйственному машиностроению, в частности к рабочим органам центробежных разбрасывателей минеральных удобрений и других сыпучих материалов. Центробежный рабочий орган содержит механизм 1 привода, установленные на валу 2 клиноременный вариатор 3 и диск 4 с...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002663919
Дата охранного документа: 13.08.2018
19.10.2018
№218.016.9445

Способ выращивания риса на лугово-черноземной почве в условиях правобережья реки кубани

Изобретение относится к области сельского хозяйства, в частности к способам выращивания риса. Способ включает предпосевную обработку семян путем смачивания их в водном растворе сульфата меди и некорневую подкормку растений в фазу кущения в утреннее время раствором медьсодержащего удобрения. При...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002670150
Дата охранного документа: 18.10.2018
Showing 101-110 of 234 items.
25.08.2017
№217.015.c358

Способ получения белкового витаминного зеленого корма

Изобретение относится к области сельского, в частности, к способу получения белково-витаминного зеленого корма. Способ включает замачивание семян в электроактивированной воде, проращивание и выгон проростков. В качестве исходных семян используют семена сои. Промывку семян сои осуществляют...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002618118
Дата охранного документа: 02.05.2017
25.08.2017
№217.015.c35c

Способ производства белково-витаминной кормовой добавки

Изобретение относится к области сельского хозяйства, в частности к способу производства белково-витаминной кормовой добавки. Способ включает замачивание семян в электроактивированной воде, проращивание и выгон проростков. В качестве исходных семян используют семена сои. Промывку семян...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002618120
Дата охранного документа: 02.05.2017
25.08.2017
№217.015.c35f

Способ приготовления функциональной кормовой добавки из зерна овса

Изобретение относится к области сельского хозяйства кормопроизводству, в частности к способу приготовления функциональной кормовой добавки из зерна овса. Способ включает замачивание зерна в электроактивированной воде, проращивание и выгон ростков. В качестве исходного зерна использовали зерно...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002618126
Дата охранного документа: 02.05.2017
25.08.2017
№217.015.c4f8

Способ получения витаминной кормовой добавки из зерна кукурузы

Изобретение относится к области сельского хозяйства кормопроизводству, в частности к способу получения витаминной кормовой добавки из зерна кукурузы. Способ получения витаминной кормовой добавки из зерна кукурузы включает промывку зерна кукурузы водопроводной водой в течение 4-8 мин. После чего...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002618128
Дата охранного документа: 02.05.2017
25.08.2017
№217.015.c8c5

Способ профилактики оспы овец и коз

Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для профилактики оспы овец и коз. Способ включает выявление 2,5-3% от общего количества животных с инфекционным заболеванием на начальной стадии развития в очаге и 1-й угрожаемой зоне, убой больных и дальнейшее обследование остальных...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002619336
Дата охранного документа: 15.05.2017
25.08.2017
№217.015.c8fa

Способ профилактики нодулярного дерматита крс

Изобретение относится к области ветеринарии. Предложен способ профилактики нодулярного дерматита крупного рогатого скота (КРС), включающий выявление животных с инфекционным заболеванием на начальной стадии развития, убой больных и дальнейшее обследование остальных животных. Остальных животных в...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002619337
Дата охранного документа: 15.05.2017
26.08.2017
№217.015.d3c8

Способ получения биологически активной кормовой добавки

Изобретение относится к области сельского хозяйства - кормопроизводству, в частности, к способу получения биологически активной кормовой добавки. Способ включает промывку зерна кукурузы водопроводной водой в течение 4-8 мин. После чего промытое зерно замачивают анолитом с рН 3,0-11,2 ед. и...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002622254
Дата охранного документа: 13.06.2017
26.08.2017
№217.015.d3d2

Способ приготовления белковой функциональной кормовой добавки из семян нута

Изобретение относится к области сельского хозяйства, в частности к кормопроизводству. Способ приготовления белковой функциональной кормовой добавки включает замачивание семян нута в анолите с рН 3,5-10,8 ед. и окислительно-восстановительным потенциалом 375-840 мВ, концентрацией кислорода...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002622116
Дата охранного документа: 13.06.2017
26.08.2017
№217.015.d3d4

Способ производства функционального корма

Изобретение относится к области сельского хозяйства - кормопроизводству, в частности к способу производства функционального корма. Способ производства функционального корма включает промывку семян сои водопроводной водой в течение 4-8 мин. После чего промытые семена замачивают в анолите с рН...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002622150
Дата охранного документа: 13.06.2017
26.08.2017
№217.015.d3d6

Способ приготовления белковой функциональной кормовой добавки из семян гороха

Изобретение относится к области сельского хозяйства, в частности к кормопроизводству. Способ приготовления белковой функциональной кормовой добавки из семян гороха включает замачивание семян гороха в анолите с рН 3,5-10,8 ед. и окислительно-восстановительным потенциалом 375-840 мВ,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002622251
Дата охранного документа: 13.06.2017
+ добавить свой РИД