Результат интеллектуальной деятельности: СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ РИСКА РАЗВИТИЯ ИНФЕКЦИОННЫХ ОСЛОЖНЕНИЙ ПРИ АТОПИЧЕСКОМ ДЕРМАТИТЕ

Изобретение относится к медицине, в частности к дерматовенерологии, и может быть использовано для прогнозирования развития инфекционных осложнений при атопическом дерматите.

Присоединение вторичной инфекции - бактериальной, грибковой или вирусной, часто осложняет течение атопического дерматита, пролонгирует длительность заболевания и способствует инвалидизации пациента. Именно поэтому своевременное выявление риска присоединения вторичной инфекции может обеспечить эффективность лечения атопического дерматита, пролонгирование периода ремиссии и улучшение качества жизни пациента [1, 2].

Известен способ прогнозирования течения атопического дерматита, при котором выделяют эпителиоциты в браш-биоптатах слизистой ротоглотки, исследуют электрокинетическую активность ядер буккальных эпителиоцитов (ЭлА) индекс инфицирования (ИИ), индекс адгезии (ИА), берут смывы с воспалительных участков кожи площадью 2 см², в которых определяют количество КОЕ/см² S. aureus и при значении ИИ>70%, ИА>100-150 микробных клеток на эпителиоцит, КОЕ>200/см² и ЭлА<20% - прогнозируют тяжелое (осложненное) течение атопического дерматита, а при ИИ<30%, ИА<50 микробных клеток на эпителиоцит, КОЕ<50/см² и ЭлА>30% прогнозируют легкое (не осложненное) течение атопического дерматита [3].

Основным недостатком данного аналога является сложность способа за счет необходимости проведения большого числа диагностических исследований.

Известен способ прогнозирования развития осложненных форм атопического дерматита, при котором определяют факторы риска: наличие семейной отягощенности по аллергическим заболеваниям и очагов хронической инфекции, неонатальные, антенатальные, алиментарные, микроэкологические, макроэкологические. По конкретным данным проводят расчет значений дискриминантных функций (fb f2, fs) на основе экспериментально определенных коэффициентов с помощью IBM PC. При наибольшем ее значении прогнозируют вероятность развития атопического дерматита у детей и его осложненных форм вторичной инфекцией бактериальной и грибковой этиологии [4].

Основным недостатком данного аналога является недостаточная точность, так как исследуют факторы риска, которые не всегда приводят к развитию инфекционных осложнений [5].

Наиболее близким аналогом - прототипом - является способ прогнозирования развития инфекционных осложнений атопического дерматита у взрослых, согласно которому проводят иммунологическое исследование периферической крови больных атопическим дерматитом и определяют содержание субпопуляций лимфоцитов CD3⁺, CD4⁺, CD8⁺, CD16⁺, CD72⁺, γδT и CD8αα и при повышении числа CD3⁺, CD4⁺, CD72⁺ лимфоцитов на фоне уменьшения содержания CD8⁺, CD16⁺, γδТ и CD8αα-лимфоцитов прогнозируют формирование инфекционных осложнений атопического дерматита [6].

Основным недостатком данного аналога является недостаточная точность способа за счет низкой специфичности маркеров, так как увеличение или уменьшение числа субпопуляций лимфоцитов CD3⁺, CD4⁺, CD8⁺, CD16⁺, CD72⁺, γδT и CD8αα может наблюдаться при других патологиях, не связанных с кожными заболеваниями.

Для повышения точности способа прогнозирования риска развития инфекционных осложнений при атопическом дерматите в сыворотке крови у пациентов определяют уровень экспрессии Тоll-2 рецепторов на моноцитах и при содержании Тоll-2 рецепторов более 216 Cell/uL прогнозируют высокий риск развития инфекционных осложнений, при содержании Тоll-2 рецепторов менее 216 Cell/uL прогнозируют низкий риск развития инфекционных осложнений у пациентов с атопическим дерматитом.

Способ осуществляют следующим образом. Производят забор венозной крови натощак, центрифугируют. В сыворотке крови метят моноциты анти-СD14 МАТ для наложения оптимального окна дискриминации (гейта) для моноцитов/макрофагов на точечном графике прямого и бокового светорассеяния. При анализе, моноцитарно-макрофагальный гейт включает не менее 93-96% клеток с фенотипом CD14⁺. В каждом образце анализировали не менее 10⁴ клеток. Для удаления эритроцитов пробоподготовку проводят с использованием лизирующего раствора Opti Lise С фирмы Immunotex (Франция) по прилагаемому протоколу. Определяют экспрессию Тоll-2 рецепторов на моноцитах методом четырехпараметрического фенотипирования, используя комбинации моноклональных антител (МАТ) к дифференцировочным (CD 14) и активационным маркерам (CD282, CD284, HLADR). Результаты фиксируют на проточном цитофлюориметре Beckman Coulter FC-500 (США), используя стандартные протоколы.

Примечание: * - различия от группы контроля при р<0,05; ** - различия от группы контроля при р<0,001. Р1 = Манна-Уитни по сравнению с контролем, Р2 = Манна-Уитни сравнение между группами, Р3 = Вилкоксона сравнение между ремиссией и обострением

В качестве показателя для прогнозирования атопического дерматита взят Тоll-2 рецептор. Известно, что кожа является барьером между внутренней средой и окружающим пространством, выполняя защитную функцию. Это первый барьер нашего организма, сталкивающийся с инфекционными агентами, где возникает воспалительный процесс, реализующийся через Toll-подобные рецепторы. От площади кожного покрова, вовлеченного в патологический процесс, зависит распределение и активность данных рецепторов. Для Тоll-2 рецептора основным лигандом являются Staphylococcus aureus, Candida albicans, которые по современным данным, активно персистируют на коже пациентов с атопическим дерматитом [7, 8, 9]. Следовательно, учитывая уровень экспресии Тоll-2 рецептора моноцитами, можно использовать данный показатель в качестве прогностического критерия развития осложнений при атопическом дерматите.

Примеры конкретного применения способа.

ПРИМЕР №1.

Пациент А., 18 лет. Обратился с жалобами на высыпания и выраженный кожный зуд. Болеет с детства. Наследственность не отягощена. Объективно: Дыхание в легких везикулярное хрипов нет. ЧДД 19 в минуту Тоны сердца ясные ритмичные. Пульс 70 в минуту. АД 110/70 мм рт.ст. Локальный статус: Кожный процесс распространенного характера, локализуется на коже лица, верхних и нижних конечностей в виде множественных папулезных элементов, экскориаций, выраженной лихенификации. Выставлен диагноз: атопический дерматит, взрослый период, распространенная форма, стадия обострения. Пациенту назначена базовая стандартная терапия. Определили уровень Тоll-2 рецепторов в сыворотке крови. Абсолютный показатель составил 301, что соответствует высокому риску развития инфекционных осложнений. К базовому лечению добавили антибактериальную терапию, через 10 дней пациент выписан с выздоровлением.

ПРИМЕР №2.

Пациент Е., 21 год. Обратился с жалобами на высыпания, кожный зуд и сухость кожи. Болеет в течении 10 лет. Наследственность не отягощена. Объективно: Дыхание в легких везикулярное хрипов нет. ЧДД 18 в минуту Тоны сердца ясные ритмичные. Пульс 68 в минуту. АД 110/70 мм рт.ст. Локальный статус: Кожный процесс распространенного характера, локализуется на коже лица, груди, спины, сгибательной поверхности верхних и нижних конечностей в виде эритематозно-папулезных элементов, множественных экскориаций, геморрагических корочек, выраженной лихенификации. Выставлен диагноз: атопический дерматит, взрослый период, распространенная форма, стадия обострения. Назначена базовая терапия атопического дерматита. Определили уровень TLR-2 рецепторов в сыворотке крови, абсолютный показатель составил 412, что соответствует высокому риску развития инфекционных осложнений. К базовой терапии добавлен антибактериальный препарат, от приема которого пациент отказался, мотивируя возникновением побочных эффектов при приеме лекарственного препарата. Через 5 суток у пациента появились клинические симптомы стрептококковой инфекции, терапия была пролонгирована за счет этиотропного лечения пиодермии. Пациент выписан с улучшением на 14 сутки.

ПРИМЕР №3.

Пациент О., 27 лет. Обратился с жалобами на высыпания и кожный зуд. Болеет с 10 лет. Наследственность не отягощена. Объективно: Дыхание в легких везикулярное хрипов нет. ЧДД 16 в минуту Тоны сердца ясные ритмичные. Пульс 72 в минуту. АД 120/80 мм рт.ст. Локальный статус: Кожный процесс распространенного характера, локализуется на коже лица, груди, спины, разгибательной поверхности верхних конечностей в виде эритематозно-папулезных элементов, экскориаций, лихенификации. Выставлен диагноз: атопический дерматит, взрослый период, распространенная форма, стадия обострения. Назначена базовая терапия атопического дерматита. Определили уровень Toll-2 рецепторов в сыворотке крови, абсолютный показатель составил 201, что соответствует низкому риску развития инфекционных осложнений. Пациент получил стандартную базовую терапию, через 10 суток выписан с выздоровлением.

Данный способ прогнозирования риска развития инфекционных осложнений использовали у 56 пациентов с атопическим дерматитом. Точность диагностики - 91%.

Литература

1. Текучева, Л.В. Мониторинг стафилококковой микрофлоры у больных атопическим дерматитом / Л.В. Текучева, Е.В. Зайцева, В.Г. Арзуманян // Вестн. дерматол. и венерол. 2006. - №5. - С. 69-72.

2. Баткаев, Э. Лечение атопического дерматита у детей с измененным микробиоценозом кожи / Э. Баткаев, И. Попов // Врач. - 2017. - №12. - 40-47.

3. RU 2310195, G01N 33/48 –аналог.

4. RU 2297797, А61В 10/00 – аналог.

5. Клиническая аллергология. Руководство для практических врачей / под ред. Р.М. Хаитова. - М. - МЕДпресс-информ. - 2002. - 624 с.

6. RU 2350960, G01N 33/53 – прототип.

7. Сорокина, Е.В. Роль Toll-подобных рецепторов в патогенезе некоторых дерматозов / Е.В. Сорокина, С.А. Масюкова // Клиническая дерматология и венерология. - 2011. - №5. - С. 13-16.

8. Кожа как орган иммунной системы. / Т.Э. Боровик [и др.] // Педиатрия. - 2010. - №2. - С. 10-18.

9. Катунина, О.Р. Функции Toll-подобных рецепторов как компонента врожденного иммунитета и их участие в патогенезе дерматозов различной этиологии / О.Р. Катунина // Вестн. дерматол. и венерол. -2011.-№2. - С. 18-25.