×
10.07.2019
219.017.ada3

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БРУЦЕЛЛЕЗНОЙ МОНОСПЕЦИФИЧЕСКОЙ СЫВОРОТКИ ANTI-ABORTUS

Вид РИД

Изобретение

Юридическая информация Свернуть Развернуть
Краткое описание РИД Свернуть Развернуть
Аннотация: Изобретение относится к области биотехнологии. Способ включает иммунизацию кроликов вакцинным штаммом бруцелл вида В. abortus разовой дозой внутривенно, обескровливание животных, инактивацию сыворотки, перекрестную абсорбцию сыворотки бактериальной массой гетерологичного вида бруцелл с последующей ее инкубацией при 37°С в течение 2 ч, концентрирование сыворотки путем центрифугирования и добавление фенола в качестве консерванта. При этом для иммунизации кроликов используют смесь (1:1) взвеси вакцинного штамма В. abortus 19ВА концентрацией 3,0-5,0×10 м.к./мл, обеззараженной кипячением в течение 60 мин, и взвеси живой культуры того же штамма В. abortus 19ВА концентрацией 3,0-5,0×10 м.к./мл в объеме 1 мл. После обескровливания животных сыворотку инактивируют при 60-65°С в течение 1-1,5 ч. Для перекрестной абсорбции используют бакмассу штамма В. melitensis 548. Способ обеспечивает получение бруцеллезной моноспецифической сыворотки anti-abortus с существенно сниженным риском биологической опасности технологического цикла при сохранении высокой специфической активности и специфичности.
Реферат Свернуть Развернуть

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для получения бруцеллезной моноспецифической сыворотки anti-abortus, используемой для видовой дифференциации штаммов возбудителей рода Brucella.

Известна биотехнология получения бруцеллезной моноспецифической сыворотки (anti-abortus) с использованием штамма бруцелл вида В.abortus первого биовара, включающая внутривенное заражение кроликов суспензией штамма В.abortus 544 в дозе 1×109 колониеобразующих единиц (КОЕ)/мл. Через 5-7 дней животных обескровливают, полученную сыворотку абсорбируют бакмассой штамма гетерологичного вида бруцелл В. melitensis 16М. Абсорбированную сыворотку инкубируют при 37°С в течение 2 ч, концентрируют центрифугированием, разводят в фенолсолевом растворе [Corbel М.Х., Yill K.P.W., Thomas E.L. Methods for the identification of Brucella. Central Veterinary Lab. New Haw, Weybrige, Sury KT153, №13, 1978].

Недостатком описанной биотехнологии является получение сыворотки с использованием вирулентного штамма бруцелл на этапе заражения кроликов и этапе абсорбции сыворотки. Полученная сыворотка характеризуется низкой чувствительностью (1:160), что препятствует получению конечных результатов дифференциации с достаточной степенью достоверности.

Наиболее близким к заявляемому способу является способ получения бруцеллезной моноспецифической сыворотки anti-abortus, при котором заражение кроликов проводят разовой дозой штамма В. abortus 544 (1,8-2,0×108 КОЕ/мл), обескровливают животных через 5-7 дней, инактивируют сыворотку при 60-65°С в течение 1-1,5 ч и проводят перекрестную абсорбцию сыворотки бакмассой штамма В. melitensis 28 при ее концентрации 3,5-3,7×109 КОЕ на 10 мл сыворотки, с последующим добавлением фенола [Патент РФ №2104031, опубл. 10.02.98. Бюл. №4].

Способ является достаточно эффективным для получения бруцеллезной моноспецифической сыворотки anti-abortus, титры которой после перекрестной абсорбции составляют 1:160-1:320.

Использование в биотехнологии получения сывороток живых культур вирулентных штаммов бруцелл на этапах заражения лабораторных животных и их обескровливания делает технологический процесс получения сыворотки опасным из-за возможного негативного воздействия на персонал фактора биологической опасности (вирулентного штамма В. abortus).

Целью изобретения является разработка биотехнологии получения бруцеллезной моноспецифической сыворотки anti-abortus, позволяющей существенно снизить риск опасного воздействия биологического фактора (вирулентного штамма возбудителя бруцеллеза) на персонал при опытно-экспериментальном производстве, с сохранением высокой специфической активности и специфичности сыворотки.

Для достижения поставленной цели предлагаемый способ получения бруцеллезной моноспецифической сыворотки anti-abortus включает иммунизацию кроликов породы Шиншилла разовой дозой в объеме 1 мл смесью (1:1) из взвеси вакцинного штамма В. abortus 19ВА концентрацией 3,0-5,0×109 м.к. (микробных клеток)/мл, обеззараженной кипячением в течение 60 мин, и взвеси живой культуры того же штамма В. abortus 19ВА концентрацией 3,0-5,0×109 м.к. /мл, обескровливание животных через 9 суток, инактивацию сыворотки при 60-65°С в течение 1-1,5 ч. Для перекрестной абсорбции используют бакмассу штамма В. melitensis 548, полученную путем выращивания культуры в течение 70-72 ч и добавляемую к сыворотке из расчета 3,5-3,7×109 м.к. на 10 мл сыворотки, с последующей инкубацией сыворотки при 37°С в течение 2 ч, ее концентрированием путем центрифугирования (30 мин при 5000 об/мин) и добавлением фенола в качестве консерванта до конечной концентрации 0,3-0,4%.

По отношению к прототипу у заявляемого изобретения имеются следующие отличительные признаки.

Использование в качестве иммунизирующего агента смеси (1:1) из взвеси вакцинного штамма В. abortus 19ВА, обеззараженной кипячением в течение 60 мин, и взвеси живой культуры того же штамма В. abortus 19ВА, значительно снижает риск биологической опасности при манипуляциях персонала на этапе иммунизации и обескровливания. Использование в качестве агента для перекрестной абсорбции культуры штамма В. melitensis 548 обеспечивает получение сыворотки с более высокой специфической активностью. Титры полученной предлагаемым способом бруцеллезной моноспецифической сыворотки anti-abortus составляют 1:320-1:640. Заявляемый способ осуществляется следующим образом.

Пример 1. Культуру В. abortus 19ВА выращивают на косяках плотной питательной среды в течение 48 ч при температуре 37°С, готовят 2 мл взвеси данного штамма концентрацией 5,0×109 м.к./мл. Один миллилитр взвеси обеззараживают кипячением в течение 60 минут. Готовят 1 мл смеси (1:1) из взвеси, обеззараженной кипячением, и взвеси живой культуры В. abortus 19ВА, которую вводят внутривенно кролику массой 2,5-3,0 кг. Через 9 суток животных обескровливают, сыворотку отбирают и инактивируют при 60°С в течение 1 ч. Параллельно выращивают культуру штамма гетерологичного вида В. melitensis 548 на матрацах в течение 72 ч. Бакмассу смывают 0,9% раствором натрия хлорида, центрифугируют в течение 30 минут при частоте вращения 5000 об/мин, осадок собирают и добавляют к нему 0,9% раствор натрия хлорида. Полученную бакмассу из расчета 3,7×109 м.к. на 10 мл добавляют к сыворотке, инкубируют при 37°С в течение 2 ч и центрифугируют в течение 30 минут при частоте вращения 5000 об/мин. Сыворотку отбирают и добавляют фенол до 0,3-0,4%. Титр сыворотки составляет 1:320-1:640.

Пример 2. Выполняют аналогично примеру 1 за исключением того, что готовят 2 мл взвеси штамма В. abortus концентрацией 4,0×109 м.к./мл. Один миллилитр взвеси обеззараживают кипячением в течение 60 минут. Готовят 1 мл смеси (1:1) из взвеси, обеззараженной кипячением, и взвеси живой культуры В. abortus 19ВА, которую вводят внутривенно кролику массой 2,5-3,0 кг. Через 9 суток животных обескровливают, сыворотку отбирают и инактивируют при 60°С в течение 1 ч. Параллельно выращивают культуру штамма гетерологичного вида B. melitensis 548 на матрацах в течение 72 ч. Бакмассу смывают 0,9% раствором натрия хлорида, центрифугируют в течение 30 минут при частоте вращения 5000 об/мин, осадок собирают и добавляют к нему 0,9% раствор натрия хлорида. Полученную бакмассу из расчета 3,7×109 м.к. на 10 мл добавляют к сыворотке, инкубируют при 37°С в течение 2 ч и центрифугируют в течение 30 минут при частоте вращения 5000 об/мин. Сыворотку отбирают и добавляют фенол до 0,3-0,4%. Титр сыворотки составляет 1:320-1:640.

Пример 3. Выполняют аналогично примеру 1 за исключением того, что готовят 2 мл взвеси штамма В. abortus 19ВА концентрацией 3,0×109 м.к./мл. Один миллилитр взвеси обеззараживают кипячением в течение 60 минут. Готовят 1 мл смеси (1:1) из взвеси, обеззараженной кипячением, и взвеси живой культуры В. abortus 19ВА, которую вводят внутривенно кролику массой 2,5-3,0 кг. Через 9 суток животных обескровливают, сыворотку отбирают и инактивируют при 60°С в течение 1 ч. Параллельно выращивают культуру гетерологичного вида В. melitensis 548 на матрацах в течение 72 ч. Бакмассу смывают 0,9% раствором натрия хлорида, центрифугируют в течение 30 минут при частоте вращения 5000 об/мин, осадок собирают и добавляют к нему 0,9% раствор натрия хлорида. Полученную бакмассу из расчета 3,7×109 м.к. на 10 мл добавляют к сыворотке, инкубируют при 37°С в течение 2 ч и центрифугируют в течение 30 минут при частоте вращения 5000 об/мин. Сыворотку отбирают и добавляют фенол до 0,3-0,4%. Титр сыворотки составляет 1:320-1:640.

Выбор штамма для иммунизации кроликов обеспечивает создание оптимальных условий биологической безопасности в ходе данной манипуляции. Выбор граничных значений заявляемых параметров предлагаемого способа обусловлен тем, что уменьшение концентраций иммунизирующего агента (В. abortus 19ВА) ниже 3,0×109 м.к./мл приводит к недостаточному образованию антител, что в конечном итоге снижает специфическую активность получаемой сыворотки, а увеличение иммунизирующей дозы выше 5,0×109 м.к./мл нецелесообразно, так как заявленные пределы концентраций используемого штамма обеспечивают достаточную степень иммунизации животных, в противном случае дальнейшее повышение иммунизирующих доз приведет к недифференцированному иммунологическому ответу.

Таким образом, изобретение практически осуществимо, его использование обеспечивает получение бруцеллезной моноспецифической сыворотки anti-abortus с существенно сниженным риском биологической опасности технологического цикла, чем по способу-прототипу, за счет использования на этапе иммунизации животных-продуцентов вместо вирулентного вакцинного штамма бруцелл В. abortus 19ВА. При этом сохраняется высокая специфическая активность и специфичность получаемой сыворотки.

Способ получения бруцеллезной моноспецифической сыворотки anti-abortus, включающий иммунизацию кроликов вакцинным штаммом бруцелл вида В. abortus разовой дозой внутривенно, обескровливание животных, инактивацию сыворотки, перекрестную абсорбцию сыворотки бактериальной массой гетерологичного вида бруцелл с последующей ее инкубацией при 37°С в течение 2 ч, концентрирование сыворотки путем центрифугирования и добавление фенола в качестве консерванта, отличающийся тем, что для иммунизации кроликов используют смесь (1:1) взвеси вакцинного штамма В. abortus 19 ВА концентрацией 3,0-5,0×10 м.к./мл, обеззараженной кипячением в течение 60 мин, и взвеси живой культуры того же штамма В. abortus 19 ВА концентрацией 3,0-5,0×10 м.к./мл в объеме 1 мл, после обескровливания животных сыворотку инактивируют при 60-65°С в течение 1-1,5 ч, для перекрестной абсорбции используют бакмассу штамма В. melitensis 548.
Источник поступления информации: Роспатент

Showing 1-10 of 12 items.
20.05.2013
№216.012.3f93

Стабилизированная композиция местного применения, обладающая противоугревым и антибиотическим действием

Изобретение относится к области медицины и косметологии, конкретно к фармацевтической композиции для местного применения, обладающей противоугревым и антибиотическим действием, содержащей эффективное количество антибиотика клиндамицина, салициловой кислоты и вспомогательные вещества....
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002481845
Дата охранного документа: 20.05.2013
10.12.2013
№216.012.893b

Способ получения липосомально-иммунопероксидазного конъюгата

Изобретение относится к области биохимии. Используют липосомы в качестве матрицы для активированного фермента - пероксидазы хрена. К 5 мг окисленной перйодатным методом пероксидазы хрена добавляют 1 мл суспензии липосом в 0,01 М растворе карбонатно-бикарбонатного буфера при рН 9,5. Подвергают...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002500813
Дата охранного документа: 10.12.2013
20.01.2014
№216.012.9704

Регенерирующая композиция для ухода за кожей

Изобретение относится к косметологии и представляет собой регенерирующую композицию для ухода за кожей, содержащую регулятор pH-триэтаноламин, БАД, основу Salcare SC80, циклометикон DC345, консервант, отдушку, воду, отличающуюся тем, что содержит в качестве биологически активной добавки...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002504359
Дата охранного документа: 20.01.2014
10.04.2014
№216.012.b03b

Способ получения микрогравиметрического иммуносенсора

Изобретение относится к биотехнологии и микробиологии. Предложен способ получения микрогравиметрического иммуносенсора. Сначала активируют поверхность кварцевого резонатора путем плазменного напыления полиэтиленимина с молекулярной массой менее 10 000 Да в течение 10 с в вакуумной установке при...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002510830
Дата охранного документа: 10.04.2014
27.09.2014
№216.012.f827

Бифазная транспортная питательная среда для выделения и выращивания бруцеллезного микроба

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к получению питательных сред, которые создают оптимальные условия для выделения и выращивания бруцеллезного микроба. Питательная среда включает плотную и жидкую фазы. Плотная фаза содержит мясную воду, пептон сухой ферментативный, печеночный...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002529364
Дата охранного документа: 27.09.2014
10.02.2016
№216.014.c38d

Способ дифференциации поствакцинного и инфекционного бруцеллёзного процессов по степени повышенной чувствительности организма к бруцеллам в условиях in vitro

Изобретение относится к области медицины и касается способа дифференциальной диагностики поствакцинального и инфекционного бруцеллезного процессов у людей в условиях in vitro. Охарактеризованный способ включает инкубацию цельной гепаринизированной крови с бруцеллезным жидким аллергеном -...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002574207
Дата охранного документа: 10.02.2016
10.04.2016
№216.015.30be

Питательная среда плотная для культивирования бруцелл

Изобретение относится к микробиологии и биотехнологии. Питательная среда для культивирования бруцелл содержит ферментативный гидролизат желатина, ферментативный гидролизат рыбной муки, дрожжевой экстракт, натрий хлористый, глюкозу, натрий сернистокислый пиро, агар микробиологический и...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002580028
Дата охранного документа: 10.04.2016
10.05.2016
№216.015.3ce5

Способ получения ниосомальной формы офлоксацина

Изобретение может быть использовано в медицине и биотехнологии для микрокапсулирования антибактериальных препаратов в ниосомы. Способ получения ниосомальной формы офлоксацина путем обращенно-фазовой отгонки осуществляется следующим образом. Хлороформенный раствор, содержащий сорбитан...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002583135
Дата охранного документа: 10.05.2016
08.03.2019
№219.016.d331

Питательная среда плотная для культивирования бруцелл вида brucella neotomae

Изобретение относится к биотехнологии. Питательная среда плотная для культивирования бруцелл вида Brucella neotomae содержит печеночный отвар, пептон сухой ферментативный, сыворотку крови плодов коровы жидкую, натрий хлористый, глюкозу, глицерин, метабисульфит натрия, микробиологический агар и...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002681285
Дата охранного документа: 05.03.2019
29.05.2019
№219.017.62f0

Питательная среда плотная для культивирования возбудителя бруцеллёза

Изобретение относится к биотехнологии и микробиологии. Плотная питательная среда для культивирования возбудителя бруцеллеза содержит мясную воду двойной концентрации, пептон сухой ферментативный, сыворотку крови лошади нормальную для культивирования микоплазм на питательных средах жидкую,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002688335
Дата охранного документа: 21.05.2019
+ добавить свой РИД