Результат интеллектуальной деятельности: ЛЕКАРСТВЕННОЕ СРЕДСТВО И СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ПАТОЛОГИЧЕСКОГО СИНДРОМА

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для лечения и профилактики острых и хронических инфекционных заболеваний, преимущественно вирусной этиологии, а также для оказания иммуномодулирующего воздействия.

Из уровня техники известно использование антител для лечения патологических синдромов (SU 131508 А, А 61 К 39/00, 1984; SU 1730144 А1, С 12 N 7/00, 1992).

Известны также лекарственные препараты (сыворотки, иммуноглобулины) на основе антител, используемых в терапевтических дозах (например, см. Регистр лекарственных средств России, Энциклопедия лекарств, 7-е изд., 2000, стр. 358-359).

Однако использование данных препаратов может быть сопряжено с нежелательными побочными эффектами в связи с введением в организм значительных доз чужеродного белка.

Известен способ лечения патологического синдрома, на механизмы формирования которого оказывают влияние различные формы интерферона, путем введения последнего в организм (см., например, Клиническая иммунология и аллергология, под ред. Л.Йегера, М.: Медицина, 1990, т.3, с.479-482).

Изобретение направлено на создание эффективного препарата с иммунотропной активностью, преимущественно для лечения инфекционных заболеваний, в том числе вирусной этиологии, путем использования активированных форм антител.

Решение поставленной задачи обеспечивается тем, что лекарственное средство содержит активированную форму сверхмалых доз моноклональных, поликлональных или естественных антител к интерферону, приготовленную путем многократного последовательного разведения и внешнего воздействия, преимущественно по гомеопатической технологии.

При этом для получения антител используют человеческий или гетерологичный интерферон альфа, бета или гамма, в том числе рекомбинантный.

Предпочтительно использование смеси различных, преимущественно сотенных, гомеопатических разведений.

Способ лечения патологического синдрома, на механизмы формирования которого оказывают воздействие интерферон, заключается в том, что используют активированные формы сверхмалых доз антител к альфа, бета или гамма-интерферону, полученные путем многократного последовательного разведения и внешнего воздействия.

Полученное в соответствии с изобретением лекарственное средство представляет собой новый иммунотропный фармакологический препарат, который характеризуется выраженной специфической фармакологической активностью, отсутствием побочных эффектов при сохранении терапевтического действия, экологической чистотой и низкой себестоимостью. В отличие от неактивированных форм антител, применяемых в том числе в малых дозах, активированные по гомеопатической технологии (потенцированные) антитела к интерферону оказывают воздействие, не подавляющее активность эндогенного интерферона, а действуют чаще синергически (однонаправленно) с интерфероном, усиливая, в частности, индукцию различных форм эндогенного интерферона.

Лекарственный препарат приготовляют преимущественно следующим образом.

Рекомбинантный гамма-интерферон, экспрессируемый в культуре Escherihia coli, очищенный путем электрофореза и содержащий не менее 97% активной субстанции, используют в качестве иммуногена в гибридомной технологии для получения моноклональных антител. Полученные моноклональные антитела очищают методом аффинной хроматографии с белком А.

Методика получения моноклональных антител описана, например, в книге: Иммунологические методы/ под ред. Г.Фримеля, М.: Медицина, 1987, с.9-33.

Выделенные антитела к рекомбинантному гамма-интерферону человека последовательно многократно разводят и подвергают внешнему механическому воздействию до получения сверхмалых или малых доз, например, по гомеопатической технологии потенцирования (см. Гомеопатические лекарственные средства. Руководство по описанию и изготовлению, В.Швабе, Москва, 1967, с. 12-38). При этом производят равномерное уменьшение концентрации путем последовательного разведения 1 объемной части исходной субстанции (антител) в 9 объемных частях (для десятичного разведения D) или в 99 объемных частях (для сотенного разведения С) нейтрального растворителя с многократным вертикальным встряхиванием каждого полученного разведения и использованием преимущественно отдельных емкостей для каждого последующего разведения до получения требуемой дозы (потенции).

Внешнюю обработку в процессе уменьшения концентрации также можно осуществлять ультразвуком, электромагнитным или иным физическим воздействием.

Используют приготовленное таким образом лекарственное средство, преимущественно, в принятых в гомеопатической практике лекарственных формах и разведениях, в виде спиртовых или водных растворов или таблеток (гранул), полученных путем пропитывания до насыщения содержащегося в лекарственной форме наполнителя потенцированным раствором или непосредственным введением последнего в жидкую лекарственную форму.

Пример 1.

При изучении влияния антител к интерферону на гуморальный иммунный ответ производили иммунизацию мышей эритроцитами барана (тимусзависимый корпускулярный антиген). Затем в течение 5 дней мышам перорально вводили препарат, содержащий потенцированные по гомеопатическому методу поликлональные овечьи антитела к мышиному альфа-интерферону (а-ИФН) в смеси разведений С12+С30. В первый день 5-дневного курса мышам также вводили однократно внутрибрюшинно циклофосфан (1/2 максимальной переносимой дозы). Через 5 дней при оценке параметров гуморального иммунного ответа выявлено, что введение потенцированных антител к а-ИФН способствуют повышению функциональной активности антителообразующих клеток в селезенке и нарастанию титров гемагглютининов в сыворотке крови, особенно значимому на фоне иммуносупрессии. Таким образом, заявленный препарат стимулирует гуморальный иммунный ответ.

Пример 2.

При изучении влияния активированных форм сверхмалых доз антител к интерферону на выраженность реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) мышей подкожно иммунизировали эритроцитами барана (ЭБ), разрешающую дозу ЭБ вводили в подушечку задней лапы в конце 10-дневного курса перорального введения препарата, содержащего потенцированные по гомеопатическому методу моноклональные антитела (AT) к мышиному бета-интерферону (б-ИФН) в смеси разведении С12+С30+С200, в количестве 0,2 мл.

Параллельно в контрлатеральную лапу вводили физиологический раствор в том же объеме. Интенсивность реакции оценивали через 24 ч по индексу реакции (ИР), который вычисляли индивидуально для каждого животного по формуле:
ИР(%)=(Ро-Рк)/Ркх100,
где Ро - масса опытной лапы, Рк - масса контрольной лапы.

Полученные данные представлены в табл.1.

Из приведенных в табл. 1 данных следует, что AT к б-ИФН активизируют функцию Т-эффекторов, что выражается в усилении реакции гиперчувствительности замедленного типа в ответ на сенсибилизацию эритроцитами барана.

Пример 3.

При изучении действия активированных форм сверхмалых доз антител к интерферону на фагоцитарную активность нейтрофилов перитонеального экссудата оценивали фагоцитарную активность нейтрофилов через 24 ч после окончания 10-дневного курса подкожного введения естественных антител (AT) к гамма-интерферону (г-ИФН) в гомеопатическом разведении D60 в количестве 0,1 мл.

Фагоцитарную активность оценивали по способности этих клеток поглощать суточную культуру St. aureus, штамм 209 (концентрация взвеси микробов - 100 млн/мл). При этом учитывали процент нейтрофилов, поглотивших микробы (фагоцитарный индекс - ФИ) и среднее число стафилококков, поглощенное одной клеткой (фагоцитарное число - ФЧ).

Приведенные в табл.2 результаты этих опытов показывают, что AT к г-ИФН существенно стимулируют фагоцитоз (по сравнению с контрольной группой (иммунизация ЭБ) за счет увеличения доли нейтрофилов, способных поглощать стафилококки.

Пример 4.

Больная К., 62 лет, обратилась с жалобами на повторяющиеся приступы лихорадки, сопровождающейся высыпаниями на грудной клетке и болями по ходу межреберных нервов. Поставлен диагноз: "рецидивирующий опоясывающий герпес". Общепринятая терапия (противовирусные средства, анальгетики) не принесла стойкого результата. В результате ежедневного приема потенцированных моноклональных антител к гамма-интерферону человека С 1000 - по 1 таблетке 2 раза в день - на 3-й день лечения лихорадка и болевой синдром купированы. На 7-й день лечения высыпания практически исчезли. Больной рекомендован профилактический прием по 1 таблетке через день. В течение 1 года рецидивов герпеса не отмечено.

Пример 5.

Больной Ш., 5 лет, наблюдается по поводу рецидивирующих инфекций верхних дыхательных путей (болеет риноларинготрахеитом в течение 10 дней каждые 2 месяца). При оценке иммунного статуса выявлено снижение содержания в периферической крови CD4+ лимфоцитов, нейтрофильных лейкоцитов, гамма-интерферона. Больному назначены потенцированные поликлональные (иммунные) антитела к рекомбинантному гамма-интерферону человека в смеси разведении D24+C30+C200 - по 1 таблетке ежедневно. В течение четырех месяцев у ребенка отсутствуют рецидивы ОРЗ; со слов родителей, он стал более активным, восполнил дефицит веса. Повторная оценка иммунного статуса через 6 месяцев после начала лечения выявила нормализацию показателей клеточного и гуморального иммунитета.

Пример 6.

Больной П. , 34 лет, обратился с жалобами на ринит, боль в носоглотке, субфебрилитет. Поставлен диагноз: "ОРВИ". Интраназальный прием капель потенцированного водного раствора моноклональных антител к рекомбинантному человеческому гамма-интерферону С12 по 3 раза в день нормализовал самочувствие пациента через 2 суток. При повторном осмотре катаральных явлений не выявлено.

Пример 7.

Больной С., 32 лет, поступил на вторые сутки заболевания в инфекционное отделение с диагнозом "грипп, тяжелое течение". Впоследствии диагноз подтвержден вирусологически. При поступлении: состояние тяжелое, гипертермия до 41,6^oС, сознание спутанное, дыхание затрудненное, сухой кашель. При аускультации: в легких дыхание везикулярное. Назначено: моноклональные антитела к человеческому гамма-интерферону, смесь потенций С12+С30+С200, каждые 2 часа - по 1 мл водного раствора подкожно. В течение 6 часов температура тела снизилась до 37,4^oС, общее состояние стало удовлетворительным. В последующие три дня получал препарат 2 раза в сутки парентерально по 1 мл водного раствора. На четвертые сутки лечения: состояние удовлетворительное, температура 36,4^oС, отмечает общую слабость. Выписан в удовлетворительном состоянии на пятые сутки после поступления.

Пример 8.

Больной У., 27 лет. Обратился к урологу через месяц после начала заболевания с жалобами на неприятные ощущения, зуд, боль в уретре, частые позывы к мочеиспусканию и выделения слизистого характера. При детальном опросе также отмечает боли в голеностопных суставах и слизисто-гнойные выделения из глаз. Объективно: губки уретры гиперемированы, отечны, слипаются. При лабораторном исследовании отделяемого из уретры методом иммунофлуоресценции выявлена Chlamidia trachomatis. Назначено: смесь поликлональных антител к человеческому альфа- и гамма-интерферону в гомеопатическом разведении С 1000 - по 1 таблетке ежедневно в течение 2 недель. Через 5 дней после начала лечения больной отметил заметное уменьшение субъективных симптомов и выделений из уретры и глаз. По окончании курса лечения проведен повторный иммунофлуоресцентный анализ секрета простаты на присутствие Chlamidia trachomatis. Результат отрицательный. Рекомендован прием препарата через день в течение двух недель. При повторной явке жалоб не предъявляет, признаков переднего уретрита и конъюнктивита не выявлено.

Пример 9.

При изучении влияния сверхмалых доз антител к интерферону на гуморальный иммунный ответ производили иммунизацию мышей эритроцитами барана (тимусзависимый корпускулярный антиген). Затем в течение 5 дней мышам перорально вводили препарат, содержащий потенцированные по гомеопатическому методу естественные антитела к гамма-интерферону (г-ИФН) в смеси разведении С12+С30. Естественные антитела были выделены из пула сывороток пациентов, получавших гамма-интерферон длительное время в качестве средства для лечения вирусных инфекций. При выделении использован метод аффинной хроматографии (иммуносорбции) на колонках с сорбированным на твердую фазу (сефадекс) рекомбинантным гамма-интерфероном (по методу, описанному, например, в кн. Иммунологические методы. Под ред. Г.Фримеля. М.: Медицина, 1987, с.427-432). В первый день 5-дневного курса мышам также вводили однократно внутрибрюшинно циклофосфан (1/2 максимальной переносимой дозы). Через 5 дней при оценке параметров гуморального иммунного ответа выявлено, что введение потенцированных естественных антител к г-ИФН способствуют повышению функциональной активности антителообразующих клеток в селезенке и нарастанию титров гемагглютининов в сыворотке крови, особенно значимому на фоне иммуносупрессии. Таким образом, заявленный препарат, полученный на основе естественных антител, стимулирует гуморальный иммунный ответ.