×
19.06.2019
219.017.85cc

4-(4'-ГИДРОКСИБУТИЛ)-6-ФЕНИЛ-1,2,4-ТРИАЗОЛО[5,1-c][1,2,4]ТРИАЗИН-7-ОН

Вид РИД

Изобретение

Юридическая информация Свернуть Развернуть
Краткое описание РИД Свернуть Развернуть
Аннотация: Описывается 4-(4'-гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-он формулы (1), обладающий противовирусным действием, который может найти применение в медицине и сельском хозяйстве. 1 табл.
Реферат Свернуть Развернуть

1. Область техники, к которой относится изобретение.

Изобретение относится к области биологически активных соединений и касается 4-(4'-гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-она, обладающего противовирусным действием, предназначенного для лечения и профилактики инфекционных заболеваний человека и животных вирусной природы. Изобретение может быть использовано в лечебных учреждениях, научно-исследовательских лабораториях, а также в животноводстве и птицеводстве.

2. Уровень техники.

Актуальность проблемы противовирусной терапии в условиях мутации вирусов, выявления новых возбудителей опасных и медленных вирусных инфекций, вызывает потребность в новых эффективных противовирусных средствах. В настоящее время наиболее перспективной группой противовирусных препаратов, эффективных в отношении вирусов герпеса, гепатитов и проч. являются ациклические нуклеозиды - АЦИКЛОВИР, ГАНЦИКЛОВИР, ФАМЦИКЛОВИР и проч. (Машковский М.Д. Лекарственные средства: в 2-х т. 14-е изд. М.: Новая волна. 2000. Т.1, 2.; Регистр лекарственных средств России. Энциклопедия лекарств. Под ред. Г.Л.Вышковского. М.: ООО РЛС-2004. 2004. 1503 с.), являющиеся структурными аналогами природных нуклеозидов пуринового ряда и ингибиторами ферментов синтеза нуклеиновых кислот.

В то же время, имеются данные о противовирусном действии 6-нитро-1,2,4-триазоло[5,1-с]-1,2,4-триазин-7(4Н)-онов (Синтез и противовирусная активность 6-нитро-7-оксо-4,7-дигидроазоло [5,1-с][1,2,4]триазинов. В.Л.Русинов, Е.Н.Уломский, О.Н.Чупахин, М.М.Зубаиров, А.Б.Капустин, Н.И.Митин и др. / Химико-фармацевтический журнал. №9, 1990, с.41-44), являющихся структурными аналогами пуринов.

Данные о противовирусной активности ациклических нуклеозидов на основе азоло[5,1-с]-1,2,4-триазинов отсутствуют.

3. Сущность изобретения.

Сущность изобретения составляет 4-(4'-гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-он формулы (1),

4. Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретения.

4.1. Синтез 4-(4'-гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-c][1,2,4]триазин-7-она (1)

4-(4'-Гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-он (1) синтезируют в соответствии со следующей схемой (схема 1).

Исходным соединением для синтеза 4-(4'-гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-она (1) является 6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-он (3). Действием карбоната натрия на соединение (3) получают натриевую соль 6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-она (3), которую затем алкилируют 4-бромбутилацетатом в диметилформамиде (ДМФА) с образованием 4-(4'-ацетоксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-она (2). Обработка соединения (2) раствором метилата натрия в метаноле приводит к гидролизу ацетоксильной группы с образованием заявляемого соединения (1).

4.2. Биологическое действие 4-(4'-гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло|5,1-с][1,2,4]триазин-7-она (1)

Для исследования противовирусной активности 4-(4'-гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-она (1) использовался вирус простого герпеса 1-го типа (ВПГ-1) штамм ЕС, полученный из коллекции вирусов НИИ вирусологии им. Ивановского и культура клеток почки зеленой мартышки - Vero, полученная из Банка клеточных культур НИИ гриппа РАМН.

В качестве контрольного препарата использовали ацикловир в концентрации 50 мкг/мл, который полностью ингибировал развитие вирусного цитопатического действия (ЦПД) во всех разведениях на протяжении всего эксперимента.

Пример 1. Синтез 4-(4'-гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-она (1).

4-(4'-Ацетоксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-c][1,2,4]триазин-7-она (2). 6-Фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-он (3) 2,13 г (0,01 моль) обрабатывают раствором 1,1 (0,01 моль) г Na2СО3 в 7 мл воды. Образовавшуюся суспензию фильтруют, осадок соли (4) сушат. Сухую соль (4) растворяют в 10 мл ДМФА, добавляют 1,95 г (0,01 моль) 4-бромбутилацетата и выдерживают 3 ч при температуре 100°С. Реакционную массу охлаждают до комнатной температуры, добавляют 250 мл воды, выпавший осадок отфильтровывают, кристаллизуют из изопропилового спирта и сушат на воздухе. Выход 2,1 г (64%).

4-(4'-Ацетоксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-он (2) имеет следующие характеристики: ТПЛ 74°С; Rf=0,65 (этилацетат 100%), 1Н ЯМР спектр в ДМСО-d6 δ, м.д.: 1,69-1,80 (2Н, м, CH2), 1,96-2,10 (2Н, м, СН2), 1,97 (3Н, с, СОСН3), 4,06 (2Н, т, ОСН2), 4,46 (2Н, т, NCH2), 7,45-7,49 (3Н, м, C6H5), 8,00-8,10 (2Н, м, С6H5), 8,3 (1Н, с, 2-Н). Найдено: С - 58,68, Н - 5,12, N - 21,36%. Брутто-формула - С16Н17N5O3. Вычислено: С - 58,71, Н - 5,23, N - 21,39%.

4-(4'-Гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-c] [1,2,4]триазин-7-она (1). К раствору 0,14 г (0,006 моль) металлического натрия в 15 мл абсолютного метанола добавляют 2,1 г (0,006 моль) 4-(4'-ацетоксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-она (2). Реакционную массу кипятят 0,5 ч, охлаждают до комнатной температуры, добавляют ледяной уксусной кислоты до нейтральной реакции и упаривают в вакууме при 100°С. Остаток хроматографируют на силикагеле марки Kieselgel 60 с использованием этилацетата (100%) в качестве элюента и выделяют 4-(4'-гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с] [1,2,4] триазин-7-он (1). Выход 1,27 г (70%).

4-(4'-Гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-он (1) имеет следующие характеристики: ТПЛ 84°C; Rf=0,25 (этилацетат 100%), 1Н ЯМР спектр в ДМСО-d6 δ, м.д.: 1,50-1,61 (2Н, м, СН2), 1,96-2,07 (2Н, м, CH2), 3,46 (2Н, к, ОСН2), 4,19 (1Н, т, ОН), 4,44 (2Н, т, NCH2), 7,44-7,47 (3Н, м, С6Н5), 8,00-8,10 (2Н, м, С6H5), 8,25 (1Н, с, 2-Н). Найдено: С - 58,94, Н - 5,33, N - 24,57%. Брутто-формула - С14Н15N5O2. Вычислено: С - 58,94, Н - 5,30, N - 24,55.

Заявляемое соединение (1) представляет собой бесцветное кристаллическое вещество, растворимое в ацетоне, хлороформе, этилацетате, диметилформамиде, диметилсульфоксиде, малорастворимое в воде, метаноле, этаноле, нерастворимое в бензоле и большинстве апротонных растворителей.

Пример 2. Определение токсичности 4-(4'-гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-она (1).

Определение токсичности 4-(4'-гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-она (1) проводили на культуре клеток MDCK в культуре, которая определялась по состоянию клеточного монослоя в инвертированном микроскопе после 3-суточной инкубации с препаратом. В результате была определена МТД (минимальная токсическая дозы) 4-(4'-гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-она (1). Для исследования противовирусной активности 4-(4'-гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-она (1) использовали половинную концентрацию от МТД.

Пример 3. Определение противовирусной активности 4-(4'-гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-она (1).

1. Клетки Vero и 4-(4'-гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-он (1) культивировали в 96-луночных планшетах для клеточных культур при 37°С в атмосфере 5% CO2 до состояния монослоя. Вещество в удвоенной концентрации в объеме 100 мкл/лунка было добавлено к клеткам, через 20 минут был внесен ВПГ-1 в разведения 10-3, 10-4, 10-5, 10-6 в том же объеме. Клетки инкубировали с вирусом 72 часа, после чего учитывали развитие вирусного ЦПД.

2. По истечении 120 часов количество живых клеток было подсчитано при помощи микротетразолиевого теста (МТТ), характеризующего митохондриальную активность клеток. С этой целью клетки дважды отмывали фосфатно-солевым буфером и в лунки добавляли по 100 мкл раствора (0,2 мг/мл) 3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифинилтетразолия бромида в 0,15М NaCl. Клетки инкубировали при 37°С в атмосфере 5% СО2 в течение 2 часов до появления характерного фиолетового осадка и затем трижды отмывали фосфатно-солевым буфером. Осадок растворяли в ДМСО (10 мкл/лунка), после чего измеряли оптическую плотность с помощью спектрофотометра при длине волны λ=535 нм.

Наблюдение развития цитопатического действия ВПГ-1 показало, что через 72 часа во всех планшетах в контроле вируса в разведении 10-3 более 90% клеток имели характерные изменения, в разведении 10-4 около 60% клеток, в разведении 10-5 - менее 20% и в разведении 10-6 цитопатическое действие вируса не наблюдалось.

Через 120 часов наблюдалась массовая гибель клеток в контроле вируса, что позволило провести МТТ-тест.

Во всех планшетах с добавлением заявляемого соединения (4-(4'-гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-она (1)) наблюдалось снижение цитапатогенного действия ВПГ-1. Так, в эксперименте в разведении вируса в 10-3 75% клеток имели характерные изменения, разведение 10-4 - 38%, разведение 10-5 - 20% (таблица 1).

Таблица 1
Результаты испытаний противовирусной активности 4-(4'-гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло|5,1-с]{1,2,4]триазин-7-он в отношении вируса простого герпеса. Среднее значения оптической плотности (интенсивности клеточного дыхания) по результатам МТТ-теста.
ПрепаратКонцентрация препарата, мкг/млТитр вируса, lg (ТЦД50)/мл
10-310-410-510-6
4-(4'-гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-он300,1240,2520,2840,287
Ацикловир500,3070,3150,3160,303
Контроль вируса0,0440,0750,1520,343
Контроль клеток0,347

4-(4'-Гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-он444500000009.tiftifdrawing43
Источник поступления информации: Роспатент

Showing 1-10 of 118 items.
20.04.2013
№216.012.35be

Селективный противотуберкулезный агент, представляющий собой 3-гидразоно-6-(3,5-диметилпиразол-1-ил)- 1,2,4,5-тетразин и способ его получения

Изобретение относится к селективному противотуберкулезному агенту, представляющему собой 3-гидразоно-6-(3,5-диметилпиразол-1-ил)-1,2,4,5-тетразин общей формулы А где R=атом водорода или метил; R=метил, арил, выбранный из возможно замещенного фенила, гетерил, выбранный из фурила, пиридила,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002479311
Дата охранного документа: 20.04.2013
27.04.2013
№216.012.3a74

Способ флуоресцентного мечения кднк вируса гриппа типа а

Изобретение относится к области молекулярной биологии и вирусологии. Способ предусматривает проведение реакции мультисегментной обратной транскрипции (М-ОТ) вирусной РНК, совмещенной с реакцией амплификации кДНК. Реакции проходят в один этап при помощи одной пары универсальных праймеров,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002480525
Дата охранного документа: 27.04.2013
27.08.2013
№216.012.6465

Применение моноклональных антител для идентификации ямагатской или викторианской эволюционных линий вируса гриппа типа в, штамм гибридомы 4н7 для получения моноклональных антител, предназначенных для определения вирусов гриппа в ямагатской ветви, штамм гибридомы в/4н1 для получения моноклональных антител, предназначенных для определения вирусов гриппа в викторианской ветви

Изобретение раскрывает применение моноклональных антител (МКА), продуцируемых гибридомами В/4Н1 и 4Н7, направленных к изменчивым детерминантам в составе белков вируса гриппа В. Штаммы гибридом В/4Н1 и 4Н7 депонированы в РККК(П) под номерами 719 Д и 720 Д соответственно. Две современные...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002491338
Дата охранного документа: 27.08.2013
10.09.2013
№216.012.67a3

Противовирусный пептид, подавляющий репликацию вируса гриппа

Изобретение относится к области молекулярной биологии, фармакологии и медицины. Предложен выделенный из олигопептида РВ1 (531-540) олигопептид KNNMINNDLG, активный как против гриппа человека H1N1 (EC=28,6 мкг/мл), так и против гриппа птиц H5N2 (EC=35,3 мкг/мл). Изобретение может быть...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002492178
Дата охранного документа: 10.09.2013
10.11.2013
№216.012.7c54

Фармацевтическая композиция, обладающая противомикробным действием, и способ ее получения

Изобретение относится к области медицины и химико-фармацевтической промышленности, а именно к фармацевтической композиции левофлоксацина. Композиция обладает лучшим сочетанием биодоступности и внешним видом таблеток, в том числе при хранении, содержащей в качестве вспомогательных веществ...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002497501
Дата охранного документа: 10.11.2013
10.01.2014
№216.012.944b

N-нитрозо-n-[(2-хлорэтил)карбамоил]-l-орнитин

Изобретение относится к области биологически активных соединений, конкретно к N-нитрозо-N-[(2-хлорэтил)карбамоил]-L-орнитину формулы 1 , обладающему противоопухолевым действием. Данное соединение может найти применение для лечения онкологических заболеваний. 1 ил., 2 пр.
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002503657
Дата охранного документа: 10.01.2014
10.04.2014
№216.012.b293

Штамм вируса гриппа а/гонконг/1/68/162/35 (h3n2)-универсальный донор внутренних генов для реассортантов и реассортантные штаммы а/спб/гк/09 (h1n1) и а/нк/astana/6:2/2010 (h5n1), полученные на его основе

Изобретение относится к области медицинской биотехнологии и касается штаммов вируса гриппа. Представлен штамм вируса гриппа A/Гонконг/1/68/162/35 (H3N2), депонированный в Государственную коллекцию вирусов научно-исследовательского института вирусологии им. Д.И.Ивановского РАМН под №2442,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002511431
Дата охранного документа: 10.04.2014
27.04.2014
№216.012.bc85

Липосомальная композиция и способ ее получения

Заявляемое изобретение относится к биотехнологии и химико-фармацевтической промышленности, а именно представляет собой липосомальную фармацевтическую композицию, осуществляющую направленную транспортировку физиологически активных веществ с целью повышения терапевтической активности...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002514000
Дата охранного документа: 27.04.2014
20.05.2014
№216.012.c7e9

Конъюгаты 2-метилтио-6-нитро-1,2,4-триазоло[5,1-c]-1,2,4-триазин-7(4i')-она с глутатионом и другими пептидами, обладающие противовирусной активностью

Изобретение относится к области биологически активных соединений и может быть использовано в синтезе противовирусных препаратов. Подробнее изобретение раскрывает конъюгат 2-метилтио-6-(глутатион-8-ил)-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-она с пептидом общей формулы (2), где пептид...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002516936
Дата охранного документа: 20.05.2014
10.06.2014
№216.012.d0c7

Селективные противотуберкулезные агенты, представляющие собой 3-аминозамещенные 6-(3,5-диметилпиразол-1-ил)-1,2,4,5-тетразины

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, в частности, представляет собой 3-аминозамещенные 6-(3,5-диметилпиразол-1-ил)-1,2,4,5-тетразины, применение которых в качестве противотуберкулезных препаратов позволяет повысить активность и специфичность антимикобактериального действия,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002519218
Дата охранного документа: 10.06.2014
+ добавить свой РИД