Результат интеллектуальной деятельности: СПОСОБ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ РИНОПНЕВМОНИИ И САЛЬМОНЕЛЛЕЗНОГО АБОРТА ЛОШАДЕЙ АССОЦИИРОВАННОЙ ВАКЦИНОЙ В УСЛОВИЯХ ТАБУННОГО СОДЕРЖАНИЯ

Изобретение относится к области ветеринарии, в частности к способам профилактики инфекционных болезней лошадей.

Аналоги изобретения. Известны способы профилактики сальмонеллезного аборта лошадей, которые предусматривают иммунизацию лошадей вакциной из штамма бактерий Sal. abortus equi БН-12 с добавлением полирибоната или культуру штамма бактерий Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП (патенты РФ на изобретение №2178713, опубл. 27.01.2002 г., бюл. №3 и №2218925, опубл. 20.12.2003 г., бюл. №35). Однако эти способы не используются для профилактики ринопневмонии. Вакцины вводятся отдельно от других профилактических препаратов (например, от вакцины против ринопневмонии).

Известна живая вакцина против ринопневмонии лошадей, сухая культуральная из штаммов СВ/69 (Инструкция по применению утверждена Россельхознадзором 20.12.2006 г.). Однако инструкция по использованию указанной вирус-вакцины предусматривает двухкратное введение, что вызывает определенные трудности при ее применении в табунном коневодстве. Также, как показали предварительные исследования, нежелательно применение живых вакцин в экстремальных условиях табунного содержания вследствие их повышенной реактогенности.

Известен способ специфической профилактики ринопневмонии и сальмонеллезного аборта лошадей, включающий одновременное введение в разные места инактивированной вакцины против сальмонеллезного аборта из штамма бактерий Sal. abortus equi БН-12 и живой вирус-вакцины против ринопневмонии лошадей из штамма вируса СВ/69 (Петрова С.Г. Иммунопрофилактика абортов лошадей сальмонеллезной и ринопневмонидной этиологии в условиях Якутии. Автореф. диссертац. на соиск. уч. степ. канд. вет. наук, Якутск, 2006).

Однако данный способ предусматривает введение двух разных вакцин в разные места. Для профилактики ринопневмонии используется живая, а не инактивированная вакцина. Следовательно, способ является малоэффективным в условиях табунного содержания лошадей.

Вышеназванные вакцины вводятся отдельно в разные места, что значительно усложняет процесс иммунизации и повышает его трудоемкость.

В основу изобретения положена задача разработки специфической профилактики сальмонеллезного аборта и ринопневмонии, ассоциированной инактивированной вакциной.

Технический результат изобретения - способ специфической профилактики сальмонеллезного аборта и ринопневмонии ассоциированной инактивированной вакциной. Для изготовления ассоциированной вакцины используют равные части инактивированной вакцины из штамма Sal. abortus equi БН-12 и инактивированной вакцины из штамма СВ/69. К вакцине добавляют культуральную жидкость штамма бактерий Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП, которая повышает иммуногенность вакцины и иммунобиологическую реактивность организма. Введение ассоциированной вакцины с культуральной жидкостью штамма бактерий Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП вызывает иммунитет высокой напряженности не менее чем у 77,7% вакцинированных лабораторных животных и обеспечивает получение высоких деловых выходов жеребят (до 83%).

В качестве компонента ассоциированной вакцины используют штамм Sal. abortus equi БН-12, депонированный в коллекции микроорганизмов Всероссийского государственного научно-исследовательского института контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов (ВГНКИ) (справка о депонировании штамма от 20 января 1997 г., №63/27). Штамм может быть получен в лаборатории по разработке микробных препаратов Якутского НИИ сельского хозяйства РАСХН и ВГНКИ.

В качестве другого компонента ассоциированной вакцины применяют штамм вируса ринопневмонии СВ/69.

Для повышения эффективности ассоциированной вакцины и повышения иммунобиологической реактивности организма к вакцине в качестве иммуномодулятора добавляют культуральную жидкость бульонной культуры штамма бактерий Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП. Штамм бактерий Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП выделен из мерзлотно-переходной, средне-суглинистой почвы Якутии. Депонирован в коллекции микроорганизмов Всероссийского государственного научно-исследовательского института контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов (ВГНКИ). Справки о депонировании выданы 17 октября 1994 г. за №002/9 и 6 февраля 2001 г. за №181/15. Получен патент РФ №2105810 «Штамм бактерий Bacillus subtilis, используемый для обеззараживания птичьего помета и навоза от патогенных микроорганизмов» от 27 февраля 1998 г. Лабораторными опытами подтверждена способность штамма бактерий Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП стимулировать иммунологическую реактивность организма.

Штамм бактерий Sal. abortus equi БН-12 выращивают в мясопептопном бульоне до накопления 8 млрд микробных клеток в 1 мл. Бактериальную массу инактивируют формалином в течение 72 часов, затем добавляют гель гидроокиси алюминия до 6% концентрации.

Штамм СВ/69 культивируют в перичных культурах (или субкультуре) клеток почки поросенка, теленка, кролика или перевиваемых, чувствительных к вирусу культурах ПТ, СПЭВ и др.) в течение 48-72 часов. Титр вируса в культуральной жидклсти до его инактивации формальдегидом должен составлять не менее 7,0-7,5 lg_50/мл.

Затем к 2 мл ассоциированной вакцины, состоящей с 1 мл инактивированной вакцины против сальмонеллезного аборта и 1 мл инактивированной вакцины против ринопневмонии, добавляют 1 мл культуральной жидкости штамма бактерий Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП.

Штамм бактерий Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП выращивают в мясопептонном агаре pH 7,0-7,2 в течение 5-7 суток при 37°С, затем суспензируют в физиологическом растворе хлористого натрия в концентрации 1 млрд КОЕ в 1 мл. Фильтруют через миллипоровые фильтры.

Для определения напряженности иммунитета отбирают 36 голов белых мышей BALB/c в возрасте 10-40 суток массой 5-7 г. Первую группу (9 голов) иммунизируют однократно ассоциированной вакциной с культуральной жидкостью штамма бактерий Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП, вторую группу (8 голов) вакцинируют двукратно с интервалом 12 дней, а третью группу (19 голов) не вакцинируют и в дальнейшем используют в качестве отрицательного и положительного контролей. Вакцину вводят подкожно в область спины в дозе 0,3 мл.

Через 14 суток после однократной и через 12 суток после повторной иммунизации опытных и контрольных белых мышей заражают интрацеребрально адаптированным нейротропным штаммом ПП1/1 вируса ринопневмонии лошадей в дозе 0,02·6,0 lg ТСД₅₀/мл. Эффективность иммунизации определяют по количеству мышей, устойчивых к заболеваемости и летальности. В течение 10 дней наблюдения за животными защитный эффект от экспериментального заражения вирусом ринопневмонии при однократном введении вакцины составляет 77,7%, а при двухкратном - 87,7%.

Отбирают 54 головы жеребых кобыл 8-12-летнего возраста. Первую группу (16 голов) иммунизируют вирус-вакциной против ринопневмонии из штамма СВ/69 в дозе 2 мл, вторую группу (17 голов) иммунизируют инактивированной ассоциированной вакциной против ринопневмонии и сальмонеллезного аборта с культуральной жидкостью из штамма бактерий Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП в дозе 3 мл, а третью группу (21 голова) не вакцинируют и используют в качестве контроля.

Вакцины вводят внутримышечно в область шеи.

Иммунизация жеребых кобыл инактивированной ассоциированной вакциной против ринопневмонии и сальмонеллезного аборта с культуральной жидкостью штамма бактерий Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП вызывает выработку специфических гемагглютинизирующих антител в высоких титрах (через 3 месяца 769,1±162,7), стимулирует иммунобиологическую реактивность организма (повышение фагоцитарной активности, содержание гамма-глобулиновой фракции белка, лимфоцитов). В результате в группе кобыл, иммунизированных ассоциированной вакциной, деловой выход жеребят повышается на 15,8% по сравнению с контрольной группой.

В целях установления противоэпизоотической эффективности в неблагополучном по ринопневмонии и сальмонеллезному аборту кобыл табуне отбирают 166 голов жеребых кобыл. Первую группу (114 голов) иммунизируют ассоциированной вакциной с культуральной жидкостью штамма бактерий Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП, а вторую группу (52 головы) не вакцинируют, оставляют в качестве контроля. Вакцину вводят внутримышечно в дозе 3 мл в ноябре месяце (период 4-5-месячной жеребости).

В конце срока наблюдения (в течение 6 месяцев) деловой выход жеребят в группе кобыл, иммунизированных ассоциированной вакциной, повышается до 83,3% (контроль - 70%).

Таким образом, иммунизация инактивированной ассоциированной вакциной из штамма Sal. abortus equi БН-12 и штамма СВ/69 с культуральной жидкостью штамма бактерий Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП вызывает иммунитет высокой напряженности и может быть использована в качестве способа специфической профилактики ринопневмонии и сальмонеллезного аборта кобыл.