Результат интеллектуальной деятельности: Штамм лактобактерий Enterococcus mundtii ВКПМ В-12673 - продуцент молочной кислоты и антибиотических веществ

Изобретение относится к биотехнологии, в частности может быть использовано в пищевой промышленности.

Известен штамм Enterococcus mundtii ВКПМ В-11828 (патент №2599430 от 2016 г.), полученный на доступных питательных средах и применяемый в качестве бактериальной закваски при приготовлении молочнокислых продуктов, характеризуемый высокой скоростью сквашивания молока.

Однако данный штамм обладает более низкой антагонистической активностью, по сравнению с предлагаемым штаммом.

Техническое решение - выделение высокопродуктивного нового местного штамма лактобактерий путем селекции.

Технический результат - получение чистой культуры молочнокислого микроорганизма Enterococcus mundtii, обладающего высокими технологическими и антагонистическими свойствами.

Для достижения данной цели использован штамм лактобактерий Enterococcus mundtii ВКПМ В-12673, выделенный с поверхности травы клевера лугового из высокогорья над селением Кобань в РСО-Алания путем многократных перевивок на питательных средах.

Идентификацию штамма проводили по методике Банниковой Л.А. и методом ПЦР-диагностики.

Этапы и результаты генетических исследований.

а) Секвенирование участков последовательности, кодирующей ген 16S рРНК.

б) Анализ последовательностей гена, кодирующего 16S рРНК, построение деревьев родства.

Первичный скрининг по базе данных GenBank и RDP-II показал, что исследуемый штамм принадлежит к следующим систематическим группам Bacteria; Firmicutes; Bacilli; Lactobacillales; Enterococcaceae; Enterococcus.

По данным анализа было построено филогенетическое дерево с гомологичными штаммами.

По результатам проведенного анализа секвенсов вариабельных участков генов, кодирующих 16S рРНК и анализа филогенетического родства, построенного с использованием типовых штаммов близкородственных бактерий тестируемый штамм наиболее близок к виду Enterococcus mundtii (99%) и депонирован во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов (ВКПМ) ГосНИИГенетика под номером В-12673.

Свойства штамма Enterococcus mundtii ВКПМ В-12673:

- грамположительные неподвижные кокки, расположенные попарно и короткими цепочками;

- эндоспоры не образуются.

- на поверхности агаризованного гидролизата молока и MRS-arapa через 24 часа при температуре 37°С образует точечные колонии.

- скорость сквашивания молока - 8-9 часов.

- предел кислотообразования - 97°Т.

- продукты, синтезируемый штаммом - молочная кислота и антибиотические вещества.

- диаметр зоны подавления роста Staphylococcus aureus - 26 мм;

- диаметр зоны подавления роста Escherichia coli - 29 мм.

Определение антибиотической активности штамма Enterococcus mundtii ВКПМ В-12673 проводили на плотной питательной среде (МПА) методом диффузии в агар.

Способ, условия и состав сред для длительного хранения штамма - лиофилизация; хранение при температуре 4-6°С; питательные среды: MRS; Rogosa et. al.; молоко с мелом; молоко с дрожжевым автолизатом, глюкозой, лакмусом, печеночным экстрактом и СаСО₃.

Способ, условия и состав сред для размножения штамма - при температуре 37°С - среды: MRS; обезжиренное молоко, несоленая подсырная молочная сыворотка с содержанием не менее 4,0% сахара.

Оптимальные условия и состав среды для ферментации - температура 37°С; среды: MRS, несоленая подсырная молочная сыворотка с содержанием не менее 4,0% сахара; молоко сельскохозяйственных животных.

Предлагаемый новый штамм Enterococcus mundtii ВКПМ В-12673, выделенный с поверхности клевера лугового, произрастающего в высокогорье над селением Кобань в РСО-Алания, хорошо приспособлен к местным условиям. Неприхотлив в культивировании и хранении, обладает низкой предельной кислотностью и средней скоростью свертывания молока, что позволяет повысить экономическую эффективность при производстве (за счет увеличения срока годности готовой продукции).

Штамм проявляет высокую антагонистическую способность по отношению к условно-патогенной и патогенной микрофлоре.

Предлагаемый новый штамм лактобактерий Enterococcus mundtii ВКПМ В-12673 обладает высокой биологической активностью и является основой для получения пробиотической закваски.