Результат интеллектуальной деятельности: ПРЕПАРАТ НА ОСНОВЕ ГРИБА PLEUROTUS 1137, ВЛИЯЮЩИЙ НА МУЖСКУЮ РЕПРОДУКТИВНУЮ ФУНКЦИЮ

Изобретение относится к медицине и касается применения лекарственных препаратов и биологически-активных добавок к пище на основе грибных продуцентов, влияющих на мужскую репродуктивную функцию.

Известно, что в настоящее время частота бесплодных браков в Российской Федерации колеблется от 10 до 19% в различных регионах, что приближается к критическому уровню воспроизводства населения. На долю мужского бесплодия приходится до 50% в структуре бесплодных браков. Мужской фактор стал преобладающим в последние 10 лет. В большинстве случаев мужское бесплодие связано со снижением фертильных характеристик спермы. При этом значительное место в структуре занимает идиопатическое бесплодие (25-50%), лечение которого является нерешенной проблемой.

В основе патогенеза мужского бесплодия преобладает нарушение репродуктивной функции, выражаемой различными видами патоспермии. Современные диагностические методы позволяют выделить ту или иную форму данной патологии.

Для стимуляции структурно-функционального состояния половых клеток у мужчин репродуктивного возраста используют ряд гормональных препаратов: ХГТ (хорионический гонадотропин), модификации тестостерона, антиэстрогены. Параллельно используют витамины, микроэлементы, антиоксиданты. [Божедомов В.А., Николаева М.А., Теодорович О.В. Применение комплекса карнитинов, фруктозы и лимонной кислоты нормализует акросомальную реакцию сперматозоидов у мужчин и бесплодных пар. / Сб. «Спермактин. Клинические исследования». М.: Изд. ЗАО «Фармамед», 2005, 18 с.]

Однако этот набор препаратов весьма ограничен и часто неэффективен, особенно при идиопатической патоспермии.

В настоящее время из выше перечисленного ряда препаратов в клинической практике наиболее широко используются препараты селена и карнитина: например, селен актив, селцинк и др.; спермактин [Тутельян В.А., Князев В.А. «Селен в организме человека». М.: Изд. РАМН, 2002, 220 с. Molecular identification of a novel carnitine transporter specific to human testis. - J. Biol. Chem. 2002, 277(39). - Enomoto A., Wempe M.F. et al.].

Карнитины являются сильными антиоксидантами и обеспечивают устойчивость сперматозоидов к пероксидазам и свободным радикалам.

Селен входит в состав различных ферментов простаты. Он обнаружен в селенопротеинах спермы. Основное его действие как компонента глутатионпероксидазы нейтрализация избытка свободных радикалов в эякуляте.

Рассмотренные два препарата используют в андрологической и репродуктивной практике. Однако применение этих препаратов дает незначительный довольно неустойчивый эффект повышения концентрации и подвижности сперматозоидов.

При применении спермактина требуется длительный курс лечения (несколько месяцев) с большими дозами (до 3 г) его приема в сутки. Кроме того, длительное применение такого препарата требует больших финансовых затрат.

На практике вышеперечисленные препараты чаще всего используют при комбинированной терапии.

Индукция сперматогенеза в условиях неясности этиологических факторов, приведших к данной патологии, во многом эмпирична и интуитивна. Поэтому поиск и применение нового препарата, имеющего доказательную экспериментальную и клиническую базу в различных областях медицины и определенный механизм действия, является актуальной задачей.

Одной из перспективных групп растений, чьи свойства в настоящее время изучаются достаточно полно, являются высшие базидиальные грибы.

Исследованием лечебных свойств высших базидиальных грибов и практическим их применением в области медицины занимаются ученые ряда стран на протяжении последних 50 лет.

Среди метаболитов высших грибов выделены и идентифицированы вещества из шляпочных грибов, которые являются иммуномодуляторами и проявляют существенные противоопухолевые, кардиоваскулярные, противовирусные, антибактериальные, противопаразитарные, гепатозащитные и противодиабетические свойства / Материалы IV Международной конференции «Наука и практика грибоводства» (М. Межрегиональная Ассоциация Грибоводов) 1997 г.; Перспективы использования в медицине веществ, образуемых базидиальными грибами. Обзор (International Journal of Medicinal Mushrooms, vol 3, 31-62, 1999)/.

Однако несмотря на большое число установленных лечебных эффектов базидиомицетов, сведения в литературе о применении существующих медицинских препаратов на основе высших базидиальных грибов, в практике медицины для профилактики и лечения патогенеза мужского бесплодия при нарушении репродуктивной функции, выражаемой различными видами патоспермии, в частности идиопатической патоспермии, отсутствуют.

Именно поэтому в настоящее время активно разрабатываются подходы к возможным применениям существующих медицинских препаратов и БАД к пище на основе высших базидиальных грибов, производимых зарубежными и отечественными фармацевтическими предприятиями.

Известен препарат, влияющий на тканевой обмен, и применение штамма гриба Pleurotus 1137 для его получения (патент РФ 2192873, кл. А61К 35/70, 2001 г.), используемый в биотехнологии и медицине при производстве и применении медицинских препаратов и биологически активных добавок на основе грибных продуцентов.

Согласно описанию и формуле этого изобретения известный препарат обладает противоопухолевой активностью и способностью модулировать проявление гематологической токсичности цитостатиков. Препарат производят путем глубинного культивирования гриба Pleurotus ostreatus 1137 (ВКПМ, F-819) с последующим разделением мицелия и культуральной жидкости и выделением из мицелия экстракцией этанолом при кислом или нейтральном значениях рН среды биологически активных веществ с антимикробной активностью, содержащих аминокислоты (глицин, аланин, треонин, серин, лейцин) и углеводы (глюкозу, глюкозамин, арабинозу, ксилозу).

Препарат выполнен в виде обезвоженных гранул или таблеток или в виде гелеобразного сиропа.

Штамм гриба Pleurotus ostreatus 1137 (ВКПМ, F-819) применяется в качестве продуцента физиологически активных веществ с противоопухолевой активностью.

Кроме того, препарат проявляет антимикробную активность в отношении как к грамположительным, так и к грамотрицательным бактериям.

На основе гриба Pleurotus ostreatus 1137 (ВКПМ, F-819) получен препарат, обладающий широким спектром лечебно-профилактического действия, в т.ч. и антиоксидантной активностью.

Однако, как препарат, влияющий на мужскую репродуктивную функцию согласно изобретению, известный препарат не применяется.

Задачей настоящего изобретения является обоснование применения препарата на основе биологически активных веществ гриба Pleurotus ostreatus 1137 (ВКПМ, F-819) по новому назначению, подтверждающему возможность реализации известным препаратом лечения мужского бесплодия, связанного со снижением фертильных характеристик спермы.

Технический результат состоит в повышении эффекта стимуляции структурно-функционального состояния половых клеток, который приводит к снижению андрогенодефицита у мужчин репродуктивного возраста при нарушении функциональных характеристик эякулята, в частности при идиопатической патоспермии за счет применения известного препарата по новому назначению.

Результат достигается применением биологически активных веществ, выделенных из мицелия гриба Pleurotus ostreatus, штамма 1137 (ВКПМ, F-819), в качестве препарата, повышающего мужскую репродуктивную функцию. Препарат выполнен в виде сгущенного экстракта (геля) или в виде сиропа.

Готовый продукт выпускается в виде 2-х форм.

а. Биологически активная добавка к пище «Экстракт мицелия вешенки «ЭМВ» по ТУ 9317-01-87552538-08 (свидетельство о государственной регистрации №77.99.23.3.У.11397.12.09 от 14.12.2009 г.).

Экстракт мицелия вешенки «ЭМВ» производится в виде сгущенного экстракта (геля) и представляет собой вязкий однородный концентрат, полученный из мицелия вешенки (штамм 1137, ВКПМ, F-819), выращенного в регулируемых асептических условиях методом глубинного культивирования на жидкой питательной среде, содержащей растительное сырье.

б. Биологически активная добавка к пище «Экстракт мицелия вешенки «ЭМВ» (сироп) по ТУ 9317-02-87552538-08 (свидетельство о государственной регистрации №77.99.23.3.У.11398.12.09 от 14.12.2009 г.).

«Экстракт мицелия вешенки «ЭМВ» (сироп) производится в виде смеси сгущенного экстракта (геля) мицелия вешенки (штамм 1137, ВКПМ, F-819) и сиропа фруктозы, лимонной кислоты, бензоата натрия, дигидроквертецина и воды.

Гриб Pleurotus ostreatus 1137 (ВКПМ, F-819) применяют для получения препарата, влияющего на мужскую репродуктивную функцию.

Штамм культуры Pleurotus ostreatus 1137 (ВКПМ, F-819) хранится во Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов, Гос. НИИгенетика под регистрационным номером ВКПМ, F-819.

Задача медико-биологических исследований и клинических испытаний препарата состояла в получении данных, подтверждающих влияние «Экстракта мицелия вешенки» («ЭМВ») в виде геля и сиропа на мужскую репродуктивную функцию.

Для решения вышеуказанной задачи проведены:

- эксперименты по воздействию in vitro растворов геля и сиропа «ЭМВ» на сперматозоиды человека;

- клинические испытания применения «ЭМВ» в виде сиропа как препарата, влияющего на мужскую репродуктивную функцию.

Проведение экспериментальных и клинических исследований применения препарата «ЭМВ» в виде геля и сиропа осуществлялись на базе ФГУ «НИИ урологии Росмедтехнологий» (г.Москва) и Института физико-химической биологии имени A.M.Белозерского, МГУ (г.Москва).

Для поведения медико-биологических исследований «ЭМВ» в виде геля или в виде сиропа на уровне in vitro экстракт разводили в дистиллированной воде до концентрации 30 и 60 мкг/мл и добавляли в эякулят в соотношении 1:1. В световом микроскопе определяли подвижность сперматозоидов, их жизнеспособность и морфологию через 1, 3 и 24 часа при комнатной температуре.

Исследованию подвергнуты 15 образцов эякулята с разной степенью подвижности.

В ходе проведения клинических испытаний «ЭМВ» в виде сиропа принимали 20 пациентов - мужчин репродуктивного возраста со сниженными фертильными характеристиками спермы.

В соответствии с Инструкцией препарат принимали по 8 мл сиропа, 1 раз в сутки за час до приема пищи, предварительно растворив его в 100 мл кипяченой воды, охлажденной до комнатной температуры.

В результате проведения медико-биологических исследований препарата на уровне in vitro установлено следующее.

В серии опытов с «ЭМВ» в виде геля, приготовленном в концентрации 50 мкг/мл, получены следующие результаты. Через 3 часа в образцах эякулята с гелем общая подвижность сперматозоидов составила 107% по отношению к исходному уровню 100%, в контрольных образцах общая подвижность существенно не изменялась. Через 24 часа общая подвижность в опыте сохранена на уровне 50%, в контроле - 40%. Активная подвижность сперматозоидов в опыте оставалась в пределах 60%, в контроле - не выше 40%. В опытных и контрольных образцах эякулята жизнеспособность и морфология сперматозоидов не претерпевали значительных изменений в течение 24 часов.

В серии опытов с «ЭМВ» в виде сиропа через 1 час не происходило изменений выделенных параметров. Но к 3-му часу обнаружено незначительное снижение общей подвижности сперматозоидов в контрольных образцах до 86% по отношению к 100% исходного уровня. В образцах эякулята, содержащих 30 мкг/мл сиропа «ЭМВ», подвижность снизилась до 92%, а в эякуляте с концентрацией 60 мкг/мл подвижность повысилась до 104%, при этом активная подвижность сперматозоидов повысилась до 145% по отношению к исходным 100%. Через 24 часа общая подвижность сперматозоидов в образцах с раствором сиропа «ЭМВ» в 2-х концентрациях сохранялась на уровне 56%, а в контрольных - 36% по отношению к исходным 100%.

Результаты клинических испытаний применения «ЭМВ» в виде сиропа мужчинами репродуктивного возраста со сниженными фертильными характеристиками спермы (таблица) подтверждает эффективность применения препарата «ЭМВ», полученную на этапе медико-биологических исследований.

Кроме того, в ходе клинических испытаний было проведено электронно-микроскопическое исследование по определению влияния препарата «ЭМВ» в виде сиропа на нормализацию астенотератозооспермии у больного.

До применения препарата «ЭМВ» в виде сиропа по показателям ультраструктурного исследования у больного в 87% сперматозоидов был выявлен недостаточно конденсированный «незрелый» хроматин. Установлено по сравнению с нормой сниженное количество интактных головок (с нормальным строением хроматина и акросомы), равное 12%. У фертильных мужчин это количество должно быть не менее 30%.

После лечения препаратом «ЭМВ» в виде сиропа в течение 20-ти дней в дозе по 8 мл сиропа, предварительно растворенного в 100 мл кипяченой воды, охлажденной до комнатной температуры, 1 раз в сутки, за час до приема пищи, по показаниям ультраструктурного исследования у больного была установлена нормозооспермия, при которой недостаточно конденсированный «незрелый» хроматин не превышает 26% у сперматозоидов, что соответствует нормативным показателям.

Таким образом, судя по полученным результатам, применение заявляемого препарата по сравнению с известными препаратами повышает эффект стимуляции структурно-функционального состояния половых клеток, заключающийся в снижении андрогенодефицита у мужчин репродуктивного возраста при нарушении функциональных характеристик эякулята, в частности при идиопатической патоспермии.

Применение заявляемого препарата с таким физиологическим проявлением свойств позволит при нарушении репродуктивной функции, выражаемой различными видами патоспермии, улучшить фертильность эякулята (фертильные характеристики сперматозоидов), что в свою очередь позволит уменьшить уровень идиопатической формы мужского бесплодия.