Вид РИД
Изобретение
Изобретение относится к области медицинской промышленности, в частности к получению вируса-индуктора для производства человеческого лейкоцитарного интерферона.
В производстве человеческого лейкоцитарного интерферона предусматривается использование в качестве вируса-индуктора интерферона вакцинного штамма "Н" вируса болезни Ньюкастл (ВБН). Этот штамм используется во многих странах мира, выпускающих человеческий лейкоцитарный интерферон для медицинской и ветеринарной практики или в научных исследованиях. Это наиболее безопасный вирус-индуктор, обладающий индуцирующими свойствами при получении лейкоцитарного интерферона человека или животных.
Известен способ получения вируса-индуктора интерферона путем культивирования штамма "Н" вируса болезни Ньюкастл в 9-11 дневных куриных эмбрионах [1] . Заражающая доза вируса составляет 106 ЦПД/50/0,2 мл. Вирус-индуктор разводят в 0,1 М фосфатно-солевом буфере. Эта доза вводится в аллантоисную полость эмбриона шприцем с соблюдением условий стерильности. Затем эмбрионы инкубируют 48 ч при (32±0,5)oC. После инкубации эмбрионы охлаждают при 4oC и отсасывают вируссодержащую аллантоисную жидкость, которая после необходимых контролей используется в качестве вируса-индуктора интерферона. Вируссодержащая жидкость должна отвечать следующим требованиям: быть бактериологически стерильной, иметь гемагглютинирующую активность (ГА) 256 единиц, инфекционный титр не ниже 1011 ЦПД/50/мл. При использовании этого индуктора в производстве человеческого лейкоцитарного интерферона получают интерферон с противовирусной активностью 11 000 - 14 000 МЕ/мл.
Задача изобретения - повышение интерферониндуцирующей способности вирусного индуктора.
Для решения поставленной задачи в способе получения вируса-индуктора интерферона маточный материал (штамм "Н" вируса болезни Ньюкастл ГКВ N 2348) разводят фосфатно-солевым буфером с добавлением 10,0% Д(+)-лактозы, вводят в аллантоисную полость куриных эмбрионов в концентрации 106 ЦПД/50/0,2 мл, с последующим инкубированием и отбором вируссодержащей жидкости.
Отличительным признаком предлагаемого способа является добавление Д(+)-лактозы в фосфатно-солевой буфер при разведении маточного штамма, что обеспечивает получение более высоких титров интерферона с активностью 16 000 - 18 000 МЕ/мл против 11 000 - 14 000 МЕ/мл у прототипа (cм. таблицу).
Пример 1. Штамм "Н" вируса болезни Ньюкастл (ГКВ N 2348) использовали в качестве маточного штамма. Для получения производственного штамма в аллантоисную полость 9-10 дневного куриного эмбриона вводят с соблюдением условий стерильности в концентрации 106 ЦПД/50/0,2 мл исходной суспензии маточного штамма, разведенного в фосфатно-солевом буфере, с добавлением 10,0% Д(+)-лактозы. Инкубируют в течение 48 ч при температуре (32±0,5)oC. После инкубации эмбрионы охлаждают в течение 18-20 ч при 4oC, отсасывают вируссодержащую аллантоисную жидкость. Титр интерферона α -типа, полученный с данным индуктором, составляет 16 000 МЕ/мл.
Пример 2. Штамм "Н" вируса болезни Ньюкастл (ГКВ N 2348) использовали в качестве маточного штамма. Для получения производственного штамма в аллантоисную полость 9-10 дневного куриного эмбриона вводят с соблюдением условий стерильности в концентрации 106 ЦПД/50/0,2 мл исходной суспензии маточного штамма, разведенного в фосфатно-солевом буфере, с добавлением 10,0% Д(+)-лактозы. Инкубируют в течение 48 ч при температуре (32±0,5)oC. После инкубации эмбрионы охлаждают в течение 18-20 ч при 4oC, отсасывают вируссодержащую аллантоисную жидкость. Титр интерферона α-типа, полученный с данным индуктором, составляет 18 000 МЕ/мл.
Источники информации
1.Патент РФ N 2140284, кл. А 61 К 38/21, публ. 27.10.99.