×
07.09.2018
218.016.83a7

Результат интеллектуальной деятельности: Способ одновременного выявления нейронов и астроцитов на гистологических препаратах нервной ткани

Вид РИД

Изобретение

Аннотация: Изобретение относится к медицине, а именно к области гистологических исследований нервной системы, в частности головного мозга, и может быть использовано в патологической анатомии, цитологии, судебной медицине и биологии. Предложенный способ обеспечивает одновременное выявление нейронов и астроцитов на гистологических препаратах нервной ткани путем сочетанной двойной окраски тигроидного вещества и телец Маринеско в нейронах, импрегнированных нитратом серебра, раствором N1, содержащим формальдегид, лимонную и концентрированную азотную кислоту и воду, с докраской крезилвиолетом. 1ил.

Изобретение относится к медицине, а именно к области гистологических исследований нервной системы, в частности головного мозга, и может быть использовано в патологической анатомии, цитологии, судебной медицине и биологии.

Известны способы приготовления гистологического препарата нервной ткани, включающие фиксацию в формалине, приготовление целлоидиновых срезов и их окрашивание по Нисслю или импрегнацию азотнокислым серебром [ L и др. «Layers I and VI of the visual cortex in the rabbit. A correlated Golgi and у S1» 1989 г.; Отеллин B.A., Коржевский Д.Э. «Иммуноцитохимическое выявление астроцитов в срезах головного мозга в сочетании с окраской по Нисслю» 2004 г., Коржевский Д.Э., Гиляров А.В Основы гистологической техники. 2010 г.; Сапожников А.Г., Доросевич А.Е. «Гистологическая и микроскопическая техника»].

Известен быстрый способ комбинированной окраски препаратов по Гольджи и Нисслю, позволяющий выявлять нейрональную морфологию и цитоархитектонику [Pilati N. at al. «Rapid Method Combining Golgi and Nissl Staining to Study Neuronal Morphology and Cytoarchitecture», 2008 г.], который является прототипом предлагаемого способа.

Однако описанные способы не позволяют осуществлять одновременное окрашивание нервных клеток и выявление на этом же препарате астроцитов.

Задачей настоящего изобретения является разработка способа выявления тигроидного вещества и телец Маринеско в нейронах, окрашенных крезилвиолетом (модифицированный метод Ниссля), а также импрегнированных нитратом серебра нейронов и астроцитов на одном срезе головного мозга.

Способ осуществляют следующим образом.

Фиксацию мозга лабораторных животных проводят либо методом прижизненной перфузии 10% раствором нейтрального формалина на фосфатно-солевом буфере через левый желудочек сердца, в случае исследования коры головного мозга образцы ткани либо методом погружения, в последнем случае мозг фиксируют в течение 10-14 дней в часто сменяемом 10% растворе нейтрального формалина.

Фиксированный препарат мозга переносят в 10% раствор нитрата серебра, в котором выдерживают в течение 3-4 дней в темном месте при комнатной температуре. Применяют стандартную процедуру обезвоживания ткани с последующим заключением в парафин. На микротоме изготавливают серийные гистологические срезы толщиной 5-30 микрометров и наносят на предметные стекла.

Предварительно приготавливают растворы №1 и №2 следующего состава:

раствор №1:

формальдегид 37-40% - 20 мл,
кислота лимонная - 500 мг,
кислота азотная концентрированная - 2 капли
вода дистиллированная - 100 мл;

раствор №2:

крезилвиолет - 100 мг,
вода дистиллированная - 100 мл,

После депарафинизации в ксилоле препараты проводят по спиртам понижающей концентрации, споласкивают в двух порциях дистиллированной воды и проводят повторную импрегнацию в 10% растворе нитрата серебра в течение 5-8 минут в термостате при 40°С в темноте.

В течение времени термостатирования приготавливают новый раствор для окраски путем растворения 8 капель раствора №1 и 8 капель концентрированного гидроксида аммония в 50 мл дистиллированной воды.

Вынутые из термостата препараты без промывки переносят в свежеприготовленный раствор на время от 40 с до 1 мин, затем, чтобы остановить реакцию, погружают их в 1% раствор гидроксида аммония на 1 минуту и промывают в трех сменах дистиллированной воды.

После промывки препараты помещают на 1 мин в 5% раствор тиосульфата натрия и снова промывают их дистиллированной водой в течение 5 мин. Затем производят докраску в предварительно подогретом растворе крезилвиолета (раствор №2) на ацетатном буфере в термостате при 60°С в течение 15-20 мин, после чего вновь промывают дистиллированной водой.

На завершающем этапе препараты последовательно погружают в 100% спирт на 5-8 мин, в карбол-ксилол на 1 мин и дважды по 5 мин в орто-ксилол, далее заключают срезы канадским бальзамом под покровные стекла.

На фиг. 1 представлена микрофотография 5-го слоя цингулярной коры головного мозга крысы при увеличении 40×. Препарат подготовлен и окрашен по вышеописанному способу. Белыми стрелками обозначены окрашенные и импрегнированные объекты: А - астроциты, М - тельца Маринеско, Н - нейроны.

Предложенный способ позволяет сохранить высокое качество структуры ткани, и с помощью сочетанной двойной окраски выявлять тигроидное вещество и тельца Маринеско в нейронах, окрашенных крезилвиолетом, а также импрегнированные нитратом серебра нейроны и астроциты при различных функциональных состояниях.

Метод прост для воспроизведения, не требует использования дорогостоящих и опасных для здоровья веществ, возможен для исследования архивного материала, хранящегося в парафиновых блоках, обработки тонких срезов.

Литература

1. Layers I and VI of the visual cortex in the rabbit. A correlated Golgi and у S1, L, Ramo C, Contamina-Gonzalvo P, de Carlos JA. J Hirnforsch. 1989; 30(2):163-73.

2. Основы гистологической техники - Коржевский Д.Э., Гиляров А.В. - Практическое руководство. 2010 г.

3. "Гистологическая и микроскопическая техника. Руководство. А.Г. Сапожников, А.Е. Доросевич. Смоленск. "САУ" 2000 год.

4. A. Nadia, Matthew Barker, Sofoklis Panteleimonitis, Revers Donga, and Martine Hamann. // Journal of Histochemistry & Cytochemistry, 2008, Volume 56(6): 539-550.


Способ одновременного выявления нейронов и астроцитов на гистологических препаратах нервной ткани
Источник поступления информации: Роспатент

Showing 1-10 of 43 items.
20.06.2016
№217.015.038d

Комплекс рекомбинантных полипептидов, обладающий протективными свойствами в отношении streptococcus agalactiae и streptococcus pyogenes

Изобретение относится к области микробиологии и молекулярной генетики. Предложен комплекс рекомбинантных полипептидов для профилактики и лечения бактериальных инфекций, вызванных Streptococcus agalactiae и/или Streptococcus pyogenes. Комплекс содержит в равных долях рекомбинантные полипептиды...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002587627
Дата охранного документа: 20.06.2016
20.06.2016
№217.015.0469

Реассортантный штамм вируса гриппа rn9/13-human a(h6n9) для определения антител к нейраминидазе при гриппозной инфекции и вакцинации

Изобретение относится к области биотехнологии, вирусологии и медицине. Диагностический штамм вируса гриппа RN9/13-human A(H6N9) получен путем скрещивания апатогенного вируса гриппа птиц А/серебристая чайка/Сарма/51 с/06(H6N1) с холодоадаптированным вакцинным штаммом А/17/Ануи/2013/61(H7N9) на...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002587629
Дата охранного документа: 20.06.2016
13.01.2017
№217.015.727b

Средство, обладающее гиполипидемической и антиатеросклеротической активностью

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для лечения дислипопротеинемии и атеросклероза. Для этого применяют бензолсульфоната 1-метил-3-этил, 4,5 (бис-N-метилкарбамоил) имидазолия в качестве гиполипидемического и антиатеросклеротического средства для лечения дислипопротеинемии...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002598347
Дата охранного документа: 20.09.2016
13.01.2017
№217.015.8e2a

Вакцинный штамм вируса гриппа а/17/боливия/2013/6585 (h1n1) pdm09 для производства живой гриппозной интраназальной вакцины для взрослых и для детей

Изобретение относится к медицинской вирусологии и касается штамма вируса гриппа. Охарактеризованный вакцинный штамм А/17/Боливия/2013/6585 (H1N1)pdm09 - реассортант, полученный путем скрещивания «дикого» вируса А/Боливия/559/2013 (H1N1)pdm09 с холодоадаптированным температурочувствительным...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002605314
Дата охранного документа: 20.12.2016
13.01.2017
№217.015.8f1d

Способ лечения болевого синдрома у больных с дегенеративно-дистрофическими заболеваниями позвоночника

Изобретение относится к медицине, а именно к неврологии, и может быть использовано для лечения острых и хронических вертеброгенных болей. Для этого больному назначают 1-дезамино-8-D-аргинин-вазопрессин (ДДАВП или десмопрессин), который вводят интраназально капельно в количестве 1-2·10 г на...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002605311
Дата охранного документа: 20.12.2016
13.01.2017
№217.015.9218

Штамм вируса гриппа в/60/пхукет/2013/26 для производства живой гриппозной интраназальной вакцины для взрослых и для детей

Изобретение относится к вирусологии. Предложен вакцинный штамм В/60/Пхукет/2013/26 - реассортант, полученный методом генетической реассортации эпидемического вируса В/Пхукет/3073/2013 с холодоадаптированным температурочувствительным вирусом В/СССР/60/69 - донором аттенуации, безвредным для...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002605926
Дата охранного документа: 27.12.2016
25.08.2017
№217.015.9f17

Вакцинный штамм вируса гриппа а/17/гонконг/2014/8296 (h3n2) для производства живой гриппозной интраназальной вакцины для взрослых и для детей

Изобретение относится к медицинской вирусологии и касается штамма вируса гриппа. Предложен вакцинный штамм А/17/Гонконг/2014/8296 (H3N2) - реассортант, полученный путем скрещивания «дикого» вируса А/Гонконг/4801/2014 (H3N2) с холодоадаптированным температурочувствительным вирусом...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002606019
Дата охранного документа: 10.01.2017
25.08.2017
№217.015.9faa

Реассортантный штамм вируса гриппа а/17/серебристая чайка/сарма/06/887 (h6n1) для производства живой гриппозной вакцины

Изобретение относится к области биотехнологии и касается штамма вируса гриппа. Предложен реассортантный вакцинный штамм А/17/серебристая чайка/Сарма/06/887 (H6N1). Штамм получен путем скрещивания вируса А/Серебристая чайка/Сарма/51с/2006 (H6N1) со штаммом А/Ленинград/134/17/57 (H2N2) - донором...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002606026
Дата охранного документа: 10.01.2017
25.08.2017
№217.015.b6ed

Гепатопротекторное средство

Изобретение относится к биологически активным соединениям, используемым в медицине и в фармакологии, в частности к гепатопротектору. Предложено применение производного таурина, хлоргидрата N-изопропиламида-2-бензиламиноэтансульфокислоты в качестве гепатопротекторного средства для профилактики...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002614691
Дата охранного документа: 28.03.2017
25.08.2017
№217.015.b726

Способ краткосрочного хранения венозного трансплантата

Изобретение относится к медицине, а именно к реконструктивной сердечно-сосудистой хирургии. Для краткосрочного хранения трансплантата его размещают в емкости с со стерильной оксигенированной наноэмульсией «Перфторан». В асептических условиях канюлируют ее дистальный конец. Накладывают...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002614499
Дата охранного документа: 28.03.2017
Showing 1-6 of 6 items.
20.10.2013
№216.012.7530

Комбинированная мазевая композиция с репарирующим эффектом

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и представляет собой комбинированную мазевую композицию для стимуляции регенерации кожи, содержащую ретинола пальмитат, метилурацил, α-токоферол, воск эмульсионный, масло вазелиновое, глицерин, этанол и воду, отличающуюся тем, что...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002495660
Дата охранного документа: 20.10.2013
20.10.2013
№216.012.753b

Средство для наружного применения, стимулирующее в коже процессы регенерации

Изобретение относится к области фармацевтики и касается композиции для наружного применения, стимулирующей в коже процессы регенерации, обладающей антисептическим и противовоспалительным действием, предназначенной для лечения воспалительных (в том числе экссудативных) заболеваний кожи,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002495671
Дата охранного документа: 20.10.2013
10.12.2013
№216.012.8799

Мазевая композиция для местного применения с противоугревой фармакологической активностью

Изобретение относится к области фармацевтики и касается мазевой композиции для лечения угревой болезни, содержащей изотретиноин, в качестве антиоксиданта α-токоферол, а также воск эмульсионный, масло вазелиновое, глицерин, спирт этиловый и воду. Композиция обладает пониженными побочными...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002500395
Дата охранного документа: 10.12.2013
27.08.2014
№216.012.f04a

Мазь с витамином а, восстанавливающая кожу и препятствующая ее избыточному ороговению

Изобретение относится к области фармацевтики и касается мазевой композиции для уменьшения ороговения эпидермиса, смягчения кожи и стимуляции ее регенерации, содержащей ретинола пальмитат, в качестве стабилизатора - α-токоферол, а также воск эмульсионный, масло вазелиновое, глицерин, спирт...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002527333
Дата охранного документа: 27.08.2014
20.02.2016
№216.014.ce0e

Стабильная эмульсионная композиция для лечения чесотки

Изобретение относится к медицине, а именно к области фармацевтики, и описывает эмульсионную композицию для наружного применения с акарицидной противочесоточной фармакологической активностью, характеризующуюся тем, что она содержит бензилбензоат 10,0-22,0%, стеарат натрия 0,1-0,25%, воск...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002575571
Дата охранного документа: 20.02.2016
20.03.2019
№219.016.e431

Лекарственное средство для лечения гиперкератозов, вросшего ногтя, а также для гигиенической обработки ногтей, деформированных в результате травмы и/или возрастных изменений

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и медицине и касается лекарственного средства в виде мази для лечения гиперкератозов, вросшего ногтя, а также для гигиенической обработки ногтей, деформированных в результате травмы и/или возрастных изменений, содержащего мочевину,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002292879
Дата охранного документа: 10.02.2007
+ добавить свой РИД