Результат интеллектуальной деятельности: КОЛПАЧОК ДЛЯ СБОРА ЛИЧИНОК И МЕЛКИХ НЕМАТОД ИЗ ФЕКАЛИЙ ЧЕЛОВЕКА И ЖИВОТНЫХ

Изобретение относится к медицинской и ветеринарной гельминтологии, а именно к лабораторному культивированию паразитических нематод.

Известно устройство для сбора личинок и мелких нематод из фекалий (а.с. №1391625). Устройство содержит чашу 1 со сбегающей боковой поверхностью в виде крыльчатки 2. На поверхности крыльчатки и чаши имеются борозды 3, с наружной стороны дна между крыльями - полукруглые вырезы 4. Чаша 1 имеет вид полусферы с гладкой внутренней поверхностью. Устройство погружается в фекалии, в чашу 1 наливается вода. Нематоды, мигрируя, натыкаются на крылья и поднимаются по бороздам 3 в чашу 1 с водой, где и остаются.

Недостатками этого устройства являются:

1) ограниченность рабочего пространства (объем чаши = 1,5 мл) ведет к меньшим срокам выживаемости личинок и мелких нематод (т.к. бактерии, покрывающие поверхности тела нематод, и продукты их обмена, быстро вызывают загрязнение воды и интоксикацию нематод, особенно личинок 1-й и 2-й стадии развития), что означает выбраковку существенной части полученного материала;

2) полупрозрачность, так как она практически не создает контраста с полупрозрачными же личинками и мелкими нематодами, что делает невозможным визуализацию последних в ходе исследования без привлечения дополнительных технических средств;

3) конструктивная сложность - наличие крыльев не обусловлено функционально в той степени, которая оправдывает расход материала, пошедшего на их отливку (при диаметре чаши = 1,7 см диаметр основания = 3,5 см): личинки и мелкие нематоды обладают гидротаксисом - свойством движения в сторону большей влажности, поэтому они заползут в чашу вне зависимости от наличия крыльев;

4) наличие вырезов со стороны дна, призванное увеличить площадь рабочей поверхности, и, следовательно, количество получаемых личинок и мелких нематод, в действительности только удлиняет период их миграции в чашу, а значит, и срок их получения.

Технический результат заключается в том, что применение колпачка (ГОСТ 32626-2014. «Средства укупорочные полимерные. Общие технические условия», стр. 4) позволяет снизить отход и повысить количество собираемых личинок и мелких нематод, достоверно визуализировать их появление в емкости колпачка и сэкономить средства на его приобретение.

Технический результат достигается тем, что применение колпачка позволяет собирать личинки и мелкие нематоды из фекалий животных и человека.

Сущность изобретения поясняется чертежами, где на фиг. 1 изображено устройство для сбора личинок и мелких нематод из фекалий (а.с. №1391625): слева - вид в плане, справа - разрез А-А;

на фиг. 2 изображен колпачок, состоящий из цилиндрического корпуса 1, внутри которого имеется правая однозаходная резьба 2 (непрерывная или прерывистая в зависимости от производителя данного элемента). Внешняя поверхность цилиндрического корпуса 2 снабжена вертикальными бороздами 3;

на фиг. 3 изображен колпачок, погруженный в фекалии, находящиеся в чашке Петри (в центре колпачка - скопление собранных личинок и мелких нематод);

на фиг. 4 - то же, но увеличено;

на фиг. 5 - микрофотография личинок и мелких нематод, собранных из фекалий при помощи колпачка.

Колпачок с целью сбора личинок и мелких нематод из фекалий используется следующим образом. В чашку Петри устанавливают колпачок отверстием вверх. Вокруг него помещают исследуемые фекалии так, чтобы они плотно прилегали к боковым поверхностям корпуса 1 со всех сторон и по всей его высоте. Внутреннюю емкость колпачка заполняют водой до самого верха. Закрывают чашку Петри. Гельминты, активно передвигаясь в фекалиях, в поисках более чистой среды поднимаются по бороздам 3 и попадают в емкость колпачка, на дно которого вскоре оседают. Колпачок экспонируют в течение заданного времени в термостате. Изъятый колпачок используют как емкость для временного хранения исследуемых гельминтов, которых по мере необходимости извлекают пипеткой и микроскопируют.

Для доказательства целесообразности использования колпачка были проведены экспериментальные исследования. В июне-августе 2017 г. в частном крестьянско-фермерском хозяйстве Выборгского района Ленинградской области (60.735175°N, 29.004207°Е) от овец романовской породы в возрасте от 2 до 7 лет ректально были получены фекалии. В лаборатории на базе кафедры паразитологии им. В.Л. Якимова ФГБОУ ВО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины» было проведено предварительное копроовоскопическое исследование по модифицированному методу С. Дарлинга, которое показало наличие яиц нематод в исследуемых фекалиях. Затем было проведено культивирование личинок из яиц по методу А.М. Петрова и В.Г. Гагарина, для чего в чашки Петри (2 серии по 45 шт.) помещали 10-граммовую навеску фекалий, чашки закрывали и помещали в термостат для культивирования в течение 10 дней при температуре 27°С. Ежедневно чашки Петри извлекали из термостата для проветривания и увлажнения фекалий. После завершения периода культивирования (когда личинки нематод успевали выйти из яиц и претерпеть две линьки, достигнув инвазионной стадии развития, оптимальной для проведения исследования) в фекалии в чашках Петри первой серии установили устройства для сбора личинок и мелких нематод из фекалий (а.с. №1391625), а в чашках Петри второй серии - колпачки. Чаши устройств и емкости колпачков до краев заполнили чистой водой и оставили экспонировать. Через 24 часа собранных личинок из каждой пробы (фиг. 3 и 4) отдельно выбрали пипеткой, а чаши устройств и емкости колпачков вновь наполнили водой и продолжили экспонирование. Жизнеспособность личинок определяли по их подвижности и сохранности морфологических структур под микроскопом Микмед-6 при 40-кратном увеличении (фиг. 5). Затем их зафиксировали 70°C спиртом и подсчитали количество личинок. Совокупный срок экспонирования составил 72 часа. По завершении экспонирования полученных личинок происследовали на жизнеспособность, а после - зафиксировали спиртом и подсчитали их количество. Результаты исследований представлены в таблице 1.

Применять колпачок для сбора личинок и мелких нематод из фекалий можно в целях: 1) качественной и количественной диагностики нематодозов человека и животных; 2) определения антигельминтной резистентности у паразитических нематод и скрининга препаратов против них in vitro; 3) получения образцов антигенов нематод с целью изготовления серологических диагностикумов и вакцин; 4) изучения биологии нематод и разработки на ее основе более совершенных мер борьбы; 5) секвенирования ДНК нематод в интересах эволюционной биологии (т.к. обнаружение сходных гельминтов у животных разных видов (ныне существующих или вымерших) может свидетельствовать о филогенетическом родстве или общем ареале обитания). Помимо этого, конструкция колпачка много проще конструкции известного устройства, что позволяет сэкономить средства на приобретение колпачка (табл. 2).

* Изготовление 5 изделий путем литья пластмасс в предварительно созданную силиконовую форму при условии предоставления исходного изделия в качестве мастер-модели сотрудникам компании NK-Технологии (http://nktech3d.ru); по данным на 20.06.2017;

** Умноженная на 5 цена, указанная на сайте интернет-гипермаркета Kit-Hobby (https://kit-hobby.ru/catalog/tovary_dlya_ofisa/bakaleya/16179/) за воду питьевую негазированную «Святой источник», 0,5 л, в пластиковой бутылке; по данным на 20.06. 2017.

Таким образом, применение колпачка для сбора личинок и мелких нематод из фекалий животных и человека является простой и экономной альтернативой использованию устройства, поскольку колпачок имеет все необходимые рабочие характеристики (наличие емкости для воды, вертикальных борозд, высота, позволяющая помещать его в чашку Петри), а экономия денежных средств даже при покупке колпачка вместе с укупориваемой тарой оценивается как 30-кратная и экономия времени - как 7-кратная.