Результат интеллектуальной деятельности: СПОСОБ РАННЕЙ ДИАГНОСТИКИ РАЗЛИЧНЫХ ФОРМ ЭССЕНЦИАЛЬНОЙ АРТЕРИАЛЬНОЙ ГИПЕРТЕНЗИИ У ДЕТЕЙ И ПОДРОСТКОВ

Способ ранней диагностики различных форм эссенциальной артериальной гипертензии у детей и подростков относится к медицине, в частности к педиатрии и кардиологии, и может быть использован для ранней диагностики эссенциальной артериальной гипертензии с дифференциацией лабильной и стабильной форм у детей и подростков.

Известен способ диагностики первичной артериальной гипертензии и гипотензии у детей и подростков (Патент РФ №2312350). Сущность методики заключается в определении содержания гомоцистеина, инсулина и мочевой кислоты в сыворотке венозной крови и составлении соотношения концентраций исследуемых показателей с верхней границей показателей контроля.

Недостатком данного способа является низкая специфичность исследуемых показателей и их слабая связь с патогенезом эссенциальной артериальной гипертензии. Мочевая кислота, как правило, исследуется для диагностики нарушения пуринового обмена. Гиперурикемия (повышение содержания мочевой кислоты) развивается либо вследствие поступления большого количества пуринов с пищей, либо вследствие усиленного распада собственных тканей. Гипоурикемия (понижение содержания мочевой кислоты) может возникнуть из-за уменьшения экскреции почками мочевой кислоты или из-за снижения ее продукции. Инсулин - один из гормонов-регуляторов углеводного обмена. Его основное действие - снижение концентрации глюкозы в крови путем увеличения проницаемости клеточных мембран для молекул глюкозы, стимуляции образования гликогена в печени, усиления синтеза жиров и белков. Нарушение секреции инсулина связано с возникновением сахарного диабета 1 типа. Гомоцистеин - промежуточный продукт, образующийся в процессе метаболизма аминокислоты метионина. В повышенной концентрации гомоцистеин обладает цитотоксическим действием, что может привести к повреждению стенки сосудов и, впоследствии, к формированию атеросклеротической бляшки, к тромбообразованию. Повышение уровня гомоцистеина могут вызвать наследственное заболевание гомоцистинурия, некоторые препараты (пенициллин, циклоспорин, метотрексат), некоторые заболевания (гипотиреоз, почечная недостаточность), неправильный образ жизни (курение, алкоголь, кофе). Таким образом, уровни гомоцистеина, как и вышеназванных маркеров, не являются диагностическими маркерами артериальной гипертензии/гипотензии. Однако повышенный уровень гомоцистеина может служить критерием оценки риска развития сердечнососудистых заболеваний.

Известен также способ диагностики эндотелиальной дисфункции у подростков при артериальной гипертензии (Патент РФ №2320270 С). Способ заключается в определении систолической скорости кровотока и пульсативного индекса. Данная методика позволяет выявить эндотелиальную дисфункцию у подростков с артериальной гипертензией путем объективных исследований.

Существует еще один способ диагностики артериальной гипертензии у подростков (Патент РФ №2419799 С). Методика заключается в исследовании эритроцитов крови, в которых определяют активность супероксиддисмутазы и глутатионпероксидазы, т.е. потенциал антиоксидантной системы, вычисляя коэффициент защитной эффективности антиоксидантных ферментов.

Недостатком данного способа является его низкая специфичность, поскольку антиоксидантная система очень чувствительна к возникновению различных патологических состояний.

Среди зарубежных патентов была обнаружена методика ранней диагностики артериальной гипертензии у подростков с ожирением (Патент UA 77556 U). Способ заключается в измерении систолического и диастолического артериального давления и уровня остеопонтина в сыворотке крови. Остеопонтин участвует в процессе формирования костей, связываясь с гидроксиапатитом. Его роль в формировании артериальной гипертензии неясна.

В настоящее время отсутствуют четкие диагностические критерии, позволяющие спрогнозировать развитие и формирование эссенциальной АГ у подростков с эпизодами повышения АД, на этапе «переходных» или «пограничных» состояний, когда еще нет проявлений болезни в ее классической форме. Это имеет актуальное значение и требует дальнейшего глубокого исследования.

Задача, которую решает предлагаемое изобретение, - это своевременная ранняя диагностика эссенциальной артериальной гипертензии с дифференциацией лабильной и стабильной форм у детей и подростков. Поставленная задача решается с помощью измерения в плазме, сыворотке и тромбоцитах крови биомаркеров, оценивающих эндотелиальную функцию. Создание теста основано на представлении о том, что наиболее ранним изменением при эссенциальной АГ является нарушение эндотелиальной функции с формированием дисфункции эндотелия, которая заключается в дисбалансе вазоактивных факторов. Вазоконстрикторные, пролиферативные, провоспалительные, проагрегантные факторы преобладают над вазодилататорными, противовоспалительными, антиагрегантными. Ключевыми вазоактивными факторами являются оксида азота (NO), эндотелии-1 (ЭТ-1) и моноамин серотонин (5-НТ). Оксид азота (NO) вызывает вазодилатацию, торможение экспрессии молекул адгезии и агрегации тромбоцитов, оказывает антипролиферативное, антиапоптическое и антитромботическое действие. Эндотелии-1 (ЭТ-1) и серотонин (5-НТ) вызывают противоположные эффекты. Вазоконстрикторный эффект серотонина (5-НТ) реализуется преимущественно через 5-НТ2А рецепторы. In vitro серотонин (5-НТ) вызывает сокращение гладкомышечных клеток сосудов. Однако хроническое введение серотонина in vivo вызывает стойкое снижение артериального давления [Watts SW, Davis RP. 5-hydroxtryptamine receptors in systemic hypertension: an arterial focus. Cardiovasc Ther 2011; 29(1): 54-67].

Сущность предлагаемого изобретения заключается в проведении диагностического теста путем сравнения состава образцов плазмы, сыворотки и тромбоцитов крови, полученных у испытуемого пациента с соответствующими показателями, полученными предварительно у здоровых детей и подростков, представляющих контрольную группу.

При проведении предложенного диагностического теста у испытуемого производят забор образцов венозной крови и проводят их биохимический анализ с помощью фотоколориметрического метода (для NO) и ИФА (для ЭТ-1, 5-НТ). При этом концентрацию NO измеряют в сыворотке, ЭТ-1 - в плазме, 5-НТ измеряют в сыворотке и тромбоцитах. Измеренные концентрации упомянутых веществ в плазме, сыворотке и тромбоцитах крови испытуемого затем сравниваются с такими значениями параметров, как концентрация оксида азота (NO), эндотелина-1 (ЭТ-1) и серотонина (5-НТ) предварительно определенными у здоровых людей. При наличии определенного цифрового или процентного соотношения между концентрациями определяемых веществ у испытуемого по сравнению со значениями в норме делается вывод о включении обследованного в группу риска по эссенциальной АГ, а также о форме этого заболевания - лабильной или стабильной.

Проведение комплексного сравнительного анализа позволяет с высокой вероятностью поставить диагноз эссенциальной артериальной гипертензии с определением формы заболевания с целью применения адекватных способов лечения. Комплексный сравнительный анализ показывает, что характерной особенностью эссенциальной артериальной гипертензии у испытуемых пациентов является существенное повышение концентрации серотонина в сыворотке и тромбоцитах, эндотелина-1 в плазме крови у больных с лабильной и стабильной формами эссенциальной артериальной гипертензии по сравнению со значениями в норме, и существенное снижение концентрации оксида азота в сыворотке крови у этих больных по сравнению со значениями в норме.

Перечень чертежей и их краткое описание.

Фиг. 1. Концентрация серотонина в сыворотке крови у нелеченых больных при лабильной и стабильной формах ЭАГ.

Фиг. 2. Концентрация серотонина в тромбоцитах у нелеченых больных при лабильной и стабильной формах ЭАГ.

Фиг. 3. Концентрация эндотелина-1 в плазме крови у нелеченых больных при лабильной и стабильной формах ЭАГ.

Фиг. 4. Концентрация оксида азота в сыворотке крови у нелеченых больных при лабильной и стабильной формах ЭАГ.

Фиг. 5. Концентрация серотонина в сыворотке крови у неполовозрелых крыс линии SHR.

Фиг. 6. Концентрация серотонина в тромбоцитах крови у неполовозрелых крыс линии SHR.

Фиг. 7. Концентрация эндотелина-1 в плазме крови у неполовозрелых крыс линии SHR.

Фиг. 8. Концентрация оксида азота в сыворотке крови у неполовозрелых крыс линии SHR.

Перед исследованием уровня серотонина необходимо исключить из рациона пациента бананы, ананасы, сыр, крепкий чай и кофе, продукты, содержащие ванилин. Перед взятием крови пациенту предоставляется полный физический и эмоциональный покой (минимум на 20 минут).

Венозную кровь для определения серотонина в сыворотке брали утром натощак путем пунктации локтевой вены в объеме 4,0 мл непосредственно в сухую пластиковую пробирку и отстаивали при комнатной температуре в течение 10 минут. Надосадочную жидкость помещали в эппендорф с помощью пипетки, и образец центрифугировали в течение 10 минут при 2000 об/мин при комнатной температуре. Полученные образцы замораживали.

Для получения плазмы крови, обогащенной тромбоцитами, 4,0 мл цельной крови собирали из локтевой вены в пластиковые пробирки, содержащие ЭДТА, и затем центрифугировали в течение 10 минут при 2000 об/мин. Надосадочную жидкость переносили в другую пробирку и производили подсчет тромбоцитов на гематологическом автоматическом анализаторе Sysmex KX-21 N (Япония). Далее забирали 200 мкл надосадочной жидкости с помощью пипетки, помещали в эппендорф, добавляли 800 мкл физиологического раствора и повторно центрифугировали в течение 10 минут при 4500 об/мин при температуре 4°C. Надосадочную жидкость удаляли. К осадку тромбоцитов добавляли 200 мкл дистиллированной воды и тщательно перемешивали. Полученные образцы замораживали и хранили до начала биохимических исследований (не более 60 дней) при -20°C.

Замороженные образцы размораживали и центрифугировали при 10000 об/мин в течение 2 минут при комнатной температуре. Для реакции ацилирования использовали 25 мкл надосадочной жидкости с использованием стандартного диагностического набора Serotonin ELISAFast Track, Labor Diagnostika Nord GmbH & Co. KG (Германия) на микропланшетном ридере Multiscan EX (Labsystems, Finland, 2008) при длине волны 450 нм. Для определения концентрации 5-НТ в тромбоцитах пересчет велся на 10⁹ тромбоцитов.

Кровь для определения эндотелина-1 забирали у больных натощак, из локтевой вены. Плазму после экспозиции центрифугировали на центрифуге с охлаждением при 3000 об/мин 10 мин. и собирали на лед. До исследования плазму хранили при температуре - 20 градусов Цельсия. Содержание эндотелина-1 определяли методом иммуноферментного твердофазного анализа (ИФА). Исследование проводили с использованием стандартного диагностического набора реактивов фирмы «BioMedica» (Австрия) (Кат. №442-0052) на микропланшетном ридере Multiscan EX (Labsystems, Finland, 2008) при длине волны 450 нм.

Перед началом анализа все реагенты и образцы сывороток размораживались и выдерживались до достижения комнатной температуры (18-26°C). В лунки вносились по 50 мкл стандартов, образцов и контролей в дублях, в каждую ячейку добавлялись детектирующие антитела (по 200 мкл), тщательно перемешивались. Стрипы инкубировались под пленкой в течение 24 часов при комнатной температуре.

После инкубации ячейки 5-кратно промывались в 300 мкл разведенного буфера для промывок. Далее во все ячейки добавлялся ферментный конъюгат (по 200 мкл), и в течение часа стрипы инкубировались под пленкой при комнатной температуре (18-26°C). После удаления содержимого ячейки 5-кратно промывались 300 мкл разведенным буфером для промывок.

Далее во все ячейки вносился субстрат (по 200 мкл) и стрипы инкубировались в течение 30 минут в защищенном от света месте. Реакция останавливалась внесением 50 мкл стоп - реагента и измерялась оптическая плотность растворов в ячейках с помощью фотометра вертикальным лучом.

Построение калибровочной кривой осуществлялось по значениям оптической плотности раствора в лунках (ось ординат). В качестве контролей использовались растворы с заданной концентрацией эндотелина-1: 0 фмоль/мл, 0,625 фмоль/мл, 1,25 фмоль/мл, 2,5 фмоль/мл, 5 фмоль/мл, 10 фмоль/мл (ось абсцисс). Концентрацию эндотелина-1 в исследуемых образцах плазмы определяли по значениям оптической плотности, используя калибровочную кривую.

Определение количественного уровня суммарной концентрации стабильных метаболитов NO (нитратов - NO₃ и нитритов - NO₂) в сыворотке крови производится следующим образом.

NO из пищевых продуктов может влиять на оценку продукции эндогенной окиси азота, поэтому пациентам за 18 часов до забора крови рекомендовано исключить из рациона мясо, рыбу, дыню, зелень, чай. Определение концентрации NO в сыворотке крови проводили методом ИФА с помощью тестового набора TotalNO/Nitrite/NitrateAssayR&DSystems R&DSystems, Inc., США).

Этот тест определяет общее количество оксида азота NO и основан на ферментном превращении нитрата в нитрит с участием фермента нитрат-редуктазы в депротеинизированной плазме (кровь забиралась утром в 8-9 часов, что соответствует «базальному» уровню NO) и суммарной экскреции стабильных метаболитов NO нитратов и нитритов с мочой в течение суток.

Реакция регистрирует колориметрически концентрацию нитрита по азо-красителю, образующемуся в реакции Грисса. Реакция Грисса основана на двухстадийной реакции диазотирования, в которой кислый NO₂ производит нитрозатирующий агент, реагирующий с сульфаниловой кислотой с образованием иона диазония. Этот ион присоединяется к N-(1-нафтил) этилендиамину с формированием цветного азо-производного, которое поглощает свет на длине волны 540-570 нм.

Статистическая обработка данных осуществлялась на персональном компьютере с помощью электронных таблиц Excel и пакета прикладных программ «Statistica for Windows» версии 6,0. Использованы методы вариационной статистики с вычислением следующих показателей: среднее арифметическое значение (М), медиана (Me), стандартная ошибка среднего арифметического (m), таблицы частот, двухсторонний критерий Стьюдента для сравнения разных групп. Достоверность различий качественных признаков проверялась с помощью критерия χ² Пирсона, с поправкой Йетса в случае малой численности групп и точного критерия Фишера. Все различия считались статистически достоверными при р≤0,05. Нормальность распределений оценивалась при помощи W-критерия Шапиро-Уилкса.

Из специальных методов проводился дискриминантный анализ результатов обследования пациентов с расчетом дискриминантных функций, корреляционный анализ количественных показателей (методом парных корреляций с определением коэффициента корреляции Пирсона).

Комплексная оценка трех концентраций, оксида азота (NO), эндотелина-1 (ЭТ-1) и серотонина (5-НТ), составляет диагностический комплекс для оценки эндотелиальной функции. При этом снижение концентрации оксида азота (NO) и повышение концентраций эндотелина-1 (ЭТ-1) и серотонина (5-НТ) свидетельствует о наличии эндотелиальной дисфункции, а значит, с большой вероятностью, о наличии одной из форм эссенциальной артериальной гипертензии.

Следующие примеры иллюстрируют данный способ.

В исследовании приняли участие 70 нелеченых подростков мужского пола в возрасте 13-18 лет с первичной артериальной гипертензией, среди которых 24 человека с лабильной формой (средний возраст 15,47 лет), 30 - со стабильной (средний возраст 15,87 лет). Средняя продолжительность АГ составляла 3 года. Группой сравнения были 16 подростков, имеющих нормальный уровень АД (средний возраст 15,75 лет).

Всем пациентам было проведено суточное мониторирование АД (СМАД), по результатам которого были сформированы группы наблюдения:

1 группа - контрольная - 16 человек (23%);

2 группа - подростки с лабильной артериальной гипертензией (ЛАГ) - 24 человека - (34%) - ИВ САД/ДАД находился в пределах 25-50%;

3 группа - подростки со стабильной артериальной гипертензией (САГ) - 30 человек (43%) - ИВ САД/ДАД был выше 50%.

Исследование было выполнено на базе ГАУЗ ДРКБ МЗ РТ. Подбор пациентов для исследования проводился на амбулаторном приеме кардиолога поликлиники ДРКБ. На проведение исследований получено разрешение этического комитета Минздрава РТ. Все испытуемые подписали информированное согласие на участие в исследовании.

Концентрация серотонина (5-НТ) в сыворотке крови у пациентов, как при лабильной, так и при стабильной форме была значительно выше, чем в контрольной группе - в среднем на 157% и 172% соответственно (Фиг. 1). Значения контрольной группы принимались за 100%. Соотношения ЛАГ/контроль и САГ/контроль составили 1,3:1 и 1,6:1 соответственно. Более того, у больных со стабильной формой эссенциальной артериальной гипертензии концентрация серотонина (5-НТ) статистически достоверно выше, чем у больных с лабильной формой ЭАГ при соотношении САГ/ЛАГ 1,2:1 (Фиг. 1).

Концентрация серотонина в тромбоцитах в крови у пациентов как при лабильной, так и при стабильной форме ЭАГ была ниже в среднем по сравнению с контролем и составила 46% и 58% процентов от 100% контроля соответственно (Фиг. 2). Соотношения ЛАГ/контроль и САГ/контроль составили 1:2 и 0,6:1 соответственно. Концентрация серотонина в тромбоцитах при стабильной форме ЭАГ незначительно выше, чем при лабильной форме ЭАГ при соотношении 1,3:1.

Концентрация эндотелина-1 (ЭТ-1) у больных со стабильной формой многократно выше, чем у больных с лабильной формой в сравнении с группой контроля на 142% и 208% соответственно (Фиг. 3). Соотношения ЛАГ/контроль и САГ/контроль составили 1,4:1 и 2,1:1 соответственно. Концентрация эндотелина-1 при стабильной форме ЭАГ значительно выше, чем при лабильной форме ЭАГ при соотношении 1,5:1.

Концентрация суммарных метаболитов оксида азота была снижена по сравнению с контролем при стабильной форме ЭАГ и составила 85% от контроля, однако при лабильной форме наблюдалось повышение концентрации оксида азота на 112% (Фиг. 4). Соотношения ЛАГ/контроль и САГ/контроль составили 1,1:1 и 0,9:1 соответственно.

Таким образом, проведенные клинические исследования показали наличие существенных изменений концентраций трех вазоактивных факторов: увеличение концентрации оксида азота (NO) в сыворотке крови при ЛАГ и уменьшение при САГ, увеличение концентрации эндотелина-1 (ЭТ-1) и серотонина (5-НТ) в плазме и сыворотке крови и серотонина (5-НТ) в тромбоцитах крови у подростков с различными формами эссенциальной артериальной гипертензии по сравнению с нормой (Таб. 1).

Комплекс медицинского оборудования при проведении диагностического теста состоял из центрифуги для отделения плазмы, сыворотки и тромбоцитов крови, низкотемпературного холодильника для хранения замороженных образцов, гематологического автоматического анализатора Sysmex КХ-21 N (Япония), фотоколориметра, тестового набора TotalNO/Nitrite/NitrateAssayR&DSystems (Кат. № КGЕ001, R&DSystems, Inc., США) для измерения концентрации оксида азота (NO), набора «Эндотелин 1-21» (Кат. №442-0052, ВСМ Биохиммак, Россия) для измерения концентрации эндотелина-1 (ЭТ-1), набора «Серотонин ИФА» (Кат. № ЕIА5061, «ДРГ инструмент, Г.М.Б.Х.», Германия) для измерения концентрации серотонина (5-НТ).

Клиническим исследованиям предшествовало исследование на экспериментальных моделях артериальной гипертензии у неполовозрелых животных.

Исследование было проведено на 25 неполовозрелых самцах крыс линии SHR в возрасте 6-8 недель (экспериментальная группа) и 10 неполовозрелых самцах крыс линии Вистар-Киото в возрасте 5-6 недель (группа контроля). У крыс линии SHR показатели АД составили 147,5±4,8 мм рт.ст., а у крыс линии Вистар-Киото 122,6±4,5 мм рт.ст. Наркотизированных уретаном (800 мг/кг) крыс подвергали срединной лапаротомии. Собирали кровь из правой или левой общих подвздошных вен в объеме 2,5 мл. Для получения сыворотки крови 0,5 мл цельной крови отстаивали при комнатной температуре в течение 10 минут. Надосадочную жидкость помещали в эппендорф с помощью пипетки, и образец центрифугировали в течение 30 минут при 2000 об/мин. Полученные образцы замораживали. Для получения плазмы крови, обогащенной тромбоцитами 1 мл цельной крови помещали в эппендорф и центрифугировали в течение 10 минут при 2000 об/мин. Далее забирали 200 мкл надосадочной жидкости с помощью пипетки, помещали в эппендорф, добавляли 800 мкл физиологического раствора и повторно центрифугировали в течение 45 минут при 2000 об/мин. Надосадочную жидкость удаляли и добавляли 200 мкл дистиллированной воды.

Полученные образцы замораживали. Определение количества тромбоцитов проводили на гематологическом автоматическом анализаторе Sysmex KX-21 N (Япония). Определение концентрации NO в сыворотке крови проводили фотоколориметрическим методом помощью тестового набора TotalNO/Nitrite/NitrateAssayR&DSystems (Кат. №KGE001, R&DSystems, Inc., США). Данный тест позволяет провести непрямое определение общего количества NO с помощью определения концентрации метаболитов NO. Метод основан на ферментном превращении нитрата в нитрит с участием фермента нитрат-редуктазы и колориметрической регистрации концентрации нитрита по азокрасителю, образующемуся в реакции Грисса. Концентрацию измеряли в нг/мл. Определение концентрации ЭТ-1 в плазме крови проводили методом ИФА с помощью набора «Эндотелин 1-21» (Кат. №442-0052, ВСМ Биохиммак, Россия) и измеряли в нг/мл. Определение концентрации 5-НТ в плазме крови и тромбоцитах проводили методом ИФА с помощью набора «Серотонин ИФА» (Кат. №ЕIА5061, «ДРГ инструмент, Г.М.Б.Х.», Германия) и измеряли в нг/мл. Для определения концентрации 5-НТ в тромбоцитах пересчет велся на 10⁹ тромбоцитов.

Концентрация 5-НТ в сыворотке крови неполовозрелых крыс линии SHR составила 182% от 100% у крыс линии Вистар-Киото. Соотношение SHR/контроль составило 1,8:1 (р≤0,05) (Фиг. 5). Количество тромбоцитов в крови крыс линии SHR составило 324,5±56,9×10⁹, а у нормотензивных крыс линии Вистар-Киото существенно меньше - 209,0±30,6×10⁹ (р≤0,01). При этом концентрация 5-НТ в тромбоцитах крови у неполовозрелых крыс линии SHR ниже, чем и у крыс линии Вистар-Киото и составляет 43% от 100% контроля. Соотношение SHR/контроль составило 0,4:1 (р≤0,05) (Фиг. 6).

Концентрация ЭТ-1 в плазме крови неполовозрелых крыс линии SHR значительно выше таковой у крыс линии Вистар-Киото в 2,9 раз и составляет 288% от 100% у контроля (р≤0,05) (Фиг. 7).

Концентрация NO в сыворотке крови неполовозрелых крыс линии SHR составляет 122% от 100% у одновозрастных крыс линии Вистар-Киото, соотношение SHR/контроль 1,2:1 (р≤0,05) (Фиг. 8).

Обнаруженное в плазме, сыворотке и тромбоцитах крови изменение уровня эндотелина-1 (ЭТ-1), серотонина (5-НТ) и оксида азота (NO) на модели эссенциальной артериальной гипертензии хорошо согласуется с результатами, полученными при анализе крови у больных, имеющих лабильную или стабильную формы эссенциальной артериальной гипертензии. При этом изменение концентраций, обнаруженное на модели эссенциальной артериальной гипертензии, больше напоминает изменение, наблюдаемое в крови у больных с лабильной формой эссенциальной артериальной гипертензии. Увеличение концентрации оксида азота (NO) у подростков с лабильной формой ЭАГ крыс линии SHR свидетельствует о развитии компенсаторной реакции, направленной на расширение периферических артерий и снижение артериального давления.

Предлагаемый способ ранней диагностики эссенциальной артериальной гипертензии по использованию в качестве биомаркеров концентрации оксида азота, эндотелина-1, серотонина в плазме, сыворотке и тромбоцитах крови может широко применяться при проведении диспансеризации детского населения и в настоящее время является одним из наиболее достоверных. Его применение впервые позволит выявить заболевание на ранней стадии по использованным показателям, а, следовательно, применять профилактическое лечение с целью предотвращения повышения артериального давления, исключения факторов риска и продления доклинической стадии на неограниченно долгое время.

Фиг. 1. Концентрация серотонина в сыворотке крови у нелеченых больных при лабильной и стабильной формах ЭАГ. Контроль - здоровые нормотензивные подростки, ЛАГ - подростки с лабильной артериальной гипертензией, САГ - подростки со стабильной артериальной гипертензией, * р<0.0001 (А-1), # р 0.0001 (А-2), @ р<0.0001 (1-2).

Фиг. 2. Концентрация серотонина в кровяных пластинках у нелеченых больных при лабильной и стабильной формах ЭАГ. Контроль - здоровые нормотензивные подростки, ЛАГ - подростки с лабильной артериальной гипертензией, САГ - подростки со стабильной артериальной гипертензией, * р<0.0001 (А-1), # р<0.0001 (А-2), @ р<0.0001 (1-2).

Фиг. 3. Концентрация эндотелина-1 в плазме крови у нелеченых больных при лабильной и стабильной формах ЭАГ. Контроль - здоровые нормотензивные подростки, ЛАГ - подростки с лабильной артериальной гипертензией, САГ - подростки со стабильной артериальной гипертензией, * р<0.0001 (А-1), # р<0.0001 (А-2).

Фиг. 4. Концентрация оксида азота в сыворотке крови у нелеченых больных при лабильной и стабильной формах ЭАГ. Контроль - здоровые нормотензивные подростки, ЛАГ - подростки с лабильной артериальной гипертензией, САГ - подростки со стабильной артериальной гипертензией. * р<0.0001 (А-1), # р<0.0001 (А-2), @ р<0.0001 (1-2).

Фиг. 5. Концентрация серотонина в сыворотке крови у неполовозрелых крыс линии SHR. Контроль - нормотензивные неполовозрелые крысы, SHR - спонтанно- гипертензивные крысы, * р<0.0001 (А-1).

Фиг. 6. Концентрация серотонина в кровяных пластинках у неполовозрелых крыс линии SHR. Контроль - нормотензивные неполовозрелые крысы, SHR - спонтанно- гипертензивные крысы, * р<0.0001 (А-1).

Фиг. 7. Концентрация эндотелина-1 в плазме крови у неполовозрелых крыс линии SHR. Контроль - нормотензивные неполовозрелые крысы, SHR - спонтанно- гипертензивные крысы, * р<0.0001 (А-1).

Фиг. 8. Концентрация оксида азота в сыворотке крови у неполовозрелых крыс линии SHR. Контроль - нормотензивные неполовозрелые крысы, SHR. - спонтанно- гипертензивные крысы, * р<0.0001 (А-1).