×
04.04.2018
218.016.343f

Способ приготовления питательной среды для выращивания пробиотических культур

Вид РИД

Изобретение

Юридическая информация Свернуть Развернуть
Краткое описание РИД Свернуть Развернуть
Аннотация: Изобретение относится к ветеринарной микробиологии. Способ приготовления питательной среды для выращивания пробиотических культур предусматривает получение соевого гидролизата из расчета 24-48 г сухого соевого молока на 1 л воды гидролизом с помощью пепсина в течение 48 ч с получением гидролизата. Полученный гидролизат подвергают фильтрации и стерилизации с последующим добавлением пептона, глюкозы и воды в заданном соотношении компонентов с получением питательной среды. Питательную среду нагревают, охлаждают, фильтруют, устанавливают рН среды в пределах 6,8-7,0 и стерилизуют при заданных параметрах. Изобретение позволяет упростить способ приготовления питательной среды. 4 пр.
Реферат Свернуть Развернуть

Предлагаемое изобретение относится к ветеринарной микробиологии, в частности к способам получения ростовой среды для молочнокислых бактерий, и может быть использовано в производстве лечебно-профилактических и лечебных препаратов.

В настоящее время в России идет активная разработка и внедрение безопасных, эффективных пробиотических препаратов при выращивании сельскохозяйственных животных и получении продукции животноводства. Пробиотики назначают для восстановления облигатной микрофлоры после длительного лечения антибиотиками и сульфаниламидными препаратами, терапии при гастритах, энтеритах, колитах. Пробиотики, нормализуя микрофлору кишечника животных, подавляют развитие кишечной палочки и гнилостных бактерий. Продукты жизнедеятельности молочнокислых бактерий благотворно влияют на секреторную деятельность желудочно-кишечного тракта, возбуждают аппетит, повышают усвояемость корма. Важное значение имеет также среда, на которой культивируют бактерии.

На данном этапе питательная среда должна быть достаточно бюджетной для производства, иметь низкую стоимость, включать все основные компоненты, соответствующие потребностям бактерий. Культивирование в такой среде должно способствовать, как минимум, сохранению пробиотических свойств микроорганизмов, обеспечивать достаточно длительное хранение при поддержании определенной массы жизнеспособных микроорганизмов, не требовать особенных условий хранения.

Известен способ получения питательной среды на основе печеночного настоя. Для ее приготовления к 1000 мл дистиллированной воды добавляют пептон, хлористый натрий, глюкозу, дрожжевой экстракт и печеночный настой. Смесь нагревают до кипения. После охлаждения фильтруют через ватно-марлевый фильтр и устанавливают рН-6,8. Среду стерилизуют автоклавированием при 1 атм. 30 минут. Среда имеет соломенный цвет с серо-белым осадком, легко разбивающимся при встряхивании. Количество жизнеспособных микробных клеток не менее 1⋅107(КОЕ), млн/см3.

Известен способ приготовления гидролизатной среды на основе гидролизата белкового компонента, включающий ферментативный гидролиз, смешивание с уксусной кислотой, кипячение, фильтрацию, разведение, введение в гидролизат стабилизирующих добавок, стерилизацию полученной гидролизатной среды, введение суточной культуры микроорганизмов, их культивирование. При этом ферментативный гидролиз проводят в два этапа, один в кислой среде с использованием пепсина, другой - в щелочной среде с использованием панкреатина с концентрацией 5-10 г/л. Выход гидролизата, из которого готовят гидролизатную среду, составляет не менее 82 об. %, а содержание аминокислот 2,2-2,5 г/л. В качестве стабилизирующих добавок, количество которых составляет не менее 0,59 об.%, используют агар-агар в количестве 0,8-2,0 г/л, NaCl - 2,0-5,0 г/л, лактулозу или лактозу - 0,15-15,0 г/л, пептон - 2,5-15,0 г/л, цистин или цистеин солянокислый - 0,15-0,5 г/л, аскорбиновую кислоту - 0,3-0,5 г/л. В качестве белкового компонента для приготовления гидролизатной среды может быть использована смесь компонентов животного и растительного происхождения (1).

За прототип мы взяли наиболее близкий к заявляемому техническому решению по совокупности существенных признаков и достигаемому результату способ, предусматривающий приготовление питательной среды на основе ферментативного гидролизата белкового компонента с использованием соевоевого молока, а в качестве фермента для гидролиза - пепсин(2).

Соевое молоко готовят путем разведения сухого соевого порошка в воде согласно рецептуре, обычная концентрация составляет 7,5% (75 грамм на 1 литр воды) с последующим отстаиванием, процеживанием и кипячением. После охлаждения до 38-40°C доводят pH молока до 1,3-4,5, после вышеуказанной коррекции pH в соевое молоко вносят пепсин, проводят термостатирование молока при 37 град. С в течение 4 часов, при этом в процессе гидролиза происходит сдвиг pH в щелочную сторону на 0,2. При проведении гидролиза при pH ниже 4,5 после его окончания pH корректируют раствором NaOH (20%) до 4,5. Получаемый гидролизат представляет собой однородную мутную жидкость с небольшим количеством осаждающихся на дне белесоватых хлопьев и со специфическим запахом и вкусом соевого молока. Отстоявшийся гидролизат сливают с осадка, разводят дистиллированной водой 1:1, добавляют агар-агар, расплавляют, вносят хлористый натрий, пептон, нагревают до 80 град. С. Далее устанавливают pH питательной среды 7,5-7,6, кипятят в течение 15 мин, отстаивают, сливают с осадка, доводят горячей дистиллированной водой до исходного объема, добавляют лактозу, аскорбиновую кислоту в количестве 0,5 г/л. В среду вносят 5% маточной культуры бифидобактерий, и/или лактобактерий, и/или молочнокислых стрептококков и проводят культивирование бактерий путем термостатирования в течение 18 час. Исследования проб полученной маточной бактериальной культуры показали полное отсутствие посторонней микрофлоры как сразу после окончания культивирования, так и спустя 30 суток, при этом титр на гидролизатно-соевоей среде составил до 10×107 микробных клеток в 1 мл среды и не менялся в течение всего периода хранения закваски (30 суток). Не менялась также и морфология клеток.

Недостатком данного способа является сложность приготовления, длительность приготовления, ограниченный срок хранения.

В задачу наших исследований входило открытие нового способа создания питательной среды для выращивания пробиотических культур, обеспечивающей длительное сохранение микробной массы в жизнеспособном состоянии, дешевой в производстве.

Наша задача решается тем, что количество сухого соевого порошка вносимого сокращается до 24,0-28,0 грамм против обычной концентрации 75 грамм на 1 литр воды. Термостатирование под воздействием фермента пепсина длится в течении 48 часов, обеспечивая более полный гидролиз белков.

Через 48 часов гидролизат фильтруют через ватно-марлевый фильтр и автоклавируют при 1 атмосфере в течение часа. Готовый гидролизат используют для приготовления ростовой среды. Для ее приготовления к фильтрованной воде добавляют пептон, глюкозу и соевый гидролизат. Смесь нагревают до кипения. После охлаждения фильтруют через бумажный фильтр и устанавливают pH-метром 6,8-7,0. Среду стерилизуют автоклавированием при 1 атм. 30 минут. Культуры пробиотических микроорганизмов высевают в ростовую среду из расчета соотношения культуры и ростовой среды 1:20. Культивируют 24 часа. КОЕ/г после культивирования составляет не менее 1×109ед. Данный способ обеспечивает более полный гидролиз белков, срок хранения среды увеличивается до 6 месяцев в закрытом флаконе.

Изобретение иллюстрируют следующие примеры.

Пример 1: приготовление питательной среды в оптимальных параметрах.

Сухое соевое молоко 24 г разводят в 1 литре фильтрованной воды. Воду подогревают до 45-50°C и постоянно помешивают, до получения однородной жидкости. После охлаждения смеси до 37°C в нее вносят пепсин и помещают в термостат. Через 48 часов полученный гидролизат фильтруют через ватно-марлевый фильтр и автоклавируют при 1 атмосфере в течение часа. Далее готовят гидролизно-соевую среду. Для этого к 1000 мл фильтрованной воды добавляют 1 г пептона, 10 г глюкозы и 120,0 мл соевого гидролизата. Смесь нагревают до кипячения. После охлаждения фильтруют через бумажный фильтр и устанавливают pH 6,8-7,0. Среду стерилизуют при 1 атм. 30 мин. Среда готова для использования.

Пример 2: приготовление питательной среды в оптимальных параметрах.

Сухое соевое молоко 28 г разводят в 1 литре фильтрованной воды. Воду подогревают до 45-50°C и постоянно помешивают, до получения однородной жидкости. Охлаждают смесь до 37°C, вносят пепсин и термостатируют. Через 48 часов полученный гидролизат фильтруют и автоклавируют при 1 атмосфере в течение часа. Готовят гидролизно-соевую среду. Для этого к 1000 мл фильтрованной воды добавляют 1 г пептона, 10 г глюкозы и 120,0 мл соевого гидролизата. Смесь доводят до кипения. После охлаждения фильтруют через бумажный фильтр и устанавливают pH 6,8-7,0. Среду стерилизуют при 1 атм. 30 мин. Среда готова для использования.

Пример 3: приготовление питательной среды с экспозицией гидролиза сои менее 48 часов.

Сухое соевое молоко 25 г разводят в 1 литре фильтрованной воды. Воду подогревают до 45-50°C и постоянно помешивают, до получения однородной жидкости. После охлаждения смеси до 37 в нее вносят пепсин и помещают в термостат. Через 40 часов полученный гидролизат фильтруют через ватно-марлевый фильтр и автоклавируют при 1 атмосфере в течение часа. Далее готовят гидролизно-соевую среду. Для этого к 1000 мл фильтрованной воды добавляют 1 г пептона, 10 г глюкозы и 120,0 мл соевого гидролизата. Смесь нагревают до кипячения. После охлаждения фильтруют через бумажный фильтр и устанавливают pH 6,8-7,0. Среду стерилизуют при 1 атм. 30 мин. В среду, готовую для использования, засевают посевной материал, состоящий из производственных штаммов: Bifidobacterium thermophilum тп-87, Lactobacillus acidofilus, Lactobacillus plantarum, Lactococcus lactissubsp.diacetilactis, Bacillus subtillus из расчета 1:20 (посевной материал \ гидролизно-соевая среда). Получена конечная концентрация: 0,4×109 м.клеток в мл, меньшая, чем с оптимальными параметрами.

Пример 4: приготовление питательной среды со снижением pH до 6,7.

Сухое соевое молоко 25 г разводят в 1 литре фильтрованной воды. Воду подогревают до 45-50°C и постоянно помешивают, до получения однородной жидкости. После охлаждения смеси до 37°C в нее вносят пепсин и помещают в термостат. Через 48 часов полученный гидролизат фильтруют через ватно-марлевый фильтр и автоклавируют при 1 атмосфере в течение часа. Далее готовят гидролизно-соевую среду. Для этого к 1000 мл фильтрованной воды добавляют 1 г пептона, 10 г глюкозы и 120,0 мл соевого гидролизата. Смесь нагревают до кипячения. После охлаждения фильтруют через бумажный фильтр и устанавливают pH 6,7. Среду стерилизуют при 1 атм. 30 мин. В среду, готовую для использования засевают посевной материал, состоящий из производственных штаммов: Bifidobacterium thermophilum тп-87, Lactobacillus acidofilus, Lactobacillus plantarum, Lactococcus lactissubsp.diacetilactis, Bacillus subtillus из расчета 1:20 (посевной материал \ гидролизно-соевая среда). В серии посевов получены конечные концентрации: от 1×106 до 1,4×107 м.клеток в мл, меньшие, чем при использовании оптимальных параметров.

Для проверки количества жизнеспособных микробных клеток после 7 месяцев хранения культуры были высеяны на элективные питательные среды методом серийных разведений. Рост отмечен до 9 разведений:

Bifidobacterium thermophilum тп-87 - 7×109 КОЕ/г

Lactobacillus acidofilus - 1×109 КОЕ/г

Lactobacillus plantarum - 4×109 КОЕ/г

Lactococcus lactis subsp.diacetilactis - 2×109 КОЕ/г

Bacillussubtillus - 1×108 КОЕ/г

Через 12 месяцев хранения образцы были повторно высеяны на элективные питательные среды, методом серийных разведений, количество их снизилось:

Bifidobacterium thermophilum тп-87 - 4×107 КОЕ/г

Lactobacillus acidofilus - 1×105 КОЕ/г

Lactobacillus plantarum - 1×109 КОЕ/г

Lactococcuslactissubsp.diacetilactis - 1×107 КОЕ/г

Bacillussubtillus - 1×105 КОЕ/г

При определении pH установлено значительное его снижение и превышение допустимой нормы - до 4,2. В результате проведенных исследований было принято решение установить срок годности среды 6 месяцев со дня изготовления.

Список литературы

1. Патент РФ №2207019. «Биологически активная добавка к пище и способ ее приготовления», МПК A23L 1/30, A23J 3/04, A23J 3/14, A23J 3/34, C12N 1/20, A23C 9/12, опубл. 27.06.2003 г.

2. Патент РФ №2087532 «Питательная среда для накопления биомассы бифидобактерий», МПК C12N 1/20, A61K 35/74, A23C 9/12 опубл. 20.08.97 г.

Способ приготовления питательной среды для выращивания пробиотических культур, предусматривающий получение соевого гидролизата из расчета 24-28 г сухого соевого молока на 1 л воды гидролизом с помощью пепсина в течение 48 часов, фильтрацию гидролизата, его стерилизацию в течение 1 часа при 1 атм и добавление его в количестве 120 мл к смеси 1г пептона, 10 г глюкозы и 1л воды, нагревание до кипения, охлаждение, фильтрацию и установление рН в пределах 6,8-7,0 с последующей стерилизацией готовой среды при 1 атм в течение 30 мин.
Источник поступления информации: Роспатент

Showing 11-20 of 26 items.
10.09.2015
№216.013.7a82

Способ определения физиологического состояния полезных насекомых перед вхождением в анабиоз, зимовку и устройство для его осуществления

Группа изобретений относится к области пчеловодства. Для определения физиологического состояния полезных насекомых перед вхождением в анабиоз, зимовку извлекают гипофаренгиальные железы, жировые тела, яичники, помещают их в закрепляющую жидкость, затем на предметный стол бинокулярной лупы....
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002562951
Дата охранного документа: 10.09.2015
10.12.2015
№216.013.9862

Способ снижения серопозитивности живых противобруцеллезных вакцин для сельскохозяйственных животных

Представленное изобретение относится к биотехнологии, в частности к ветеринарной микробиологии, и касается способа снижения серопозитивности живых противобруцеллезных вакцин из штаммов Brucella abortus 19 или Brucella melitensis Rev-1 для сельскохозяйственных животных. Охарактеризованный способ...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002570630
Дата охранного документа: 10.12.2015
10.04.2016
№216.015.2c8e

Биотрилакт - биопрепарат для повышения жизнедеятельности и активности пчел в закрытом грунте

Изобретение относится к области биотехнологии и ветеринарии, а именно к производству биопрепаратов для повышения жизнедеятельности и активности пчелиных семей в закрытом грунте. Биопрепарат содержит в одной пчелиной дозе в качестве биологически активного вещества сухую бактериальную массу...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002579266
Дата охранного документа: 10.04.2016
27.08.2016
№216.015.50ba

Способ серологической диагностики йерсиниоза лососевых рыб, вызываемого yersinia ruckeri, методом иммуноферментного анализа и диагностический набор для осуществления способа

Группа изобретений относится к области ветеринарной биотехнологии, микробиологии и может быть использована для выявления антигена возбудителя йерсиниоза лососевых - Yersinia ruckeri в биологическом материале как для диагностики болезней рыб в ветеринарии, так и для научных исследований методом...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002595883
Дата охранного документа: 27.08.2016
12.01.2017
№217.015.5c37

Средство для защиты лап собак от агрессивных факторов внешней среды

Изобретение относится к ветеринарии, в частности к средствам защиты лап животных от агрессивных факторов внешней среды. Средство для защиты лап собак от агрессивных факторов внешней среды включает ланолин, триэтиленгликоль, полиэтиленгликоль 400, глицерин, соли лантаноидов (лантан, церий,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002589698
Дата охранного документа: 10.07.2016
13.01.2017
№217.015.7c07

Способ профилактики и лечения мешотчатого расплода пчел

Изобретение относится к области ветеринарии и пчеловодства, в частности к способу профилактики и лечения мешотчатого расплода пчел. Способ включает пропитку раствором эндоглюкина 50 мл 5000 ед. активности 14 бумажно-картонных пластин размером 25×170×1 мм. Затем осуществляют внесение четырех...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002600702
Дата охранного документа: 27.10.2016
13.01.2017
№217.015.7c34

Способ оздоровления семей пчел от варрооза

Изобретение относится к области ветеринарии и пчеловодства, в частности к способу оздоровления семей пчел от варрооза. Способ заключается в том, что из семьи пчел удаляют весь печатный трутневый и пчелиный расплод в два приема с интервалом 7-10 дней в активный период жизнедеятельности пчел...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002600707
Дата охранного документа: 27.10.2016
13.01.2017
№217.015.920a

Средство для профилактики мастита у крупного рогатого скота

Изобретение относится к ветеринарии, а именно к средствам профилактики мастита у крупного рогатого скота. Средство содержит глицерин, азотнокислый церий, триэтиленгликоль, полиэтиленгликоль, масло расторопши, масло облепихи, этиловый спирт, фурацилин, воду очищенную в заданном соотношении...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002605631
Дата охранного документа: 27.12.2016
25.08.2017
№217.015.a810

Способ лечения болезней бактериальной этиологии у сельскохозяйственных животных и птиц

Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для лечения болезней бактериальной этиологии у сельскохозяйственных животных и птиц. Способ включает введение животным и птице антибиотика широкого спектра действия Ципровентор совместно с бесклеточными пробиотиками Бацинил или...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002611351
Дата охранного документа: 21.02.2017
25.08.2017
№217.015.ac04

Способ диагностики анаплазмоза рогатого скота методом полимеразной цепной реакции

Изобретение относится к области ветеринарии и молекулярной биотехнологии и предназначено для диагностики анаплазмоза рогатого скота методом полимеразной цепной реакции (ПЦР). Осуществляют выявление фрагмента гена MSP4, кодирующего ДНК анаплазм, с использованием 10 различных пар прямых и...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002612263
Дата охранного документа: 03.03.2017
Showing 11-20 of 42 items.
10.09.2015
№216.013.7a82

Способ определения физиологического состояния полезных насекомых перед вхождением в анабиоз, зимовку и устройство для его осуществления

Группа изобретений относится к области пчеловодства. Для определения физиологического состояния полезных насекомых перед вхождением в анабиоз, зимовку извлекают гипофаренгиальные железы, жировые тела, яичники, помещают их в закрепляющую жидкость, затем на предметный стол бинокулярной лупы....
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002562951
Дата охранного документа: 10.09.2015
10.12.2015
№216.013.9862

Способ снижения серопозитивности живых противобруцеллезных вакцин для сельскохозяйственных животных

Представленное изобретение относится к биотехнологии, в частности к ветеринарной микробиологии, и касается способа снижения серопозитивности живых противобруцеллезных вакцин из штаммов Brucella abortus 19 или Brucella melitensis Rev-1 для сельскохозяйственных животных. Охарактеризованный способ...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002570630
Дата охранного документа: 10.12.2015
10.04.2016
№216.015.2c8e

Биотрилакт - биопрепарат для повышения жизнедеятельности и активности пчел в закрытом грунте

Изобретение относится к области биотехнологии и ветеринарии, а именно к производству биопрепаратов для повышения жизнедеятельности и активности пчелиных семей в закрытом грунте. Биопрепарат содержит в одной пчелиной дозе в качестве биологически активного вещества сухую бактериальную массу...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002579266
Дата охранного документа: 10.04.2016
27.08.2016
№216.015.50ba

Способ серологической диагностики йерсиниоза лососевых рыб, вызываемого yersinia ruckeri, методом иммуноферментного анализа и диагностический набор для осуществления способа

Группа изобретений относится к области ветеринарной биотехнологии, микробиологии и может быть использована для выявления антигена возбудителя йерсиниоза лососевых - Yersinia ruckeri в биологическом материале как для диагностики болезней рыб в ветеринарии, так и для научных исследований методом...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002595883
Дата охранного документа: 27.08.2016
12.01.2017
№217.015.5c37

Средство для защиты лап собак от агрессивных факторов внешней среды

Изобретение относится к ветеринарии, в частности к средствам защиты лап животных от агрессивных факторов внешней среды. Средство для защиты лап собак от агрессивных факторов внешней среды включает ланолин, триэтиленгликоль, полиэтиленгликоль 400, глицерин, соли лантаноидов (лантан, церий,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002589698
Дата охранного документа: 10.07.2016
13.01.2017
№217.015.7c07

Способ профилактики и лечения мешотчатого расплода пчел

Изобретение относится к области ветеринарии и пчеловодства, в частности к способу профилактики и лечения мешотчатого расплода пчел. Способ включает пропитку раствором эндоглюкина 50 мл 5000 ед. активности 14 бумажно-картонных пластин размером 25×170×1 мм. Затем осуществляют внесение четырех...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002600702
Дата охранного документа: 27.10.2016
13.01.2017
№217.015.7c34

Способ оздоровления семей пчел от варрооза

Изобретение относится к области ветеринарии и пчеловодства, в частности к способу оздоровления семей пчел от варрооза. Способ заключается в том, что из семьи пчел удаляют весь печатный трутневый и пчелиный расплод в два приема с интервалом 7-10 дней в активный период жизнедеятельности пчел...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002600707
Дата охранного документа: 27.10.2016
13.01.2017
№217.015.920a

Средство для профилактики мастита у крупного рогатого скота

Изобретение относится к ветеринарии, а именно к средствам профилактики мастита у крупного рогатого скота. Средство содержит глицерин, азотнокислый церий, триэтиленгликоль, полиэтиленгликоль, масло расторопши, масло облепихи, этиловый спирт, фурацилин, воду очищенную в заданном соотношении...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002605631
Дата охранного документа: 27.12.2016
25.08.2017
№217.015.a810

Способ лечения болезней бактериальной этиологии у сельскохозяйственных животных и птиц

Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для лечения болезней бактериальной этиологии у сельскохозяйственных животных и птиц. Способ включает введение животным и птице антибиотика широкого спектра действия Ципровентор совместно с бесклеточными пробиотиками Бацинил или...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002611351
Дата охранного документа: 21.02.2017
25.08.2017
№217.015.ac04

Способ диагностики анаплазмоза рогатого скота методом полимеразной цепной реакции

Изобретение относится к области ветеринарии и молекулярной биотехнологии и предназначено для диагностики анаплазмоза рогатого скота методом полимеразной цепной реакции (ПЦР). Осуществляют выявление фрагмента гена MSP4, кодирующего ДНК анаплазм, с использованием 10 различных пар прямых и...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002612263
Дата охранного документа: 03.03.2017
+ добавить свой РИД