×
17.02.2018
218.016.2af2

Средство, увеличивающее устойчивость сердца к реперфузионному повреждению

Вид РИД

Изобретение

Юридическая информация Свернуть Развернуть
Краткое описание РИД Свернуть Развернуть
Аннотация: Изобретение относится к применению соединения с химической формулой Tyr-dAla-Phe-Gly-Phe-Leu-NH2 в качестве средства, увеличивающего устойчивость сердца к реперфузионному повреждению, например, для уменьшения повреждения миокарда при ишемии/реперфузии у пациентов с острым инфарктом миокарда, в ходе кардиохирургических вмешательств с использованием искусственного кровообращения и при трансплантации сердца. 3 табл., 1 пр.
Реферат Свернуть Развернуть

Изобретение относится к разделу экспериментальной медицины и может быть использовано для создания нового эффективного средства, увеличивающего устойчивость сердца к реперфузионным повреждениям.

Реперфузионное повреждение является патофизиологической основой такого социально значимого заболевания, как острый инфаркт миокарда (ОИМ), поскольку подобные повреждения возникают при реканализации инфаркт-связанной коронарной артерии. Некоторые пациенты с ОИМ погибают, несмотря на успешное восстановление коронарного кровотока, в результате реперфузионного повреждения сердца [Марков В.А. и др., 2011]. Кроме того, этот тип повреждения миокарда возникает во время кардиохирургических вмешательств с использованием искусственного кровообращения [Марков В.А. и др., 2011]. Применяемые в настоящее время в клинической практике фармакологические агенты не способны существенно повлиять на реперфузионные повреждения сердца.

По этой причине создание лекарственных средств, способных предупреждать реперфузионные повреждения сердца, является актуальной задачей фармакологии и кардиологии.

Задачей изобретения является расширение арсенала средств, увеличивающих устойчивость сердца к реперфузионным повреждениям.

Использованное вещество гексапептид «Дельтолей» было синтезировано в компании ЗАО «Синтез пептидов», Москва (Россия).

Химическая формула этого соединения:

Tyr-dAla-Phe-Gly-Phe-Leu-NH2

Синтез проводили в автоматическом режиме на пептидном синтезаторе Tribute-UV фирмы ProteinTechnologies, Inc. (США) в соответствии с программой для однократной конденсации Fmoc-аминокислот.

В работе использовали производные L-аминокислот: Fmoc-Tyr(But)-OH, Fmoc-Phe-ОН, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-dAla-OH,Fmoc-Leu-OH, а также реагенты и растворители (4-пиперидин (4-MePip), 1.8-диазабицикло[5.4.0]-ундец-7-ен (DBU), N-метилморфолин (NMM), трифторуксусная кислота (TFA), N,N,N,N-тетра метил-O-(бензотриазол-1-ил)урония тетрафторборат (TBTU) фирмы Fluka (Швейцария). Реакции конденсации проводили при помощи N,N,N',N'-тетраметил-O-(бензотриазол-1-ил)урониятетрафторбората (TBTU) в диметилформамиде (DMF) с использованием четырехкратных избытков производных аминокислоты N-метилморфолина (NMM) в качестве основания. Для деблокирования α-аминогрупп использовали раствор 10% 4-метилпиперидина (4-MePip)и 2% диазобициклоундецена(DBU) в DMF.

Синтез проводили с С-конца, исходя из 0.52 г (0.375 ммоль)амидной смолы ringamid-AMPS-resin фирмы SENNChemicals со степенью замещения 0.72 ммоль/г.

По окончании синтеза пептидил-полимер отфильтровывали, промывали DMF (3×30 мл), дихлорметаном (5×30 мл), сушили на воздухе. Получали 0.81 г Fmoc-пептидил-полимера.

Для отщепления пептида от полимера использовали смесь реагентов: 10.0 мл трифторуксусной кислоты (TFA) + 0.5 мл деионизированной воды + 0.5 мл триизобутилсилана. Время отщепления 1 час. Сырой продукт высаживали диэтиловым эфиром, отфильтровывали, промывали на фильтре эфиром. Получено 0.25 г технического продукта с содержанием основного вещества 58% по результатам аналитической высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Очистку проводили методом препаративной обращенно-фазной ВЭЖХ, используя колонку Kromasil 100-10-С18 (50×250 мм), размер частиц сорбента 10 мкм. В качестве элюентов применяли буфер А - 0.1% TFA, буфер Б - 70% ацетонитрила в буфере А. Элюцию проводили от 100% буфера А градиентом буфера Б (от 0 до 10% за 5 мин и от 10% до 60% за 100 мин) со скоростью потока 1 мл в мин. Пептид детектировали при длине волны 220 нм. Получено 120 мг готового вещества с содержанием основного продукта 99.35%. Выход 45.3% в расчете на стартовую аминокислоту.

Аналитическую ВЭЖХ проводили на хроматографе Gilson (Франция), на колонке Kromasil 100 С18, 5 мкм (4.6×250 мм) (Швеция), подвижная фаза: буфер А - 0.05М KH2PO4, рН 3.0, буфер Б - 70% ацетонитрила в буфере А, элюция градиентом концентрации буфера Б в буфере А от 20 до 80% за 30 мин. Детекция - при 220 нм.

Структура полученного пептида доказана спектрами 1Н-ЯМР и данными масс-спектрометрии. Спектры 1Н-ЯМР получены на спектрометре WM-500 (Bruker) (ФРГ) в DMSO-d6 при 300 К, концентрация пептида составляла 2-3 мг/мл. Масс-спектры регистрировали на приборе UltrafexTOF/TOF (BrukerDaltonics, ФРГ) с время пролетной базой методом MALDI.

ИССЛЕДОВАНИЕ ИНФАРКТ-ЛИМИТИРУЮЩЕГО ДЕЙСТВИЯ

Исследование инфаркт-лимитирующего действия пептида было проведено на модели реперфузионного повреждения миокарда крысы.

Эксперименты проведены на крысах-самцах линии Вистар массой 250-300 г. Животных наркотизировали внутрибрюшинным введением α-хлоралозы (60 мг/кг, внутрибрюшинно, Sigma) и подключали к аппарату искусственной вентиляции легких "SAR-830 Series" (CWE Inc. США). Коронароокклюзию и реперфузию осуществляли по методу J.E. Schultz и соавт. [Schultz J.E. et al., 1997]. Регистрация частоты сердечных сокращений (ЧСС) и артериального давления (АД) осуществлялась с помощью датчика давления SS13L (BiopacSystemInc., Goleta, Калифорния, США), сопряженного с аппаратом для электрофизиологических исследований МР35 (Biopac System Inc., Goleta, США). Данный прибор также использовался для регистрации ЭКГ. После 45 минут ишемии узел лигатуры развязывали и восстановление кровотока подтверждали появлением эпикардиальной гиперемии. Продолжительность реперфузии составляла 2 часа. Выявление зоны некроза и области риска проводили по методу J. Neckar и соавт. [Neckar J. et al., 2003]. После реперфузии сердце удаляли из грудной клетки и промывали ретроградно через аорту физиологическим раствором. Для определения зоны риска (ЗР) лигатуру вновь затягивали и миокард окрашивали струйно через аорту 5% перманганатом калия. Зоной риска принято называть миокард, подвергнутый ишемии-реперфузии. После промывки физиологическим раствором делали срезы сердца толщиной в 1 мм перпендикулярно к продольной оси с помощью слайсера HSRA001-1 (Zivic Instruments, Pittsburgh, США). Визуализацию зоны некроза от зоны риска осуществляли путем окрашивания 1%-ным раствором 2,3,5-трифенил тетразолия хлорида в течение 30 минут при 37°C. В основе метода лежит способность 2,3,5-трифенил тетразолия хлорида приобретать стойкую окраску при переходе из окисленного состояния в восстановленное под действием дегидрогеназ. Поскольку в погибших кардиомиоцитах отсутствовали дегидрогеназы, некротизированный миокард не окрашивался. После окончания окраски срезы помещали в 10% раствор формальдегида на 1 сутки. Срезы сканировали с обеих сторон сканером HP Scan Jet G4050. Размер ЗР и зоны инфаркта (ЗИ) определяли компьютеризированным планиметрическим методом. Размер инфаркта определяли как соотношение ЗИ/ЗР в процентах от размера зоны риска.

Исследование кардиопротекторной активности «Дельтолей» проводилось по следующей схеме.

«Дельтолей» растворяли extempore в физиологическом растворе и вводили внутривенно в дозе 0,1 мг/кг после 40 минут ишемии за 5 минут до начала реперфузии (основная группа).

Контролем служила группа животных, которым по такой же схеме вводили физиологический раствор.

В качестве препарата сравнения был выбран препарат даларгин (Tyr-D-Ala-Gly-Phe-Leu-Arg). Известно, что даларгин, так же как и исследуемый препарат, представляет собой гексапептид, близкий по структуре к исследуемому веществу. Даларгин является фармакологическим препаратом и применяется в клинической практике как противоязвенное средство.

Группа сравнения включала 14 крыс, которым аналогично вводили даларгин в дозе 0,1 мг/кг.

Полученные результаты обрабатывали статистически с использованием критерия Манна-Уитни.

После 45-минутной коронароокклюзии и последующей 2-часовой реперфузии размер инфаркта в контрольной группе животных оказался равным 46,6±5,1% от зоны риска (табл. 2).

В основной группе соотношение зоны инфаркта/зона риска составляло 30,9±4,9%, что на 33% меньше аналогичного показателя в группе контроля (р<0,05) (табл. 2).

В группе сравнения (введение даларгина за 5 минут до реперфузии) размер зоны некроза составил 44,2±5,7% от зоны риска и не отличался от значений контрольной группы (табл. 2).

Измерение ЧСС у крыс в экспериментальных группах не выявило статистически значимых изменений этого параметра на фоне введения «Дельтолей» или даларгина на протяжении всего эксперимента (Табл. 3).

Измерение АД у крыс в экспериментальных группах не выявило статистически значимых изменений этого параметра на фоне введения «дельтолея» или даларгина на протяжении всего эксперимента (данные не представлены в таблице).

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Полученные нами результаты свидетельствуют о том, что гексапептид «дельтолей» способствует ограничению размера зоны некроза при 45-минутной коронароокклюзии и 2-часовой реперфузии, то есть оказывает кардиопротекторный эффект, достоверно больший, чем препарат сравнения, и не влияет на ЧСС и АД при ишемии-реперфузии. Положительное действие «дельтолея», приводящее к уменьшению размера зоны реперфузионного некроза, было выявлено впервые. В патентной и научно-медицинской литературе не найдено сведений о том, что «дельтолей» увеличивает устойчивость сердца к реперфузионным повреждениям. Данное свойство «дельтолея» не вытекает из уровня техники в данной области и неочевидно для специалиста.

Применение предлагаемого изобретения позволит расширить арсенал средств, увеличивающих устойчивость сердца к реперфузионным повреждениям.

Изобретение может быть использовано в экспериментальных исследованиях для создания нового кардиопротекторного лекарственного препарата; для уменьшения повреждения миокарда при ишемии/реперфузии у пациентов с острым инфарктом миокарда, в ходе кардиохирургических вмешательств с использованием искусственного кровообращения и при трансплантации сердца.

Исходя из вышеизложенного, следует считать предлагаемое изобретение соответствующим условиям патентоспособности «Новизна», «Изобретательский уровень», «Промышленная применимость».

ЛИТЕРАТУРА

1. Марков В.А., Рябов В.В., Максимов И.В., Вышлов Е.В., Демьянов С.В., Сыркина А.Г., Белокопытова Н.В., Шурупов B.C., Оюнаров Э.О., Максимов А.И., Васильев А.Г. Вчера, сегодня, завтра в диагностике и лечении острого инфаркта миокарда. Сиб. мед. жур. (Томск) 2011; Т. 26, №2, Выпуск 1:8-14.

2. Schultz J.E.J., Yao Z., Cavero I., Gross G.J. Glibenclamide induced blockade of ischemic preconditioning is time dependent in intact rat heart. Am. J. Physiol. 1997; 272(6 Pt 2); H2607-H2615.

3. , , Herget J., , Cardioprotective effect of chronic hypoxia is blunted by concomitant hypercapnia. Physiol Res. 2003; 52(2): 171-5.

Применение соединения с химической формулой Tyr-dAla-Phe-Gly-Phe-Leu-NH2 в качестве средства, увеличивающего устойчивость сердца к реперфузионному повреждению.
Источник поступления информации: Роспатент

Showing 1-10 of 178 items.
27.01.2013
№216.012.1e9a

Способ консервативного лечения дакриостеноза

Изобретение относится к офтальмологии и предназначено для консервативного лечения дакриостенозов. В слезный каналец вводят гель глазной на основе фурацилина. Гель глазной на основе фурацилина вводят с помощью шприца в объеме 3 мл, через сутки, всего 8-10 раз. Способ обеспечивает восстановление...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002473335
Дата охранного документа: 27.01.2013
20.04.2013
№216.012.35aa

Способ консервативного лечения дакриостеноза

Изобретение относится к медицине, в частности к офтальмологии, и предназначено для консервативного лечения дакриостеноза. В слезный каналец вводят гель глазной офлоксацин. Гель глазной офлоксацин вводят в объеме 3 мл, через сутки, всего 8-10 раз. Способ обеспечивает восстановление проходимости...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002479291
Дата охранного документа: 20.04.2013
27.04.2013
№216.012.3950

Фармацевтическая композиция, обладающая противогипоксической, нейропротекторной и антиамнестической активностью

Изобретение относится к медицине и касается фармацевтической композиции, обладающей противогипоксической, нейропротекторной и антиамнестической активностью, представляющей собой смесь трипептидов: , и , взятых в равных соотношениях. Фармацевтическая композиция может быть выполнена в виде...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002480233
Дата охранного документа: 27.04.2013
20.05.2013
№216.012.40ae

Пептиды, обладающие цитопротекторной активностью

Изобретение относится к органической химии, конкретно к новым биологически активным пептидам, которые могут найти применение в фармакологии и медицине при создании новых лекарственных средств, обладающих цитопротекторной активностью. 28 ил., 2 табл., 12 пр.
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002482128
Дата охранного документа: 20.05.2013
10.06.2013
№216.012.46f6

Средство для антиагрегатной, антивоспалительной и цитопротекторной терапии

Изобретение относится к медицине и касается средства для профилактики и лечения заболеваний сердечно-сосудистой системы. Синтезирован пептид 3-меркаптопропионил-Phe-Ile-Ile-Arg-Lys-Pro-Asp-Lys-NH, который при большей доступности и более низкой стоимости, чем у известных аналогов, обладает...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002483746
Дата охранного документа: 10.06.2013
27.06.2013
№216.012.4f99

Композиция и применение композиции для получения средства, обладающего гепатопротективной активностью

Изобретение относится к медицине и касается средств, обладающих гепатопротективной активностью. Предложена композиция, облададающая гепатопротективной активностью, которая состоит из смеси пептидов H-Lys-Asp-Glu-OH, H-Asp-Glu-Pro-OH и H-Asp-Glu-Leu-OH, взятых в весовом соотношении...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002485970
Дата охранного документа: 27.06.2013
27.07.2013
№216.012.58ff

Средство, увеличивающее устойчивость сердца к ишемическим и последующим реперфузионным повреждениям

Предложено профилактическое применение блокатора опиоидных рецепторов СТАР в качестве средства, увеличивающего устойчивость сердца к ишемическим и последующим реперфузионным повреждениям. Показана способность СТАР предупреждать указанные повреждения (снижать массы зоны некроза и зоны риска) при...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002488404
Дата охранного документа: 27.07.2013
20.09.2013
№216.012.6b79

Амид нонапептида, препятствующий повышению гиперпроницаемости сосудистого эндотелия

Изобретение относится к биологически активным пептидам, способным предотвращать острое повышение проницаемости сосудистого эндотелия при введении реципиенту. Предложен пептид формулы H-(N-Me)-Arg-Lys-Lys-Tyr-Lys-Tyr-Arg-D-Arg-Lys-NH. Заявленный пептид может найти применение в качестве средства...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002493164
Дата охранного документа: 20.09.2013
27.10.2013
№216.012.7881

Фармацевтическая композиция, средство (варианты) и способ профилактики и лечения артрита, остеоартроза и остеохондроза позвоночника (варианты)

Изобретение относится к медицине и касается способа профилактики и лечения заболеваний суставов, включающий одновременное внутримышечное введение пептидов H-Ala-Glu-Asp-OH, Lys-Glu-Asp и Н-Lys-Glu-OH в эффективной дозе. Изобретение обеспечивает позитивное изменение динамики...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002496511
Дата охранного документа: 27.10.2013
27.12.2013
№216.012.8fcf

Средство, имитирующее феномен посткондиционирования сердца

Предложено применение вещества каннабиноидной природы HU-210 в качестве средства, имитирующего посткондиционирование. Показано снижение зоны некроза миокарда как по абсолютной величине, так и по процентному соотношению зоны инфаркта к зоне гипоперфузии. Изобретение может быть использовано для...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002502508
Дата охранного документа: 27.12.2013
Showing 1-10 of 56 items.
27.04.2013
№216.012.3950

Фармацевтическая композиция, обладающая противогипоксической, нейропротекторной и антиамнестической активностью

Изобретение относится к медицине и касается фармацевтической композиции, обладающей противогипоксической, нейропротекторной и антиамнестической активностью, представляющей собой смесь трипептидов: , и , взятых в равных соотношениях. Фармацевтическая композиция может быть выполнена в виде...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002480233
Дата охранного документа: 27.04.2013
20.05.2013
№216.012.40ae

Пептиды, обладающие цитопротекторной активностью

Изобретение относится к органической химии, конкретно к новым биологически активным пептидам, которые могут найти применение в фармакологии и медицине при создании новых лекарственных средств, обладающих цитопротекторной активностью. 28 ил., 2 табл., 12 пр.
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002482128
Дата охранного документа: 20.05.2013
10.06.2013
№216.012.46f6

Средство для антиагрегатной, антивоспалительной и цитопротекторной терапии

Изобретение относится к медицине и касается средства для профилактики и лечения заболеваний сердечно-сосудистой системы. Синтезирован пептид 3-меркаптопропионил-Phe-Ile-Ile-Arg-Lys-Pro-Asp-Lys-NH, который при большей доступности и более низкой стоимости, чем у известных аналогов, обладает...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002483746
Дата охранного документа: 10.06.2013
27.06.2013
№216.012.4f99

Композиция и применение композиции для получения средства, обладающего гепатопротективной активностью

Изобретение относится к медицине и касается средств, обладающих гепатопротективной активностью. Предложена композиция, облададающая гепатопротективной активностью, которая состоит из смеси пептидов H-Lys-Asp-Glu-OH, H-Asp-Glu-Pro-OH и H-Asp-Glu-Leu-OH, взятых в весовом соотношении...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002485970
Дата охранного документа: 27.06.2013
20.09.2013
№216.012.6b79

Амид нонапептида, препятствующий повышению гиперпроницаемости сосудистого эндотелия

Изобретение относится к биологически активным пептидам, способным предотвращать острое повышение проницаемости сосудистого эндотелия при введении реципиенту. Предложен пептид формулы H-(N-Me)-Arg-Lys-Lys-Tyr-Lys-Tyr-Arg-D-Arg-Lys-NH. Заявленный пептид может найти применение в качестве средства...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002493164
Дата охранного документа: 20.09.2013
27.10.2013
№216.012.7881

Фармацевтическая композиция, средство (варианты) и способ профилактики и лечения артрита, остеоартроза и остеохондроза позвоночника (варианты)

Изобретение относится к медицине и касается способа профилактики и лечения заболеваний суставов, включающий одновременное внутримышечное введение пептидов H-Ala-Glu-Asp-OH, Lys-Glu-Asp и Н-Lys-Glu-OH в эффективной дозе. Изобретение обеспечивает позитивное изменение динамики...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002496511
Дата охранного документа: 27.10.2013
27.12.2013
№216.012.90ba

Синтетический антиген, обладающий способностью связывать аутоантитела к мускариновому м2-рецептору

Изобретение предназначено для определения аутоантител, специфичных к мускариновому М2-рецептору, которое может быть использовано для диагностики идиопатических нарушений сердечного ритма. Создан искусственный конформационный антиген, включающий в себя пептидные фрагменты из двух внеклеточных...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002502743
Дата охранного документа: 27.12.2013
10.07.2014
№216.012.db83

Средства для профилактики и лечения заболеваний суставов и способы их применения

Группа изобретений относится к медицине и касается средств для профилактики и лечения заболеваний суставов, включающих смесь пептидов H-Ala-Glu-Asp-OH, Lys-Glu-Asp и H-Lys-Glu-OH и смесь хондроитина и/или его солей, и/или глюкозамина и/или его солей; способов их применения. Группа изобретений...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002521973
Дата охранного документа: 10.07.2014
27.04.2015
№216.013.462e

Кристаллоидные кардиоплегические растворы, содержащие додекапептиды (варианты)

Группа изобретений относится к медицине и касается кристаллоидного кардиоплегического раствора, содержащего солевой раствор, включающий натрия хлорид, калия хлорид, магния хлорид, кальция хлорид, натрия гидрокорбонат, воду для инъекций, и структурный аналог природного апелина...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002549470
Дата охранного документа: 27.04.2015
20.06.2016
№216.015.48a4

Средство, увеличивающее устойчивость сердца к аритмогенному действию ишемии и реперфузии

Изобретение относится к разделу экспериментальной медицины и может быть использовано для создания нового эффективного средства, увеличивающего устойчивость сердца к аритмогенному действию ишемии-реперфузии. Предложено применение агониста каппа-опиоидных рецепторов ICI-199441...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002587783
Дата охранного документа: 20.06.2016
+ добавить свой РИД