Результат интеллектуальной деятельности: Способ диагностики метастазов колоректального рака в печень

Изобретение относится к медицине, в частности к хирургии и биохимии, и может быть использовано для ранней диагностики метастазов колоректального рака в печень.

Известен способ лабораторной диагностики метастазов колоректального рака в печень путем изучения содержания канцер-эмбрионального антигена в периферической крови. Рост метастазов колоректального рака в печени или местный рецидив опухоли сопровождается повышением уровня канцер-эмбрионального антигена в крови, что может быть использовано для диагностики данного заболевания [Бахлаев И.Е., Фетюков А.И., Ястребова А.В., Романов А.А. Опухолевые маркеры в предоперационном обследовании и мониторинге хирургического лечения больных с колоректальным раком // Вестник хирургии им. И.И. Грекова 2011. 5; С. 19-22].

Недостатки известного способа:

Основными недостатками данного способа являются невысокая чувствительность и специфичность. Чувствительность в среднем составляет 37% и тем выше, чем больше размеры опухоли печени [Su В.В., Shi Н., Wan J. Role of serum carcinoembryonic antigen in the detection of colorectal cancer before and after surgical resection // World J Gastroenterol. 2012; 7: 2121-6].

Технический результат: повышение, чувствительности и упрощение способа.

Указанные задачи достигаются путем определения содержания меди в плазме периферической крови больных колоректальным раком. Повышение содержания меди более 37 мкмоль/л в плазме периферической крови больных свидетельствует о наличии метастазов колоректального рака в печени.

Способ осуществляют следующим образом. Объектом исследования служит кровь больных. Кровь забирают утром натощак из локтевой вены объеме 5 мл и используют для получения плазмы. Для получения плазмы кровь, полученную при венепункции, стабилизируют гепарином в дозе 10 Ед/мл крови (0,01 мл фарм. препарата гепарина активностью 5000 Ед/мл добавляли к 5 мл крови). После этого пробирку с кровью центрифугируют при 3000 об/мин в течение 10 минут. Плазму удаляют и используют для определения содержания в ней меди (Зитта Д.В., Субботин В.М., Терёхина Н.А. Влияние механической предоперационной подготовки кишечника на показатели свободно-радикального окисления в раннем послеоперационном периоде // Колопроктология. - 2010 - №3 - С. 14-19).

Принцип метода определения содержания меди в плазме крови основан на том, что батокупорин образует с ионами одновалентной меди устойчивый комплекс оранжевого цвета, пригодный для фотометрического определения.

Реагенты: набор реактивов «медь» фирмы «Erba Lachema» (Чешская республика).

Приготовление рабочих растворов:

Раствор 1: в мерную колбу вносят 1 мл реактива №1 и разбавляют дистиллированной водой точно до 100 мл. Раствор содержит 30 мкмоль Сu²⁺/л. Сохраняет стабильность несколько недель при температуре от +15 до +25°C.

Раствор 2: всю навеску реактива №3 растворяют во всем объеме реактива №4. Устойчивость 3 месяца при температуре от +2 до +8°C.

Проведение анализа. В трех пробирках смешивают раствор 2 в соотношении 1:1 с плазмой крови (проба), раствором 1 (стандарт) и дистиллированной водой (контрольный раствор). Перемешивают и через 30 минут пробу центрифугируют 10 минут при 3000 об/мин. В следующих 3 пробирках смешивают надосадочную жидкость, стандарт или контрольный раствор в соотношении 1:1 с раствором №2 (например 1 мл надосадочной жидкости, стандарта или контрольного раствора и 1 мл реактива №2). Перемешивают и в интервале времени 5-90 минут измеряют оптическую плотность пробы A₁ и стандарта А₂ против контрольного раствора при длине волны 460-500 нм в кювете с толщиной поглощающего слоя 10 мм при температуре от +15° до +25°C.

Расчет проводили по формуле:

Медь=30*A₁/A₂ мкмоль/л

A₁ - экстинкция пробы

А₂ - экстинкция стандарта

(Landers J., Zak В. Determination of serum copper and iron in a single small sample // Am J Clin Pathol. 1958 Jun; 29(6): 590-2.)

Определение содержания меди в крови используется в настоящее время для диагностики ряда заболеваний, таких как цирроз печени, болезнь Вильсона-Коновалова. Для диагностики метастазов колоректального рака в печень используется впервые.

С целью диагностики метастазов колоректального рака выполняют определение содержание меди в плазме периферической крови до оперативного лечения. Повышение содержания меди в плазме крови свыше 37 мкмоль/л говорит о наличии метастазов колоректального рака в печени.

Примеры конкретного выполнения.

Пример 1. Больной П. 67 лет. Диагноз: злокачественное новообразование среднеампуллярного отдела прямой кишки. При обследовании до операции выявлена циркулярная опухоль прямой кишки протяженностью около 6 см, по данным патогистологического исследования биоптата высокодифференцированная аденокарцинома. При ультразвуковом исследовании поражения печени не обнаружено. Содержание меди в плазме крови составило 44,66 мкмоль/л. Во время операции обнаружены множественные небольшие метастазы в обоих долях печени. Таким образом, развитие метастазов колоректального рака в печени сопровождалось значительным повышением содержания меди в плазме крови.

Пример 2. Больной Б. 77 лет. Диагноз: злокачественное новообразование сигмовидной ободочной кишки pT4b pN1a M1. При обследовании больного до операции выявлена опухоль сигмовидной ободочной кишки. Патогистологическое заключение по биоптату из опухоли - аденокарцинома. По данным компьютерной томографии выявлены очаговые образования печени. Содержание меди в плазме крови до операции составило 42 мкмоль/л. Операция: сигмоидэктомия. При операции обнаружены множественные метастазы в печени. Патогистологическое заключение по удаленному препарату: аденокарцинома толстой кишки с метастазами в печень. Таким образом, при поражении печени метастазами колоректального рака наблюдалось резкое повышение содержания меди в плазме крови больного.

Пример 3. Больной Д. 58 лет. Диагноз: злокачественное новообразование дистальной трети сигмовидной ободочной кишки. При обследовании перед операцией выявлена опухоль дистальной трети сигмовидной кишки. Патогистологическое заключение по биоптату из опухоли - аденокарцинома. При ультразвуковом исследовании и компьютерной томографии брюшной полости очаговых изменений в печени найдено не было» Содержание меди в плазме крови 43,33 мкмоль/л. Операция: сигмоидэктомия и передняя резекция прямой кишки. Во время операции выявлены метастазы колоректального рака в печени. Выполнена атипичная резекция печени. Патогистологическое исследование удаленных препаратов - аденокарцинома толстой кишки с метастазом в печень. Таким образом, развитие метастазов колоректального рака в печени сопровождалось достоверным ростом содержания меди в плазме крови.

Пример 4. Больной С. 63 лет. Диагноз: злокачественное новообразование слепой кишки рТ2 pN0 М0. По данным исследований, выполненных перед операцией, имеется злокачественная опухоль (заключение патогистологического исследования биоптата - аденокарцинома) слепой кишки. По данным КТГ и УЗИ признаков метастазирования опухоли нет. Операция: лапароскопическая правосторонняя гемиколэктомия. Во время операции метастазирования опухоли не обнаружено. По данным патогистологического исследования удаленного препарата метастазирования рака не выявлено. Содержание меди в плазме крови до операции 29,08 мкмоль/л. Таким образом, у пациента без метастазов рака толстой кишки в печень повышения содержание меди в плазме крови не наблюдалось.

Пример 5. Больная П. 63 лет. Диагноз: Злокачественное новообразование прямой кишки pT2pN0M0. Сахарный диабет 2 тип. По данным исследований, проведенных перед операцией, имеется опухоль прямой кишки. При ультразвуковом исследовании и компьютерной томографии брюшной полости очаговых образований не выявлено. Содержание меди в плазме крови 21,75 мкмоль/л. Операция: лапароскопическая передняя резекция прямой кишки. Вовремя операции метастазов рака печени также не обнаружено. Патогистологическое заключение: аденокарцинома прямой кишки с инвазий в подслизистый слой без поражения лимфатических узлов. Таким образом, у больной с злокачественным новообразованием прямой кишки без метастазов в печени не наблюдалось повышения содержания меди в плазме крови.

Определение содержания меди в плазме крови проведено у 46 больных колоректальным раком, перенесших радикальные оперативные вмешательства. Среди них у 6 выявлены метастазы в печени. В качестве контроля использовалась кровь здоровых доноров.

Содержание меди в плазме крови здоровых доноров составило 21,6±4,4 мкмоль/л. У пациентов с метастазами колоректального рака содержание меди в плазме крови было 42,8±3,2 мкмоль/л (минимальное значение 37 мкмоль/л). У пациентов колоректальным раком без метастазов в печени содержание меди в плазме крови до начала лечения было 24,9±5,7 мкмоль/л.

Таким образом, возрастание содержания меди в сыворотке крови больных злокачественными новообразованиями толстой кишки свыше 37 мкмоль/л говорит о наличии метастазов опухоли в печени.

Положительный эффект.

Повышение содержания меди в плазме периферической крови больных злокачественными новообразованиями толстой кишки позволяет выявлять метастатическое поражение печени уже на ранних стадиях.

Взятие крови из периферической вены и выполнение исследования не представляет технических трудностей.

Появление метастазов колоректального рака в печени сопровождается достоверным изменением содержания меди в плазме периферической крови больных по сравнению с больными злокачественными новообразованиями толстой кишки без метастазов в печени (р<0,05).