СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ОЖОГОВЫХ И РУБЦОВЫХ ПОВРЕЖДЕНИЙ С ПРИМЕНЕНИЕМ ТОКОТРИЕНОЛЬНЫХ КОМПОЗИЦИЙ

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение касается способа улучшения последствий рубцов и ожогов с применением токотриенолов. Конкретнее, различные патологии кожи могут быть подвергнуты лечению с применением способов по настоящему изобретению. В настоящем изобретении также предлагаются способы повышения концентраций токотриенолов в ткани кожи.

Уровень техники

В Соединенных штатах каждый год сообщается о более 2,4 М ожоговых поражений, и ожоги представляют собой одно из наиболее дорогостоящих для лечения катастрофических повреждений. Ожоги и связанные с ними рубцовые повреждения оказывают как функциональное, так и эмоциональное влияние на пациентов. Современные медицинские стандарты лечения термического ожогового повреждения направлены на купирование боли (анальгезирующие средства и NSAID) и на предотвращение инфекции (местные антибиотики). В данном изобретении описано местное терапевтическое лечение, которое снижает тяжесть термического ожогового повреждения, а также образования рубцов, индуцированного ожогами. Ограничение образования рубцов имеет применения для рубцов, образованных в результате травм или хирургических операций, и кроме того рубцы оказывают как физическое (функциональное), так и эмоциональное влияние на пациентов.

Природный витамин Е существует в двух формах: токоферолы и токотриенолы. И токоферолы, и токотриенолы обладают хроманольным циклом, и внутри семейств изоформы дифференцируются как α, β, γ, и δ согласно присутствию метальной группы в положениях 5, 7 и 8, соответственно. Токоферолы отличаются насыщенной боковой цепью, тогда как токотриенолы обладают изопреноидной боковой цепью с двойными связями у С-3, -7 и -11.

При проведении клинических испытаний, в которых тестировались эффекты витамина Е в широком диапазоне основных расстройств здоровья, пришли к общему выводу о том, что витамин Е либо не полезен, либо может быть вредным в определенных условиях. Мета-анализы более чем 20 рандомизированных, контролируемых клинических испытаний, в которых тестировали витамин Е, в настоящее время позволяют сделать выводы о том, что с одной стороны, испытания служат основанием для повторной корректировки публичной политики и практики, а с другой стороны, страдают от основного слепого пятна, которое не определено ни в одном из этих отчетов. Хотя заявления таких метаанализов обращаются к витамину Е в целом, они не учитывают, что единственной формой изучаемого витамина Е во всех этих испытаниях является α-токоферол, который представляет собой одну восьмую природного семейства витамина Е.

Пальмовое масло представляет собой основной источник природного токотриенола. Токотриенол обладает мощными нейропротективным, антиоксидантным, противоопухолевым и холестерин-снижающим свойствами, которые часто отличаются от свойств токоферола. Микромолярные количества токотриенола подавляют активность HMG-CoA редуктказы, фермента печени, ответственного за синтез холестерина. Считается, что токотриенолы обладают более мощными антиоксидантыми свойствами, чем токоферол. Ненасыщенная боковая цепь токотриенола дает возможность более эффективного проникновения в ткани, которые обладают насыщенными жировыми слоями, такие как мозг и печень. Сравнительное исследование антиоксидантных свойств токоферола и токотриенола показало, что токотриенол является предпочтительным благодаря его лучшему распределению в жировых слоях клеточной мембраны. Недавно сообщалось об антиангиогенной функции токотриенола. Было обнаружено, что аналогично токоферолу, токотриенолы обладают различными функциями, которые могут быть полезны для здоровья человека, и, кроме того, на токоферол приходится очень маленькая фракция исследований витамина Е.

Витамин Е: основная информация

Витамин Е представляет собой жирорастворимый витамин, который существует в восьми различных формах. Каждая форма обладает своей собственной биологической активностью, которая является мерой эффективности или функционального применения в организме. Витамин Е представляет собой пищевой антиоксидант, который принимает участие в поддержании клеточной целостности. Его получают из подсолнечного, сафлорового, канолового и оливкового масел; а также из множества зерновых культур, орехов, фруктов, а также из жировых частей мяса. Токотриенольная форма витамина Е обнаружена в рисе и в зерновых злаках, но более распространена в пальмовом масле. Пальмовое масло является составной частью ежедневного рациона в юго-восточной Азии.

Необходимо только небольшое количество витамина Е для удовлетворения суточной потребности. Однако в исследовании применения витамина Е при более высоких дозах получили предварительные данные, что оно может быть полезен для предотвращения или лечения различных патологических состояний. Эти применения включают лечение менструальной боли, сердечной вегетативной невропатии (осложнение диабета), низкого количества сперматозоидов, синдрома беспокойных ног, воспаления глазной ткани, болезни Альцгеймера, болезни Паркинсона и ревматоидного артрита. Витамин Е также может улучшать иммунный ответ у пожилых людей. Исследования продемонстрировали, что для людей, у которых уже есть высокий риск болезни сердца или у которых имеется история болезни такого состояния, витамин Е может быть не полезен. Также предлагалось многообещающее лечение на основе витамина Е для предотвращения некоторых типов злокачественных новообразований. Однако текущие данные указывают только на предотвращение злокачественного новообразования простаты.

Натуральный витамин Е биологически активен. Данное исследование включает обеспечение натурального витамина Е. Синтетический витамин Е (иногда обозначаемый как dl-альфа-токоферол) имеет только половину активности по сравнение с натуральной формой витамина Е.

Витамин Е: Безопасность

К настоящему моменту времени не выявлено никаких связанных побочных эффектов в протоколе IRB авторов настоящего изобретения (200500034). В данном протоколе пациентам давали 200 мг ТСТ дважды в день в течение минимального срока, составляющего 4 недели, перед хирургической операцией. Максимальное время приема составило около года (прием продолжает проводится в настоящее время).

Крем с 20% витамином Е (крем с токотриенолом) не обладает известными токсическими эффектами, так как крем применяется местно, и системная адсорбция является ничтожной.

Витамин Е представляет собой широко применяемое безопасное питательное вещество, которое необходимо для обеспечения общего состояния здоровья. Недавний анализ данных из нескольких клинических испытаний предполагает, что избыток витамина Е может немного повышать риск смерти у ряда индивидуумов с имеющимися патологическими состояниями. Избыточный витамин Е может вызывать проблемы со свертывающей системой крови в результате кровоизлияния. Отдел по пищевым продуктам и питанию института медицины установил верхний переносимый уровень приема (ВУ) для витамина Е на 1000 мг (1500 ME) для любой формы приема альфа-токоферола в день. На основании по большей части результатов исследований на животных, отдел решил, что поскольку витамин Е может действовать как антикоагулянт и может повышать риск проблем со свертывающей системой крови, то данный ВУ представляет собой самую высокую дозу, которая, по всей вероятности, не приведет к проблемам со свертывающей системой крови.

Раскрытие изобретения

В первом широком аспекте, авторы изобретения продемонстрировали, что токотриенол функционирует в качестве мощного ингибитора рубцовых поражений, вызванных термическим (т.е. ожог) или механическим (т.е. хирургически) повреждением. Как пероральное, так и местное введение витамина Е в виде токотриенола ослабляет образование рубцов, вызванных хирургической операцией или ожогом.

Без привязки к теории, можно сказать, что возможный механизм действия, лежащего в основе данного применения, включает в частности снижение инфильтрации макрофагов в месте повреждения, ослабление пролиферации воспалительных клеток, снижение образования фиброзного коллагена, снижение ожоговой денервации и повышение васкуляризации.

Пероральное (400 мг/день токотриенол-обогащенного (ТЕ) состава, «Tocovid Suprabio^®») и/или местное применение данного токотриенол-обогащенного состава эффективно повышает концентрацию токотриенола в клетках кожи и может, таким образом, использоваться независимо или в комбинации для доставки токотриенола в очаг поражения.

В изобретении описаны местные кремы и способы применения для эффективного уменьшения тяжести ожогового поражения и связанного с ними образования рубцов. Коммерческие применения также охватывают способы лечения рубцовых поражений, индуцированных хирургически или травмой, с целью уменьшения физического и эстетического влияния рубцового поражения.

В настоящем изобретении предлагаются способы улучшения состояния кожных рубцов или ожоговых последствий у объекта с кожным рубцом или с ожоговой патологией, включающие: а) введение объекту с кожным рубцом или с ожоговой патологией по меньшей мере одного токотриенола, выбранного из группы, состоящей из: альфа-токотриенола; бета-токотриенола; гамма-токотриенола; и дельта-триенола; и b) улучшение состояния кожного рубца или ожоговых последствий у объекта.

Также предлагаются способы замедления прогрессии кожных рубцов или ожоговых последствий у объекта с кожным рубцом или с ожоговой патологией, включающие: а), введение объекту с кожным рубцом или с ожоговой патологией по меньшей мере одного токотриенола, выбранного из группы, состоящей из: альфа-токотриенола; бета-токотриенола; гамма-токотриенола; и дельта-триенола; и b) замедление прогрессии кожного рубца или ожоговых последствий у объекта.

Также предлагаются способы улучшения симптомов кожных рубцов или ожогов у объекта с окончательным кожным рубцом или с ожогом, включающие: а) введение объекту с кожным рубцом или с ожоговой патологией по меньшей мере одного токотриенола, выбранного из группы, состоящей из: альфа-токотриенола; бета-токотриенола; гамма-токотриенола; и дельта-триенола; и b) улучшение симптомов кожного рубца или ожога у объекта.

Также предлагаются способы улучшения симптомов коного рубца или ожога у объекта, имеющего кожный рубец или ожог, причем способ включает: введение композиции, по существу состоящей из альфа-токотриенола, гамма-токотриенола, дельта-ткотриенола и альфа-токоферола, объекту с кожным рубцом или с ожогом, где композицию вводят перорально или местно в течение от двух до шести недель.

Также предлагаются способы повышения концентрации по меньшей мере одного токотриенола у объекта, причем способы включают: а) введение объекту по меньшей мере одного токотриенола, выбранного из группы, состоящей из: альфа-токотриенола; ета-токотриенола; гамма-токотриенола; и дельта-токотриенола; и b) повышение концентрации в коже объекта по меньшей мере одного токотриенола.

Также предлагаются такие способы, где объект не переносит стандартные терапевтические процедуры.

Также предлагаются такие способы, где токотриенол вводят согласно таблице А.

Также предлагаются такие способы, где токотриенол вводят согласно таблице В.

Также предлагаются такие способы, где токотриенол вводят согласно таблице С.

Способ по любому пункту в данном документе, где токотриенол вводят согласно таблице D.

Также предлагаются такие способы, где токотриенол вводят согласно таблице Е.

Также предлагаются такие способы, где токотриенол вводится перорально в составе, содержащем приблизительно 15-30% альфа-токотриенола, приблизительно 30-50% гамма-токотриенола, приблизительно 2-15% дельта-токотриенола и приблизительно 20-30% альфа-токоферола, по массе этих четырех ингредиентов.

Также предлагаются такие способы, где токотриенол вводится перорально в составе, содержащем приблизительно 23% альфа-токотриенола, приблизительно 41% гамма-токотриенола, приблизительно 9% дельта-токотриенола и приблизительно 25% альфа-токоферола, по массе этих четырех ингредиентов.

Также предлагаются такие способы, где токотриенол вводится местно в концентрации приблизительно 0,5 мл 200 мг «Tocovid Suprabio^®» на см².

Также предлагаются такие способы, где токотриенол вводится местно или перорально.

Также предлагаются такие способы, которые дополнительно включают измерение концентрации токотриенола в ткани объекта, где ткань выбрана из группы, состоящей из: крови; кожи; жировой ткани; мозга; сердечной мышцы; и печени.

Также предлагаются такие способы, где концентрация в ткани по меньшей мере одного токотриенола повышается от исходного значения на множитель, выбранный из группы, состоящей из около: 1,2х; 1,3х; 1,4х; 1,5х; 1,6х; 1,7х; 1,8х; 1,9х; 2х; 3х; 4х; 5х; 6х; 7х; 8х; 9х; 10х; 11х; 12х; 13х; 14х; и 15х.

Также предлагаются такие способы, где вводимая композиция токотриенола включает токоферол с массовой долей в целом, менее чем доля, выбранная из группы, состоящей из: 50%; 40%; 30%; 20%; 15%; 10%; 5%; и 1%.

Также предлагаются такие способы, где композиция токотриенола по существу свободна от токоферола.

Также предлагаются такие способы, где тканевая концентрация по меньшей мере одного токотриенола после введения выбрана из группы, состоящей, по меньшей мере, из около: от по меньшей мере около 0,5 нмоль/г до по меньшей мере около 50 нмоль/г; от по меньшей мере около 1 нмоль/г до по меньшей мере около 40 нмоль/г; от по меньшей мере около 2 нмоль/г до по меньшей мере около 30 нмоль/г; от по меньшей мере около 3 нмоль/г до по меньшей мере около 25 нмоль/г; от по меньшей мере около 4 нмоль/г до по меньшей мере около 20 нмоль/г; и от по меньшей мере около 5 нмоль/г до по меньшей мере около 15 нмоль/г.

Также предлагаются такие способы, где композиция токотриенола выделена по меньшей мере из одного растения, выбранного из группы, состоящей из: пшеницы; риса; ячменя; и пальмы.

Также предлагаются такие способы, где композиция токотриенола выделена из пальмового масла.

Также предлагаются такие способы, где композиция токотриенола представляет собой «Tocovid SupraBio®».

Также предлагаются способы лечения кожного рубца или ожога у пациента с кожным рубцом или ожогом, включающие: а) введение по меньшей мере одной ежедневной дозы состава токотриенола пациенту с кожным рубцом или ожогом, где состав токотриенола включает приблизительно 123 мг/день альфа-токотриенола; приблизительно 16 мг/день бета-токотриенола; приблизительно 225 мг/день гамма-токотриенола; и приблизительно 51 мг/день дельта-токотриенола; и b) лечение кожного рубца или ожога у пациента.

Также предлагаются такие способы, где рубец является результатом выбранного из группы, состоящей из: царапины; пореза; рваной раны; хирургической операции; ссадины; и акне.

Также предлагаются такие способы, где тип рубца выбран из группы, состоящей из: гипертрофированного; келоидного; атрофического; и из растяжек.

Также предлагаются такие способы, которые дополнительно включают введение альфа-токоферола.

Также предлагаются такие способы, которые дополнительно включают введение приблизительно 134,6 мг альфа-токоферола в день.

Также предлагаются такие способы, где введение является ежедневным в течение 4 недель после еды.

Также предлагаются такие способы, где ослабление симптомов рубца или ожога измеряют способом, выбранным из группы, состоящей из: оценки рубцов Вакувера; трансэпидермальной потери влаги (TEWL); и поверхностной электроемкости (SEC).

Различные цели и преимущества данного изобретения станут очевидными для специалиста в данной области благодаря следующему подробному описанию предпочтительного воплощения, при его изучении в свете прилагающихся чертежей.

Краткое описание чертежей

Фиг. 1А-Фиг. 1D - местное применение витамина Е альфа-токотриенола улучшает итоговые рубцы. Содержание альфа-токотриенола и итоговые рубцы оценивали в коже через 65 дней после ожогового поражения. Изображены ожоговые рубцы, обработанные репрезентативным плацебо и Т3, (А) (масштабная шкала = 1 см). Местная обработка токотриенолом значительно повышала содержание альфа-токотриенола в рубцовой ткани (В). Цвет (С) и контур (D) оценивали независимыми экспертами по соответствующей 5-балльной шкале. Местное применение токотриенола значительно улучшало как цвет, так и контур индуцированных ожогом рубцов. Данные представляют собой среднее + SD (n=8); *р<0,05.

Фиг. 2А-Фиг. 2В описывают протокол исследования.

Фиг. 3А-Фиг. 3В описывают протокол исследования.

Фиг. 4 - билатеральные хирургические рубцы одного и того же объекта обрабатывали местно с помощью плацебо (пустой контроль) или с помощью крема с токотриенолом в течение 12 недель после операции, как описано в примере 2 и затем изображено. Через 12 недель рубец, обработанный токотриенолом (правое изображение) выглядит менее гипертрофированным с улучшенным цветом и контуром по сравнению с рубцом, обработанным плацебо (левое изображение).

Осуществление изобретения

В описании различные публикации, патенты и описания опубликованных патентов указаны идентифицирующим цитированием. Описание этих публикаций, патентов и опубликованных описаний патентов включено в данную заявку с помощью ссылки с целью более полного описания уровня техники, к которому принадлежит изобретение.

В настоящем изобретении предлагаются способы улучшения состояния кожных рубцов или ожоговых последствий у субъекта с кожным рубцом или с ожоговой патологией, включающие: а) введение объекту с кожным рубцом или с ожоговой патологией по меньшей мере одного токотриенола, выбранного из группы, состоящей из: альфа-токотриенола; бета-токотриенола; гаммагтокотриенола; и дельта-триенола; и b) улучшение состояния кожного рубца или ожоговых последствий у объекта. Токотриенол может вводиться согласно следующим таблицам А-Е и как описано в примерах.

Авторы изобретения также наблюдали, что пероральное введение животным приводит к повышению токотриенола в ткани, такой как кожа, мозг, легкое и т.д. Уровни токотриенола в тканях человека после введения исследовались в данной работе в лоборатории авторов изобретения (IRB протокол 200500034). Пациенты в продолжающемся исследовании получают перорально 200 мг дважды в день. Недавно были осуществлены фармакокинетические исследования, где людям перорально вводили токотриенол (доза: 692 мг). На основании данной работы и текущего исследования авторы изобретения планировали использовать (200×2=400 мг/день; следует отметить, что для альфа-токоферола 1 мг=1,51 Е) для исследования авторов изобретения.

Образование рубцов представляет собой физиологическое и неизбежное конечное развитие заживления ран млекопитающих и, по существу, очевидно, что воспаление является существенной предпосылкой для рубцевания. Хотя рубцовая ткань восстанавливает нормальный кожный барьер, новая ткань хуже в структурном, эстетическом и функциональном отношении. Реакция заживления ран млекопитающих может происходить во время высокой восприимчивости к инфекции. Таким образом, авторы изобретения могут разработать оптимизированное по скорости заживление ран, где множественная излишняя компенсация быстрой воспалительной реакции дает возможность быстрого заживления ран без инфекции. Таким образом, рубец является платой млекопитающих за эволюционное выживание после ран.

Существует огромное количество вариаций по качеству и размеру рубцов между видами и даже среди различных частей тела и органов. Человеческие патологические состояния и генетические расстройства могут приводить к избыточному рубцеванию, такому как гипертрофированные и келоидные рубцы. Не смотря на то, что механизмы, лежащие в основе рубцевания еще не полностью ясны, имеется большое количество экспериментальных и клинических данных, которые указывают на измененные воспалительные и/или цитокиновые профили, приводящие к различиям в рубцевании. Существует множество случаев, которые обеспечивают ясные данные, что воспалительная реакция во время заживления раны тесно связана с образованием рубца. Классический пример это не оставляющее рубцов заживление ранней эмбриональной кожи. Существует множество различий между плодом и взрослым, но признаком эмбриональной кожи является отсутствие типичной воспалительной реакции. Не оставляющее рубцов заживление ран у эмбриона при отсутствии воспаления и появление рубцевания в процессе эмбрионального заживления ран согласуется с присутствием острой воспалительной реакции. Важность воспаления в образовании рубца подчеркивается тем фактом, что введение воспаления в обычно безрубцовое заживление ран приводит к повышению в ране макрофагов, нейтрофилов, накапливанию коллагена и к рубцеванию.

Было продемонстрировано, что провоспалительные цитокины, такие как IL-1a, IL-1(3, IL-6, и TNF-α, являются центральными медиаторами во время различных кожных воспалительных процессов. Провоспалительные цитокины подвергаются сильной положительной регуляции во время воспалительной фазы заживления; и некоторые клеточные типы, включающие полиморфоядерные нейтрофилы, моноциты и макрофаги усиливают воспалительный ответ посредством TNF-a, IL-113 и IL-6. Интерлейкины (IL) регулируют хемотаксис и активацию воспалительных клеток. IL-6 стимулирует моноцитарный хемотаксис и макрофагальную активацию, в то время как IL-8 привлекает нейтрофилы и стимулирует неоваскуляризацию. Ранение стимулирует быстрое повышение уровня IL-6 и IL-8, которое сохраняется у взрослых, но быстро исчезает у эмбриона. Фактор роста, выделенный из тромбоцитов, (PDGF) индуцирует продуцирование IL-6 фибробластами взрослого. В свою очередь, добавление IL-6 к эмбриональным ранам производит раннее рубцевание. В эмбриональных фибробластах, в отличие от фибробластов взрослого, экспрессия IL-6 и IL-8 ниже в исходный момент и после стимулирования с помощью (PDGF). IL-10, противовоспалительный цитокин, функционирует путем уменьшения продуцирования IL-6 и IL-8. В исходном отчете раны взрослой мыши, обработанные с помощью аденовирусного вектора, сверхэкспрессирующего IL-10, демонстрировали снижение воспаления и заживление без рубца.

Ядерный фактор kB (NF-kB) представляет собой транскрипционный регулятор, который играет центральную роль в реакции на воспалительные сигнальные пути не только посредством рецепторов Toll-типа, но и посредством TNF-рецепторов и рецептора IL-1. Среди молекул, индуцируемых NF-kB, присутствуют цитокины, хемокины, эффекторные молекулы иммунитета, факторы про-выживания и молекулы адгезии.

Обе изоформы трансформирующего фактора роста (TGF) обладают профиброзными функциями и стимулируют образование рубца. В ткани раны TGF высвобождается макрофагами. Их экспрессия повышается при нормальном заживлении раны, и экзогенное введение данного фактора роста в раны взрослых повышает коллаген, протеоглликан и накапливание воспалительных клеток. Кроме того, обработка ран взрослых крыс с помощью нейтрализующего антитела к изоформам TGF снижает образование рубца.

Избыток воспаления ассоциирован с замедленным заживлением раны. Раневые расстройства в клинической практике присутствуют в виде гипертрофированных рубцов и в виде хронических не заживающих ран. Не смотря на различные типы ассоциации с хроническими ранами (т.е. сахарный диабет, некроз вследствие сдавливания, и васкулит) большинство не заживающих ран не способны прогрессировать через нормальные фазы восстановления ран, и вместо этого остаются в хроническом воспалительном состоянии. Гипертрофированные рубцы представляют повышенный пролиферативный ответ на заживление раны, который остается внутри границ исходной раны. Келоиды напротив имеют более агрессивный жизненный цикл и распространяются за исходные границы. По некоторым оценкам, келоиды присутствуют у около 10% людей. В то время, как у большинства людей никогда не образуются келоиды, у других они развиваются после незначительных повреждений, таких как укусы насекомых или прыщи. Оказалось, что люди с темным пигментом более восприимчивы к образованию келоидов, но при этом мужчины и женщины подвержены такому воздействию в равной степени. Келоиды рассматриваются как доброкачественная опухоль, но они в основном неприятны с косметической точки зрения и никогда не становятся злокачественными. Теоретические предпосылки причин келоидного рубцевания включают дефицит или избыток гормона меланоцитов (MSH), уменьшение процентного содержания зрелого коллагена и повышение процентного содержания растворимого коллагена. Гипертрофированный рубец выглядит аналогично келоидному рубцу; однако гипертрофированные рубцы более распространены и не такие крупные, как келоиды и могут исчезать со временем. Келоидные и гипертрофированные рубцы развиваются наиболее часто в ранах с высоким натяжением кожи и особенно на верхнем стволе.

В отличие от интенсивных исследований токоферола, о токотриеноле известно очень мало. Недавнее исследование продемонстрировало, что гамма-токотриенол полностью отменял активацию NF-KB, индуцированную фактором некроза опухоли (TNF-a), в то время как аналогичная доза гамма-токоферола не имела эффекта. Кроме TNF, гамма-токотриенол также отменял активацию NF-KB, индуцированную форболмиристатацетатом, окадаиковой кислотой, липополисахаридом, сигаретным дымом, IL-1I, и эпидермальным фактором роста. Активация конститутивного NF-KB, экспрессируемого определенными опухолевыми клетками, также обнулялась с помощью у-токотриенола. Было продемонстрировано, что гамма-токотриенол ингибирует деградацию IKBa путем ингибирования TNF-индуцированной активации IKBa-киназы (IKK). Таким образом, гамма-токотриенол ингибирует активацию NF-KB посредством ингибирования ИСК. Также было продемонстрировано, что гамма-токотриенол ингибирует TNF-индуцированное фосфорилирование р65 и TNF-индуцированной активации Akt. Было продемонстрировано, что гамма-токотриенол ингибирует ТАК1/ТАВ1-индуцированную NF-KB-зависимую экспрессию репортерного гена. ТКА1, член киназы МАРК-киназы, исходно идентифицировали как ключевой регулятор активации МАРК в TGF-индуцированных сигнальных путях. Он активируется различными воспалительными стимулами, включающими TNF, IL-1 и LPS. СОХ2, циклин D1, VEGF, ICAM-1, ММР-9 и с-Мус имеют NFkB-связывающие сайты в своих промоторах, и ингибирование NF-KB-активации у-токотриенола подавляет продуцирование этих белков. Наконец, было продемонстрировано, что ингибирование NF-KB-активации с помощью гамма-токотриенола не является клеточно-специфичным. Вместо этого было продемонстрировано, что гамма-токотриенол оказывает влияние на миелоидные клетки, человеческие эпителиальные клетки и клетки MCF-7.

Недавно было обнаружено, что смесь пальмовых токотриенолов способна предотвращать повышение уровня IL-1 и IL-6 в сыворотке являющегося результатом никотиновой обработке; тогда как токоферолы не были способны оказывать такое воздействие. Сывороточный уровень IL-6 у крыс, обработанных токотриенолом, был значительно ниже, чем даже перед обработкой никотином и токотриенолом. Кроме того, ранее было продемонстрировано, что токотриенол представляет собой наиболее эффективную форму витамина Е для уменьшения экспрессии эндотелиальными клетками молекул адгезии (ICAM, VCAM, и Е-селектин) и адгезии с моноцитами.

В настоящее время не существует единственного оптимального способа воздействия, который может исключать или предотвращать нормальное, гипертрофированное или келоидное рубцевание. Наиболее приемлемая обработка для старых и новых гипертрофированных рубцов представляет собой силиконовую гелевую пластину. Однако силиконовая мазь или гель индивидуально менее эффективны, чем силиконовая пластина. Прессотерапия продемонстрировала некоторую эффективность, но она громоздка в использовании и не стандартизована. Проблемы, связанные с прессотерапией, ограничивают применение на областях, отличных от лица, и высокоподвижных областях Анатомическая депрессия, низкая исполнительность пациента, и побочные эффекты локальной мацерации кожи представляют собой значительные проблемы при использовании такой обработки. «Mederma^®» представляет собой крем с экстрактом лука, продаваемый без рецепта в США для обработки рубцов. В настоящее время он рекомендуется врачами и фармацевтами как номер один для лечения рубцов. Однако продукты из Соединенных штатов, содержащие экстракт лука, не улучшают косметический вид или симптоматологию рубца по сравнению с мазью на основе вазелина. В предварительном клиническом испытании было показано, что назначение крема с 5% имиквимодом улучшает качество новых гипертрофированных рубцов после хирургической операции, но необходимы дополнительные испытания. Крем с 5% имиквимодом, модификатором местного иммунного ответа, одобрен для лечения остроконечной кондиломы, базальноклеточной карциномы и фотохимических кератозов. Имиквимод стимулирует провоспалительные цитокины, особенно интерферон-а, который увеличивает разрушение коллагена.

Токотриенол может быть эффективным средством для предотвращения или уменьшения нормального, гипертрофированного или келоидного рубцевания медиируя воспалительный ответ. Токотриенол представляет собой безопасное и стандартное лечение, которое может приниматься внутрь или местно. Еще не проводилось исследований эффективности токотриенола в отношении предотвращения или уменьшения образования рубцов. Наблюдения на основе текущего IRB-протокола привели авторов изобретения к оценке эффективности токотриенола в этом отношении.

Семейство природного витамина Е состоит из восьми членов, равно разделенных на два класса; токоферолы (TCP) и токотриенолы (ТЕ). TCP характеризуются насыщенной фитильной боковой цепью с тремя хиральными атомами углерода, тогда как ТЕ обладает фарнезильной боковой цепью с двойными связями в атомах углерода 3, 7 и 11. Внутри каждого класса изомеры различаются как α, β, γ, и δ согласно положению и степени метилирования хроманольной головы (chromanol head). TCP представляют собой первичную форму витамина Е в зеленых листовых овощах, в то время как ТЕ обнаружены в наибольшей концентрации в семенах однодольных растений, которые включают пшеницу, рис, ячмень и пальму.

Важно заметить, что во всех этих исследованиях, на основе которых витамин Е был заявлен как имеющий потенциальный вредный эффект, исследовалась форма витамина Е в виде а-токоферола, но не а-токотриенола. Известно, что восемь природных изоформ витамина Е обладают уникальными биологическими функциями. Например, а-токоферол и а-токотриенол имеют функции, которые уникальны друг для друга. Таким образом, основания для беспокойства в отношении а-токоферола могут не иметь непосредственного отношения к а-токотриенолу. Большая часть (>98%) текущих публикаций на тему витамина Е относятся к а-токоферолу. По мере того, как авторы изобретения узнавали больше по поводу уникальных функций других форм витамина Е и по поводу потенциальных проблемы безопасности а-токоферола, интерес к не а-токоферольным формам витамина Е быстро возрастал.

Функции ингредиентов

Метилпарабен и пропилпарабен выполняют роль консервантов. В Обзоре косметических ингредиентов (CIR), в 1984 году рассмотрели безопасность метилпарабена, пропилпарабена и бутилпарабена и пришли к выводу о том, что они безопасны для использования в косметических продуктах на уровне до 25%. В декабре 2005 года, с помощью панели CIR снова определили, что нет необходимости изменять свое исходное заключение по поводу того, что парабены безопасны при использовании в косметических средствах. Они включены в Руководство по неактивным ингредиентам FDA для местных препаратов. Они также приняты для использования в качестве пищевой добавки в Европе и признаны как общепринято безопасные в качестве ингредиентов продуктов питания (GRAS) в США на уровне до 0,1% (Handbook of Pharmaceutical Excipients, 4th Edition, 2003, published by the Pharmaceutical Press and the American Pharmaceutical Association).

Карбомер - гелеобразующий агент для водной фазы. Включен в Руководство по неактивным ингредиентам FDA (пероральные суспензии и таблетки, офтальмологические, ректальные и местные препараты). Он интенсивно используется в непарентеральных продуктах, в частности в жидких и полужидких препаратах для местного применения. Карбомер, как правило, рассматривается в качестве по существу нетоксичного и нераздражающего материала; нет данных по поводу гиперчувствительной реакции на карбомер у людей, использующих его для местного применения (Handbook of Pharmaceutical Excipients, 4th Edition, 2003, published by the Pharmaceutical Press and the American Pharmaceutical Association).

Глицерин также обозначается как глицерол. Он выполняет роль увлажнителя. Глицерин перечислен как GRAS и принят в качестве пищевой добавки. Он включен в Руководство по неактивным ингредиентам FDA для применения в местных препаратах.

Триэтаноламин - алкилирующий агент для нейтрализации карбомера с построением гелеобразной структуры, также используется в качестве эмульгирующего агента. Также обозначается как Троламин в USPNF. Включен в Руководство по неактивным ингредиентам FDA (ректальные, местные и вагинальные препараты).

Полиоксил 40 касторовое масло - эмульпфуюпщй агент. Включен в Руководство по неактивным ингредиентам FDA (в.в. инъекции и офтальмологические растворы).

Цетомакрогол, воск эмульгированный - также относится к неионным эмульгированным воскам. Используется в качестве эмульгирующего агента и загустителя. Цетомакрогол, воск эмульгированный включен в Руководство по неактивным ингредиентам FDA (местные аэрозоли, эмульсии, лосьоны и мази). Он, как правило, рассматривается как по существу нетоксичный и нераздражающий материал.

Цетиловый спирт - эмульгирующий агент и загуститель. Включен в Руководство по неактивным ингредиентам FDA (кремы, эмульсии и местные аэрозоли).

Стеариновая кислота представляет собой загуститель. Она перечислена как GRAS и принята в качестве пищевой добавки в Европе (жирные кислоты). Включена в Руководство по неактивным ингредиентам FDA (местные и вагинальные препараты).

Пропиленгликоль каприлат представляет собой загуститель.

Dry Flo AF - гидрофобно модифицированные кукурузные крахмалы, которые используются из-за их способности усиливать эстетику продуктов по уходу за кожей и смягчать маслянистость в составе крема. Он производится компанией «National Starch and Chemical Сотрапу», Нью Джерси, США.

ПРИМЕРЫ

Пример 1. После 12 нед введения ТЕ, концентрации αТЕ, γТЕ, и δТЕ в коже значительно повышались. Объединенные данные для мужчин и женщин демонстрировали значительное повышение всех трех изоформ на 12 нед. Пероральное введение ТЕ не оказывало значительного эффекта на концентрацию αТСР или γТСР в коже.

Участники

Научный протокол был рассмотрен и одобрен комиссией по биомедицинской этике университета штата Огайо. Все пациенты дали письменное информированное согласие. Из-за ограничений в получении ткани здорового взрослого человека, цельную кровь и образцы биопсии кожи брали у группы здоровых участников, в то время как ткань жизненно важных органов получали от группы пациентов хирургии.

Группа здоровых участников

Концентрацию витамина Е в цельной крови и в коже сравнивали в исходной точке (момент до введения) с образцами, собранными через 12 нед введения ТЕ. Здоровые участники (n=16) получали 400 мг ТЕ ежедневно. Взрослые добровольцы обеспечили два образца биопсии кожи и три образца крови. Биопсии кожи собирали из правой (1^ая биопсия на 0 нед) и левой (2^ая биопсия на 12 нед) внутренней области бедра. Цельную кровь забирали на 0, 6 и 12 нед. Здоровых участников выбирали для исследования, так как они могли получать лекарственное средство в течение определенного периода времени (не связанного с хирургической операцией, как в группе пациентов с хирургической операцией). Это давало возможность авторам изобретения собирать исходные образцы до введения. В этой группе участники не получали TCP, так как каждый участник не подвергался воздействию ТЕ и сам контролировал свои действия. Критерий включения для группы здоровых участников включали: возраст 21-40 лет, хорошее состояние здоровья, некурящий, не беременная или не кормящая грудью, и не получающие недавно (последние 6 месяцев) или в настоящее время добавок, содержащих витамин Е. Критерии исключения для группы здоровых участников включали: диабет или ВИЧ-инфекция, получение иммуноподавляющей терапии, неврологическое заболевание и принятие алкоголя или наркотиков.

Группа пациентов хирургии

Взрослых хирургических пациентов рандомизировали для получения либо 400 мг TCP, либо 400 мг ТЕ ежедневно. Критерии исключения включали текущее или недавнее получение витамина Е, и хирургических пациентов в возрасте до 21 года. Обе группы, которым давали TCP и ТЕ получали сравнимые предписанные врачом диеты, которые не включали дополнительных пищевых добавок.

График приема и соблюдение установленных требований

Для текущего исследования капсулы витамина Е были предоставлены Carotech Inc., 21 Balmoral Court, Talmadge Village, Edison, New Jersey 08817, USA. Полное исследование проводили с использованием желатиновых капсул витамина Е, произведенных в одной партии и сразу же отправленных авторам изобретения. Содержимое капсул подтверждали с помощью чувствительного метода детекции с использованием колориметрического электрода, разработанного в лаборатории авторов изобретения.

Участников из группы хирургических пациентов рандомизировали для получения либо 400 мг ТЕ (200 мг «Tocovid SupraBio» дважды в день), либо 400 мг TCP (200 мг дважды в день). Группа здоровых участников получала только 400 мг ТЕ (200 мг дважды в день). Одна 200 мг мягкая желатиновая капсула «Tocovid SupraBio» содержит 61,52 мг d-альфа-токотриенола, 8,11 мг d-бета-токотриенола; 112,8 мг d-гамма-токотриенола и 25,68 мг d-дельта-токотриенола. Желатиновые капсулы TCP содержали 200 мг d-альфа-токоферола. Желатиновые капсулы витамина Е запаивали в блистерные упаковки. Для определения соблюдения установленных требований испытуемые участники отправляли по почте пустые упаковки обратно в клинику каждые две недели. Соблюдение установленных требований по приему для исследования составило >90%.

Продолжительность периода приема для хирургической группы определяли от исходного приема витамина Е до дня перед назначенной операцией. Для всех хирургических пациентов целесообразен прием в течение минимум 4 недель. Однако в некоторых случаях врачебно обусловленная необходимость хирургической операции не позволяла полного 4-недельного курса. Тканеспецифичность, минимальный и максимальный период приема для пациентов представлены в дополнительной таблице 1.

Выделение и анализ витамина Е

Оперативно удаленные ткани измельчали, промывали в фосфатно-солевом буферном растворе для удаления крови и хранили в жидком азоте до анализа. Экстракцию витамина Е осуществляли с использованием кулонометрического детектора для ВЭЖХ на основе электродной матрицы (Coularray Detector, 12-канальньгй, модель 5600, ESA Inc., Chelmsford, MA, USA).

Пример 2. Наблюдения продолжающегося исследования авторов изобретения указывает на то, что предварительная обработка с использованием ТСТ улучшает внешний вид рубцов. Основная цель данного рандомизированного двойного слепого испытания заключалась в определении эффективности токотриенола (ТСТ), натуральной формы витамина Е, в предотвращении или в уменьшении образования рубцов после ран на коже человека.

Конкретные цели:

1. Определить эффективность ТСТ в улучшении вида постхирургических рубцов после перорального приема (200 мг×2 в день в течение минимум 4 недель до хирургической операции и 12 недель после нее).

2. Определить эффективность ТСТ в улучшении вида постхирургических рубцов после местного применения в течение 12 недель.

3. Установить связь причины и эффекта между приемом ТСТ и характеристиками рубцов, соблюдение установленного графика отслеживали с помощью измерения уровня ТСТ в сыворотке, в ткани кожи и в жировой ткани.

Пациенты, подвергающиеся односторонней или двусторонней коррекции контуров тела, привлекались из отделения пластической хирургии в медицинском центре университета штата Огайо.

Пероральный прием добавки

Пациенты, подвергавшиеся либо односторонней, либо двусторонней хирургической операции начинали пероральный прием плацебо (пустой носитель), или пероральный прием ТСТ в течение минимум от 4 недель до операции до 12 недель после операции (цель 1). Пациенты, подвергавшиеся хирургическому вмешательству, привлекались минимум за 4 недели до операции.

Местное введение

Пациенты, подвергавшиеся двусторонней операции, получали и местный крем с ТСТ (20%), и крем с пустым носителем (плацебо). Пациенты местно применяли крем с ТСТ к прооперированному участку с одной стороны тела. К другому прооперированному участку они применяли крем с пустым носителем (цель 2). Пациенты, подвергавшиеся односторонней операции, распределялись случайным образом для применения ими либо местного крема с ТСТ (20%), либо крема с пустым носителем (плацебо). Пациент местно применял крем (либо с ТСТ, либо с плацебо) на прооперированном участке тела.

Рандомизация

Пациенты с односторонней операцией распределялись случайным образом на одну из четырех групп обработки, определенных комбинацией 2 на 2 перорального ТСТ/перорального плацебо против местного ТС Т/местного плацебо. См. ниже диаграмму рандомизации пациентов с односторонней операцией. Пациенты, подвергавшиеся двусторонней операции, распределялись случайным образом для приема либо перорального ТСТ, либо перорального плацебо с последующим применением крема с ТСТ либо на правой стороне, либо на левой стороне. Крем с плацебо применяли на противоположной стороне. См. ниже диаграмму рандомизации пациентов с двусторонней операцией. Объекты с двусторонней операцией сами себя обрабатывали и контролировали местное введение и один пациент участвовал в обеих группах, группах I и II, или группах III и IV.

Пациенты входили в испытание или как объекты с односторонней операцией, или как объекты с двусторонней операцией. Объекты с односторонней операцией распределялись случайным образом на четыре группы, определенные по пероральному введению (ТСТ или плацебо) и местному введению (ТСТ или плацебо). Каждого объекта с односторонней операцией подсчитывали один раз среди 42 объектов на группу, необходимых для исследования. Объекты с двусторонней операцией распределялись случайным образом на одну из четырех групп, определенных по пероральному введению ТСТ вместе с местным введением ТСТ с правой стороны, подвергнутой операции, определенных по пероральному введению ТСТ вместе с местным введением ТСТ с левой стороны, подвергнутой операции, определенных по пероральному введению плацебо вместе с местным введением ТСТ с правой стороны, подвергнутой операции, или определенных по пероральному введению плацебо вместе с местным введением ТСТ с левой стороны, подвергнутой операции. Местное введение плацебо будет применяться к другим участкам, подвергнутым операции у объектов с двусторонней операцией, и эти объекты подсчитывали дважды среди 42 объектов на группу, поскольку они принимали местно как ТСТ, так и плацебо. Таким образом, если все объекты в испытании представляли собой объекты с односторонней операцией, то всего должно завершить данное испытание 168 объектов. В случае другой крайности, если все объекты в испытании представляли собой объекты с двусторонней операцией, то всего будет необходимо 84 объекта. Фактическое распределение объектов с односторонней операцией в данное время неизвестно, но какой бы ни была комбинация, всего в данном испытании будет 168 участков с раной, принадлежащих где-то от 84 до 168 индивидуальным объектам. Было два списка рандомизации, один для объектов с односторонней операцией, и один для объектов с двусторонней операцией.

Испытание было двойным слепым. Ни пациенты, ни исследователи не знали, какой из участников получает перорально плацебо или перорально ТСТ. Единственным идентифицирующим объектом на капсулах был цвет, кодирующий блистерные упаковки. Кремы также имели различные маркировки, кодируемые цветом: один для крема с пустым носителем, и один для крема, содержащего ТСТ. Расшифровывающая информация была у статистика-консультанта в центре биостатистики. Пример возможного сценария обработки участника представлен в чертежах.

Продукт и дозировка, используемые в данном испытании

Капсула 100 мг, содержащие токотриенол и пустой носитель, предоставлены Carotech Inc, Нью Джерси. Токотриенол продается без рецепта для всех видов потребления человеком. Крем с токотриенолом (20% ТСТ) и с плацебо также предоставлены Carotech Inc. Крем с токотриенолом доступен для применения людьми в Азии.

Источник витамина Е:

В течение последних шести лет лаборатория авторов изобретения осуществляла некоторые экспериментальные исследования витамина Е, касающиеся специфических изоформ витамина Е. Каждое из тих исследований было осуществлено с витамином Е из одного источника (Carotech Inc., NJ) во избежание разброса. Для предлагаемого испытания капсулы с витамином Е были предоставлены Carotech Inc. Лаборатория авторов изобретения специализируется на аналитических способах оценки витамина Е. С помощью чувствительного способа CouloArray авторы изобретения анализировали содержимое капсул для гарантии того, что испытание не будет подвернуто разбросу по содержанию витамина Е. Полное испытание проводили с использованием капсул с витамином Е, которые были произведены в одной партии и недавно были отправлены авторам изобретения.

Доза пилюль с ТСТ основана на эквивалентном дозовом интервале для альфа-токоферола, на основании чего 100 м.е. альфа-токоферола эквивалентно 91 мг альфа-токоферола. Для крема доза основана на коммерчески доступном препарате токоферола из Малайзии, таком как «Natopherol Dermal Night» от «Abbot Malaysia)), который содержит 40 м.е. альфа-токоферола (эквивалентного 36,4 мг альфа-токоферола на применение). Количество токотриенола, применяемого добровольцами, использующими крем с ТСТ, приблизительно аналогично приведенному выше.

Предотвращение экспонирования воздуху участка раны главным образом достигается благодаря окклюзионному эффекту местного препарата, особенно мази. В данном случае используется крем, и таким образом, предотвращение экспонирования воздуху осуществляется в меньшей степени. Многие хирурги обрабатывают хирургические разрезы с помощью мази «Neosporin», обычной в клинической практике. Крем с витамином Е является менее оклюзионным, чем любая мазь.

Пероральный состав токотриенола был доступен добровольцам в форме мягких желатиновых капсул. Мягкие желатиновые капсулы с токотриенолом доступны коммерчески в Малайзии в виде «Tocovid° Suprabio®» 50 мг, «Tocovid° Suprabio» 100 мг и «Tocovid® Suprabio®» 200 мг.Эти препараты изготовляли в условиях cGMP.

Каждая капсула «Tocovid® Suprabio» 200 мг содержит:

Tocomin® 50 содержит минимум 50% витамина Е, в результате чего приблизительно 10% представляет собой альфа-токоферл, 12% - альфа-токотриенолы, 20,6% - гамма-токотриенолы, 1,5% - бета-токотриенолы и 5% - дельта-токотриенолы. Tocomin® 50 производится Carotech Bhd, Малайзия.

Соевое Масло представляет собой соевое масло, которое широко используется и имеет коммерческое называние «растительное масло». Соевое масло также используется для пищевой промышленности в разнообразных пищевых продуктах, включающих заправки для салатов, пасты для сэндвичей, маргарин, хлеб, майонез, немолочные забеливатели для кофе и закуски. Высокая температура образования копоти соевого масла позволяет использовать его в качестве масла для жарки. Соевое масло используется в качестве носителя и наполнителя в составе.

Labrasol® представляет собой продукт Gattefosse SAS, Франция. Представляет собой смесь каприлокапроил полиоксиглицеридов и каприлокапроил макроголглицеридов. Лабрасол выполняет роль жидкого солюбилизатора для получения самоэмульгирующейся системы. Описан в монографии в последнем издании USP/NF под названием каприлокаприолил полиоксиглицериды и в Европейской фармакопее под названием каприлокапроил макроголглицериды. Фармацевтическая и пищевая регламентирующая инструкция от поставщика, Gattefosse, прилагается.

Cremophor EL® представляет собой продукт BASF, Германия. Выполняет роль эмульгирующего агента и солюбилизирующего агента. Его непатентованное название - полиоксил 35 касторовое масло, приведено в USP/NF. Он широко используется в пероральных, местных и в парентеральных фармацевтических составах, а также в косметике и в животных кормах. Он приведен в Руководстве по неактивным ингредиентам FDA (в.в. инъекции и офтальмологичесике растворы), а также включен в парентеральные лекарственные средства, лицензированные в Великобритании (Handbook of Pharmaceutical Excipients, 4th Edition, 2003, published by the Pharmaceutical Press and the American Pharmaceutical Association).

Похожий крем с 1%-концентрацией доступен и продается Hovid Bhd, Малайзия. Однако в низкой концентрации он не предназначен для применения на ранах. Для испытания заживления ран крем был специально приготовлен с концентрацией 15%. Ниже приведена формула крема. Пожалуйста, обратите внимание на то, что все используемые ингредиенты одобрены со ссылкой на USP-NF или перечислены в Обзоре косметических ингредиентов (CIR) как «Безопасные при практическом применении в настоящее время и при концентрациях, описанных при оценке безопасности» или «Безопасны с оговоркой» за исключением Dry Flo AF. Продукт изготовляли в условиях cGMP.

Дозировка:

Цель 1: 200 мг капсул с ТСТ или с пустым носителем (плацебо) дважды в день (400 мг/день) в течение минимум от 4 недель до операции до 12 недель после операции.

Цель 2: Все пациенты также будут наносить крем ТСТ (20% ТСТ) или крем с плацебо на прооперированный участок в количестве размером с десятицентовую монету на каждые 10 см по длине раны (100 мг крема на 10 см разреза).

Недавно было высказано предположение, что безопасная доза различных токотриенолов для потребления человеком составляет 200-1000 мг/день. К настоящему моменту времени не выявлено никаких связанных побочных эффектов в протоколе ERB авторов настоящего изобретения (200500034). В данном протоколе пациентам давали 200 мг ТСТ дважды в день в течение минимального срока, составляющего 4 недели, перед хирургической операцией. На основе результатов данного протокола дозировки 400 мг в день достаточно для того, чтобы достичь кожу.

Объекты и исследователи не знали того, какие пациенты получают перорально ТСТ, а какие получают плацебо. Объекты и исследователи также не знали того, какая сторона тела участника получает местную обработку плацебо, а какая местную обработку ТСТ. Расшифровывающая информация была в Центре биостатистики государственного университета Огайо, а также там были расшифрованы конечные данные.

Критерии отбора пациентов

Отбор пациентов: Для испытания рассматривались пациенты, которые были включены в расписание (минимум через 4 недели) для хирургических процедур в Отделении пластической хирургии в медицинском центре государственного университета Огайо, включающих избирательную коррекцию контуров тела. Пациенты входили в испытание минимум за 4 недели до операции.

Критерии включения:

Для гарантии более высокого количества вовлеченных в испытание авторы изобретения не контролировали возраст объектов при условии, что объектам было 18 лет или старше.

К другим критериям включения относятся: некурящие, не принимающие в настоящее время лекарственные средства, которые изменяют метаболизм печени, например, Фенобарбитал, HmG со-А ингибиторы, не беременные или не кормящие грудью, не принимающие в настоящее время пищевых добавок, содержащих витамин Е, не принимающие активно наркотики или алкоголь.

Критерии исключения: возраст до 18 лет, заключенные, курящие в настоящее время, беременные или кормящие грудью, ВИЧ-диагноз, диагноз вирусного гепатита, иммуноподавляющая терапия, активное потребление наркотиков или алкоголя, прием в настоящее время пищевых добавок, содержащих витамин Е.

История болезни: Авторы изобретения планируют получить следующую историю болезни от хирурга или лечащего врача: возраст, раса и пол; осуществленная хирургическая процедура; текущий список лекарственных средств; текущий список пищевых добавок; какая-либо прошлая история болезни, генетические заболевания, потребление алкоголя.

План обработки

Согласие пациента: Участников идентифицировали с помощью их пластического хирурга. Если пластический хирург решал, что пациент подходит для участия в испытании (на основе критериев включения и исключения испытания), то врач инициировал процесс согласия путем краткого объяснения испытания и сообщения пациенту уведомлений, содержащих контактную информацию младшего медицинского персонала или утвержденного персонала клинического исследования. Если пациент был заинтересован в участии в испытании, то он мог контактировать с младшим медицинским персоналом или с утвержденным персоналом клинического исследования. После обсуждения испытания с пациентом по телефону, если пациент оставался заинтересованным в участии, то младший медицинский персонал или утвержденный персонал клинического исследования посылал домой пациенту по почте формы согласия и НЕРАА. После прочтения формы согласия и рассмотрения испытания, при решении пациента войти в испытание, его можно было записать на прием к младшему медицинскому персоналу или утвержденному персоналу клинического исследования.

Хронология обработки:

Пациенты с двусторонней операцией

1. В первый прием у младшего медицинского персонала или утвержденного персонала клинического исследования пациент возвращал/подписывал формы согласия и НЕРАА. Производили исходный забор крови (20 мл) для измерения соответствия требованиям. Участники также получали 4-недельное обеспечение для перорального введения (токотриенола или плацебо) в виде 200 мг×2 в день. После исходного приема до установления даты операции 4-недельное обеспечение перорального введения посылали по почте участнику каждые 4 недели. С целью определения соответствия требованиям участника проинструктировали о необходимости возвращения пустых блистерных упаковок младшему медицинскому персоналу или утвержденному персоналу клинического испытания в конверте с предварительно оплаченным при получении партии почтовым сбором.

После установления даты операции:

За четыре недели до операции

2. Участники получали 4-недельное обеспечение перорального введения (токотриенола или плацебо) в виде 200 мг×2 в день. Осуществляли забор крови (20 мл) для измерения соответствия требованиям (это был исходный забор крови, если объект не начинал прием препарата).

День операции:

3. Участники получали 4-недельное обеспечение перорального приема (токотриенола или плацебо) в виде 200 мг×2 в день. Производили забор крови (20 мл) для измерения соответствия требованиям. Участники получали крем с токотриенолом и крем с плацебо. Образцы ткани также собирали из оперативно удаляемого хирургического материала.

Первая неделя после операции:

4. Участники возвращались в офис пластической хирургии государственного университета Огайо. Три независимых и не посвященных в подробности испытания представителя медицинского персонала оценивали прооперированные участки участников согласно Ванкуверской шкале оценки. Фотографирование прооперированного участка осуществлялось младшим медицинским персоналом или утвержденным персоналом клинического испытания. Фотографию использовали для записи и/или публикации. Производили забор крови (20 мл) для измерения соответствия требованиям.

Через четыре недели после операции:

5. Участники возвращались в офис пластической хирургии государственного университета Огайо. Три независимых и не посвященных в подробности испытания представителя медицинского персонала оценивали рубцы участников и процесс заживления согласно Ванкуверской шкале оценки. Фотографирование прооперированного участка осуществлялось младшим медицинским персоналом или утвержденным персоналом клинического испытания. Фотографию использовали для записи и/или публикации. Производили забор крови (20 мл) для измерения соответствия требованиям. Участники получали 4-недельное обеспечение перорального приема (токотриенола или плацебо) в виде 200 мг×2 в день. Участники также получали другой контейнер с кремом с токотриенолом и с кремом с плацебо.

Восемь недель после операции:

6. Участники возвращались в офис пластической хирургии государственного университета Огайо. Три независимых и не посвященных в подробности испытания представителя медицинского персонала оценивали рубцы участников и процесс заживления согласно Ванкуверской шкале оценки. Фотографирование прооперированного участка осуществлялось младшим медицинским персоналом или утвержденным персоналом клинического испытания. Фотографию использовали для записи и/или публикации. Производили забор крови (20 мл) для измерения соответствия требованиям. Участники получали 4-недельное обеспечение перорального приема (токотриенола или плацебо) в виде 200 мг×2 в день. Участники также получали другой контейнер с кремом с токотриенолом и с кремом с плацебо.

Двенадцать недель после операции:

7. Участники возвращались в офис пластической хирургии государственного университета Огайо для последнего приема. Три независимых и не посвященных в подробности испытания представителя медицинского персонала оценивали рубцы участников и процесс заживления согласно Ванкуверской шкале оценки. Фотографирование прооперированного участка осуществлялось также младшим медицинским персоналом или утвержденным персоналом клинического испытания. Фотографию использовали для записи и/или публикации.

Хирургические пациенты с односторонней операцией

1. В первый прием у младшего медицинского персонала или утвержденного персонала клинического исследования пациент возвращал/подписывал формы согласия и HIPAA. Производили исходный забор крови (20 мл) для измерения соответствия требованиям. Участники также получали 4-недельное обеспечение перорального введения (токотриенола или плацебо) в виде 200 мг×2 в день. После исходного приема до установления даты операции 4-недельное обеспечение перорального введения посылали по почте участнику каждые 4 недели. С целью определения соответствия требованиям участников проинструктировали о необходимости возвращения пустых блистерных упаковок младшему медицинскому персоналу или утвержденному персоналу клинического испытания в конверте с предварительно оплаченным почтовым сбором при получении партии.

После установления даты операции:

Четыре недели до операции

2. Участники получали 4-недельное обеспечение перорального введения (токотриенола или плацебо) в виде 200 мг×2 в день. Осуществляется забор крови (20 мл) для измерения соответствия требованиям (это будет исходный забор крови, если объект не начинал прием препарата).

День операции:

3. Участники получали 4-недельное обеспечение перорального приема (токотриенола или плацебо) в виде 200 мг×2 в день. Производили забор крови (20 мл) для измерения соответствия требованиям. Участники получали крем с токотриенолом или крем с плацебо. Образцы ткани также собирали из оперативно удаляемого хирургического материала.

Одна неделя после операции:

4. Участники возвращались в офис пластической хирургии государственного университета Огайо. Три независимых и не посвященных в подробности испытания представителя медицинского персонала оценивали прооперированные участки участников согласно Ванкуверской шкале оценки. Фотографирование прооперированного участка осуществлялось младшим медицинским персоналом или утвержденным персоналом клинического испытания. Фотографию использовали для записи и/или публикации. Производили забор крови (20 мл) для измерения соответствия требованиям.

Через четыре недели после операции:

5. Участники возвращались в офис пластической хирургии государственного университета Огайо. Три независимых и не посвященных в подробности испытания представителя медицинского персонала оценивали рубцы участников и процесс заживления согласно Ванкуверской шкале оценки. Фотографирование прооперированного участка осуществлялось младшим медицинским персоналом или утвержденным персоналом клинического испытания. Фотографию использовали для записи и/или публикации. Производили забор крови (20 мл) для измерения соответствия требованиям. Участники получали 4-недельное обеспечение перорального приема (токотриенола или плацебо) в виде 200 мг×2 в день. Участники также получали другой контейнер с кремом с токотриенолом или с кремом с плацебо.

Восемь недель после операции:

6. Участники возвращались в офис пластической хирургии государственного университета Огайо. Три независимых и не посвященных в подробности испытания представителя медицинского персонала оценивали рубцы участников и процесс заживления согласно Ванкуверской шкале оценки. Фотографирование прооперированного участка осуществлялось младшим медицинским персоналом или утвержденным персоналом клинического испытания. Фотографию использовали для записи и/или публикации. Производили забор крови (20 мл) для измерения соответствия требованиям. Участники получали 4-недельное обеспечение перорального приема (токотриенола или плацебо) в виде 200 мг×2 в день. Участники также получали другой контейнер с кремом с токотриенолом или с кремом с плацебо.

Двенадцать недель после операции:

7. Участники возвратятся в офис пластической хирургии государственного Университета Огайо для последнего приема. Три независимых и не посвященных в подробности испытания представителя медицинского персонала оценивали рубцы участников и процесс заживления согласно Ванкуверской шкале оценки. Фотографирование прооперированного участка осуществлялось младшим медицинским персоналом или утвержденным персоналом клинического испытания. Фотографию использовали для записи и/или публикации.

Объектам требовалось самим вводить две капсулы по 100 мг дважды в день с интервалом приблизительно 12 часов. Им также потребовалось местное применение количества крема с монету в десять центов на 10 см по длине раны в месте хирургического разреза. Крему применяли один раз в день (с утра), начиная с первого дня после операции. С целью оценки соответствия требованиям объекты должны были приносить свои пустые блистерные упаковки и тюбики крема во время каждого визита к врачу, если они их использовали. Младший медицинский персонал или утвержденный персонал клинического исследования пациент подсчитывали оставшиеся капсулы и взвешивали тюбики. Пациенты предоставляли образец крови в четыре чайные ложки (20 мл) во время каждого визита к врачу, за исключением последнего. Осуществляли максимум 6 заборов крови и минимум 5. Младший медицинский персонал производил забор крови у пациента. Младший медицинский персонал также демонстрировал как и насколько много крема применять к каждому прооперированному участку. Пациент получал рандомизированную диаграмму, аналогичную показанной выше, объясняющую где применять каждый маркированный, зашифрованный с помощью цвета крем. В день операции также собирали образец ткани из оперативно удаляемого материала. Медицинский персонал оценивал фактические рубцы и прооперированные участки. Фотографии делали для записи и для возможной публикации. Никаких признаков, идентифицирующих личность, в фотографию не включали.

Описание оценки по Ванкуверской шкале:

Заживление рубцов обычно характеризуется определениями, касающимися глубины приподнятой ткани, цвета, мягкости, формы и ориентации. Эволюция пролиферативного процесса и гистопатологические различия также используются для различения гипертрофированного рубца, процесса, как правило, ограниченного по времени, от келоидного рубца, который включает перманентно развивающуюся продуктивность клеток, закрытие исходных границ и выход за исходные границы рубца в окружающую область кожи. Для оценки хирургического рубца используется Ванкуверская шкала рубцов, ассоциированная с приемлемой внутренней согласованностью и надежностью наблюдателя. Рубцы участников оцениваются тремя независимыми представителями медицинского персонала согласно шкале, приведенной ниже. Ванкуверская шкала рубцов представляет собой количественную оценку образования рубца. Нормальная кожа имеет по Ванкуверской шкале рубцов суммарную балльную оценку ноль.

Побочные явления:

К настоящему моменту времени не выявлено никаких связанных побочных эффектов в протоколе IRB авторов настоящего изобретения (200500034). В данном протоколе пациентам давали 200 мг ТСТ дважды в день в течение минимального срока, составляющего 4 недели, перед хирургической операцией. Максимальное время приема составило около года (прием продолжается в настоящее время).

Витамин Е представляет собой питательный элемент и его используемая дозировка составляет менее, чем половину ВП (верхний предел; 1000 мг/день), который определен отделом по пищевым продуктам и питанию Института медицины. Поэтому осложнения не ожидаются. Если имели место побочные явления, то участник прерывал применение витамина Е и записывался на осмотр его пластическим хирургом. Любые побочные явления указываются в виде протокола.

Результаты исследования

Образование рубца анализировали с использованием Ванкуверской шкалы рубцов. Данные анализировали с помощью Центра биостатистики государственного университета Огайо. Среднюю балльную оценку по Ванкуверской шкале рубцов использовали для каждого пациента в каждый момент времени. Первый ожидаемый результат данного испытания проявился после того, как в исследование включили половину пациентов. Центр биостатистики анализировал данные в этот момент. Изображения прооперированного участка могут использоваться в публикации, но при использовании будут деидентифицированы. Испытание обеспечит первые данные, выявляющие эффективность токотриенола в предотвращении или уменьшении образования рубцов.

СТАТИСТИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ

Размер образца:

Первичной целью данного рандомизированного двойного слепого испытания является определение того, улучшает ли пероральное и местное введение токотриенола (ТСТ) рубцевание после операции согласно Ванкуверской шкалы рубцов (VSS). VSS имеет интервал от 0 до 13, где 0 представляет собой наименьшее количество рубцевания, и 13 представляет собой наибольшее количество рубцевания. Хирургические рубцы будут оцениваться по балльной оценке в 1 день после операции, и через 4, 8 и 12 недель после операции. Объекты случайным образом распределялись на одну из четырех групп, определенных следующим образом: I) пероральное введение плацебо/местное введение плацебо, II) пероральное введение плацебо/местное введение ТСТ, III) пероральное введение ТСТ/местное введение плацебо, или IV) пероральное введение ТСТ/местное введение ТСТ при односторонней операции. Если объектам предписана двусторонняя операция, то они случайным образом распределялись по введению либо перорально плацебо, либо перорально ТСТ, где каждый объект получает местно ТСТ, рандомизированный по левой или правой стороне, а местное введение плацебо применялось к другой стороне. Таким образом, при двусторонней операции объекты получали при местном введении как обработку, так и контроль. Протестировали пять конкретных гипотез. Первая сравнивает балльные оценки VSS между пероральным введением ТСТ и пероральным введением плацебо. Вторая сравнивает местное введение ТСТ и местное введение плацебо. Третья сравнивает пероральное и местное введение ТСТ с пероральным и местным введением плацебо. Четвертая сравнивает пероральное введение ТСТ и местное введение плацебо с пероральным и местным введением плацебо, и пятая сравнивает местное введение ТСТ и пероральное введение плацебо с пероральным введением и местным введением плацебо. Общий уровень значимости 0,05 делили на 5, поскольку имеется пять первичных гипотез, которые следует протестировать, контролируя, таким образом, ошибку типа I. Тридцать семь участков ран (37) на группу будут обладать 80%-способностью для детекции различия в 1,4 единицы по шкале VSS. Эта оценка основана на двустороннем критерии Стьюдента с уровнем значимости 0,01, который имеет отклонение от единого стандарта 1,7 VSS единиц. Значения VSS и отклонение от единого стандарта основаны на работе Conologue and Norwood's по обработке хирургических рубцов. Балльная оценка VSS на 12 неделе после операции будет представлять собой первичный результат в тесте пяти гипотез. С учетом того, что 10% объектов не смогли продолжить, 42 участка с ранами на группу будут необходимы для гарантии того, что испытание проходит с корректным получением суммарного размера образца из 168 участков ран. Распределение односторонних прооперированных участков и двусторонних прооперированных участков неизвестно на данный момент времени. Если бы все объекты, которые вступили в данное испытание, представляли собой объектов с односторонней операцией, то количество объектов и участков ран будет одинаковым и для испытания будет необходимо 168 объектов. С другой стороны, если всем объектам требовалась двусторонняя операция, то необходимо только 84 объекта для получения 168 участков ран. Фактическое количество требующихся объектов будет составлять от 84 до 168, однако при этом будет 168 участков ран независимо от распределения типов операций.

Промежуточный анализ:

Один промежуточный анализ проводили в середине испытания, после того как приблизительно 84 объекта случайным образом распределяли с использованием альфа-функции Lan-DeMets с использованием границ O'Brien-Fleming для двух анализов (промежуточный и конечный анализ). Испытание будет остановлено, если р-величина для различия в балльных оценках VSS между пероральным и местным введением ТСТ по сравнению с пероральным и местным введением плацебо составит менее чем 0,0054.

Статистический анализ:

Описательную статистику использовали для описания индивидуальных данных пациентов и клинических результатов. В первичном анализе использовали смешанную модель случайных секущих, где VSS на 12 неделе после операции будет регрессировать в группе четырех обработок и корректироваться с учетом фактора, искажающего результаты, такого как индивидуальные данные пациента и место расположения рубца. Р-величины из пяти тестированных гипотез корректировали для сохранения суммарного коэффициента ошибки первого рода на уровне 0,0492. Вторичные анализы тестировали степень заживления между четырьмя группами обработок с использованием смешанной модели со случайным коэффициентом, которая использует VSS во все моменты времени. Балльные оценки VSS основаны на результатах трех независимых наблюдателей. Экспертная оценка также включена в вышеописанные модели. Межэкспертное соглашение проверено с использованием каппа-статистики. Балльные оценки VSS протестированы на соответствие стандартам и равной дисперсии, которые необходимы для смешанной модели. VSS может быть трансформирована с целью удовлетворения этим допущениям. Все анализы проводили с использованием «Stata 9.2» или более новой версии, Stata Corporation, College Station, Техас.

Приложение

Ванкуверская шкала рубцов

Васкуляризация

0 баллов - нормальный цвет, который сильно напоминает цвет всего остал тела.

1 балл - розовый цвет. Данный цвет, обычно наблюдаемый в течение временного периода в большинстве процессов нормального созревания, становится диагностическим сигналом патологии рубца, когда он сохраняется через два месяца развития.

2 балла - красный. Красный аспект связан с гиперваскуляризацией рубца. Данный цвет становится обычным через 4-8 недель после завершения заживления и представляет собой хороший признак развития патологии. Обычно красный рубец объединяется с пропорциональным увеличением приподнятости, определяющим гипертрофию рубца.

3 балла - пурпурный. Пурпурный рубец наблюдается в сильно васкуляризованных рубцах, типа ожоговых рубцов или в начальной стадии келоидного процесса.

Пигментация

0 баллов - нормальная кожа,

1 балл – гипопигментация,

2 балла – гиперпигментация.

Эластичность

0 баллов - нормальная,

1 балл - мягкая: гибкая с минимальным сопротивлением,

2 балла - упругая: уступающая под давлением,

3 балла - твердая: не гибкая, двигающаяся с трудом, сопротивляющаяся ручному давлению,

4 балла - полосатость: образование полос, которые белеют при растягивании, но не ограничивают диапазон движения,

5 баллов - контрактура рубца любого типа, ограничивающая диапазон движения.

Высота

0 баллов – нормальная,

1 балл - высота (в) <2 мм,

2 балла - 2 мм < в <5 мм,

3 балла - в >5 мм.

Суммарная возможная балльная оценка = 13

Все публикации, включающие патенты и непатентную литературу, упомянутые в данном описании изобретения, включены в данный документ конкретной ссылкой. Цитирование любого из документов, цитированных в данном документе, не подразумевает признания того факта, что любое из вышеупомянутого имеет отношение к предшествующему уровню техники. Все заявления относительно даты или представление относительно содержания этих документов основаны на информации, доступной для заявителей и не представляют собой какое-либо признание относительно правильности дат или содержания этих документов.