Результат интеллектуальной деятельности: СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ЭФФЕКТИВНОСТИ ТЕРАПИИ ЭВЕРОЛИМУСОМ У БОЛЬНЫХ МЕТАСТАТИЧЕСКИМ РАКОМ ПОЧКИ

Изобретение относится к области медицины, конкретно к онкологии, касается возможности прогнозирования эффективности терапии эверолимусом у больных с метастатическим раком почки и может быть использовано для персонифицированного назначения таргетного агента в лечении данной категории пациентов.

Рак почки в большинстве случаев представлен светлоклеточным почечноклеточным подтипом [5], ассоциированным с мутационными изменениями белка фон Хиппель-Линдау, увеличением содержания ядерного фактора HIF-1, гиперэкспрессией эндотелиального фактора роста (VEGF), активацией тирозинкиназных путей [7] и ключевой серин/треониновой протеинкиназой m-TOR [2]. Таргетная терапия на сегодняшний день является наиболее эффективным методом лечения метастатического рака почки (мПКР) [1]. В клинической практике помимо тирозинкиназных ингибиторов, широкое применение нашли ингибиторы m-TOR, в частности эверолимус («Афинитор», Novartis).

В настоящее время активно ведется поиск молекулярных маркеров, позволяющих предсказать эффективность применения данной группы препаратов у пациентов с мПКР, т.к. существующие прогностические шкалы Motzer и Heng, основанные на клинико-лабораторных показателях, в большей степени рассматриваются в отношении возможного исхода заболевания [4, 6].

С представленных позиций поиск новых предикторных маркеров, сопряженных с эффективностью таргетной терапии мПКР, является крайне актуальным.

Наиболее близким к заявляемому является способ, описанный Siming Li с соавторами (2014). Перед проведением терапии эвералимусом у пациентов с мПКР иммуногистохимически в ткани опухоли, полученной после оперативного этапа лечения, было определено наличие либо отсутствие экспрессии фосфорилированного АКТ (phospho-AKT), phospho-m-TOR, инициирующего фактора 4Е (eIF4E) и 40S рибосомального белка S6 (S6RP). При анализе полученных данных авторы пришли к выводу, что клиническая эффективность эверолимуса сопряжена с положительной сочетанной экспрессией m-TOR и S6RP [8]. При этом количественные значения маркеров в работе не указываются, так же как и не учитываются патогенетические особенности развития рака почки, связанные с гиперэкспрессией ядерного фактора HIF-1 сосудистого эндотелиального фактора роста - VEGF.

Новая техническая задача - выявление прогностических критериев, ассоциированных с возможной эффективностью лечения ингибиторами m-TOR, в частности эверолимусом.

Новый технический результат - повышение точности и информативности способа.

Технический результат достигается в способе прогнозирования эффективности терапии эверолимусом у больных метастатическим раком почки путем иммуноферментного определения количественного уровня phospho-m-TOR в ткани опухоли. Причем дополнительно в ткани опухоли, полученной при выполнении диагностической биопсии до оперативного этапа лечения, определяют содержание фактора, индуцированного гипоксией HIF-1α, сосудистого эндотелиального фактора роста VEGF и его рецептора VEGFR2. При значениях HIF-1α, VEGF, VEGFR2 более 16,2 УЕ/ мг белка в лунке; 100,5 и 82,2 пг/мг белка соответственно, а уровне phospho-m-TOR менее 5,5 пг/мг белка прогнозируют высокую эффективность терапии эверолимусом, а при значениях HIF-1α, VEGF, VEGFR2 менее 16,2 УЕ/ мг белка в лунке, 100,5 и 82,2 пг/мг белка соответственно и уровне phospho-m-TOR более 5,5 пг/мг белка прогнозируют низкую эффективность терапии эверолимусом.

Способ осуществляют следующим образом. Для прогнозирования исхода заболевания в опухолевой ткани, полученной при выполнении диагностической биопсии до оперативного лечения, проводят определение содержания HIF-1α, VEGF, его рецептора VEGFR2 и серин/треониновой протеинкиназы phospho-m-TOR. Образцы тканей до определения активности ферментов хранят при температуре -80°С и размораживают не более 1 раза. Перед определением активности исследуемых ферментов замороженную опухолевую ткань гомогенизируют до порошкообразного состояния в жидком азоте. Гомогенат центрифугируют при 2400g и 4°С для получения осадка, который ресуспендируют в 50 мкл 50 mМ Трис-HCl буфера (рН 7,5) и затем центрифугируют при 14000g и 4°С. Полученный супернатант используют для определения экспрессии транскрипционного фактора HIF-1α (hypoxia inducible transcription factor), содержания сосудистого эндотелиального фактора роста (VEGF), его рецептора VEGFR2 и серин/треониновой протеинкиназы phospho-m-TOR. Молекулярные показатели определяют иммуноферментным методом.

И при значении HIF-1α более 16,2 УЕ/ мг белка в лунке, содержании сосудистого эндотелиального фактора роста (VEGF), его рецептора VEGFR2 более 100,5 и 82,2 пг/мг белка соответственно, уровне серин/треониновой протеинкиназы phospho-m-TOR менее 5,5 пг/мг белка прогнозируют высокую эффективность терапии эверолимусом. При содержании HIF-1α менее 16,2 УЕ/ мг белка в лунке, VEGF и VEGFR2 - менее 100,5 и 82,2 пг/мг соответственно и серин/треониновой протеинкиназы phospho-m-TOR более 5,5 пг/мг белка прогнозируют низкую эффективность терапии эверолимусом.

Информативность отобранных критериев подтверждена наличием связи экспрессии транскрипционных, ростовых факторов и phospho-m-TOR с эффективностью терапии ингибитором m-TOR - эверолимусом у больных метастатическим раком почки. В исследование было включено 18 пациентов с метастатическим светлоклеточным почечноклеточным раком (T_3-4N_0-1M₁), получавших лечение на базе отделения общей онкологии ФГБНУ «НИИ онкологии» в период с 2011 по 2015 г. Комбинированное лечение больных предполагало проведение предоперационной таргетной терапии эверолимусом в дозе 10 мг ежедневно в течение двух месяцев с последующим выполнением паллиативной нефрэктомии. Непосредственная эффективность таргетной терапии оценивалась на основании результатов клинического обследования, данных СКТ/МРТ по шкале RECIST.

Отмечено, что эффективность таргетной терапии эверолимусом у больных диссеминированным раком почки ассоциируется с исходно высокими уровнями транскрипционного фактора HIF-1, ростового фактора VEGF, его рецептора VEGFR2. Уровень протеинкиназы phospho-m-TOR также может определять ожидаемый ответ на терапию ингибиторами m-TOR. Изначально низкая экспрессия данного маркера коррелирует с высокой эффективностью лечения.

Таким образом, высокие исходные показатели экспрессии транскрипционных факторов, ростового фактора VEGF и его рецептора в сочетании с низким содержанием phospho-m-TOR в опухоли почки ассоциированы с клиническим ответом на терапию эверолимусом, что позволяет рассматривать эти параметры в качестве дополнительных информативных маркеров, предсказывающих эффективность эверолимуса у больных метастатическим раком почки.

Клинические примеры

Пример 1. Больной Д., 74 года, обратился в Томский НИИ онкологии, где по результатам комплексного обследования был диагностирован светлоклеточный почечноклеточный рак, стадия G₂T₂N₁M₁. Прогноз заболевания по критериям MSKCC был оценен как промежуточный. Проведено исследование опухолевой ткани, полученной при выполнении диагностической биопсии на дооперационном этапе, согласно предлагаемому способу. Получены следующие данные: уровень HIF-1α составлял 4,94 УЕ/мг белка в лунке, содержание VEGF и VEGFR2 - 33,33 и 19,11 пг/мг белка. Экспрессия phospho-m-TOR была равна 14,67 пг/мг белка. Полученные уровни свидетельствовали о предполагаемой низкой эффективности эверолимуса у данного пациента. Лечение больного включало в себя проведение 2-месячного курса предоперационной таргетной терапии ингибитором m-TOR - эверолимусом в дозе 10 мг 1 раз в сутки, по окончании которого была оценена его эффективность по критериям RECIST. На фоне терапии отмечено прогрессирование заболевания с развитием полиорганной недостаточности и смертью пациента в течение 3-х месяцев.

Пример 2. Больная С., 57 лет, обратилась Томский НИИ онкологии, где по результатам комплексного обследования был диагностирован светлоклеточный почечноклеточный рак, стадия G₂T₁N₁M₁. При этом прогноз заболевания по критериям MSKCC был оценен как благоприятный. Проведено исследование опухолевой ткани, полученной при выполнении диагностической биопсии на дооперационном этапе согласно предлагаемому способу. Получены следующие данные: уровень HIF-1α составлял 4,26 УЕ/мг белка в лунке, содержание VEGF и VEGFR2 - 13,47 и 55,01 пг/мг белка. Экспрессия phospho-m-TOR была равна 16,43 пг/мг белка. На основании данных молекулярных показателей пациентка была отнесена в группу с плохой прогнозируемой эффективностью терапии эверолимусом. Лечение больной включало в себя проведение 2-месячного курса предоперационной таргетной терапии ингибитором m-TOR - эверолимусом в дозе 10 мг 1 раз в сутки, по окончании которого была оценена его эффективность по критериям RECIST. На фоне терапии отмечено прогрессирование заболевания с развитием полиорганной недостаточности и смертью пациентки в течение 4-х месяцев.

Пример 3. Больной С., 67 лет обратился в Томский НИИ онкологии, где по результатам комплексного обследования был диагностирован светлоклеточный почечноклеточный рак, стадия G2T2N1M1. Прогноз заболевания по критериям MSKCC был оценен как промежуточный. Проведено исследование опухолевой ткани, полученной при выполнении диагностической биопсии на дооперационном этапе, согласно предлагаемому способу. Получены следующие данные: уровень HIF-1α был равен 87,0 УЕ/мг белка в лунке, содержание VEGF и VEGFR2 - 428,0 и 340 пг/мг белка, а уровень phospho-m-TOR был равен 0. Пациент был отнесен в группу с высокой ожидаемой эффективностью эверолимуса. Лечение включало в себя проведение 2-месячного курса предоперационной таргетной терапии эверолимусом в дозе 10 мг 1 раз в сутки, по окончании которого была оценена его эффективность по критериям RECIST. На фоне терапии отмечена стабилизация заболевания, которая продолжалась в течение 10 месяцев.

Таким образом, предложенный способ с высокой информативностью позволяет предсказывать ожидаемую эффективность терапии эверолимусом у больных метастатическим раком почки, что немаловажно при выборе вида таргетной терапии.

Источники информации, принятые во внимание при составлении описания

1. Алексеев Б.Я., Нюшко К.М., Калпинский А.С. Неоадъювантная таргетная терапия у больных почечно-клеточным раком // Онкоурология. - 2015. - №2. - С.23-33. DOI: http://dx.doi.org/10.17650/1726-9776-2015-11-2-23-33

2. Guerin М., Salem N., Walz J., Dermeche S., Gravis G. Major response with sorafenib in advanced renal cell carcinoma after 14 years of follow-up. World Journal of Surgical Oncology. 2013; 11: 243-247.

3. Heng D.Y.C, Xie W., Regan M.M, Harshman L.C, Bjarnason G.A, Vaishampayan U.N, Mackenzie M., Wood L., Donskov F., Tan M. - H. Et al. External validation and comparison with other models of the International Metastatic Renal-Cell Carcinoma Database Consortium prognostic model: a population-based study // www.thelancet.com/oncology // Published online January 9, 2013 http://dx.doi.org/10.1016/S1470-2045(12)70559-4

4. Heng D.Y., Xie W., Regan M., et al. Prognostic factors for overall survival (OS) in patients with metastatic renal cell carcinoma (RCC) treated with vascular endothelial growth factor (VEGF)-targeted agents: Results from a large multicenter study. J Clin Oncol. 2009; 27: 5794-5799.

5. Keefe S.M., Nathanson K.L., Rathmell W.K. The molecular biology of renal cell carcinoma. Semin. Oncol. 2013; 40 (4): 421-428.

6. Motzer R.J., Bacik J., Schwartz L.H., Reuter V., Russo P., Marion S., Mazumdar M. Prognostic Factors for Survival in Previously Treated Patients With Metastatic Renal Cell Carcinoma // Journal of Clinical Oncology. - 2004. - Vol. 22. - 454-463.

7. Na X., Wu G., Ryan C.K., Shoen S.R., di'Santagness P.A., messing E.M. Overproduction of vascular endothelial growth factor related to von Hippel-Lindau tumor suppressor gene mutations and hypoxia-inducible factor-1 alpha expression in renal cell carcinomas. J. Urol. 2003; 170 (2 Pt 1): 588-592.

8. Siming Li, Yan Kong, Lu Si, Zhihong Chi, Chuanliang Cui, Xinan Sheng.

Phosphorylation of mTOR and S6RP predicts the efficacy of everolimus in patients with metastatic renal cell carcinoma. BMC Cancer 2014, 14: 376/

http://www.biomedcentral.com/1471-2407/14/376