Средство, представляющее собой этиловый эфир (±)-11,15-дидезокси-16-метил-16-гидроксипростагландина E, проявляющее абортивную активность, оптимально, в сочетании с мифепристоном

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности, а именно к средству, представляющему собой этиловый эфир (±)-11,15-дидезокси-16-метил-16-гидроксипростагландина E₁ (соединение 1), проявляющему абортивную активность, оптимально, в сочетании с мифепристоном.

Ранее были описаны синтез [1], острая, репродуктивная и иммунная токсичности [2, 3, 4], утеротонические [2] и другие свойства [5, 6, 7] соединения (1).

В акушерско-гинекологической практике актуальна проблема родовспоможения при доношенной беременности, а также прерывания беременности в I и II триместрах в случаях внутриутробной гибели плода, экстрагенитальных заболеваниях и других показаниях. В настоящее время в акушерско-гинекологической практике для обозначенных целей используется ограниченное количество препаратов, относящихся к производным простагландина E₁: мизопростол и гемепрост. Другие производные простагландинов (ПГ), ранее применяемые в гинекологической практике, такие как сульпростон и ПГF_2α, по данным ВОЗ, больше не применяются из-за их низкой эффективности и ряда побочных эффектов [8]. Мизопростол и гемепрост используются в качестве абортивного средства на ранних сроках беременности, а также для подготовки шейки матки и индукции родов как самостоятельно, так и в комплексе с антипрогестином мифепристоном [9]. При приеме антипрогестина мифепристона за 24-48 часов до введения простагландина, происходит лютеолиз, способствующий усилению утеротонического действия мизопростола и гемепроста, при этом эффективность медикаментозного аборта возрастает в среднем до 95%-97% [10, 11]. В связи с высокой востребованностью и безопасностью этих препаратов по сравнению с хирургическим абортом ВОЗ включила мизопростол и мифепристон в перечень необходимых лекарственных средств [8]. Однако применение мизопростола сопровождается рядом побочных эффектов со стороны желудочно-кишечного тракта (диарея, тошнота, рвота, коликообразные боли в животе) [12], а на поздних сроках беременности - повышением температуры тела, удлинением периода родов, эндометритом, разрывом матки [13]. Гемепрост требует особых условий хранения и применяется только вагинально [8]. В связи с этим продолжается поиск эффективных и в то же время безопасных средств, щадящих репродуктивное здоровье женщины.

Задача, на решение которой направлено заявленное техническое решение, заключается в поиске среди производных простагландинов соединений, отличающихся высокой абортивной активностью, стабильностью при хранении, низкой токсичностью, минимумом побочных эффектов, доступным синтезом, позволяющим снизить рыночную стоимость препаратов на их основе.

Поставленная задача решается средством, представляющим собой этиловый эфир (±)-11,15-дидезокси-16-метил-16-гидроксипростагландина Е₁, проявляющим абортивную активность, оптимально, в сочетании с антипрогестином мифепристоном. Абортивный эффект простагландинов определяется двумя составляющими - утеротонической и лютеолитической. Утеротоническая составляющая направлена на сокращение миометрия. Лютеолитическая составляющая направлена на повышение чувствительности гранулезных клеток желтого тела к простагландинам, которые способствуют снижению синтеза полового гормона, отвечающего за поддержание беременности - прогестерона. Поэтому основным показателем наличия лютеолитических свойств у соединения является его способность понижать уровень прогестерона. Кроме влияния на половые гормоны, ПГ вызывают изменение уровней гипофизарных гормонов, повышая уровень лютеинизирующего гормона (ЛГ), который снижается на фоне беременности. ЛГ стимулирует активность циклооксигеназы-2 в гранулезных клетках, что приводит к синтезу желтым телом собственных ПГ [14]; при этом возрастает чувствительность миометрия к простагландинам, как к собственным (ПГF_2α), так и экзогенным, что, в итоге, приводит к индукции маточных сокращений с последующим изгнанием плода.

Соединение (1), относящееся к ряду 11-дезоксипростагландинов и близкое по химическому строению с мизопростолом, является более стабильным [1] и в 2 раза менее токсичным, чем мизопростол [2]. Ранее, в экспериментах in vitro была показана способность соединения (1) усиливать сокращения миометрия крыс [2] и возможность проявления абортивного действия при длительном пероральном введении в низких дозах [15]. Это послужило предпосылкой к изучению абортивных свойств соединения (1) в сочетании с мифепристоном на беременных крысах. Соединение (1) получали согласно [1].

Изучение влияния соединения (1) в виде фармакологической субстанции (ФС) и лекарственного средства (ЛС, таблетка, 0,2 мг) на его основе, на матку беременных крыс осуществляли при пероральном введении в монорежиме и в сочетании с антипрогестином. В качестве референс-препарата использовали мизопростол. В качестве антипрогестина использовали мифепристон, вводимый на 7-е сутки беременности, за 24 часа до введения простагландинов. Изучение абортивной активности осуществляли согласно руководству по доклиническим исследованиям [16]. Полученные результаты приведены в таблице 1.

Проведенные исследования показали, что соединение (1) в виде ФС и ЛС при введении в монорежиме обладает абортивной активностью, сравнимой с мизопростолом, а при введении в сочетании с мифепристоном у ФС и ЛС наблюдалось более выраженное усиление абортивной активности (р<0,01), чем у мизопростола (р>0,05).

Изучение влияния соединения (1) в виде ФС и ЛС на его основе, вводимых как в монорежиме, так и в сочетании с мифепристоном, на уровень прогестерона и лютеинизирующего гормона (ЛГ) показало (таблица 2), что при сочетанном введении с мифепристоном ФС и ЛС более эффективно снижают уровень прогестерона (р<0,001), чем мизопростол.

ФС при сочетанном введении с мифепристоном эффективнее, чем мизопростол, повышает уровень ЛГ, а ЛС действует аналогично мизопростолу. Больший процент полных абортов в группах ФС и ЛС, по сравнению с мизопростолом (таблица 1), можно объяснить их более эффективным влиянием на уровни прогестерона и ЛГ.

Таким образом, предложено средство, представляющее собой этиловый эфир (±)-11,15-дидезокси-16-метил-16-гидроксипростагландина E₁, проявляющее абортивную активность, оптимально, в сочетании с мифепристоном. Соединение (1) является более стабильным и менее токсичным, чем мизопростол, что в сочетании с синтетической доступностью соединения (1) делает его исключительно перспективным для внедрения в практику с целью импортозамещения мизопростола в гинекологических бинарных препаратах и создания нового отечественного препарата подобного типа.

Сущность изобретения поясняется следующими примерами.

Пример 1. Изучение влияния соединения (1) в виде ФС и ЛС на его основе при пероральном введении в монорежиме и совместно с мифепристоном на матку беременных крыс в условиях in vivo.

Абортивную активность ФС и ЛС изучали на беременных крысах самках, линии Вистар массой 220-240 г, полученных из питомника лабораторных животных Рапполово. Животные содержались в стандартных условиях вивария, при 12-часовом освещении, постоянной температуре и влажности, кормление осуществлялось согласно ГОСТу. Самок подсаживали к самцам в соотношении 4:1. Влагалищные мазки брали каждое утро в 10 ч. Полученные мазки окрашивали краской Романовского-Гимзы. Наличие сперматозоидов в мазке считали первым днем беременности.

Беременных крыс распределяли следующим образом: 1 группа - ФС, 2 группа - ЛС, 3 группа - мизопростол, 4 группа - мифепристон, 5 группа - мифепристон + ФС, 6 группа - мифепристон + ЛС, 7 группа - мифепристон + мизопростол, 8 группа - интактный контроль.

В качестве препарата сравнения использовали мизопростол (таблетки, 0,2 мг) производства фирмы Бейджинг Зижу Фармасьютикал, Китай, применяемый в сочетании с мифепристоном для прерывания маточной беременности ранних сроков. В качестве вспомогательного препарата для прерывания беременности в сочетании с простагландинами использовали мифепристон (Гинестрил, 0,05 г, ЗАО «ОХФК», Россия).

Исследуемые вещества вводили перорально. Мифепристон вводили однократно на 7-й день беременности в дозе 7 мг/кг. Доза мифепристона подбиралась экспериментальным путем, дальнейшее увеличение дозы было нежелательным из-за повышения побочного действия соединения [17].

Изучаемые простагландины вводили трехкратно в дозе 1200 мкг/кг, с интервалом в 3 часа, через 24 часа после введения мифепристона. Выбор доз для исследования абортивной активности производился экспериментально с учетом аналогичных зарубежных исследований по изучению абортивной активности мизопростола [18]. Наблюдения проводили в течение последующих 6 дней с целью выявления возможных признаков прерывания беременности (кровянистые выделения из влагалища). Животных подвергали эвтаназии на 14-й день беременности, осуществляли ревизию полости матки на наличие или отсутствие плодов и мест резорбций. Подсчитывали среднее количество развивающихся плодов в группе. Абортивный эффект оценивали по количеству полных абортов и выражали в процентах от общего количества животных в группе.

Статистическая обработка результатов производилась путем расчета среднего арифметического (M=Σx_i/n) и стандартной ошибки среднего (m=σ/√n), где . Оценка статистической значимости различий при межгрупповых сравнениях производилась по двустороннему t-критерию Стьюдента для независимых групп и с использованием критерия χ² [19]. Различия считались статистически значимыми при значениях р<0,05. Для статистических расчетов использовалась программа «Microsoft Excel 2003».

При введении в монорежиме соединение (1) в виде ФС и ЛС на его основе в дозе 1200 мкг/кг увеличивало количество полных абортов на 20% (р>0,05) относительно группы интактного контроля. Наибольшее количество неполных абортов наблюдали в группах ЛС как при введении в монорежиме, так и в сочетании с мифепристоном (таблица 1). Препарат сравнения мизопростол, также вводимый в монорежиме в дозе 1200 мкг/кг, увеличивал число абортов на 30% (р>0,05). При введении изучаемых простагландинов в сочетании с мифепристоном наблюдали увеличение количества полных абортов в группах ФС (86,7%, р<0,001), ЛС (73,3%, р<0,001) и мизопростола (60%, р<0,01). Следует отметить, что абортивная активность ЛС в сочетании с мифепристоном возрастает в 3,7 раза (р<0,01) по сравнению с введением ЛС в монорежиме, тогда как сочетание мизопростола с мифепристоном приводит к увеличению абортивной активности только в 2 раза (р>0,05). Результаты представлены в таблице 1.

Количество живых плодов, приходящихся на одну самку в группах, которым вводили ФС, ЛС, мизопростол и мифепристон в монорежиме, было в среднем 7 плодов (таблица 1). Наименьшее количество плодов наблюдалось в группе ФС при сочетанном введении, что в 12 раз меньше (Р<0,001), чем у группы интактного контроля и в 4,3 раза меньше (Р>0,05), чем в группе мизопростол+мифепристон. В группе ЛС при сочетанном введении количество плодов было соответственно в 4,9 раза (Р<0,001) и 1,7 раза (Р>0,05) меньше, чем в группе контроля и группе мизопростол + мифепристон. В группе мизопростола при сочетанном введении количество плодов было в 2,8 раза (Р<0,001) меньше, чем у группы интактного контроля.

Приведенные данные подтверждают более выраженное абортивное действие соединения (1) в виде ФС и ЛС на его основе, по сравнению с мизопростолом.

Пример 2. Изучение влияния соединения (1) в виде ФС и ЛС на его основе при пероральном введении в монорежиме и совместно с мифепристоном на уровень прогестерона и ЛГ в инкубатах яичников беременных крыс.

Влияние ФС и ЛС на уровни гормонов изучали на беременных крысах самках, линии Вистар массой 220-240 г. Наличие сперматозоидов в мазке считали первым днем беременности.

Беременных крыс распределяли по следующим группам: 1 группа - интактный контроль, 2 группа - ЛС, 3 группа - мизопростол, 4 группа - мифепристон, 5 группа - мифепристон + ЛС, 6 группа - мифепристон + ФС, 7 группа - мифепристон + мизопростол.

Исследуемые вещества вводили перорально. Мифепристон вводили однократно на 7-й день беременности в дозе 4 мг/кг. Изучаемые простагландины: ФС, ЛС и мизопростол вводили в дозе 1200 мкг/кг трехкратно с интервалом в 3 часа через 24 часа после введения мифепристона.

Животных подвергали эвтаназии на 14-й день беременности, затем извлекали яичники для приготовления их инкубатов с последующим определением уровня гормонов.

Инкубаты яичников получали инкубированием яичников в 1,5 мл раствора Рингера-Тироде (на 1 л раствора: NaCl - 8 г, KCl - 0,2 г, CaCl₂ - 0,2 г, NaHCO₃ - 0,1 г, NaH₂PO₄ - 0,05 г, MgCl₂ - 0,1 г, глюкоза - 0,1 г) при 37°C в течение 2 часов. Инкубаты замораживали и хранили при температуре - 20°C. Уровни гормонов определяли методом электрохемилюминесценции с помощью иммуноферментного анализатора cobas е 411 (Roche).

Оценка статистической значимости различий при межгрупповых сравнениях производилась по двустороннему t-критерию Стьюдента для независимых групп [19]. Различия считались статистически значимыми при значениях р<0,05. Для статистических расчетов использовалась программа «Microsoft Excel 2003».

Изучение влияния соединения (1) в виде ФС и ЛС на его основе при введении в монорежиме и в сочетании с мифепристоном на 8-й день беременности показало его более высокую лютеолитическую способность, по сравнению с мизопростолом. В группе ЛС, уровень прогестерона к 14-му дню беременности был снижен в 2 раза (р<0,001), а в группе мизопростола в 1,4 раза (р<0,05) по сравнению с контролем. При сочетанном введении с мифепристоном ФС, ЛС и мизопростола в одинаковой дозе, равной 1200 мкг/кг, наибольшую лютеолитическую активность показало сочетание с ФС, при котором уровень прогестерона понижался относительно контроля в 10,7 раза (р<0,001). ЛС и мизопростол снижали уровень этого гормона по сравнению с данными контрольной группы в 2,5 (р<0,001) и 1,9 раза (р<0,01) соответственно (таблица 2).

ЛГ, отвечающий за развитие и созревание яйцеклетки во время менструального цикла, во время беременности снижен. При введении изучаемых соединений (ПГ и мифепристона) наблюдалось повышение уровня ЛГ в инкубатах яичников. Особенно этот показатель возрос у группы животных, которым вводили ФС в сочетании с мифепристоном: в 1,9 раз (Р<0,001) относительно контроля и в 1,3 раза (Р<0,001) относительно группы мизопростола в сочетании с мифепристоном (таблица 2).

Таким образом, абортивный эффект, вызываемый соединением (1) в виде ФС и ЛС на его основе, обусловлен не только утеротонической составляющей, но и способностью соединения (1) в виде ФС и ЛС влиять на уровни гонадотропных и половых гормонов, повышая уровень ЛГ и понижая уровень прогестерона в инкубатах яичников беременных крыс. ЛС на основе соединения (1) как в монорежиме, так и в сочетанном введении с мифепристоном эффективнее, чем мизопростол, понижало уровень прогестерона.

Литература

1. Иванова Н.А., Шайнурова A.M., Мифтахов М.С. Простаноиды. LXIX. Синтез этилового эфира (±)-11,15-дидезокси-16-метил-16-гидрокси-простагландина Е₁. // Хим.-фарм. Журнал, 1998, №. 6, С. 39-40.

2. Иванова Н.А., Сапожникова Т.А., Габдрахманова С.Ф. и др. Средство, представляющее собой этиловый эфир (±)-11,15-дидезокси-16-метил-16-гидроксипростагландина Е₁, проявляющее утеротоническую активность // Патент №2394814 от 20.07.10 г.

3. Катаева P.M., Аглетдинов Э.Ф., Катаев В.А., Иванова Н.А., Халиков Р.А. Изучение иммунотоксичности и аллергенных свойств 11-дезоксимизопростолаи // "Фундаментальные исследования" 2014, №10 (часть 10), с. 1938-1941.

4. Катаева P.M., Аглетдинов Э.Ф., Иванова Н.А., Галимова Р.А., Булыгин К.В., Катаев В.В. Изучение репродуктивной токсичности перспективного нового лекарственного средства «11-дезоксимизопростол» // Современные проблемы науки и образования, 2015, №1, с.

5. Сапожникова Т.А., Зарудий Ф.С., Карачурина Л.Т., Макара Н.С., Хисамутдинова С.Ю., Иванова Н.А., Шайнурова A.M., Мифтахов М.С. Фармакологические свойства 11-дезоксимизопростола. // Эксперим. и клин. фармакология, 2003, Т. 66, №1, С. 34-36.

6. Иванова Н.А., Сапожникова Т.А.; Зарудий Ф.С; Басченко Н.Ж.; Макара Н.С.; Хисамутдинова Р.Ю.; Габдрахманова С.Ф.; Назаров В.С. Гепатопротекторная активность 2-дезметоксикарбонил-2-этоксикарбонил-11-дезоксимизопростбла. // Эксперим. и клин. фармакология, 2007, Т. 70, №4, С. 30-31.

7. Сапожникова Т.А.; Зарудий Ф. С, Басченко Н.Ж., Габдрахманова С.Ф., Макара Н.С., Хисамутдинова Р.Ю., Назаров B.C. Желчегонная активность 2-дезметоксикарбонил-2-этоксикарбонил-11-дезоксимизопростола на модели гепатита, вызванного CCl₄. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2008. - Т. 145. - №2. - С. 183-184.

8. ВОЗ, Безопасный аборт: рекомендации для систем здравоохранения по вопросам политики и практики, Второе издание, 125 с., 2013.

9. Wong K.S. et al. Vaginal misoprostol compared with vaginal gemeprost in termination of second trimester pregnancy. A randomized trial // Contraception, 1998, 58(4), pp 207-210.

10. Дикке Г.Б. Опыт прерывания беременности одной таблеткой мифепристона в комбинации с мизопростолом // Земский врач, 2012, №4 (12), с. 25-30.

11. Løkeland М, Iversen ОЕ, Engeland A, Okland I, Bjørge L. Medical abortion with mifepristone and home administration of misoprostol up to 63 days gestation. // Acta Obstet Gynecol Scand, 2014, 93(7), pp 647-53.

12. R. Sitruk-Ware Mifepristone and misoprostol sequential regimen side effects, complications and safety // Contraception, 2006, 74(1), 48-55.

13. M. Cayrac, Faillie J.L, et al. Second- and third-trimester management of medical termination of pregnancy and fetal death in utero after prior caesarean section // Eur J Obst Gynecol and Reprod Biol, 2011, 157, pp 145-147.

14. M.C. Wiltbank, J.S. Ottobre. Regulation of intraluteal production of prostaglandins// J Reprod Biol Endocrinol, 2003, 1, p 91.

15. Габдрахманова С.Ф., Сапожникова T.A., Басченко Н.Ж., Зарудий Ф.С., Иванова Н.А. Влияние аналога мизопростола - 11-дезоксимизопростола на сократительную активность матки крыс и его абортивные свойства Экспериментальная и клиническая фармакология. Т. 73, №3. С. 18-20. 2010.

16. А.Н. Миронов. Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Часть первая. - М.: Гриф и К, 2012. - 944 с.

17. Абрамченко В.В., Гусева Е.Н. Медикаментозный аборт. - СПб.: «Элби-СПб», 2005. 116 с.

18. Q. He, В. Yang Synergistic effects of DL111-IT in combination with mifepristone and misoprostol on termination of early pregnancy in preclinical studies // Contraception, 68, 2003, 289-295.

19. Прозоровский В.Б. Статистическая обработка результатов фармакологических исследований // Психофармакология и биологическая наркология, том 7, выпуск 3-4, 2007. С. 2090-2120.