СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ПРЕДРАСПОЛОЖЕННОСТИ К РАЗВИТИЮ ПОСТТРАВМАТИЧЕСКОГО ОСТЕОАРТРОЗА КОЛЕННОГО СУСТАВА

Область техники, к которой относится изобретение

Изобретение относится к медицине, в частности к молекулярно-генетическим исследованиям, а именно к области диагностики генетической предрасположенности к развитию остеоартроза коленного сустава после травматического повреждения, что может быть использовано в спортивной и предиктивной медицине, а также в целях коррекции образа жизни пациентов в валеологической практике.

Уровень техники

Гонартроз - остеоартроз (OA) коленного сустава, одна из причин хронической нетрудоспособности, от симптомов которого в мире страдают около 13% женщин и 10% мужчин старше 60 лет (Heidari В., 2011) /1/. Основными факторами, способствующими развитию остеоартроза коленного сустава, являются физические нагрузки и травмы. Травматические воздействия являются причиной истончения суставного хряща, что приводит к развитию посттравматического гонартроза (Капустина Н.В., Кобракова Т.Д., 2013) /2/. После травмы сустава содержание провоспалительных маркеров (интерлейкин-1-бета IL-1β, фактор некроза опухоли TNFα) увеличивается в синовиальной среде, что стимулирует ангиогенез (рост новых кровеносных сосудов), а также экспрессию катаболических ферментов, таких как матриксные металлопротеиназы, ММР (Anderson D.D., Chubinskaya S. et al, 2011) /3/.

Показано, что остеоартроз характеризуется множеством генетических факторов риска, и исследования ассоциаций кандидатных генов уже обнаружили несколько локусов восприимчивости к OA (Chapman K., Valdes А.М., 2012) /4/. Несмотря на то, что различные группы исследователей рассматривали более 80 потенциальных кандидатных генов, ассоциированных с развитием OA, удалось выявить один повсеместный и надежный аллель чувствительности к остеоартрозу, а именно точечный полиморфизм С/Т (rs143383), который локализуется в 3′-нетранслируемом регионе гена фактора роста и дифференциации 5 GDF5 (Reynard L.N., Louhlin J., 2012) /5/. Полногеномные исследования полиморфизмов (GWAS - genome-wide association study), например, британское исследование arcOGEN, выявили несколько общих локусов предрасположенности к OA, в т.ч. коленного сустава, у различных рас мира, например, блок неравновесного сцепления на участке хромосомы 7q22 (Gonzalez А., 2013) /6/. Патологическая активность любого из генов региона 7q22 может привести к развитию OA коленного сустава, поскольку в данном регионе наблюдается сильное неравновесное сцепление (Evangelou Е., Valdes A.M., Kerkhof H.J.M., 2011) /7/. Последняя работа содержит самый большой на момент публикации объем изученных образцов по исследованию OA коленного сустава, а именно почти 8000 случаев. Блок неравновесного сцепления на участке 7q22 включает 6 генов: PRKAR2B, HPB, COG5, GPR22, DUS4L и BCAP29.

Как было показано, локусы многих генов ассоциированы с OA коленного сустава и без «полногеномной» значимости: SMAD3, BMP5, 2 (костный морфогенетический белок 5, 2), FTO (ген, ассоциированный с жировой массой), TRPV1 (ваниллоидный рецептор 1) (Gonzalez А., 2013) /6/. Были показаны значимые ассоциации полиморфизмов таких генов, как ADAM12, COX2 (циклооксигеназа 2), TNA (тетранектин, который является плазминоген-связывающим пептидом), с тремя характерными признаками OA коленного сустава - сужение суставной щели, остеофиты, радиографические признаки (Valdes A.M., Hart D.J., Jones K.A. et al., 2004 /8/, Kerna I., Kisand K., Tamm A.E. et al., 2009 /9/). Гены, экспрессия которых связана с воспалительным процессом и деградацией хряща, также оказались вовлеченными в явление генетической предрасположенности к OA: например, гены интерлейкина-1 и его модуляторов (Prieto-Montana J.R., Riancho J.A., 2009) /10/. Группа (Smith A.J.P., Keen L.J. et al., 2004) /11/ установила сцепление между девятью полиморфными локусами в промоторе гена IL1R1, восемью локусами в генном комплексе IL1A-IL1B-IL1RN, и их ассоциацию с остеоартрозом коленного сустава. Исследование британских популяций показало, что один из распространенных гаплотипов кластера IL1A-IL1B-IL1RN в 2-4 раза повышает риск развития OA (2C-CTG-1TT); другой (протективный) - в 4-5 раз его снижает (CCA-1ТТ). С другой стороны, мета-анализ результатов нескольких исследований, проведенный группой (Moxley G., Meulenbelt I. et al., 2009) /12/, не показал влияния различных гаплотипов кластера IL-1 на риск развития гонартроза (остеоартроза коленного сустава). Кроме того, обширный мета-анализ группы (Kerkhof H.J.M., Doherty М. et al., 2011) /13/ показал отсутствие ассоциации гаплотипов IL-1B-IL1B-IL1RN (rs1143634/rs16944/rs419598) с риском развития гонартроза, однако ген IL1RN (антагонист рецептора IL-1) может влиять на тяжесть патологии.

Противоречивые результаты получены относительно ассоциации полиморфных локусов генов Wnt-сигнального пути, который регулирует развитие кости и сустава, и восприимчивостью к OA коленного сустава (Valdes A.M., Spector T.D., 2010) /14/. Для передачи сигнала внутрь клетки белки семейства Wnt должны связать соответствующий рецептор на поверхности клетки (например, из семейства Frizzled); другие белки также способны акцептировать лиганды Wnt (корецепторы LRP5/6). Сигнальный путь Wnt задействован в контроле пролиферации и дифференциации клеток, в организации цитоскелета и клеточной подвижности (Куликова К.В., Кибардин А.В. и др., 2012) /15/. Так, замены в гене FRZB (frizzled-связанный белок 3) rs7775 и rs28836 могут быть связаны с риском развития гонартроза. С другой стороны, группа (Kerkhof J.M., Uitterlinden A.G., et al., 2008) /16/ изучала полиморфизмы нескольких ключевых участников Wnt-сигнального пути, а именно генов FRZB, LRP5, LRP6 (LRP - белки, связанные с рецептором липопротеина низкой плотности), и не обнаружила ассоциации полиморфизмов данных генов с частотой OA в двух популяциях.

Из противоречивости перечисленных данных очевидно, что поиск надежных и значимых генетических маркеров предрасположенности к остеоартрозу коленного сустава в популяциях русского населения является актуальной проблемой ранней диагностики и предиктивной медицины.

Наиболее близким к настоящему изобретению является молекулярно-генетический способ прогнозирования предрасположенности к развитию тяжелой формы деформирующего OA коленного сустава у взрослых с помощью выявления генотипа, гомозиготного по функционально неполноценному аллелю t гена рецептора 1,25-дигидроксивитамина D3, VDR (патент RU №2249210, 27.03.2005) /17/. Данный способ осуществляется путем смешивания компонентов реакционной смеси и добавления олигопраймеров, путем полимеразной цепной реакции с последующей рестрикцией полученного продукта и визуализацией электрофореграммы в вертикальном полиакриламидном геле. В данном способе генетическую предрасположенность определяют путем анализа полиморфизма Taq I гена VDR методом полимеразной цепной реакции с использованием следующих праймеров: 5′-GATGATCCAGAAGCTAGCCGACCT-3′ и 5′-GCAACTCCTCATGGCTGAGGTCT-3′. На основании результата анализа электрофореграммы составляют клиническую интерпретацию, при этом наличие функционально неполноценного генотипа tt по полиморфизму Taq I гена VDR интерпретируют как предрасположенность к высокому риску развития тяжелой формы деформирующего остеоартроза коленного сустава (в популяции Северо-Западного региона Российской Федерации).

Однако обширный мета-анализ, касающийся роли различных полиморфизмов гена VDR, в том числе и полиморфизма Taq I, учитывающий данные 3372 пациентов, не обнаружил статистически значимой ассоциации с предрасположенностью к OA, даже после стратификации по европейским и азиатским когортам (Lee Y.H., Woo J.H. et al., 2009) /18/.

В вышеупомянутом способе пациенты с предшествовавшими травмами коленного сустава (внутрисуставные и околосуставные переломы, вывихи, повреждения менисков и связок коленного сустава) не были включены в исследование, поскольку это могло быть причиной вторичного OA. Задачей настоящего изобретения является установление предрасположенности к развитию OA именно после травматического воздействия на коленный сустав. Вторичный OA вследствие травмы может диагностироваться в достаточно раннем возрасте и прогрессировать быстро; посттравматический OA составляет 12% случаев об общего количества больных OA коленного сустава (Stiebel М., Miller L.E., Block J.E., 2014) /19/. Более того, как показано в работе (Valdes A.M., Doherty S.A., Muir K.R., 2013) /20/, посттравматические тяжелые формы OA, ведущие к необходимости полной замены сустава, характеризуются по крайней мере такой же генетической предрасположенностью, как и в случае первичного OA.

Раскрытие изобретения

Техническим результатом настоящего изобретения является увеличение достоверности выявления генетической предрасположенности человека к развитию остеоартроза коленного сустава после травматического повреждения за счет определения полиморфизма rs2276109 (A-82G) гена ММР-12 (матриксная металлопротеиназа 12, макрофагальная металлоэластаза). При выявлении генотипа GG диагностируют высокую генетическую предрасположенность к развитию посттравматического OA коленного сустава.

Предлагаемый способ технически прост, обеспечивает существенное снижение времени и материальных затрат на проведение анализа. Интерпретация полученных результатов может быть использована в области спортивной и предиктивной медицины, валеологии.

Матриксная металлопротеиназа 12 (ММР-12) входит в отдельную подгруппу ММР, и как все матриксные металлопротеиназы синтезируется в виде профермента, имеет ионы Zn²⁺ в активном центре и консервативные последовательности, а также C-гемопексиноподобный домен, отвечающий за субстратную специфичность (Ганусевич И.И., 2010) /21/.

Известна роль ММР-12 в воспалении и ангиогенезе (Jormsjo S., Ye S., Moritz J. et al., 2000) /22/, а эти процессы особенно характерны для посттравматического остеоартроза. Матриксная металлопротеиназа-12 секретируется активированными макрофагами, среди ее субстратов можно назвать эластин, фибронектин, ламинин, коллаген IV типа, плазминоген (Rodriguez D., Morrison C.J., Overall С.М., 2010) /23/. Ген ММР-12 картирован в области 11q22.2-22.3 и включает 10 экзонов и 9 интронов; промотор гена имеет сайты взаимодействия с такими факторами транскрипции, как TCF-4, LBP-сайт, сайт АР-1, TATA бокс (Yamana K., Bilim V. et al., 2005) /24/. В промоторе гена ММР-12 несколько полиморфных локусов, влияющих на экспрессию: A-82G; -1079Т ins/del; C-1839G (Johnson М., Toms S., 2005) /25/.

Показано, что в хряще и субхондральной кости пациентов с OA наблюдается экспрессия гена ММР-12, которая в норме отсутствует (Kaspiris А., Papadimitriou Е. et al., 2012) /26/, а экспрессия ММР-12 в культивированных хондроцитах индуцируется в присутствии провоспалительного цитокина IL-1β (Oh H., Yang S. et al., 2008) /27/.

Полиморфная замена A→G в позиции -82 промотора гена ММР-12 (аллель А более распространен) влияет на аффинность транскрипционного фактора АР-1 и, следовательно, транскрипционную активность промотора этого гена (Ye S., 2000) /28/. Аллель А обладает большим сродством к АР-1 и большей транскрипционной активностью в различных макрофагальных клеточных линиях. Аллель А ассоциирован с такими патологиями, как сужение коронарных артерий при сердечной недостаточности, диабете (Jormsjo S., Ye S., Moritz J. et al., 2000) /22/. Обсуждалась роль этого полиморфизма в связи с риском новообразований (Shin A., Cai Q., Shu Х.-О. et al., 2005) /29/ и легочных заболеваний (Van Diemen С.С., Postma D.S. et al., 2011) /30/.

Авторами настоящего изобретения в результате анализа распределения генотипов по ММР12 среди пациентов с посттравматическим OA коленного сустава и их сравнении с контрольной группой неожиданно было обнаружено наличие достоверной ассоциации между полиморфным аллелем G и, в частности, генотипом GG по полиморфизму A-82G гена ММР12 и развитием посттравматического остеоартроза.

Осуществление изобретения

Использование способа прогнозирования предрасположенности человека к посттравматическому OA коленного сустава на основе анализа полиморфизма A-82G гена ММР-12 включает проведение следующих исследований.

Выделение ДНК из периферической крови

Для выделения ДНК из периферической крови используют коммерческий набор реагентов «ДНК-экспресс-кровь» (Литех, Москва).

Основные этапы выделения ДНК:

1. В пробирку типа «Эппендорф» с замком внести 800 мкл цельной крови. Перед внесением кровь необходимо перемешать до однородности. В качестве антикоагулянта при заборе венозной крови используется ЭДТА.

2. Закрыть пробирку и центрифугировать со скоростью 3000 оборотов в минуту при комнатной температуре в течение 5 минут, после центрифугирования кровь разделится на плазму и форменные элементы. На поверхности осадка форменных элементов расположен тонкий слой лейкоцитов.

3. Аккуратно удалить пипеткой плазму, не захватив при этом лейкоциты.

4. Закрыть пробирку и выдержать ее при -20°C (в морозильной камере) до полного замораживания форменных элементов (в течение 1 часа).

5. Полностью разморозить содержимое пробирки при комнатной температуре.

6. Внести в пробирку реактив «ДНК-экспресс-кровь». Его объем должен быть равен объему оставшихся в пробирке форменных элементов и плазмы (в опыте в пробирке находилось 500 мкл форменных элементов, соответственно прибавляли 500 мкл реагента «ДНК-экспресс-кровь»). Закрыть пробирку.

7. Содержимое пробирки в течение 10 секунд тщательно перемешать на вортексе.

8. Установить пробирку в предварительно прогретый до 98°C термостат, выдержать 15 минут, затем центрифугировать со скоростью 12000 оборотов в минуту при комнатной температуре в течение 60 секунд.

Полученный таким образом супернатант используют в качестве исследуемого образца ДНК.

Анализ полиморфизма гена. Проведение амплификации

Для выявления полиморфных аллелей гена матриксной металлопротеиназы 12 (ММР-12, A-82G) используют наборы реагентов SNP-экспресс (Литех, Москва). Анализ основан на одновременном проведении двух реакций амплификации с двумя парами аллель-специфичных праймеров. Одна пара праймеров комплементарна нормальному (более распространенному) аллелю, вторая комплементарна полиморфному аллелю. Данный анализ позволяет выявлять как гетерозиготное носительство полиморфных аллелей, так и гомозиготное состояние.

Ход работы:

1. Приготовить и пронумеровать пробирки для проведения амплификации. Для каждой пробы необходимы две пробирки - N (норма) и P (патология).

2. Приготовить рабочие смеси реагентов для амплификации из расчета на 1 пробу: 17 мкл разбавителя; 2.5 мкл реакционной смеси; 0.2 мкл Taq-полимеразы. Готовятся две рабочие смеси: с реакционной смесью «норма» и с реакционной смесью «патология».

3. После добавления Taq-полимеразы, которое производится в последнюю очередь, необходимо тщательно перемешать смесь пипетированием.

4. Добавить по 20 мкл соответствующей рабочей амплификационной смеси во все соответствующие пробирки для амплификации.

5. Добавить во все пробирки по 1 капле минерального масла.

6. Внести по 5 мкл образца ДНК в пробирку с рабочей амплификационной смесью «норма» и в пробирку с рабочей амплификационной смесью «патология». В пробирке отрицательного контроля содержится равное количество рабочей амплификационной смеси, минерального масла, а также 5 мкл разбавителя.

7. Пробирки закрыть и центрифугировать в течение 3-5 секунд при 3000 оборотах в минуту.

8. Перенести пробирки в амплификатор для проведения реакции амплификации. Используется «горячий старт», то есть пробирки вносятся в прогретый до 94°C амплификатор.

Режим амплификации:

93°C - 1 минута

1 цикл

93°C - 10 секунд

64°C - 10 секунд

72°C - 20 секунд

35 циклов

72°C - 1 минута

1 цикл

10°C - хранение

Детекция продуктов амплификации

Разделение продуктов амплификации проводят методом горизонтального электрофореза в агарозном геле.

Ход работы:

1. Залить в аппарат для электрофореза TAE - буфер, приготовленный на дистиллированной воде разбавлением 50хТАЕ: в 50 раз (pH=8.3).

2. Приготовить 3% агарозный гель. Добавить к 100 мл расплавленной агарозы 10 мкл 1% раствора бромистого этидия.

3. Охладить расплавленную агарозу до температуры 50-60°C и залить в планшет для заливки геля. Для получения карманов в агарозном геле установить гребенку. Объем карманов должен быть не менее 20-25 мкл. После застывания агарозы перенести планшет с гелем в камеру для проведения электрофореза.

4. Нанести в карманы геля по 10-15 мкл амплификата

5. Подключить камеру для электрофореза к источнику питания и задать напряжение 10-15 В/см геля. Оптимальное время проведения электрофореза 15-20 минут.

Анализ электрофореграмм осуществляют под ультрафиолетом (УФ) на трансиллюминаторе BioRad (длина волны УФ света 310 нм).

Далее приводятся конкретные примеры осуществления заявленного способа.

Пример 1

Пациент М., мужчина, 25 лет, находился в отделении ортопедии с 05.12.2013 по 16.12.2013. После спортивной травмы левого коленного сустава (25.11.2013 г.) появились боли, ограничение функции сустава. Был поставлен следующий диагноз: левосторонний гонартроз II стадии по Kellgren-Lawrence, закрытая травма левого коленного сустава, травматический разрыв медиального мениска левого коленного сустава. Был госпитализирован для оперативного лечения.

Проведено молекулярно-генетическое типирование и выявлен генотип GG (rs2276109), данный генотип предрасполагает к развитию OA коленного сустава после травмы.

Пример 2

Пациент Г., мужчина, 34 года, находился в отделении ортопедии с 20.06.2013 по 30.06.2013. Жалобы на боль в левом коленном суставе, нарушение функции. Был поставлен диагноз: посттравматический левосторонний гонартроз II стадии по Kellgren-Lawrence, состояние после пластики подколенного сухожилия левого коленного сустава. Был госпитализирован для оперативного лечения.

Проведено молекулярно-генетическое типирование и выявлен генотип GG (rs2276109), данный генотип предрасполагает к развитию OA коленного сустава после травмы.

Пример 3

В качестве объекта исследования были использованы образцы периферической крови 93 неродственных пациентов с диагнозом посттравматический остеоартроз коленного сустава в возрасте 46.6 (SD 14.7) лет, 37 мужчин и 56 женщин, русской национальности, проживающие на территории Ростовской области, проходившие лечение в Центральной городской больнице №1 им. Н.А. Семашко. Контрольную группу составили 85 пациентов отделения травматологии и ортопедии ЦГБ, без признаков сужения суставной щели, наличия остеофитов, жалоб на боли или ограниченность функций, в возрасте 43.4 (SD 15.5) лет, 33 мужчины и 52 женщины, из Ростовской области.

Частоты генотипов и аллелей в группе пациентов с OA коленного сустава составили: AA - 64.8%, AG - 25.3%, GG - 9.9%, частота аллеля A - 77.5%, G - 22.5%, в контрольной группе: AA - 76.1%, AG - 23.9%, GG - 0.0%, частота аллеля A - 88.0%, G - 12.0%. Гетерозигот в группе пациентов с OA было на 5.9% больше, чем в контрольной группе. Важно отметить, что генотип GG, обладатели которого, согласно гипотезе авторов настоящего изобретения, имеют сниженный уровень продукции ММР-12, не встречается в контрольной группе. Обнаружены достоверные различия в частотах генотипов (X²=7.77, p=0.02) и аллелей (X²=6.05, p=0.01) по полиморфизму A-82G между группой пациентов с OA коленного сустава и контрольной группой, следовательно, полученные результаты позволяют утверждать о наличии достоверных ассоциаций полиморфного маркера A-82G гена ММР-12 с предрасположенностью к развитию посттравматического остеоартроза коленного сустава.

При оценке соответствия данных исследуемых выборок применяли критерий X²:

X²=Σ(П-Е)²/Е,

где П - показатель в исследуемой группе;

Е - данные контрольной группы.

Если вычисленный критерий не превышает табличного для уровня значимости 0.05, то данные о частоте генотипов, полученные нами, соответствуют контрольным.

Вышеприведенные примеры свидетельствуют о возможности использовать заявленный способ для выявления генетической предрасположенности человека к развитию осложнений после травматического повреждения, а именно к развитию посттравматического остеоартроза коленного сустава. Способ можно использовать при отборе для разных сфер деятельности человека с повышенной двигательной активностью (травмоопасные профессии, спорт).

Источники информации

1. Heidari В. Knee osteoarthritis prevalence, risk factors, pathogenesis and features // Caspian J. Intern. Med. - 2011. - Vol. 2, No. 2. - P. 205-12.

2. Капустина H.B., Кобракова Т.Д. Применение артрадола в восстановительном лечении больных посттравматическим остеоартрозом коленных суставов // Спортивная медицина: наука и практика. - 2013. - №3. - С. 12-15.

3. Anderson D.D., Chubinskaya S., Guilak F., Martin J.A., Oegema T.R., Olson S.A. et al. Post-traumatic osteoarthritis: improved understanding and opportunities for early intervention // J. Orthop. Res. - 2011. - Vol. 29. - P. 802-9.

4. Chapman K., Valdes A.M. Genetic factors in OA pathogenesis // Bone. - 2012. - Vol. 51. - P. 258-64.

5. Reynard L.N., Louhlin J. Genetics and epigenetics of osteoarthritis // Maturitas. - 2012. - Vol. 71, No. 3. - P. 200-4.

6. Gonzalez A. Osteoarthritis year 2013 in review: genetics and genomics // Osteoarthritis and Cartilage (2013).

7. Evangelou E., Valdes A.M., Kerkhof H.J.M. Meta-analyses of genome-wide association studies confirms a susceptibility locus for knee osteoarthritis on chromosome 7q22 // Ann. Rheum. Dis. - 2011. - Vol. 70. - P. 349-55.

8. Valdes A.M., Hart D.J., Jones K.A., Surdulescu G., Swarbrick P., Doyle D.V. et al. Association study of candidate genes for the prevalence and progression of knee osteoarthritis // Arthritis Rheum. - 2004. - Vol. 50, No. 8. - P. 2497-2507.

9. Kerna I., Kisand K., Tamm A.E., Lintrop M., Veske K., Tamm A.O. Missense single nucleotide polymorphism of the ADAM12 gene is associated with radiographic knee osteoarthritis in middle-aged Estonian cohort // Osteoarthritis and Cartilage. - 2009. - Vol. 17. - P. 1093-8.

10. Prieto-Montana J.R., Riancho J.A. Osteoarthritis as a genetic condition // Rev esp. cir. ortop. traumatol. - 2009. - Vol. 53, No. 4. - P. 271-7.

11. Smith A.J.P., Keen L.J., Billingham M.J., Perry M.J., Elson C.J., Kirwan J.R. et al. Extended haplotypes and linkage disequilibrium in the IL1R1-IL-1A-IL-1B-IL-1RN gene cluster // Genes Immun. - 2004. - Vol. 5. - P. 451-460.

12. Moxley G., Meulenbelt I., Chapman K., van Diujn С.М., Slagboom P.E., Neale M.C. et al. lnterleukin-1 region meta-analysis with osteoarthritis phenotypes // Osteoarthritis and Cartilage. - 2009. - Vol. 18. - P. 200-207.

13. Kerkhof H.J.M., Doherty M., Arden N.K., Abramson S.B., Attur M., Bos S.D. et al. Large-scale meta-analyses of interleukin-1 beta and interleukin-1 receptor antagonist polymorphisms on risk of radiographic hip and knee osteoarthritis and severity of knee osteoarthritis // Osteoarthritis and Cartilage. - 2011. - Vol. 19. - P. 265-71.

14. Valdes A.M., Spector T.D. The clinical relevance of genetic susceptibility to osteoarthritis // Best Pract. Res. Cl. Rh. - 2010. - Vol. 24. - P. 3-14.

15. Куликова K.B., Кибардин A.B., Гнучев H.B., Георгиев Г.П., Ларин С.С. Сигнальный путь Wnt и его значение для развития меланомы // СТМ. - 2012. - №3. - С. 107-112.

16. Kerkhof J.M., Uitterlinden A.G., Valdes A.M., Hart D.J., Rivadeneira F., Jhamai M. et al. Radiographic osteoarthritis at three joint sites and FRZB, LRP5 and LRP6 polymorphisms in two population-based cohorts // Osteoarthritis and Cartilage. - 2008. - Vol. 16. - P. 1141-9.

17. RU 2249210, 27.03.2005.

18. Lee Y.H., Woo J.H., Choi S.J., Ji J.D., Song G.G. Vitamin D receptor Taql, Bsml and Apal polymorphisms and osteoarthritis susceptibility: A meta-analysis // Joint Bone Spine. - 2009. - Vol. 76. - P. 156-161.

19. Stiebel M., Miller L.E., Block J.E. Post-traumatic knee osteoarthritis in the young patient: therapeutic dilemmas and emerging technologies // Open Access J. Sports Med. - 2014. - Vol. 5. - P. 73-9.

20. Valdes A.M., Doherty S.A., Muir K.R., Wheeler M., Maciewicz R.A., Zhang W. et al. The genetic contribution to severe post-traumatic osteoarthritis // Ann. Rheum. Dis. - 2013. - Vol. 72. - P. 1687-90.

21. Ганусевич И.И. Роль матриксных металлопротеиназ (ММП) при злокачественных новообразованиях. I. Характеристика ММП, регуляция их активности, прогностическое значение // Онкология. - 2010. - Т. 12, №. - С. 10-6.

22. Jormsjo S., Ye S., Moritz J., Walter D.H., Dimmeler S., Zeiher A.M. et al. Allele-specific regulation of matrix metalloproteinase-12 gene activity is associated with coronary artery luminal dimensions in diabetic patients with manifest coronary artery disease // Circ. Res. - 2000. - Vol. 86. - P. 998-1003.

23. Rodriguez D., Morrison C.J., Overall C.M. Matrix metalloproteinases: What do they not do? New substrates and biological roles identified by murine models and proteomics // Biochim Biophys Acta. - 2010. - Vol. 1803. - P. 39-54.

24. Yamana K., Bilim V., Hara N., Kasahara I., Itoi T. et al. Prognostic impact of FAS/CD95/APO-1 in urothelial cancers: decreased expression of Fas is associated with disease progression // Br. J. Cancer. - 2005. - Vol. 93. - P. 544-51.

25. Johnson M., Toms S. Mitogenic signal transduction pathways in meningiomas: novel targets for meningioma chemotherapy? // J. Neuropathol. Exp. Neurol. - 2005. - Vol. 64. - P. 1029-36.

26. Kaspiris A., Papadimitriou E., Chronopoulos E., Vasiliadis E., Khaldi L., Kouvaras I. et al. Immunolocalization of the human metalloelactase MMP-12 in the cartilage and subchondral bone in osteoarthritis // Bone. - 2012. - Vol. 50, Supple. 1. - S185.

27. Oh H., Yang S., Park M., Chun J.-S. Matrix metalloproteinase MMP-12 regulates MMP-9 expression in interleukin-1-treated articular chondrocytes // J. Cell Biochem. - 2008. - Vol. 105. - P. 1443-50.

28. Ye S. Polymorphism in matrix metalloproteinase gene promoters: implication in regulation of gene expression and susceptibility of various diseases // Matrix Biol. - 2000. - Vol. 19. - P. 623-9.

29. Shin A., Cai Q., Shu X.-O., Gao Y.-T., Zheng W. Genetic polymorphisms in the matrix metalloproteinase 12 gene (MMP12) and breast cancer risk and survival: the Shanghai Breast Cancer Study // Breast Cancer Res. - 2005. - Vol. 7, No. 4. - R506-512.

30. Van Diemen C.C., Postma D.S., Siedlinski M., Blokstra A., Smit H.A., Boezen H.M. Genetic variation in TIMP1 but not MMPs predict excess FEV₁ decline in two general population-based cohorts // Respiratory Res. - 2011. - Vol. 12:57. - P. 1-8.

31. Kader K.A., Liu J., Shao L., Dinney C.P., Lin J., Wang Y. et al. Matrix metalloproteinase polymorphisms are associated with bladder cancer invasiveness // Clin. Cancer Res. - 2007. - Vol. 13. - P. 2614-20.

32. Cornelius L.A., Nehring L.C., Harding E., Bolanowski M., Welgus H.G., Kobayashi D.K. et al. Matrix metalloproteinases generate angiostatin: effects on neovascularization // J. Immunol. - 1998. - Vol. 161. - P. 6845-52.