ПРИМЕНЕНИЕ ГЕКСАЗАМЕЩЕННЫХ ПАРА-АМИНОФЕНОЛОВ С АРИЛАМИДНЫМИ ГРУППАМИ В 2,6-ПОЛОЖЕНИЯХ ПО ОТНОШЕНИЮ К ГИДРОКСИЛУ В КАЧЕСТВЕ АНТИАРИТМИЧЕСКИХ И АНТИГИПЕРТЕНЗИВНЫХ СРЕДСТВ

Изобретение относится к медицине, в частности, к новым областям применения ароматических гексазамещенных пара-аминофенолов, обладающих гипотензивными и антиаритмическими свойствами, которые могут быть использованы в фармакологии для создания новых лекарственных препаратов, понижающих давление и восстанавливающих сердечный ритм.

Среди всех причин смертности в России и в Европе на первом месте стоит смерть от сердечно-сосудистых заболеваний / M. Nichols, N. Townsend, P. Scarborough, M. Rayner / Cardiovascular disease in Europe 2014: epidemiological update // European Heart Journal, 2014, N. 35, p. 2950-2959/. Именно по этой причине поиск веществ, понижающих давление и поддерживающих стабильный сердечный ритм, представляет важную задачу.

Известно большое количество гипотензивных препаратов различного действия, например, нитраты и нитриты, производные изохинолина (папаверин, но-шпа), замещенный имидазол (дибазол) /Машковский, М.Д. Лекарственные средства. Пособие по фармакологии для врачей - М.: Медицина, 1985. - 620 с./ и многие другие. Ежегодно появляется множество разных новых соединений нового поколения с гипотензивным эффектом и разными механизмами действия.

Существует целый ряд соединений, проявляющих антиаритмическую активность, например, новокаинамид, хинидин и другие /Машковский, М.Д. Лекарственные средства. Пособие по фармакологии для врачей - М.: Медицина, 1985. - 620 с./.

Известно применение в качестве антиаритмических средств производных гексазамещенных пара-аминофенолов со сложноэфирными группами в 2,6-положениях по отношению к гидроксилу /F. Eiden, Н.P. Leister, D. Mayer. 5-Aminoacetamido-4,6-dimethyl-2-hydroxy-isophtalic acid diethyl ester: synthesis investigation of antiarrhythmic properties. Arzneimittel-Forschung. - 1983. - №33. - S. 101-105/.

К недостаткам этих известных средств можно отнести тот факт, что они не совмещают в себе одновременно и гипотензивное, и антиаритмическое действие.

Известно, что гексазамещенные пара-аминофенолы - это соединения, проявляющие антибактериальное действие против E.coli (Escherichia coli, штамм АТСС 25822, чувствительный к антибиотикам), и S. aureus MSSA (Staphylococcus aureus, штамм 209 Р чувствительный к антибиотикам золотистый стафилококк) и Staphylococcus aureus MRSA (Метициллин - резистентный стафилококк). /Гексазамещенные пара-аминофенолы с ариламидными группами в 2,6-положениях по отношению к гидроксилу// патент РФ №2537398, опубл. Б.И. 2015. №1, авторы Комар Н.А., Перьянова О.В., Слащинин Д.Г., Товбис М.С./.

В то же время, не было известно о действии этих веществ на животных in vivo, так как они были получены недавно / Комар Н.А., Петерсон И.В., Субоч Г.А., Товбис М.С. Получение аминопроизводных перзамещенных ариламидов изофталевой кислоты и продуктов их хлорацетилирования. Журнал органической химии, 2014. - Т. 50. - Вып. 8. - С. 1218-1219/, и исследований их действия на организм животных до сих пор не было проведено.

Изобретение решает задачу расширения арсенала веществ, одновременно обладающих эффективными антигипертензивными и антиаритмическими свойствами.

Технический результат заключается в расширении арсенала веществ, одновременно обладающих эффективными антигипертензивными и антиаритмическими свойствами путем применения гексазамещенных пара-аминофенолов с ариламидными группами в 2,6-положениях по отношению к гидроксилу в качестве одновременно антиаритмических и антигипертензивных средств.

Указанный технический результат достигается применением в качестве одновременно антиаритмических и антигипертензивных средств гексазамещенных пара-аминофенолов с ариламидными группами в 2,6-положениях по отношению к гидроксилу общей формулы:

Полученные впервые авторами по патенту РФ №2537398 четыре гексазамещенных пара-аминофенола с ариламидными группами в 2,6-положениях по отношению к гидроксилу 2,6-бис(фенилкарбамоил)-3,5-диметил-4-аминофенола (1), 2,6-бис[(4-хлорфенил)карбамоил]-3,5-диметил-4-аминофенола (2), 2,6-бис [(4-бромфенил)карбамоил]-3,5-диметил-4-аминофенола (3) и 2,6-бис [(4-метилфенил)карбамоил]-3,5-диметил-4-аминофенола (4) были исследованы на антиаритмическое и антигипертензивное действие.

Из четырех новых веществ только два проявили указанные свойства. Это 2,6-бис-[(4-хлорфенил)карбамоил]-3,5-диметил-4-аминофенол и 2,6-бис-[(4-метилфенил)карбамоил]-3,5-диметил-4-аминофенол.

2,6-Бис [(4-хлорфенил)карбамоил]-3,5-диметил-4-аминофенол

Белое кристаллическое вещество с Тпл=275°C, растворимое в органических растворителях, малорастворимое в воде. ИК-спектр, ν, см^-1: 3231 (NH₂), 2942 (ОН), 1649 (C=O). УФ-спектр, λ_макс, нм (ε): 206 (32310), 258 (32710). В ЯМР ¹H-спектре (ДМСО-d₆) наблюдаются сигналы метальных групп бензольного кольца с хим. сдвигом 2,06 м.д., синглет (6Н, 2CH₃); сигналы протонов аминогруппы с хим. сдвигом 4.40 м.д., синглет (2Н, NH₂); сигналы протонов фенильных колец в области 7.38 м.д., дублет (4Н_аром, J 8.6 Гц), 7.77 м.д. дублет (4Н_аром, J 8.6 Гц); сигнал протона гидроксильной группы с хим. сдвигом 8.16 м.д., синглет (1Н, ОН); в области 10.26 м.д. присутствуют сигналы протонов двух амидных групп, синглет (2Н, NH). Спектр ЯМР ¹³C, δ, м.д.: 15.3, 119.7, 121.5, 126.9, 127.3, 128.9, 138.4, 138.8, 140.7, 167.1. Элементный анализ: Найдено, %: С 59.22; Н 4.01; N 9.25. C₂₂H₁₉Cl₂N₃O₃. Вычислено, %: С 59.46; Н 4.28; N 9.46.

2,6-Бис [(4-метилфенил)карбамоил]-3,5-диметил-4-аминофенол

Белое кристаллическое вещество с Тпл=275°C, растворимое в органических растворителях, малорастворимое в воде. ИК-спектр, ν, см^-1: 3231 (NH₂), 2992 (ОН), 1653 (С=O). УФ-спектр, λ_макс, нм (ε): 201 (8580), 250 (4390). В ЯМР ¹H-спектре (ДМСО-d₆) наблюдаются сигналы метальных групп бензольного кольца с хим. сдвигом 2,07 м.д., синглет (6Н, 2СН₃) и двух метальных групп в ариламидных заместителях 2.27, синглет (6Н, 2-СН₃), сигналы протонов аминогруппы с хим. сдвигом 4.36 м.д., синглет (2Н, NH₂); сигналы протонов фенильных колец в области 7.13 м.д., дублет (4Н_аром, J 8.6 Гц), 7.63 м.д. дублет (4Н_аром, J 8.6 Гц); сигнал протона гидроксильной группы с хим. сдвигом 8.10 м.д., синглет (1Н, ОН); в области 9,99 м.д. присутствуют сигналы протонов двух амидных групп, синглет (2Н, NH). Спектр ЯМР ¹³С, δ, м.д.: 15.3, 20.9, 119.6, 120.0, 126.8, 129.3, 132.6, 137.3, 138.2, 141.0, 166.9. Элементный анализ: Найдено, %: С 71.05; Н 6.87; N 10.92. C₂₄H₂₅N₃O₃. Вычислено, %: С 71.46; Н 6.20; N 10.42.

Получение гексазамещенных пара-аминофенолов с ариламидными группами в 2,6-положениях по отношению к гидроксилу осуществляют следующим способом.

В этиловом спирте растворяют 2,6-бис (арилкарбамоил)-3,5-диметил-4-нитрозофенол. Затем добавляют катализатор - палладий на угле, перемешивают в течение 30 минут. По истечении этого времени приливают по каплям гидразингидрат (3-6-кратный мольный избыток относительно нитрозофенола). Начало реакции можно заметить, если начали выделяться пузырьки газа. После того как весь гидразин гидрат добавили, еще 30 минут перемешивают и контролируют наличие исходного нитрозофенола с помощью тонкослойной хроматографии на пластинах Sorbfil марки ПТСХ-АФ-В (Россия). Когда исходное соединение полностью прореагировало, отфильтровывают катализатор на фильтре Шотта, а фильтрат упаривают в выпарной чашке. Конечный продукт выпадает в виде белых кристаллов. Выход 42-48%.

Пример 1

Способ получения 2,6-бис[(4-хлорфенил)карбамоил]-3,5-диметил-4-аминофенола.

В этиловом спирте растворяют 4,58 г (0,01 моль) 2,6-бис [(4-хлорфенил)карбамоил]-3,5-диметил-4-нитрозофенола. Затем добавляют 1 г палладия на угле, перемешивают в течение 30 минут. По истечении этого времени приливают по каплям 2 г (0,04 моль) гидразингидрата. После того как весь гидразингидрат добавили, еще 30 минут перемешивают и контролируют наличие исходного нитрозофенола с помощью тонкослойной хроматографии на пластинах Sorbfil марки ПТСХ-АФ-В (Россия). Когда исходное соединение полностью прореагировало, отфильтровывают катализатор на фильтре Шотта, а фильтрат упаривают в выпарной чашке. Конечный продукт выпадает в виде белых кристаллов. Выход 2,13 г (48%)

Пример 2

Способ получения 2,6-бис [(4-метилфенил)карбамоил]-3,5-диметил-4-аминофенола.

Аналогично примеру 1. В этиловом спирте растворяют 4,17 г (0,01 моль) 2,6-бис(4-метилфенилкарбамоил)-3,5-диметил-4-нитрозофенола. Затем добавляют 1 г палладия на угле, перемешивают в течение 30 минут. По истечении этого времени приливают по каплям 1,5 г (0,03 моль) гидразингидрата. Выход 1,85 г (46%).

Строение полученных 2,6-бис(арилкарбамоил)-3,5-диметил-4-аминофенолов было подтверждено методами ИК-, УФ-, ЯМР ¹H- и ЯМР ¹³С-спектроскопии и элементным анализом.

Исследования фармакологической активности всех полученных по патенту РФ №2537398 гексазамещенных пара-аминофенолов с ариламидными группами в 2,6- положениях по отношению к гидроксилу 2,6-бис(фенилкарбамоил)-3,5-диметил-4-аминофенола (1), 2,6-бис[(4-хлорфенил)карбамоил]-3,5-диметил-4-аминофенола (2), 2,6-бис [(4-бромфенил)карбамоил]-3,5-диметил-4-аминофенола (3) и 2,6-бис [(4-метилфенил)карбамоил]-3,5-диметил-4-аминофенола (4) на антигипертензивную и антиаритмическую активность были проведены в лаборатории фармакологических исследований Новосибирского института органической химии им. Н.Н. Ворожцова СО РАН.

Определение биологической активности исследуемых веществ проводили на нормотензивных, наркотизированных тиопенталом натрия (в дозе 30 мг/кг внутрибрюшинно) половозрелых крысах самцах массой 190-220 г. Животные были получены из вивария Института цитологии и генетики СО РАН, все манипуляции с ними проводили в соответствии с правилами и принципами гуманного обращения с животными. Опыты проводились в одно и то же время - с 9⁰⁰ до 12⁰⁰.

Для выполнения исследований животных разделяли на группы по 10 особей в каждой. Изучение антиаритмической активности проводили при внутривенном введении агентов в различных дозах. Аритмию вызывали путем однократного введения в бедренную вену 10% раствора CaCl₂ в дозе 250 мг/кг или адреналина гидрохлорида (АГ) в дозе 0,3 мг/кг. Данные дозы являются летальными для крыс в 100% случаях. Запись ЭКГ производили в течение 10 мин. ЭКГ регистрировали во втором стандартном отведении на приборе фирмы «LabLinc V» model v75-11. Оценивали длительность интервалов RR, PQ, QRS, QT, зубца Р; амплитуду зубцов Р, Т, R.

Определение параметров артериального давления проводили в остром эксперименте путем введения канюли в сонную артерию. Регистрацию показателей вели с помощью прибора фирмы «Coulbourn instruments» (США), а статистическую обработку данных - с помощью программы "Statistica 6.0", усредняя основные показатели систолического артериального давления. В качестве отклонения от среднего значения использовали среднюю статистическую ошибку, в качестве критерия достоверности был взят t-критерий Стьюдента.

Как показали проведенные исследования, соединение (1) - 2,6-бис(фенилкарбамоил)-3,5-диметил-4-аминофенол и соединение (3) - 2,6-бис [(4-бромфенил)карбамоил]-3,5-диметил-4-аминофенол антиаритмической и антигипертензивной активности не проявили.

Соединение (2) 2,6-бис-[(4-хлорфенил)карбамоил]-3,5-диметил-4-аминофенол проявляет эффект в дозе 0,5 мг/кг на модели адреналовой аритмии, вызывая восстановление ЭКГ у 50% животных. Кроме того, показано, что соединение в дозе 0,45 мг/кг проявляет гипотензивный эффект, снижая давление у крыс более чем на 20%.

Соединение (4) 2,6-бис-[(4-метилфенил)карбамоил]-3,5-диметил-4-аминофенол в дозе 4 мг/кг проявляет антиаритмический эффект на модели адреналовой аритмии, вызывая восстановление ЭКГ в 70% животных. Исследования влияния агента на артериальное давление крыс показало, что введение агента в дозе 0,5 мг/кг оказывает гипотензивный эффект и снижает давление более чем на 20%.

Таким образом, установлено, что соединения (2) и (4) - 2,6-бис-[(4-хлорфенил)карбамоил]-3,5-диметил-4-аминофенол и 2,6-бис-[(4-метилфенил)карбамоил]-3,5-диметил-4-аминофенол обладают одновременно антиаритмической и антигипертензивной активностью.