×
27.08.2016
216.015.5026

ЛЕКАРСТВЕННОЕ СРЕДСТВО

Вид РИД

Изобретение

Юридическая информация Свернуть Развернуть
№ охранного документа
0002595809
Дата охранного документа
27.08.2016
Краткое описание РИД Свернуть Развернуть
Аннотация: Настоящая группа изобретений относится к медицине, а именно к неврологии, и касается лечения рассеянного склероза в эксперименте. Для этого вводят лекарственное средство, представляющее собой активированные-потенцированные антитела к мозгоспецифическому белку S-100. Введение этого лекарственного средства экспериментальным животным отодвигало сроки появления признаков аутоиммунного энцефаломиелита и снижало тяжесть клинических проявлений заболевания. 2 н. и 7 з.п. ф-лы, 4 ил., 2 пр.
Реферат Свернуть Развернуть

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для эффективного лечения рассеянного склероза.

Из уровня техники известно лечение воспалительных заболеваний или аутоиммунных заболеваний, в том числе рассеянного склероза, анти-CD 40-антителами (RU 2008121899 A, 10.12.2009). Однако данное лекарственное средство при лечении рассеянного склероза может не обеспечить необходимую терапевтическую эффективность.

Изобретение направлено на создание лекарственного средства для лечения рассеянного склероза.

Решение поставленной задачи обеспечивается тем, что лекарственное средство выполнено в виде фармацевтической композиции для лечения рассеянного склероза и согласно изобретению содержит активированную-потенцированную форму антител к мозгоспецифическому белку S-100.

При этом активированную-потенцированную форму антител к мозгоспецифическому белку S-100 используют в виде активированного-потенцированного водного или водно-спиртового раствора, полученного в процессе последовательного многократного разведения в водном или водно-спиртовом растворителе и промежуточного внешнего механического воздействия - встряхивания.

Кроме того, фармацевтическая композиция может быть выполнена в твердой лекарственной форме, которая содержит эффективное количество гранул нейтрального носителя, насыщенного смесью активированной-потенцированной формой антител к мозгоспецифическому белку S-100, и фармацевтически приемлемые добавки, которые могут включать лактозу, целлюлозу микрокристаллическую и магния стеарат.

При этом водные или водно-спиртовые растворы активированных-потенцированных форм антител к мозгоспецифическому белку S-100 получены путем многократного последовательного разведения и промежуточного внешнего воздействия из матричных растворов аффинно очищенных антител к мозгоспецифическому белку S-100 с концентрацией 0,5÷5,0 мг/мл. Предпочтительно используются в виде смеси различных, преимущественно сотенных, гомеопатических разведений.

Предпочтительно фармацевтическая композиция содержит активированную-потенцированную форму антител к мозгоспецифическому белку S-100 в сверхмалой дозе, полученной разведением матричного раствора в 10012, 10030, 10050 раз, эквивалентной смеси сотенных гомеопатических разведений C12, C30 и C50.

Возможно использование смеси сотенных гомеопатических разведений C12, C30 и C200 или соответственно разведений матричного раствора в 10012, 10030, 10050 раз.

При этом активированную-потенцированную форму антител к мозгоспецифическому белку S-100 используют в виде активированного-потенцированного водного или водно-спиртового раствора, полученного в процессе последовательного многократного разведения в водном или водно-спиртовом растворителе и промежуточного внешнего механического воздействия - вертикального встряхивания.

Заявленную фармацевтическую композицию рекомендуется принимать предпочтительно по 1÷2 таблетке 2÷6 раз в день, преимущественно 2÷4 раза в день.

При лечении патологического синдрома возможно раздельное применение в виде двух отдельно приготовленных препаратов как в виде растворов, так и в твердых лекарственных формах (таблеток), каждая из которых содержит активированную-потенцированную форму сверхмалых доз аффинно очищенных антител к мозгоспецифическому белку S-100.

Предложенное лекарственное средство содержит активированные-потенцированные формы антител к мозгоспецифическому белку S-100 в фармацевтической композиции, приготовленные по гомеопатической технологии потенцирования путем многократного последовательного разведения и дополнительного промежуточного внешнего воздействия - вертикального встряхивания, которые обладают активностью в фармакологических моделях и/или клинических методах лечения рассеянного склероза, обеспечивает получение неожиданного терапевтического эффекта, экспериментально подтвержденного на адекватной модели, который заключается в существенном улучшении эффективности лечения рассеянного склероза. Кроме того, заявленная фармацевтическая композиция расширяет арсенал препаратов, предназначенных для лечения рассеянного склероза.

На Фиг.1 представлен график, на котором отображены сроки начала появления клинических симптомов заболевания; на Фиг.2 - тяжесть проявления клинических симптомов ЭАЭ; на Фиг.3 - тяжесть проявления ЭАЭ в зависимости от фазы заболевания; на Фиг.4 - частота возникновения рецидивов (возвращения симптомов ЭАЭ).

Фармацевтическую композицию приготовляют преимущественно следующим образом.

Для приготовления гомеопатически активированной-потенцированной формы действующего компонента используют моноклональные или преимущественно поликлональные антитела, которые могут быть получены по известным технологиям - методикам, описанным, например, в книге: Иммунологические методы, под ред. Г. Фримеля. М., «Медицина», 1987, с.9-33; или, например, в статье Laffly E., Sodoyer R. Hum. Antibodies. Monoclonal and recombinant antibodies, 30 years after. - 2005. - Vol.14. - N 1-2. P.33-55.

Для проведения экспериментальных исследований могут быть использованы антитела, приготовленные по заказу специализированной фармацевтической фирмой.

Моноклональные антитела получают, например, с помощью гибридомной технологии. Причем начальная стадия процесса включает иммунизацию, основанную на принципах, уже разработанных при приготовлении поликлональных антисывороток. Дальнейшие этапы работы предусматривают получение гибридных клеток, продуцирующих клоны одинаковых по специфичности антител. Их выделение в индивидуальном виде проводится теми же методами, что и в случае поликлональных антисывороток.

Поликлональные антитела могут быть получены активной иммунизацией животных. Для этого по специально разработанной схеме животным делают серию инъекций требуемым в соответствии с изобретением веществом - мозгоспецифическим белком S-100. В результате проведения такой процедуры получают моноспецифическую антисыворотку с высоким содержанием антител, которую и используют для получения активированной-потенцированной формы. При необходимости проводят очистку антител, присутствующих в антисыворотке, например, методом аффинной хроматографии, путем применения фракционирования солевым осаждением или ионообменной хроматографии.

Предпочтительным для приготовления заявленной фармацевтической композиции является использование поликлональных антител к мозгоспецифическому белоку S-100, которые могут быть получены иммунизацией кроликов следующим образом.

Для получения поликлональных антител к мозгоспецифическому белку S-100 используют мозгоспецифический белок S-100, физико-химические свойства которого описаны в статье М.В. Старостина, С.М. Свиридов. Нейроспецифический белок S-100 // Успехи современной биологии, 1977 г., т.5, с.170-178; книге М.Б. Штарк. Мозгоспецифические белки /антигены/ и функции нейрона. М., "Медицина", 1985 г., с.12-14, выделенный из ткани головного мозга быка по следующей методике:

- замороженную в жидком азоте ткань головного мозга быка растирают в порошок на специальной мельнице;

- экстракцию белков проводят в соотношении 1:3 (вес/объем) в экстрагирующем буфере при гомогенизации;

- гомогенат прогревают в течение 10 мин при 60°C и охлаждают до 4°C на ледяной бане;

- термолабильные белки удаляют центрифугированием;

- проводят ступенчатое фракционирование сульфатом аммония с последующим удалением выпадающих в осадок примесных белков;

- содержащую белок S-100 фракцию осаждают 100% насыщенным сульфатом аммония при снижении pH до 4,0 и собирают центрифугированием;

- осадок растворяют в минимальном объеме буфера, содержащего ЭДТА и меркаптоэтанол, диализируют против деионизованной воды и лиофильно высушивают;

- фракционирование кислых белков продолжают хроматографией на ионообменных носителях - ДЭАЭ целлюлозе ДЕ-52 и затем ДЭАЭ-сефадексе А-50;

- собранные и отдиализованные фракции, содержащие белок S-100, разделяют по молекулярному весу гель-фильтрацией на сефадексе G-100;

- очищенный белок S-100 диализируют и лиофильно высушивают.

Молекулярный вес очищенного мозгоспецифического белка S-100 составляет 21000 Да.

Благодаря высокому содержанию аспарагиновой и глутаминовой кислот мозгоспецифический белок S-100 является сильнокислым и занимает крайнее анодное положение при электрофорезе в прерывистой буферной системе в полиакриламидном геле, что облегчает его идентификацию.

Для получения мозгоспецифической антисыворотки к выделенному мозгоспецифическому белку S-100 готовят смесь очищенного белка S-100 (антигена) в комплексе с метилированным бычьим сывороточным альбумином в качестве носителя с полным адъювантом Фрейнда, которую вводят подкожно лабораторному животному - кролику в область спины в количестве 1-2 мл. На 8-й, 15-й день проводят повторную иммунизацию. Забор крови производят (например, из вены уха) на 26-й и 28-й день.

Полученная антисыворотка имеет титр 1:500-1:1000, образует единственную полосу преципитации с экстрактом из нервной ткани, но не реагирует с экстрактами гетерологичных органов и формирует единственный пик преципитации как с чистым белком S-100, так и с экстрактом нервной ткани, что свидетельствует о моноспецифичности полученной антисыворотки.

Полученный таким образом буферный раствор антител к мозгоспецифическому белку S-100 с концентрацией 0,5÷5,0 мг/мл, предпочтительно 2,0÷3,0 мг/мл, используют в качестве матричного (первичного) раствора для последующего приготовления активированных-потенцированных форм фармацевтической композиции.

Активированную-потенцированную форму готовят путем равномерного уменьшения концентрации в результате последовательного разведения 1 части упомянутого матричного раствора в 9 частях (для десятичного разведения), или в 99 частях (для сотенного разведения), или в 999 частях (для тысячного разведения) нейтрального растворителя с многократным вертикальным встряхиванием ("динамизацией") каждого полученного разведения и использованием отдельных емкостей для каждого последующего разведения до получения требуемой потенции - кратности разведения по гомеопатическому методу (см., например, В. Швабе. "Гомеопатические лекарственные средства". М., 1967 г., с.14-29).

Внешнюю обработку в процессе уменьшения концентрации также можно осуществлять ультразвуком, электромагнитным или иным физическим воздействием.

Например, для приготовления 12-го сотенного разведения C12 одну часть упомянутого матричного раствора антител к мозгоспецифическому белку S-100 с концентрацией 3,0 мг/мл разводят в 99 частях нейтрального водного или водно-спиртового растворителя (преимущественно 15% этилового спирта) и многократно (10 и более раз) вертикально встряхивают - потенцируют полученное 1-е сотенное C1 разведение. Из 1-го сотенного C1 разведения приготовляют 2-ое сотенное разведение C2. Данную операцию повторяют 11 раз, получая 12-е сотенное разведение C12. Таким образом, 12-е сотенное разведение C12 представляет собой раствор, полученный разбавлением последовательно в разных емкостях 12 раз 1-й части исходного матричного раствора антител к мозгоспецифическому белку S-100 с концентрацией 3,0 мг/мл в 99-ти частях нейтрального растворителя, т.е. раствор, полученный разведением матричного раствора в 10012 раз. Аналогичные операции с соответствующей кратностью разведения проводят для получения разведений C30 и C50.

При использовании в качестве действующих веществ каждого компонента смеси различных гомеопатических, преимущественно сотенных, разведений (например, C12, C30, C50) действующее вещество каждого компонентов приготовляют раздельно по описанной выше технологии до их предпоследнего разведения (соответственно до получения C11, C29, C49) и затем вносят в соответствии с составом смеси в одну емкость по одной части каждого компонента и смешивают с требуемым количеством растворителя (соответственно с 97 частями для сотенного разведения). При этом получают активированную-потенцированную форму антител к мозгоспецифическому белку S-100 в сверхмалой дозе, полученной разведением матричного раствора в 10012, 10030, 10050 раз, эквивалентной смеси сотенных гомеопатических разведений C12, C30, C50.

Возможно использование действующего вещества в виде смеси других различных гомеопатических разведений, например десятичных, и/или сотенных, и/или тысячных (C12, C30, C200; D20, C30, C100 или D20, C30, M100 и т.д.), эффективность которых определяют экспериментально.

При потенцировании вместо встряхивания в процессе уменьшения концентрации также можно осуществлять внешнее воздействие ультразвуком, электромагнитным или иным физическим воздействием.

Заявленная фармацевтическая композиция может быть использована и в твердой лекарственной форме, которая содержит эффективное количество гранул нейтрального носителя - лактозы, насыщенных путем пропитывания до насыщения смесью, приготовленных по вышеуказанной технологии, водных или водно-спиртовых растворов активированных-потенцированных форм антител к мозгоспецифическому белку S-100, и фармацевтически приемлемые добавки, включающие преимущественно лактозу, целлюлозу микрокристаллическую и магния стеарат.

Для получения твердой оральной формы заявленной фармацевтической композиции производят в установке кипящего слоя (например, типа «Hüttlin Pilotlab» производства компании Hüttlin GmbH) орошение до насыщения вводимых в псевдоожиженный - кипящий слой гранул нейтрального вещества - лактозы (молочного сахара) с размером частиц 100÷300 мкм, предварительно полученным водным или водно-спиртовым раствором активированных-потенцированных форм антител к мозгоспецифическому белку S-100 преимущественно в соотношении 1 кг раствора антител на 5 или 10 кг лактозы (1:5-1:10) с одновременной сушкой в потоке подаваемого под решетку нагретого воздуха при температуре не выше 40°C. Расчетное количество 10÷34 мас. частей высушенных гранул, насыщенных активированной-потенцированной формой антител, загружают в смеситель и смешивают с 25÷85 мас. частей от общей массы загрузки «ненасыщенной» чистой лактозы (для снижения стоимости и некоторого упрощения и ускорения технологического процесса без снижения эффективности лечебного воздействия). Затем в эту смесь добавляют стеарат магния в количестве 0,1÷1 мас. частей от общей массы загрузки и микрокристаллическую целлюлозу в количестве 3÷10 мас. частей от общей массы загрузки. Полученную таблеточную массу равномерно перемешивают и таблетируют прямым сухим прессованием (например, в таблет-прессе Korsch - XL 400) с формированием круглых таблеток массой 150÷500 мг, преимущественно массой 300 мг, пропитанных водно-спиртовым раствором (3,0-6,0 мг/табл.) активированной-потенцированной формой антител к мозгоспецифическому белку S-100 в сверхмалой дозе каждого компонента, приготовленной из матричного раствора, разведенного в 10012, в 10030 в 100200, что эквивалентно смеси сотенных гомеопатических разведений C12, C30 и C200.

Предпочтительно использовать таблетки массой 250÷300 мг, которые включают 3,0÷6,0 мг/табл. активированной-потенцированной формы водно-спиртовых разведений субстанции - действующего вещества поликлональных кроличьих антител к мозгоспецифическому белку S-100, очищенных на антигене, в сверхмалой дозе, полученной разведением матричного раствора в 10012, 10030, 10050 раз, эквивалентной смеси сотенных гомеопатических разведений C12, C30, C50.

В качестве нейтрального носителя возможно также использование глюкозы, сахарозы, мальтозы, крахмала, изомальтозы, изомальта и других моносахаридов, олигосахаридов и полисахаридов, использующихся в производстве фармацевтических препаратов, а также технологических смесей на основе последних с добавлением фармацевтически приемлемых добавок (например, изомальт, кросповидон, цикламат натрия, сахарин натрия, лимонная кислота безводная и т.д.), в том числе лубрикантов, дезинтегрантов, связующих и красителей.

Предпочтительно заявленную фармацевтическую композицию рекомендуется принимать по 1÷2 таблетке 2÷6 раз в день, предпочтительно 2÷4 раза в день.

Для проведения экспериментальных исследований были использованы антитела, приготовленные по заказу специализированной фармацевтической фирмой.

Пример 1

Исследование влияния заявленной фармацевтической композиции в виде комплексного препарата СМД АТ к ИФН-γ + СМД АТ к S100, в состав которого входят сверхмалые дозы антител к белку S100 (смесь гомеопатических разведений C12+C30+C50) и сверхмалые дозы антител к интерферону-гамма (смесь гомеопатических разведений C12+C30+C50) в соотношении 1:1, а также компонентов, входящих в его состав (сверхмалые дозы антител к белку S100 (смесь гомеопатических разведений C12+C30+C50) (СМД АТ к S100) и сверхмалые дозы антител к интерферону-гамма (смесь гомеопатических разведений C12+C30+C50) (СМД АТ к ИФН-γ)) in vitro, на связывание стандартного лиганда [3H]пентазоцина с рекомбинантным сигма-1 рецептором человека оценивали радиолигандным методом.

Сигма-1 рецептор - внутриклеточный рецептор, локализованный в клетках центральной нервной системеы, клетках большинства периферических тканей и иммунокомпетентных клетках. Этот рецептор посредством контроля гомеостаза внутриклеточного кальция регулирует внутриклеточные сигнальные каскады, приводящие к активации соответствующих транскрипционных факторов и транскрипции целого семейства генов. Сигма-1 рецептор вовлечен в патогенез различных заболеваний, в том числе инфекционных и нейродегенеративных. В связи с этим препараты, оказывающие влияние на данный рецептор и эффективность взаимодействия с ним лигандов, могут рассматриваться как эффективные лекарственные средства (фармацевтические композиции) для лечения нейроинфекционных, нейродегенеративных и других заболеваний.

В качестве контроля в данной экспериментальной модели была использована потенцированная дистиллированная вода (смесь гомеопатических разведений C12+C30+C50) - (потенцированная вода).

В процессе исследования (для измерения общего связывания) в инкубационную среду вносили 20 мкл комплексного препарата или по 10 мкл СМД АТ к S100 или СМД АТ к ИФН-γ. Таким образом, количество СМД АТ к S100 и СМД АТ к ИФН-γ, вносимых в экспериментальную лунку при тестировании комплексного препарата, было идентично количеству СМД АТ к S100 и СМД АТ к ИФН-γ, тестируемых в качестве монопрепаратов, что позволяет провести сравнение эффективности комплексного препарата с его отдельными компонентами, входящими в его состав. Потенцированную воду вносили в инкубационную среду в объеме 20 мкл и 10 мкл.

Затем вносили 160 мкл (~200 µg белка) гомогената мембран клеток линии Jurkat (линия лейкемических T-лимфоцитов человека) и в последнюю очередь 20 мкл радиолиганда, меченного тритием [3H]пентазоцин (15 нМ).

Для измерения неспецифического связывания вместо препаратов или потенцированной воды в инкубационную среду вносили 20 мкл немеченого лиганда - галоперидол (10 мкМ).

Радиоактивность измеряли на сцинтилляционном счетчике (Topcount, Packard) с использованием сцинтилляционной смеси (Microscint 0, Packard) после инкубации в течение 120 минут при температуре 22°C в 50 мМ Tris-HCl буфере (pH=7,4) и фильтрации на стекловолоконных фильтрах (GF/B, Packard). Специфическое связывание (в опыте или контроле) рассчитывали как разницу между общим (в опыте или контроле) и неспецифическим связыванием.

Результаты исследований представлены в виде процента ингибирования специфического связывания в контроле (в качестве контроля использовали потенцированную воду) (Таблица 1).

Таблица 1.
Влияние препаратов и потенцированной воды на связывание стандартного радиолиганда [3H]пентазоцина с рекомбинантным сигма 1 рецептором человека
Экспериментальная группа Количество, вносимое в экспериментальную лунку % от специфического связывания радиолиганда в контроле % ингибированя связывания радиолиганда в контроле
1-е измерение 2-е измерение Среднее значение
Комплексный препарат 20 мкл 44,2 46,2 45,2 54,8
СМД АТ к S100 10 мкл 70,9 62,9 66,9 33,1
СМД АТ к 10 мкл 158,9 149,8 154,3 -54,3
ИФН-γ
Потенцированная вода 20 мкл 98,1 75,8 86,9 13,1
Потенцированная вода 10 мкл 140,1 106,2 123,2 -23,2
Примечание:
% специфического связывания в контроле = (специфическое связывание в опыте / специфическое связывание в контроле)* 100%;
% ингибирования специфического связывания в контроле = 100% - (специфическое связывание в опыте / специфическое связывание в контроле) * 100%).

В условиях данной экспериментальной модели показано, что комплексный препарат (СМД АТ к S100 + СМД АТ к ИФН-γ) более эффективно, чем отдельные его компоненты (СМД АТ к S100) и (СМД АТ к ИФН-γ), ингибирует связывание стандартного радиолиганда [3H]пентазоцина с рекомбинантным сигма 1 рецептором человека и может быть использован как эффективное лекарственное средство для лечения нейроинфекционных, нейродегенеративных и других заболеваний, в частности для лечения рассеянного склероза.

Пример 2

Экспериментальный аллергический энцефаломиелит (ЭАЭ) является общепризнанной моделью рассеянного склероза - тяжелого аутоиммунного демиелинизирующего заболевания, поражающего людей трудоспособного возраста.

Индуцировать ЭАЭ у чувствительных животных можно гомогенатом гомологичной (Raine, Traugott, 1984) или гетерологичной (McCombe et al., 1994) мозговой ткани, очищенным миелином или белками, входящими в его состав. В настоящее время описано более 20 белков миелина (Baumann, Pham-Dinh, 2001), из которых обладают иммуногенными свойствами и наиболее часто используются для индукции ЭАЭ: основной белок миелина - ОБМ, протеолипидный протеин - ПЛП, гликопротеины: миелин ассоциированный гликопротеин - МАГ и миелин олигодендроцитарный гликопротеин - МОГ, олигодендроцитарный специфический белок - ОСБ. Выявлено, что не только целые белки, но и определенные фрагменты этих белков способны при введении животным вызывать ЭАЭ.

Заболевание типа ЭАЭ (с воспалительным процессом) можно воспроизвести на чувствительных животных белками ЦНС, не входящими в состав миелина: кальмодулином, белком S100, глиальным фибриллярным кислым белком, арестином и трансальдолазой.

Наиболее адекватной моделью РС является ЭАЭ, вызываемый введением гомогената спинного мозга. В этой модели, как и при исходном заболевании, осуществляется иммунный ответ на все компоненты миелина: индуцируется воспаление с последующей демиелинизацией, дегенерацией аксонов, а затем самих нервных клеток. Проявляется патологическая цепь событий с развитием парезов, параличей и других симптомов болезни.

Модель экспериментального аутоиммунного энцефаломиелита (ЭАЭ) у грызунов является основной моделью тестирования новых препаратов для лечения рассеянного склероза.

В НИИ экспериментальной медицины СЗО РАМН была использована модель экспериментальной аутоиммунной энцефалопатии у крыс, вызванной введением гомогената аутологичного спинного мозга в полном адъюванте Фрейнда (ПАФ).

В развитии ЭАЭ можно выделить четыре стадии:

1. Сенсибилизация T-лимфоцитов на периферии под действием мозгового антигена с ПАФ и увеличение проницаемости ГЭБ.

2. Миграция активированных T-клеток в ЦНС и активация антиген-представляющих клеток (астроцитов и микроглии) непосредственно в мозге.

Первые две стадии соответствуют латентному (индуктивному) периоду, при котором не наблюдается клинических проявлений.

3. Развитие аутоиммунных и воспалительных реакций в мозге, приводящих к демиелинизации нервных волокон (клинический период).

4. Супрессия патологических процессов и репарация поврежденных тканей (фаза выздоровления). В этот период у большинства животных неврологические и двигательные нарушения сглаживаются и наступает частичное или полное выздоровление, после которого животные резистентны к повторной индукции ЭАЭ.

Аналогичные фазы развития патологического процесса в ЦНС наблюдаются и при рассеянном склерозе.

Средняя продолжительность ЭАЭ - 30 дней: латентная стадия, клиническая стадия и стадия выздоровления. Продолжительность каждой стадии обычно 7-10 дней.

В НИИ экспериментальной медицины СЗО РАМН на модели рассеянного склероза (ЭАЭ) были проведены исследования эффективности заявленной фармацевтической композиции, содержащей активированную-потенцированную форму антител к гамма-интерферону человека, очищенных на антигене, в сверхмалой дозе, полученной сверхразведением исходного матричного раствора (концентрации 2.5 мг/мл) в 10012, 10030, 10050 раз, эквивалентной смеси сотенных гомеопатических разведений C12, C30, C50, и активированную-потенцированную форму антител к мозгоспецифическому белку S-100, очищенных на антигене, в сверхмалой дозе, полученной сверхразведением исходного матричного раствора (концентрации 2.5 мг/мл) в 10012, 10030, 10050 раз, эквивалентной смеси сотенных гомеопатических разведений C12, C30, C50 (СМД АТ к ИФН-γ + СМД АТ к S100). Для экспериментальных исследований были использованы крысы-самки линии Wistar (200-220 г), у которых индуцировали экспериментальный аутоиммунный энцефаломиелит (ЭАЭ) однократной инокуляцией энцефалитогенной смеси (ЭГС) из расчета 100 мг гомогената гомологичного спинного мозга, 0,2 мл полного адъюванта Фрейда (ПАФ) (содержание убитых микобактерий 5 мг/мл) и 0,2 мл физиологического раствора на одно животное. ЭГС вводили подкожно в основание хвоста вдоль хвостовой вены под легким эфирным наркозом в объеме 0,4 мл (по 0,2 мл справа и слева). Начиная со дня индукции ЭАЭ, вводили внутрижелудочно 2 раза в день с интервалом 7 часов в течение 30 дней (СМД АТ к ИФН-γ + СМД АТ к S100) (количество мышей n=10, в дозе 5 мл/кг/сут), препарат сравнения - активированную-потенцированную форму антител к гамма-интерферону человека, очищенных на антигене, в сверхмалой дозе, полученной сверхразведением исходного матричного раствора (концентрации 2.5 мг/мл) в 10012, 10030, 10050 раз, эквивалентной смеси сотенных гомеопатических разведений C12, C30, C50 (СМД АТ к ИФН-γ) (n=10; 2,5 мл/кг/сут), препарат сравнения - активированную-потенцированную форму антител к мозгоспецифическому белку S-100, очищенных на антигене, в сверхмалой дозе, полученной сверхразведением исходного матричного раствора (концентрации 2.5 мг/мл) в 10012, 10030, 10050 раз эквивалентной смеси сотенных гомеопатических разведений C12, C30, C50 (СМД АТ к S100) (n=10, 2,5 мл/кг/сут) и дистиллированную воду (контроль; n=10; 5 мл/кг/сут). В качестве референсного препарата использовали иммуномодулятор копаксон (Тева, Израиль), который вводили внутримышечно крысам-самкам линии Wistar (n=10) в дозе 4 мг/кг, со 2-го по 25-й день после индукции ЭАЭ. Результаты исследований представлены на Фиг.1-4.

Препарат сравнения (СМД АТ к S100) отодвигал сроки начала проявления клинических симптомов заболевания как по сравнению с отрицательным контролем (p<0,05), так и по сравнению с референсным препаратом копаксоном (p>0,05). Сроки начала заболевания (Фиг.1) в группах, получавших (СМД АТ к ИФН-γ), и в группе, получавшей копаксон, не отличались от контроля. В то же время у животных, которым вводили комплексный препарат(СМД АТ к ИФН-γ + СМД АТ к S100), наблюдали тенденцию к укорочению сроков появления клинических признаков рассеянного склероза по сравнению с контролем. Следует отметить, что были выявлены достоверные различия в сроках начала заболевания между группами (СМД АТ к S100) и (СМД АТ к ИФН-γ + СМД АТ к S100).

Доля животных с тяжелым течением заболевания (>3 баллов) (Фиг.2) также была ниже в группе (СМД АТ к S100). У животных, получавших (СМД АТ к ИФН-γ + СМД АТ к S100), процент животных с тяжелым течением был выше, чем в других исследуемых группах во все сроки заболевания.

В связи с тем, что в разные фазы развития рассеянного склероза задействованы разные механизмы патогенеза ЭАЭ, было проанализировано влияние тестируемых препаратов на тяжесть заболевания в латентный период, в фазе развития клинических признаков и в фазе выздоровления (Фиг.3). (СМД АТ к S100) достоверно способствовал снижению среднего балла проявления клинических признаков заболевания в стадии клинических проявлении и в стадии выздоровления, в то время как копаксон и (СМД АТ к ИФН-γ) достоверно снижали тяжесть поражения только в последней фазе. Комплексный препарат (СМД АТ к ИФН-γ + СМД АТ к S100) достоверно по сравнению с контролем и входящими в его состав (СМД АТ к ИФН-γ) и (СМД АТ к S100) увеличивал средний балл поражения животных на стадии появления клинических признаков заболевания и на стадии выздоровления.

Следует отметить, что у части животных после полного исчезновения клинических признаков заболевания отмечали некое подобие рецидива, то есть возвращение клинических проявлений ЭАЭ (Фиг.4). В группе (СМД АТ к S100), несмотря на его благотворное влияние на клиническое течение ЭАЭ (более поздний срок начала заболевания, меньшая тяжесть проявления клинических признаков), отмечено наибольшее число животных (25%) с рецидивом. В то же время в группе (СМД АТ к ИФН-γ + СМД АТ к S100), для которой было характерно раннее начало заболевания и большая выраженность патологического процесса, ни у одного животного не было выявлено развития рецидива.

На модели экспериментального аутоиммунного энцефаломиелита (ЭАЭ) показано благотворное влияние (СМД АТ к S100) на течение заболевания, который оттягивал сроки появления клинических признаков заболевания и снижал тяжесть поражения, при этом (СМД АТ к ИФН-γ) и препарат сравнения копаксон не оказывали влияния на течение экспериментального рассеянного склероза, поскольку сроки появления клинических признаков заболевания и тяжесть симптомов не отличались от группы контроля (дистиллированная вода). Эффект комплексного препарата (СМД АТ к ИФН-γ + СМД АТ к S100) отличался от эффекта входящих в его состав компонентов (СМД АТ к S100) и (СМД АТ к ИФН-γ), при этом применение (СМД АТ к ИФН-γ + СМД АТ к S100) приводило к усилению иммунного ответа, что выражалось в более раннем начале заболевания, увеличению доли заболевших животных и тяжести заболевания. Однако в группе (СМД АТ к ИФН-γ + СМД АТ к S100) рецидива ни у одного животного не было зафиксировано, в то время как у 25% животных группы (СМД АТ к S100) и у 15% животных группы (СМД АТ к ИФН-γ) в течение периода исследования (30 дней) был выявлен рецидив.

Таким образом, заявленная фармацевтическая композиция (СМД АТ к ИФН-γ + СМД АТ к S100) является многообещающим препаратом для лечения рассеянного склероза, который дает усиление иммунного ответа на пике развития болезни и может обеспечить более эффективную реабилитацию и предотвращение развития рецидивов заболевания.


ЛЕКАРСТВЕННОЕ СРЕДСТВО
ЛЕКАРСТВЕННОЕ СРЕДСТВО
ЛЕКАРСТВЕННОЕ СРЕДСТВО
ЛЕКАРСТВЕННОЕ СРЕДСТВО
Источник поступления информации: Роспатент

Showing 1-10 of 79 items.
10.03.2013
№216.012.2ede

Способ коррекции эндотелиальной дисфункции раствором гомеопатических разведений антител к эндотелиальной синтазе оксида азота человека

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной кардиофармакологии, и может быть использовано для коррекции индуцированной эндотелиальной дисфункции. Для этого в эксперименте крысам самцам линии Wistar в течение 28 дней индуцируют эндотелиальную дисфункцию ежедневным...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002477529
Дата охранного документа: 10.03.2013
10.03.2013
№216.012.2edf

Способ коррекции эндотелиальной дисфункции раствором гомеопатических разведений антител к интерлейкину-6

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной кардиофармакологии, и может быть использовано для коррекции индуцированной эндотелиальной дисфункции. Для этого в эксперименте крысам самцам линии Wistar в течение 28 дней индуцируют эндотелиальную дисфункцию ежедневным...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002477530
Дата охранного документа: 10.03.2013
27.03.2013
№216.012.3197

Способ коррекции эндотелиальной дисфункции раствором гомеопатических разведений антител к фактору некроза опухоли-альфа

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной кардиофармакологии, и может быть использовано для коррекции индуцированной эндотелиальной дисфункции. Для этого в эксперименте крысам-самцам линии Wistar в течение 28 дней индуцируют эндотелиальную дисфункцию ежедневным...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002478233
Дата охранного документа: 27.03.2013
20.05.2013
№216.012.4250

Способ коррекции эндотелиальной дисфункции раствором гомеопатических разведений антител к с-концевому фрагменту рецептора ангиотензина ii

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной кардиофармакологии, и может быть использовано для коррекции индуцированной эндотелиальной дисфункции. Для этого в эксперименте крысам самцам линии Wistar в течение 28 дней индуцируют эндотелиальную дисфункцию ежедневным...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002482546
Дата охранного документа: 20.05.2013
10.12.2013
№216.012.87b4

Комплексное лекарственное средство для лечения вирусных инфекций и способ лечения вирусных инфекций

Настоящая группа изобретений относится к медицине, а именно к терапии, и касается лечения вирусных инфекций. Для этого вводят комплексное лекарственное средство, включающее активированные-потенцированные антитела к гамма- интерферону человека, к CD4 рецептору и к гистамину. Введение такого...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002500422
Дата охранного документа: 10.12.2013
10.12.2013
№216.012.87b6

Лекарственное средство для коррекции эндотелиальной дисфункции

Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии, и касается коррекции эндотелиальной дисфункции. Для этого вводят лекарственное средство, содержащее активированную потенцированную форму антител к фактору роста сосудистого эндотелия (VEGF). Активность лекарственного средства обусловлена...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002500424
Дата охранного документа: 10.12.2013
10.12.2013
№216.012.87b7

Способ коррекции эндотелиальной дисфункции раствором гомеопатических разведений антител к эндотелиальной синтазе оксида азота человека в комплексе с раствором гомеопатических разведений антител к с-концевому фрагменту рецептора ангиотензина ii

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной кардиологии, и касается коррекции L-NAME-индуцированной эндотелиальной дисфункции. Для этого вводят смесь растворов гомеопатических разведений поликлональных кроличьих антител к эндотелиальной синтазе оксида азота человека - С12,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002500425
Дата охранного документа: 10.12.2013
10.12.2013
№216.012.87b8

Способ лечения инфекционных заболеваний, вызванных вирусом гриппа с типом поверхностного антигена h5n1, и лекарственное средство для лечения инфекционных заболеваний, вызванных вирусом гриппа с типом поверхностного антигена h5n1

Настоящая группа изобретений относится к медицине, а именно к терапии, и касается лечения инфекционных заболеваний, вызванных вирусом гриппа с типом поверхностного антигена H5N1. Для этого вводят лекарственное средство, включающее гомеопатически активированную потенцированную форму антител к...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002500426
Дата охранного документа: 10.12.2013
10.12.2013
№216.012.87b9

Лекарственное средство для лечения функциональных нарушений желудочно-кишечного тракта и способ лечения функциональных нарушений желудочно-кишечного тракта

Настоящая группа изобретений относится к медицине, а именно к терапии и гастроэнтерологии, и касается лечения функциональных нарушений желудочно-кишечного тракта. Для этого вводят композицию, содержащую активированные - потенцированные формы антител к гистамину, к фактору некроза опухоли -...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002500427
Дата охранного документа: 10.12.2013
27.12.2013
№216.012.8fdc

Комплексное лекарственное средство для лечения бактериальных инфекций и способ лечения бактериальных инфекций

Настоящая группа изобретений относится к медицине, а именно к терапии, и касается лечения бактериальных инфекций. Для этого вводят комплексное лекарственное средство, содержащее активированную-потенцированную форму антител к гамма-интерферону человека (ИФН-γ), активированную-потенцированную...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002502521
Дата охранного документа: 27.12.2013
Showing 1-10 of 76 items.
10.03.2013
№216.012.2ede

Способ коррекции эндотелиальной дисфункции раствором гомеопатических разведений антител к эндотелиальной синтазе оксида азота человека

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной кардиофармакологии, и может быть использовано для коррекции индуцированной эндотелиальной дисфункции. Для этого в эксперименте крысам самцам линии Wistar в течение 28 дней индуцируют эндотелиальную дисфункцию ежедневным...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002477529
Дата охранного документа: 10.03.2013
10.03.2013
№216.012.2edf

Способ коррекции эндотелиальной дисфункции раствором гомеопатических разведений антител к интерлейкину-6

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной кардиофармакологии, и может быть использовано для коррекции индуцированной эндотелиальной дисфункции. Для этого в эксперименте крысам самцам линии Wistar в течение 28 дней индуцируют эндотелиальную дисфункцию ежедневным...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002477530
Дата охранного документа: 10.03.2013
27.03.2013
№216.012.3197

Способ коррекции эндотелиальной дисфункции раствором гомеопатических разведений антител к фактору некроза опухоли-альфа

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной кардиофармакологии, и может быть использовано для коррекции индуцированной эндотелиальной дисфункции. Для этого в эксперименте крысам-самцам линии Wistar в течение 28 дней индуцируют эндотелиальную дисфункцию ежедневным...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002478233
Дата охранного документа: 27.03.2013
20.05.2013
№216.012.4250

Способ коррекции эндотелиальной дисфункции раствором гомеопатических разведений антител к с-концевому фрагменту рецептора ангиотензина ii

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной кардиофармакологии, и может быть использовано для коррекции индуцированной эндотелиальной дисфункции. Для этого в эксперименте крысам самцам линии Wistar в течение 28 дней индуцируют эндотелиальную дисфункцию ежедневным...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002482546
Дата охранного документа: 20.05.2013
10.12.2013
№216.012.87b4

Комплексное лекарственное средство для лечения вирусных инфекций и способ лечения вирусных инфекций

Настоящая группа изобретений относится к медицине, а именно к терапии, и касается лечения вирусных инфекций. Для этого вводят комплексное лекарственное средство, включающее активированные-потенцированные антитела к гамма- интерферону человека, к CD4 рецептору и к гистамину. Введение такого...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002500422
Дата охранного документа: 10.12.2013
10.12.2013
№216.012.87b6

Лекарственное средство для коррекции эндотелиальной дисфункции

Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии, и касается коррекции эндотелиальной дисфункции. Для этого вводят лекарственное средство, содержащее активированную потенцированную форму антител к фактору роста сосудистого эндотелия (VEGF). Активность лекарственного средства обусловлена...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002500424
Дата охранного документа: 10.12.2013
10.12.2013
№216.012.87b7

Способ коррекции эндотелиальной дисфункции раствором гомеопатических разведений антител к эндотелиальной синтазе оксида азота человека в комплексе с раствором гомеопатических разведений антител к с-концевому фрагменту рецептора ангиотензина ii

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной кардиологии, и касается коррекции L-NAME-индуцированной эндотелиальной дисфункции. Для этого вводят смесь растворов гомеопатических разведений поликлональных кроличьих антител к эндотелиальной синтазе оксида азота человека - С12,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002500425
Дата охранного документа: 10.12.2013
10.12.2013
№216.012.87b8

Способ лечения инфекционных заболеваний, вызванных вирусом гриппа с типом поверхностного антигена h5n1, и лекарственное средство для лечения инфекционных заболеваний, вызванных вирусом гриппа с типом поверхностного антигена h5n1

Настоящая группа изобретений относится к медицине, а именно к терапии, и касается лечения инфекционных заболеваний, вызванных вирусом гриппа с типом поверхностного антигена H5N1. Для этого вводят лекарственное средство, включающее гомеопатически активированную потенцированную форму антител к...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002500426
Дата охранного документа: 10.12.2013
10.12.2013
№216.012.87b9

Лекарственное средство для лечения функциональных нарушений желудочно-кишечного тракта и способ лечения функциональных нарушений желудочно-кишечного тракта

Настоящая группа изобретений относится к медицине, а именно к терапии и гастроэнтерологии, и касается лечения функциональных нарушений желудочно-кишечного тракта. Для этого вводят композицию, содержащую активированные - потенцированные формы антител к гистамину, к фактору некроза опухоли -...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002500427
Дата охранного документа: 10.12.2013
27.12.2013
№216.012.8fdc

Комплексное лекарственное средство для лечения бактериальных инфекций и способ лечения бактериальных инфекций

Настоящая группа изобретений относится к медицине, а именно к терапии, и касается лечения бактериальных инфекций. Для этого вводят комплексное лекарственное средство, содержащее активированную-потенцированную форму антител к гамма-интерферону человека (ИФН-γ), активированную-потенцированную...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002502521
Дата охранного документа: 27.12.2013
+ добавить свой РИД