×
10.03.2016
216.014.cc98

СПОСОБ ОЦЕНКИ ПОДАВЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ АДЕНИЛАТЦИКЛАЗЫ В МЕМБРАНАХ ЭРИТРОЦИТОВ ПРИ ОБОСТРЕНИИ ЦИТОМЕГАЛОВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ У БЕРЕМЕННЫХ НА ТРЕТЬЕМ ТРИМЕСТРЕ ГЕСТАЦИИ

Вид РИД

Изобретение

Юридическая информация Свернуть Развернуть
Краткое описание РИД Свернуть Развернуть
Аннотация: Изобретение относится к медицине и может быть использовано для оценки угрозы формирования гемической анемии у беременных на третьем триместре гестации при обострении цитомегаловирусной инфекции. Способ включает измерение в мембранах эритроцитов титра антител к цитомегаловирусу, содержания активности аденилатциклазы в эритроцитах периферической крови и АТФ. При титре антител к цитомегаловирусу 1:1600, снижении содержания в периферической крови эритроцитов с активностью аденилатциклазы до 10,0±0,2%, АТФ до 0,52±0,04 млмоль/мл и оксигемоглобина до 96,3±1,7% оценивают угрозу формирования у беременной гемической анемии. 2 ил.
Основные результаты: Способ оценки угрозы формирования гемической анемии у беременных на третьем триместре гестации при обострении цитомегаловирусной инфекции, включающий измерение в мембранах эритроцитов титра антител к цитомегаловирусу, содержания активности аденилатциклазы в эритроцитах периферической крови и АТФ, и при титре антител к цитомегаловирусу 1:1600, снижении содержания в периферической крови эритроцитов с активностью аденилатциклазы до 10,0±0,2%, АТФ до 0,52±0,04 млмоль/мл и оксигемоглобина до 96,3±1,7% оценивают угрозу формирования у беременной гемической анемии.
Реферат Свернуть Развернуть

1. Цель изобретения - разработать метод, позволяющий гистохимическим способом оценить влияние цитомегаловирусной инфекции на активность аденилатциклазы в мембранах эритроцитов, влияющей на фосфорилирование внутриклеточных белков и, в частности, на АТФ, обеспечивающую оксигенацию гемоглобина.

2. Изобретение относится к медицине, а именно разработке метода, позволяющего выявить активность аденилатциклазы в мембранах эритроцитов, влияющей на фосфорилирование белков и по содержанию АТФ в эритроцитах оценивать степень оксигенации гемоглобина.

3. Раскрытие изобретения

Центральной частью аденилатциклазной системы является фермент аденилатциклаза, который катализирует превращение АТФ в цАМФ [1, 3]. Этот фермент может стимулироваться Gs-белком и после этого связываться с цАМФ-зависимой протеинкиназой. Это приводит к ее активации и последующему фосфорилированию белков эффекторов, выполняющих разнообразные физиологические процессы в клетке [5-9]. Если речь идет об аденилатциклазе, встроенной в мембрану эритроцитов, то речь идет о фосфорилировании крайне важных структур, таких как 2,3-ДФГ и АТФ, от которых зависит основная функциональная работа эритроцитов - оксигенация гемоглобина.

4. Новая техническая задача

Уточнить влияет ли цитомегаловирусная инфекция на активность аденилатциклазы в эритроцитах периферической крови и не оказывает ли ее действие на синтез АТФ и если АТФ становится меньше, то процессы оксигенации гемоглобина будут снижаться.

5. Прототипом для оценки влияния вирусных инфекций на активность аденилатциклазы мы избрали работу Kimberg D.V., Field М. и Gershon Е. (1974) [7], которые показали, что холерный вибрион, действуя на аденилатциклазу клеток слизистой оболочки кишечника и активизируя цАМФ, вызывает большой выброс воды в просвет кишечника. Однако наши исследования свидетельствуют, что не все вирусы оказывают одинаковое влияние на аденилатциклазу, встроенную в мембрану клетки. Так, при обострении цитомегаловирусной инфекции в период беременности аденилатциклаза мембран эритроцитов подвергается угнетению и, следовательно, подавляется процесс оксигенации гемоглобина.

5.1. Аденилатциклаза, встроенная в мембрану эритроцитов, в период беременности подавляется цитомегаловирусной инфекцией.

5.2. Снижается процесс фосфорилирования белков в эритроцитах, в результате чего резко уменьшается количество АТФ.

5.3. Уменьшение АТФ в эритроцитах приводит к снижению оксигенации гемоглобина, уменьшению оксигемоглобина в периферической крови, что формирует состояние гемической анемии в период беременности.

6. Осуществление изобретения

6.1. Обследованы 40 беременных 18-25 лет (срок гестации - 35-40 недель). Основную группу составили 25 беременных с ХЦМВИ в стадии обострения, контрольную - 15 беременных без этой патологии. У беременных симптоматически ЦМВИ проявлялась в виде острого респираторного заболевания, сопровождающегося ринофарингитом. Клинический диагноз (обострение ЦМВИ) устанавливался по результатам комплексного исследования периферической крови на наличие ДНК цитомегаловируса (ЦМВ), IgM или увеличение титра антител IgG в парных сыворотках (в 4 раза и более) в динамике через 10 суток, а также индекса авидности (более 65%). Исследования проводили с учетом требований Хельсинской декларации Всемирной медицинской ассоциации «Этические принципы проведения научных исследований с участием человека» с поправками 2008 г. и правилами клинической практики в РФ, утвержденными приказом Министерства РФ №266 от 19.06.2003.

6.2. Верификацию ЦМВ, определение типоспецифических антител, индекса авидности осуществляли методами ИФА на спектрофотометре «Stat-Fax-2100» с использованием тест-систем ЗАО «Вектор-Бест», ДНК ЦМВ выявляли методами ПЦР на аппарате ДТ-96 с использованием наборов НПО «ДНК-технология».

6.3. Аденилатциклазу определяли в эритроцитах периферической крови беременных на третьем триместре гестации. Кровь, взятую из вены натощак с коагулянтом в количестве 100 мкл, вносили в пробирку РИНТ, КЗ ЭДТА к 5 мл инкубационного раствора.

6.4. Инкубационный раствор готовился на основе:

а) 80 мМ Na-малеатного буфера при рН 7,4 с - 20 мл
б) добавлением глюкозы - 1,6 г
в) MgSO47H2O - 19,8 мг
г) АТФ-Na2 - 6,0 мг
д) Pb(NO3)2 - 32,0 мг

6.5. Инкубацию проводили в течение 30 мин при температуре 37°C, после чего эритроциты тщательно промывали в Na-малеатном буфере (рН 7,4) с добавлением до 4,5% глюкозы.

6.6. Эритроциты помещали в 1% раствор Na2S·9H2O на 1-3 мин при комнатной температуре, затем несколько раз промывали в малеатном буфере.

6.7. Центрифугировали и из осадка готовили мазки на центрифуге «Diffe Spin-2». Полученные мазки высушивали и изучали с помощью цифрового микроскопа, соединенного с компьютером для цитофотометрического анализа по программе «Scion» (США).

7. Содержание АТФ в эритроцитах определяли по методу Луганова И.С. и Блинова М.Н. [2].

8. Содержание оксигемоглобина в периферической крови определяли по методу Эвлина и Мэллой [4].

9. Статистический анализ и обработка данных проводилась с использованием пакета прикладных программ «Statistica 6.0». Характеристика вариационных рядов: средняя арифметическая (М), стандартная ошибка (m), коэффициент вариации 95%, доверительный интервал для средних значений М±m, где t определялось по таблице граничных значений критерия Стьюдента при доверительном уровне 95% и числе степеней свободы F=n1+n2-2. Для определения достоверности различий использовался непарный параметрический критерий Стьюдента. Принимались во внимание р<0,05; 0,01; 0,001. Для определения достоверности различий в случае негауссовых распределений непараметрические критерии Колмогорова-Смирнова и Манна-Уитни.

10. Исследования показали, что при обострении цитомегаловирусной инфекции на третьем триместре гестации до титра 1:1600 к цитомегаловирусу в эритроцитах периферической крови беременной снижается содержание эритроцитов с реакцией на аденилатциклазу - до 10,0±0,2% (контроль - 70,2±1,2%) (фигура 1, 2). В эритроцитах периферической крови снижается содержание АТФ - до 0,52±0,04 мкмоль/мл. В периферической крови содержание оксигемоглобина снижается до 96,3±1,7%.

Полученные данные свидетельствуют, что обострение цитомегаловирусной инфекции через подавление активности аденилатциклазы в мембранах эритроцитов снижает процессы фосфорилирования АТФ, что и приводит к нарушению оксигенации гемоглобина, создавая угрозу формирования гемической анемии у беременной.

На фигуре 1 изображены эритроциты периферической крови беременной после проведения гистохимической реакции на выявление аденилатциклазы в мембранах эритроцитов при обострении цитомегаловирусной инфекции с титром антител к цитомегаловирусу 1:1600. Число эритроцитов, сохраняющих реакцию на аденилатциклазу, 10,0±0,2%. Увеличение 10×100.

На фигуре 2 изображены эритроциты беременной, не болевшей на всем протяжении гестации. В мембранах эритроцитов отмечается высокая активность на реакцию к аденилатциклазе. 70,2±1,2% эритроцитов выявляют активность на аденилатциклазу в мембранах эритроцитов. Увеличение 10×100.

Литература

1. Доман Н.Г., Феденко Е.П. Биологическая роль циклического АМФ // Успехи биол. химии. 1976. Т. 17. С. 63-101.

2. Луганов И.С., Блинов М.Н. Определение дифосфоглицериновой кислоты неэнзиматическим методом и содержание 2,3-ДФГ и АТФ в эритроцитах больных хроническим лимфолейкозом // Лабораторное дело. 1975. №11. С. 625-634.

3. Мелихов В.И. Регуляция Са активности аденилатциклазы, фосфодиэстеразы и содержания цАМФ в слизистой тонкой кишки кролика при действии холерного энтеротоксина. Автореф. дисс. на степень канд. биол. наук. 1984. 140 с.

4. Покровский А.А. Биохимические методы исследования. М.: Медицина. 1969. 337 с.

5. Ткачук В.А., Балденков Г.Н. Выделение, очистка и характеристика регуляторных свойств аденилатциклазы сердца кролика. Биохимия. 1978. Т. 43. 6 С. 1097-1110.

6. Bar Н.Р., Hechter О. Adenyl cyclase and hormone action. Effeck of adenocorticotrophic hormone, glucagons and epinephrine on the plasma membrane of rat fat cells // Proc. Natl. Acad. Sci. Usa. 1969. V. 63. P. 350-356.

7. Kimberg D.V., Field M., Gershon E. Effect of prostaglandins and cholera enterotoxin on intestinal mucosal cyclic AMP accumulation // J. Clin. Invest 1974. V. 53. 5. P. 941-949.

8. Steer M.L., Atlas D., Levitzki A. Interelations between - adrenergic receptor adenilatecyclase and calcium // New Engl. J. Medic. 1975. V. 292. P. 409-414.

9. Thorns P., Capito K. Differential effects, of Ca-calmodulin on adenilatecyclase acticity in mouse and rat pancreatic islets // Biochem. Journ. 1982. V. 206. 1. P. 97-102.

Способ оценки угрозы формирования гемической анемии у беременных на третьем триместре гестации при обострении цитомегаловирусной инфекции, включающий измерение в мембранах эритроцитов титра антител к цитомегаловирусу, содержания активности аденилатциклазы в эритроцитах периферической крови и АТФ, и при титре антител к цитомегаловирусу 1:1600, снижении содержания в периферической крови эритроцитов с активностью аденилатциклазы до 10,0±0,2%, АТФ до 0,52±0,04 млмоль/мл и оксигемоглобина до 96,3±1,7% оценивают угрозу формирования у беременной гемической анемии.
СПОСОБ ОЦЕНКИ ПОДАВЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ АДЕНИЛАТЦИКЛАЗЫ В МЕМБРАНАХ ЭРИТРОЦИТОВ ПРИ ОБОСТРЕНИИ ЦИТОМЕГАЛОВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ У БЕРЕМЕННЫХ НА ТРЕТЬЕМ ТРИМЕСТРЕ ГЕСТАЦИИ
СПОСОБ ОЦЕНКИ ПОДАВЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ АДЕНИЛАТЦИКЛАЗЫ В МЕМБРАНАХ ЭРИТРОЦИТОВ ПРИ ОБОСТРЕНИИ ЦИТОМЕГАЛОВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ У БЕРЕМЕННЫХ НА ТРЕТЬЕМ ТРИМЕСТРЕ ГЕСТАЦИИ
Источник поступления информации: Роспатент

Showing 11-20 of 105 items.
20.09.2013
№216.012.6a1c

Способ определения фетоплацентарной недостаточности у беременных, перенесших в третьем триместре гестации обострение цитомегаловирусной инфекции

Изобретение относится к области медицины. Для определения фетоплацентарной недостаточности у беременных, перенесших в третьем триместре гестации обострение цитомегаловирусной инфекции, проводят измерение у беременной в момент обострения в периферической крови титра антител к цитомегаловирусу, а...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002492815
Дата охранного документа: 20.09.2013
10.10.2013
№216.012.7444

Способ оценки индуцирующего действия цитомегаловирусной инфекции на характер течения беременности в первом триместре гестации на фоне снижения в периферической крови плацентарного лактогена

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии, и может быть использовано для оценки индуцирующего действия цитомегаловирусной инфекции на характер течения беременности в первом триместре гестации. Для этого в периферической крови беременных определяют титр антител к...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002495421
Дата охранного документа: 10.10.2013
10.10.2013
№216.012.7447

Способ оценки индуцирующего действия цитомегаловирусной инфекции на характер течения беременности на фоне снижения в периферической крови α-фетопротеина

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии, и может быть использовано для оценки индуцирующего действия цитомегаловирусной инфекции на характер течения беременности на фоне снижения в периферической крови α-фетопротеина. Для этого проводят определение титра антител к...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002495424
Дата охранного документа: 10.10.2013
10.10.2013
№216.012.744c

Способ прогнозирования внутриутробного инфицирования плода при гриппе а(н3n2) у женщин во втором триместре гестации с угрозой невынашивания беременности

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству, и может быть использовано при прогнозировании развития внутриутробного инфицирования плода при гриппе A(H3N2) у женщин во втором триместре гестации с угрозой невынашивания беременности. Сущность способа: во втором триместре гестации при...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002495429
Дата охранного документа: 10.10.2013
20.11.2013
№216.012.8330

Способ оценки индуцирующего действия цитомегаловирусной инфекции на содержание метгемоглобина в эритроцитах периферической крови беременных на третьем триместре гестации

Изобретение применяют для оценки влияния цитомегаловирусной инфекции на содержание метгемоглобина в эритроцитах периферической крови беременной на третьем триместре гестации. Сущность способа: в периферической крови беременных с цитомегаловирусной инфекцией на третьем триместре гестации...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002499260
Дата охранного документа: 20.11.2013
10.12.2013
№216.012.8a0b

Способ прогнозирования внутриутробного инфицирования плода при обострении хронического обструктивного бронхита у женщин с гриппом а (h3n2) во втором триместре гестации

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству. Сущность способа: при обострении хронического обструктивного бронхита у женщин с гриппом A(H3N2) во втором триместре гестации осуществляют посредством парных сывороток крови, определяют содержание противогриппозных антител в первой...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002501021
Дата охранного документа: 10.12.2013
20.12.2013
№216.012.8e25

Способ оценки индуцирующего действия цитомегаловирусной инфекции на содержание в первом триместре гестации эстриола на фоне увеличения в периферической крови tnfα

Изобретение относится к области медицины, а именно к диагностическим методам, и может быть использовано для оценки угрозы выкидыша эмбриона у беременной. Способ характеризуется тем, что в первом триместре гестации при обострении цитомегаловирусной инфекции до титра 1:1600 в периферической крови...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002502072
Дата охранного документа: 20.12.2013
20.12.2013
№216.012.8e26

Способ оценки индуцирующего действия цитомегаловирусной инфекции на содержание в первом триместре гестации эстрадиола на фоне увеличения в периферической крови tnfα

Изобретение относится к области медицины, а именно к диагностическим методам, и описывает способ оценки угрозы выкидыша эмбриона у беременной. Способ характеризуется тем, что в первом триместре гестации при обострении цитомегаловирусной инфекции до титра 1:1600 в периферической крови беременной...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002502073
Дата охранного документа: 20.12.2013
27.12.2013
№216.012.91c2

Способ оценки нарушения трансаминирования в синцитиотрофобласте в третьем триместре беременности при обострении герпес-вирусной инфекции путем определения гистохимическим методом активности пиридоксальфосфатдегидрогеназы в синцитиотрофобласте плаценты

Изобретение относится к области медицины и касается способа оценки трансаминирования в синцитиотрофобласте. Сущность способа: гистохимическим методом определяют активность пиридоксальфосфатдегидрогеназы. Оценивают нарушение трансаминирования в синцитиотрофобласте плаценты при титре антител к...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002503007
Дата охранного документа: 27.12.2013
20.01.2014
№216.012.98a4

Способ оценки индуцирующего действия цитомегаловирусной инфекции на оксигенацию гемоглобина в третьем триместре гестации на фоне определения количества гемоглобина и 2,3 дфг в эритроцитах периферической крови

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторным методам диагностики, и может быть использовано для оценки угрозы формирования гипоксии в третьем триместре гестации. Для этого в периферической крови определяют титр антител к цитомегаловирусу, содержание в эритроцитах периферической...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002504775
Дата охранного документа: 20.01.2014
Showing 11-20 of 81 items.
10.02.2015
№216.013.2606

Способ оценки нарушения импрегнации зародыша в слизистую оболочку матки на первых неделях беременности при обострении цитомегаловирусной инфекции, подавляющей содержание прогестерона вследствие снижения активности 5β-прегнен-3,20-дион-дегидрогеназы

Изобретение относится к области медицины и описывает способ оценки нарушения импрегнации зародыша в слизистую оболочку матки на первых неделях беременности при обострении цитомегаловирусной инфекции, характеризующейся тем, что определяют титр антител к цитомегаловирусу, гистохимическим методом...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002541187
Дата охранного документа: 10.02.2015
20.02.2015
№216.013.2982

Способ диагностики респираторного дистресс-синдрома у доношенных новорожденных в первые минуты жизни

Изобретение относится к медицине, а именно к перинатологии и неонатологии, и может быть использовано при проведении диагностики респираторного дистресс-синдрома у доношенных новорожденных в первые минуты жизни. Для этого сначала получают аспират биологической жидкости из начального отдела...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002542083
Дата охранного документа: 20.02.2015
20.02.2015
№216.013.2ad9

Способ оценки действия цитомегаловирусной инфекции на подавление дыхательной активности эритроцитов беременных путем определения активности глутатионредуктазы в эритроцитах периферической крови и при нарастании в них перекисей жирный кислот

Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике, и может быть использовано для оценки угрозы формирования гипоксии у беременной при обострении цитомегаловирусной инфекции в третьем триместре гестации. Для этого в периферической крови беременных измеряют титр антител к цитомегаловирусу,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002542426
Дата охранного документа: 20.02.2015
20.02.2015
№216.013.2adc

Способ ранней диагностики вентрикуломегалии при церебральной ишемии тяжелой степени у новорожденных с внутриутробной цитомегаловирусно-герпетической инфекцией

Изобретение относится к медицине, а именно к перинатологии и неонатологии, и описывает способ ранней диагностики вентрикуломегалии при церебральной ишемии тяжелой степени у новорожденных с внутриутробной цитомегаловирусно-герпетической инфекцией. Способ осуществляют путем определения...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002542429
Дата охранного документа: 20.02.2015
10.04.2015
№216.013.38b9

Способ оценки действия цитомегаловирусной инфекции на устойчивость мембран эритроцитов новорожденных от матерей, перенесших в третьем триместре беременности обострение цитомегаловирусной инфекции

Изобретение касается способа оценки действия цитомегаловирусной инфекции на устойчивость мембран эритроцитов новорожденных от матерей, перенесших в третьем триместре беременности обострение цитомегаловирусной инфекции. Сущность способа: в периферической крови новорожденного определяют...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002546009
Дата охранного документа: 10.04.2015
10.04.2015
№216.013.38ba

Способ ранней диагностики вентрикуломегалии при церебральной ишемии средней степени тяжести у новорожденных с внутритрубной цитомегаловирусно-герпетической инфекцией

Изобретение относится к медицине, а именно к перинатологии и неонатологии. Целью предлагаемого изобретения является ранняя диагностика вентрикуломегалии при церебральной ишемии средней степени тяжести, обусловленной внутриутробной цитомегаловирусно-герпетической инфекцией у новорожденных, где...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002546010
Дата охранного документа: 10.04.2015
10.04.2015
№216.013.3ac3

Способ определения пиридоксальфосфата в эритроцитах периферической крови

Изобретение относится к области медицины, а именно к методу медицинской диагностики, и может быть использовано в лабораторно-диагностической практике для определения пиридоксальфосфата в эритроцитах периферической крови, как в норме, так и при патологических состояниях организма, в том числе...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002546531
Дата охранного документа: 10.04.2015
10.04.2015
№216.013.3ac4

Способ оценки индуцирующего действия цитомегаловирусной инфекции на третьем триместре гестации на деформирующие свойства эритроцитов периферической крови

Изобретение относится к области медицины и может найти применение для оценки действия цитомегаловирусной инфекции (ЦМВИ) на деформабельность эритроцитов в период гестации. Сущность способа: в третьем триместре гестации определяют титр антител к ЦМВИ, содержание аденозинтрифосфата, содержание...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002546532
Дата охранного документа: 10.04.2015
27.04.2015
№216.013.4608

Способ оценки нарушения оксигенации гемоглобина в эритроцитах периферической крови беременных на третьем триместре гестации при снижении глюконеогенеза на фоне обострения цитомегаловирусной инфекции

Изобретение касается способа оценки угрозы формирования гипоксии у беременных с обострением цитомегаловирусной инфекции в третьем триместре гестации. Сущность способа: в периферической крови определяют титр антител к цитомегаловирусу, гистохимическим методом определяют активность...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002549432
Дата охранного документа: 27.04.2015
10.06.2015
№216.013.5145

Способ прогнозирования затяжного течения острого ринофарингита у женщин с реактивацией хронической цитомегаловирусной инфекции во втором триместре беременности

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и отоларингологии, и касается способа прогнозирования затяжного течения острого ринофарингита при реактивации хронической цитомегаловирусной инфекции у женщин во втором триместре беременности. Сущность способа: определяют титр антител...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002552326
Дата охранного документа: 10.06.2015
+ добавить свой РИД