×
10.03.2016
216.014.cc98

СПОСОБ ОЦЕНКИ ПОДАВЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ АДЕНИЛАТЦИКЛАЗЫ В МЕМБРАНАХ ЭРИТРОЦИТОВ ПРИ ОБОСТРЕНИИ ЦИТОМЕГАЛОВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ У БЕРЕМЕННЫХ НА ТРЕТЬЕМ ТРИМЕСТРЕ ГЕСТАЦИИ

Вид РИД

Изобретение

Юридическая информация Свернуть Развернуть
Краткое описание РИД Свернуть Развернуть
Аннотация: Изобретение относится к медицине и может быть использовано для оценки угрозы формирования гемической анемии у беременных на третьем триместре гестации при обострении цитомегаловирусной инфекции. Способ включает измерение в мембранах эритроцитов титра антител к цитомегаловирусу, содержания активности аденилатциклазы в эритроцитах периферической крови и АТФ. При титре антител к цитомегаловирусу 1:1600, снижении содержания в периферической крови эритроцитов с активностью аденилатциклазы до 10,0±0,2%, АТФ до 0,52±0,04 млмоль/мл и оксигемоглобина до 96,3±1,7% оценивают угрозу формирования у беременной гемической анемии. 2 ил.
Основные результаты: Способ оценки угрозы формирования гемической анемии у беременных на третьем триместре гестации при обострении цитомегаловирусной инфекции, включающий измерение в мембранах эритроцитов титра антител к цитомегаловирусу, содержания активности аденилатциклазы в эритроцитах периферической крови и АТФ, и при титре антител к цитомегаловирусу 1:1600, снижении содержания в периферической крови эритроцитов с активностью аденилатциклазы до 10,0±0,2%, АТФ до 0,52±0,04 млмоль/мл и оксигемоглобина до 96,3±1,7% оценивают угрозу формирования у беременной гемической анемии.
Реферат Свернуть Развернуть

1. Цель изобретения - разработать метод, позволяющий гистохимическим способом оценить влияние цитомегаловирусной инфекции на активность аденилатциклазы в мембранах эритроцитов, влияющей на фосфорилирование внутриклеточных белков и, в частности, на АТФ, обеспечивающую оксигенацию гемоглобина.

2. Изобретение относится к медицине, а именно разработке метода, позволяющего выявить активность аденилатциклазы в мембранах эритроцитов, влияющей на фосфорилирование белков и по содержанию АТФ в эритроцитах оценивать степень оксигенации гемоглобина.

3. Раскрытие изобретения

Центральной частью аденилатциклазной системы является фермент аденилатциклаза, который катализирует превращение АТФ в цАМФ [1, 3]. Этот фермент может стимулироваться Gs-белком и после этого связываться с цАМФ-зависимой протеинкиназой. Это приводит к ее активации и последующему фосфорилированию белков эффекторов, выполняющих разнообразные физиологические процессы в клетке [5-9]. Если речь идет об аденилатциклазе, встроенной в мембрану эритроцитов, то речь идет о фосфорилировании крайне важных структур, таких как 2,3-ДФГ и АТФ, от которых зависит основная функциональная работа эритроцитов - оксигенация гемоглобина.

4. Новая техническая задача

Уточнить влияет ли цитомегаловирусная инфекция на активность аденилатциклазы в эритроцитах периферической крови и не оказывает ли ее действие на синтез АТФ и если АТФ становится меньше, то процессы оксигенации гемоглобина будут снижаться.

5. Прототипом для оценки влияния вирусных инфекций на активность аденилатциклазы мы избрали работу Kimberg D.V., Field М. и Gershon Е. (1974) [7], которые показали, что холерный вибрион, действуя на аденилатциклазу клеток слизистой оболочки кишечника и активизируя цАМФ, вызывает большой выброс воды в просвет кишечника. Однако наши исследования свидетельствуют, что не все вирусы оказывают одинаковое влияние на аденилатциклазу, встроенную в мембрану клетки. Так, при обострении цитомегаловирусной инфекции в период беременности аденилатциклаза мембран эритроцитов подвергается угнетению и, следовательно, подавляется процесс оксигенации гемоглобина.

5.1. Аденилатциклаза, встроенная в мембрану эритроцитов, в период беременности подавляется цитомегаловирусной инфекцией.

5.2. Снижается процесс фосфорилирования белков в эритроцитах, в результате чего резко уменьшается количество АТФ.

5.3. Уменьшение АТФ в эритроцитах приводит к снижению оксигенации гемоглобина, уменьшению оксигемоглобина в периферической крови, что формирует состояние гемической анемии в период беременности.

6. Осуществление изобретения

6.1. Обследованы 40 беременных 18-25 лет (срок гестации - 35-40 недель). Основную группу составили 25 беременных с ХЦМВИ в стадии обострения, контрольную - 15 беременных без этой патологии. У беременных симптоматически ЦМВИ проявлялась в виде острого респираторного заболевания, сопровождающегося ринофарингитом. Клинический диагноз (обострение ЦМВИ) устанавливался по результатам комплексного исследования периферической крови на наличие ДНК цитомегаловируса (ЦМВ), IgM или увеличение титра антител IgG в парных сыворотках (в 4 раза и более) в динамике через 10 суток, а также индекса авидности (более 65%). Исследования проводили с учетом требований Хельсинской декларации Всемирной медицинской ассоциации «Этические принципы проведения научных исследований с участием человека» с поправками 2008 г. и правилами клинической практики в РФ, утвержденными приказом Министерства РФ №266 от 19.06.2003.

6.2. Верификацию ЦМВ, определение типоспецифических антител, индекса авидности осуществляли методами ИФА на спектрофотометре «Stat-Fax-2100» с использованием тест-систем ЗАО «Вектор-Бест», ДНК ЦМВ выявляли методами ПЦР на аппарате ДТ-96 с использованием наборов НПО «ДНК-технология».

6.3. Аденилатциклазу определяли в эритроцитах периферической крови беременных на третьем триместре гестации. Кровь, взятую из вены натощак с коагулянтом в количестве 100 мкл, вносили в пробирку РИНТ, КЗ ЭДТА к 5 мл инкубационного раствора.

6.4. Инкубационный раствор готовился на основе:

а) 80 мМ Na-малеатного буфера при рН 7,4 с - 20 мл
б) добавлением глюкозы - 1,6 г
в) MgSO47H2O - 19,8 мг
г) АТФ-Na2 - 6,0 мг
д) Pb(NO3)2 - 32,0 мг

6.5. Инкубацию проводили в течение 30 мин при температуре 37°C, после чего эритроциты тщательно промывали в Na-малеатном буфере (рН 7,4) с добавлением до 4,5% глюкозы.

6.6. Эритроциты помещали в 1% раствор Na2S·9H2O на 1-3 мин при комнатной температуре, затем несколько раз промывали в малеатном буфере.

6.7. Центрифугировали и из осадка готовили мазки на центрифуге «Diffe Spin-2». Полученные мазки высушивали и изучали с помощью цифрового микроскопа, соединенного с компьютером для цитофотометрического анализа по программе «Scion» (США).

7. Содержание АТФ в эритроцитах определяли по методу Луганова И.С. и Блинова М.Н. [2].

8. Содержание оксигемоглобина в периферической крови определяли по методу Эвлина и Мэллой [4].

9. Статистический анализ и обработка данных проводилась с использованием пакета прикладных программ «Statistica 6.0». Характеристика вариационных рядов: средняя арифметическая (М), стандартная ошибка (m), коэффициент вариации 95%, доверительный интервал для средних значений М±m, где t определялось по таблице граничных значений критерия Стьюдента при доверительном уровне 95% и числе степеней свободы F=n1+n2-2. Для определения достоверности различий использовался непарный параметрический критерий Стьюдента. Принимались во внимание р<0,05; 0,01; 0,001. Для определения достоверности различий в случае негауссовых распределений непараметрические критерии Колмогорова-Смирнова и Манна-Уитни.

10. Исследования показали, что при обострении цитомегаловирусной инфекции на третьем триместре гестации до титра 1:1600 к цитомегаловирусу в эритроцитах периферической крови беременной снижается содержание эритроцитов с реакцией на аденилатциклазу - до 10,0±0,2% (контроль - 70,2±1,2%) (фигура 1, 2). В эритроцитах периферической крови снижается содержание АТФ - до 0,52±0,04 мкмоль/мл. В периферической крови содержание оксигемоглобина снижается до 96,3±1,7%.

Полученные данные свидетельствуют, что обострение цитомегаловирусной инфекции через подавление активности аденилатциклазы в мембранах эритроцитов снижает процессы фосфорилирования АТФ, что и приводит к нарушению оксигенации гемоглобина, создавая угрозу формирования гемической анемии у беременной.

На фигуре 1 изображены эритроциты периферической крови беременной после проведения гистохимической реакции на выявление аденилатциклазы в мембранах эритроцитов при обострении цитомегаловирусной инфекции с титром антител к цитомегаловирусу 1:1600. Число эритроцитов, сохраняющих реакцию на аденилатциклазу, 10,0±0,2%. Увеличение 10×100.

На фигуре 2 изображены эритроциты беременной, не болевшей на всем протяжении гестации. В мембранах эритроцитов отмечается высокая активность на реакцию к аденилатциклазе. 70,2±1,2% эритроцитов выявляют активность на аденилатциклазу в мембранах эритроцитов. Увеличение 10×100.

Литература

1. Доман Н.Г., Феденко Е.П. Биологическая роль циклического АМФ // Успехи биол. химии. 1976. Т. 17. С. 63-101.

2. Луганов И.С., Блинов М.Н. Определение дифосфоглицериновой кислоты неэнзиматическим методом и содержание 2,3-ДФГ и АТФ в эритроцитах больных хроническим лимфолейкозом // Лабораторное дело. 1975. №11. С. 625-634.

3. Мелихов В.И. Регуляция Са активности аденилатциклазы, фосфодиэстеразы и содержания цАМФ в слизистой тонкой кишки кролика при действии холерного энтеротоксина. Автореф. дисс. на степень канд. биол. наук. 1984. 140 с.

4. Покровский А.А. Биохимические методы исследования. М.: Медицина. 1969. 337 с.

5. Ткачук В.А., Балденков Г.Н. Выделение, очистка и характеристика регуляторных свойств аденилатциклазы сердца кролика. Биохимия. 1978. Т. 43. 6 С. 1097-1110.

6. Bar Н.Р., Hechter О. Adenyl cyclase and hormone action. Effeck of adenocorticotrophic hormone, glucagons and epinephrine on the plasma membrane of rat fat cells // Proc. Natl. Acad. Sci. Usa. 1969. V. 63. P. 350-356.

7. Kimberg D.V., Field M., Gershon E. Effect of prostaglandins and cholera enterotoxin on intestinal mucosal cyclic AMP accumulation // J. Clin. Invest 1974. V. 53. 5. P. 941-949.

8. Steer M.L., Atlas D., Levitzki A. Interelations between - adrenergic receptor adenilatecyclase and calcium // New Engl. J. Medic. 1975. V. 292. P. 409-414.

9. Thorns P., Capito K. Differential effects, of Ca-calmodulin on adenilatecyclase acticity in mouse and rat pancreatic islets // Biochem. Journ. 1982. V. 206. 1. P. 97-102.

Способ оценки угрозы формирования гемической анемии у беременных на третьем триместре гестации при обострении цитомегаловирусной инфекции, включающий измерение в мембранах эритроцитов титра антител к цитомегаловирусу, содержания активности аденилатциклазы в эритроцитах периферической крови и АТФ, и при титре антител к цитомегаловирусу 1:1600, снижении содержания в периферической крови эритроцитов с активностью аденилатциклазы до 10,0±0,2%, АТФ до 0,52±0,04 млмоль/мл и оксигемоглобина до 96,3±1,7% оценивают угрозу формирования у беременной гемической анемии.
СПОСОБ ОЦЕНКИ ПОДАВЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ АДЕНИЛАТЦИКЛАЗЫ В МЕМБРАНАХ ЭРИТРОЦИТОВ ПРИ ОБОСТРЕНИИ ЦИТОМЕГАЛОВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ У БЕРЕМЕННЫХ НА ТРЕТЬЕМ ТРИМЕСТРЕ ГЕСТАЦИИ
СПОСОБ ОЦЕНКИ ПОДАВЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ АДЕНИЛАТЦИКЛАЗЫ В МЕМБРАНАХ ЭРИТРОЦИТОВ ПРИ ОБОСТРЕНИИ ЦИТОМЕГАЛОВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ У БЕРЕМЕННЫХ НА ТРЕТЬЕМ ТРИМЕСТРЕ ГЕСТАЦИИ
Источник поступления информации: Роспатент

Showing 1-10 of 105 items.
10.01.2013
№216.012.1a09

Способ прогнозирования течения беременности, учитывая интенсивность формирования плацентарных гормонов эстриола и прогестерона, изменяющийся в связи с обострением герпес-вирусной инфекции во время гестации

Изобретение относится к области медицины, а именно к прогностическим методам, и может быть использовано для прогнозирования течения беременности при обострении во время гестации герпес-вирусной инфекции. Сущность способа: при обострении в третьем триместре герпес-вирусной инфекции (титр...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002472157
Дата охранного документа: 10.01.2013
20.04.2013
№216.012.37d2

Способ выявления влияния герпес-вирусной инфекции на активность сквалендегидрогеназы на гистологических срезах плаценты при введении в инкубационный раствор содержимого герпесных пузырьков беременной

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для выявления влияния герпес-вирусной инфекции на активность сквалендегидрогеназы у беременных. Сущность способа: на гистологических срезах плаценты при введении в инкубационный раствор содержимого герпесных пузырьков проводят...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002479843
Дата охранного документа: 20.04.2013
20.05.2013
№216.012.4217

Способ диагностики повреждающего действия nk(cd)-лимфоцитов на плаценту беременных, перенесших герпес-вирусную инфекцию, увеличивающего число ядер синцитиотрофобласта в состоянии апоптоза

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может быть использовано для определения наличия повреждений синцитиотрофобласта плаценты у беременных с герпес-вирусной инфекцией. Для этого в периферической крови беременных определяют количество NK(СD)-лимфоцитов, при...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002482489
Дата охранного документа: 20.05.2013
20.06.2013
№216.012.4dd3

Способ оценки действия герпес-вирусной инфекции на устойчивость мембран эритроцитов новорожденных от матерей, перенесших в третьем триместре беременности обострение герпес-вирусной инфекции

Изобретение относится к области медицины и может найти применение для оценки действия герпес-вирусной инфекции на устойчивость мембран эритроцитов новорожденных от матерей, перенесших в третьем триместре беременности обострение герпес-вирусной инфекции. Сущность способа: в периферической крови...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002485505
Дата охранного документа: 20.06.2013
20.06.2013
№216.012.4de2

Способ определения подавления переноса липидов с помощью липидпереносящих белков h-fabp через фетоплацентарный барьер у беременных, перенесших в третьем триместре гестации герпес-вирусную инфекцию

Изобретение относится к области медицины и применяется для определения подавления переноса липидов через фетоплацентарный барьер у беременных, перенесших в третьем триместре гестации герпес-вирусную инфекцию. Сущность способа: в гомогенате плаценты определяют липидпереносящие белки H-FABP. При...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002485520
Дата охранного документа: 20.06.2013
20.06.2013
№216.012.4de3

Способ оценки влияния герпес-вирусной инфекции беременной на проникновение повышенного количества арахидоновой кислоты в пуповинную кровь новорожденного

Настоящее изобретение относится к области медицины и описывает способ оценки влияния герпес-вирусной инфекции на проникновение арахидоновой кислоты в пуповинную кровь новорожденного от матерей, перенесших обострение герпес-вирусной инфекции в период гестации, характеризующийся тем, что в...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002485521
Дата охранного документа: 20.06.2013
20.07.2013
№216.012.57e8

Способ оценки действия герпес-вирусной инфекции на устойчивость мембран эритроцитов новорожденных от матерей, перенесших в третьем триместре беременности обострение герпес-вирусной инфекции

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу оценки устойчивости мембран эритроцитов новорожденного на фоне обострения у беременной герпес-вирусной инфекции в третьем триместре беременности. Способ осуществляется следующим образом: в периферической крови новорожденного...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002488112
Дата охранного документа: 20.07.2013
10.09.2013
№216.012.68cf

Способ прогнозирования внутриутробного инфицирования плода у женщин с гриппом а(h3n2) во втором триместре беременности при анемическом синдроме

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и перинатологии, и касается способа прогнозирования внутриутробного инфицирования плода у женщин с гриппом А(Н3N2) во втором триместре беременности при анемическом синдроме. Сущность изобретения состоит в том, что определяют содержание...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002492478
Дата охранного документа: 10.09.2013
10.09.2013
№216.012.68d9

Способ прогнозирования летального исхода у новорожденных при церебральной ишемии тяжелой степени

Изобретение относится к медицине, а именно к перинатологии и неонатологии, и может быть использовано при прогнозировании летального исхода у новорожденных при церебральной ишемии тяжелой степени. Сущность способа: в надосадочной части биологической жидкости носоглоточного аспирата исследуют...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002492488
Дата охранного документа: 10.09.2013
10.09.2013
№216.012.68da

Способ доклинической диагностики степени тяжести респираторного дистресс-синдрома при внутриутробном гриппе a(н3n2) у недоношенных новорожденных

Изобретение относится к медицине, а именно к перинатологии и неонатологии, и может быть использовано для доклинической диагностики респираторного дистресс-синдрома различной степени тяжести у недоношенных новорожденных при внутриутробном гриппе A(H3N2). Сущность способа: исследуют концентрацию...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002492489
Дата охранного документа: 10.09.2013
Showing 1-10 of 81 items.
27.08.2014
№216.012.ee55

Способ определения глутатиона в эритроцитах периферической крови

Изобретение относится к области медицины, а именно к методам медицинской диагностики, и может быть использовано в лабораторно-диагностической практике для определения глутатиона в эритроцитах периферической крови как в норме, так и при патологических состояниях организма, в том числе анемии....
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002526832
Дата охранного документа: 27.08.2014
10.11.2014
№216.013.03e1

Способ оценки угрозы самопроизвольного выкидыша при обострении цитомегаловирусной инфекции на ранних этапах гестации, приводящей к снижению содержания прогестерона в периферической крови

Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике, и может быть использовано для оценки угрозы гибели эмбриона при обострении цитомегаловирусной инфекции на ранних этапах гестации. Для этого при обострении цитомегаловирусной инфекции у беременной в периферической крови определяют титр...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002532391
Дата охранного документа: 10.11.2014
20.11.2014
№216.013.072c

Способ определения гистидина в эритроцитах периферической крови, позволяющий определять степень оксигенации гемоглобина

Изобретение касается способа выявления гистидина в эритроцитах периферической крови. Способ осуществляют путем приготовления инкубационного раствора №1, состоящего из раствора 500 мг сульфаниловой кислоты в 50 мл 1 М HCl, и раствора №2, состоящего из 125 мг NaNO в 2,5 мл дистиллированной воды....
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002533237
Дата охранного документа: 20.11.2014
10.12.2014
№216.013.0e2e

Способ оценки формирования гипоксии в третьем триместре гестации при снижении уровня рн и оксигемоглобина, вызванных обострением цитомегаловирусной инфекции

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для оценки угрозы формирования гипоксии в третьем триместре гестации. Способ включает: определение в периферической крови титра антител к цитомегаловирусу, уровня рН крови и содержания оксигемоглобина на биохимическом...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002535047
Дата охранного документа: 10.12.2014
10.12.2014
№216.013.0e36

Способ оценки нарушения оксигенации гемоглобина в эритроцитах периферической крови беременных на третьем триместре гестации при обострении цитомегаловирусной инфекции

Изобретение относится к области медицины, в частности к лабораторной диагностике, и может быть использовано для оценки угрозы формирования гипоксии у беременных с обострением цитомегаловирусной инфекции в третьем триместре гестации. Сущность способа: определяют титр антител к цитомегаловирусу,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002535055
Дата охранного документа: 10.12.2014
20.12.2014
№216.013.12cc

Способ оценки индуцирующего действия обострения цитомегаловирусной инфекции у беременной на третьем триместре гестации на содержание метгемоглобина и оксигенацию гемоглобина в периферической крови новорожденного

Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике, и может быть использовано для оценки индуцирующего действия цитомегаловирусной инфекции на содержание метгемоглобина и оксигемоглобина в эритроцитах новорожденного. Для этого в периферической крови новорожденного при обострении у...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002536235
Дата охранного документа: 20.12.2014
27.12.2014
№216.013.163f

Способ оценки нарушения микровязкости мембран эритроцитов периферической крови беременных на третьем триместре гестации, при обострении цитомегаловирусной инфекции

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для оценки устойчивости мембран эритроцитов периферической крови у беременных с цитомегаловирусной инфекцией на третьем триместре гестации. Способ характеризуется тем, что определяют титр антител к цитомегаловирусу, коэффициент...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002537119
Дата охранного документа: 27.12.2014
27.12.2014
№216.013.167c

Способ оценки ингибирующего действия цитомегаловирусной инфекции на активность карбоангидразы в эритроцитах периферической крови беременных

Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике, и может быть использовано для оценки угрозы формирования гемической гипоксии у беременных при обострении цитомегаловирусной инфекции. Для этого при обострении у беременной цитомегаловирусной инфекции в периферической крови измеряют титр...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002537180
Дата охранного документа: 27.12.2014
10.02.2015
№216.013.230c

Способ оценки нарушения оксигенации гемоглобина при снижении микровязкости мембран эритроцитов периферической крови беременных на третьем триместре гестации и обострении цитомегаловирусной инфекции

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для оценки угрозы формирования гипоксии у беременных с обострением цитомегаловирусной инфекции в третьем триместре гестации. Сущность способа: в периферической крови определяют титр антител к цитомегаловирусу, микровязкость...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002540425
Дата охранного документа: 10.02.2015
10.02.2015
№216.013.25fb

Способ оценки угрозы гибели эмбриона при обострении цитомегаловирусной инфекции на ранних этапах гестации, приводящей к снижению содержания кортизола в периферической крови

Изобретение относится к области медицины, а именно к проблеме создания новых способов диагностики угрозы гибели эмбриона при цитомегаловирусной инфекции. Выполняют измерение у беременной в момент обострения заболевания в периферической крови титра антител IgG к цитомегаловирусу и уровня...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002541176
Дата охранного документа: 10.02.2015
+ добавить свой РИД