Результат интеллектуальной деятельности: СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ СТЕАТОГЕПАТИТА

Данный способ относится к медицине, а в частности к диагностике стеатогепатита.

Стеатогепатит - воспалительные изменения на фоне жировой дистрофии печени. Жировая дистрофия печени имеет ряд равноценных синонимов: стеатоз печени, стеатогепатоз, жировой гепатоз, жирная печень.

Критерии диагноза стеатогепатита.

При микроскопическом исследовании биоптата (ткани печени), полученного с помощью чрескожной биопсии печени, можно выявить признаки баллонной дистрофии гепатоцитов, стеатонекроза и долькового воспаления (представленного внутридольковыми инфильтратами, состоящими из полиморфных лейкоцитов, лимфоцитов и мононуклеарных фагоцитов). В большинстве случаев выявляется крупнокапельный стеатоз, главным образом центрилобулярно, характеризующийся наличием крупных одиночных липидных капель в цитоплазме гепатоцитов со смещением ядра к периферии дольки («Неалкогольная жировая болезнь печени в вопросах и ответах». Мехтиев С.Н., Мехтиева О.А., Зиновьева Е.Н. СПбГМУ им. академика И.П. Павлова, учебное пособие, 2011, стр. 26). Однако существенным препятствием для широкого применения этого метода является его стоимость, дополнительные технические и профессиональные издержки.

Помимо этого у чрескожной биопсии печени имеется ряд существенных недостатков:

- это инвазивный способ;

- причиняются неудобства больному;

- имеются противопоказания для применения;

- невозможно в течение короткого промежутка времени, в связи с угрозой осложнений хирургической манипуляции, провести контроль;

В настоящее время не существует какого-либо одного лабораторного метода исследования, позволяющего достоверно подтвердить или исключить стеатогепатит.

Однако в медицине используются неинвазивные методики по комплексной оценке степени активности стеатогепатита: определение в сыворотке крови маркеров апоптоза гепатоцитов (цитокератина-18), определение концентрации провоспалительных цитокинов (интерлейкины-6, индекс туморнекротизирующий фактор, адипонектин, высокочувствительный C-реактивный белок), определение маркеров окислительного стресса (реактивные субстанции тиобарбитуровой кислоты, окисление липопротеидов низкой плотности, общий уровень пероксидов липидов) («Неалкогольная жировая болезнь печени в вопросах и ответах». Мехтиев С.Н., Мехтиева О.А., Зиновьева Е.Н. СПбГМУ им. академика И.П. Павлова, учебное пособие, 2011, стр. 29). Недостатки: определение какого-то одного маркера не может свидетельствовать о наличии именно стеатогепатита, так как изменение данных показателей возможно при других заболеваниях.

Цель данного изобретения - упрощение диагностики стеатогепатита. Ближайшим аналогом данного способа является «Способ диагностики инсулинорезистентности», изобретение №2012112724/14(019167) от 28.08.13 г. Способ позволяет выявить метаболические нарушения в организме на раннем этапе. На предметное стекло наносят каплю биологического субстрата (слюны) больного и каплю кристаллообразующего вещества /0,9% раствор хлорида натрия/.

При исследовании капли под микроскопом по наличию и количеству в кристаллограмме округлых неправильной формы кристаллов в поле зрения на фоне четких ромбовидных центров кристаллизации определяют наличие и выраженность инсулинорезистентности. При отсутствии кристаллов на всем поле зрения судят об отсутствии инсулинорезистентности.

Мы разработали способ диагностики стеатогепатита, заключающийся в следующем. На предметное стекло наносят каплю биологического субстрата (слюны) и одну каплю спиртового 3% раствора хлористой меди (CuCl₂). Препарат выдерживают 24 часа в строго горизонтальном положении при комнатной температуре (20-25°C), влажности 50-70%, вдали от прямых солнечных лучей и нагревательных приборов. Проводят микроскопию препарата на световом микроскопе «Биолам» при увеличении 7X8.

На основании распределения кристаллических элементов проводят диагностику неалкогольного стеатогепатита. Наличие стеатогепатита характеризуется появлением в микроскопическом препарате кристаллов в виде «метелок» или «пучков» с наложением аморфных темно-желтых масс (3) (Фиг. 1). Отсутствие неалкогольного стеатогепатита характеризуется наличием в микроскопическом препарате кристаллов в виде «метелок» (1) или «пучков» (2) без наложения аморфных темно-желтых масс (Фиг. 2).

Существенные признаки, характеризующие изобретение:

1) кристаллография слюны используется для выявления неалкогольного стеатогепатита;

2) применено кристаллообразующее вещество - 3% спиртовой раствор хлорида меди;

3) при наличии неалкогольного стеатогепатита в микроскопическом препарате появляются аморфные темно-желтые массы, наложенные на кристаллы в виде «метелок» или «пучков»;

4) по количеству аморфных масс можно определить выраженность неалкогольного стеатогепатита.

Признаки 2, 3, 4 являются отличительными от ближайших аналогов.

Основные преимущества, характеризующие изобретение:

- простота метода;

- дешевизна, минимальные материальные затраты;

- быстрота выполнения кристаллографического исследования (через 24 часа получен результат);

- не трудоемок;

- неинвазивен;

- не причиняет неудобства больному;

- возможность выполнять повторные исследования, проводить контроль и коррекцию лечения.

Результаты исследований.

В отделениях гепатологии, психиатрии, гастроэнтерологии Главного клинического военного госпиталя ФСБ России проведены исследования, изучены твердокристаллические структуры слюны у больных с хроническим неалкогольным стеатогепатитом, алкогольной болезнью печени и у здоровых пациентов (табл. 1). Клинический диагноз подтвержден лабораторными, инструментальными методами исследования, гистологическим исследованием ткани печени.

Изложенным способом проведено исследование у 80 пациентов, что подтверждено утвержденным начальником ГКВГ ФСБ РФ актом внедрения №436/11 от 03.10.11 г. «Способ диагностики стеатогепатита». В результате исследования была впервые проведена корреляция между выявленными структурами кристаллов: аморфными массами, наложенными на «метла», и гиперферментемией, гистологическим исследованием ткани печени; впервые выявлена связь между изменением количества аморфных масс, наложенных на «метла», в препарате и показателями гиперферментемии крови (табл. 2).

Данный способ прост в исполнении и позволяет выявить метаболические нарушения на раннем этапе. С октября 2011 г., после завершения обследования 80 больных, данный способ продолжает использоваться в гепатологическом и эндокринологическом отделениях госпиталя. За истекший период времени проведено обследование 183 пациентов.

Таким образом, предлагаемый нами способ диагностики стеатогепатита отличается от других способов тем, что к капле слюны больного добавляют каплю кристаллообразующего вещества (3% спиртовой раствор хлорида меди), выдерживают полученный препарат в течение 24 часов в горизонтальном положении при температуре 20-25°C, влажности 50-70%, вдали от прямых солнечных лучей и нагревательных приборов и исследуют под микроскопом. Наличие неалкогольного стеатогепатита определяют наличием в микроскопическом препарате аморфных темно-желтых масс (3) с наложением на кристаллы в виде «метелок» (1) или «пучков» (2) (Фиг. 1). Отсутствие неалкогольного стеатогепатита определяют наличием в микроскопическом препарате кристаллов в виде «метелок» (1) или «пучков» (2) без наложения аморфных темно-желтых масс (Фиг. 2). Способ позволяет с минимизированными материальными затратами и простотой выполнения осуществлять диагностику метаболических нарушений организма.