Результат интеллектуальной деятельности: СОСТАВ ДЛЯ КРИОКОНСЕРВАЦИИ СПЕРМАТОЗОИДОВ

Изобретение относится к медицине, а именно к андрологии, и предназначено для сохранения фертильности сперматозоидов после глубокого охлаждения.

Известен состав Спермопреп для криоконсервации сперматозоидов методом витрификации, включающий варианты растворов с использованием непосредственно Спермопрепа и Спермопрепа с криопротекторами: раствор Спермопрепа, раствор Спермопрепа с глицином, раствор Спермопрепа с глицином и глицерином, а также раствор Спермопрепа с глицином и глицерином и с добавлением или сахарозы, или раффинозы, или трехалозы (см., например, В.В. Честков, Л.А. Беккерова, Ю.В. Щепкина, Л.В. Шилейко и Л.Ф. Курило. Выбор среды для витрификации сперматозоидов человека. Андрология и генитальная хирургия, №1, 2012, с. 46-49).

Известный состав обеспечивает возможность сохранения жизнестойкости серматозоидов при размораживании после витрификации, однако ограничением для использования является необходимость высокой скорости охлаждения (более 300°С/мин), что лимитирует объем среды и выбор материала емкостей (криопробирок) для помещения эякулята.

Наиболее близким аналогом-прототипом является используемый центрами репродукции в программах вспомогательных репродуктивных технологий (ВТР) при лечении бесплодных пар состав среды для криоконсервации сперматозоидов фирмы COOK SYDNEY IVF, содержащий D-глюкозу, гентамицин, глицин, кальция лактат, магния сульфат, хлориды калия, магния и натрия, натрия гидрокарбонат, дигидрофосфат, человеческий сывороточный альбумин, сахарозу и воду, а также HEPES кислый (см., например, Д.Т. Айбятов. Современные методы подготовки эякулята для использования в программах ВТР. М., 2012, с. 69).

Известный состав для криоконсервации обеспечивает возможность сохранения фертильности значительного количества сперматозоидов после их размораживания, однако высокая себестоимость этого состава создает определенные экономические сложности для его использования.

Задачей изобретения является разработка конкурентоспособного состава на рынке сред для криоконсервации сперматозоидов.

Сущность изобретения состоит в том, что предложенный состав для криоконсервации сперматозоидов содержит смешанные с дистиллированной водой: глицерин и альбумин человека, мексидол, полиген, глутатион восстановленный, яичный желток и трис-фруктозо-цитратную смесь, при этом в состав на 100 мл дистиллированной воды введено 590-660 мг глицерина, 2-3 г яичного желтка, 0,4-0,6 мг полигена, 1-10 мг альбумина человека, 0,1-0,4 мг глутатиона восстановленного, 0,04-0,06 мкг мексидола и 4,3-11,3 г трис-фруктозо-цитратной смеси, содержащей 2,5-6,0 г трис, 0,6-1,5 г фруктозы и 1,2-3,8 г цитрата.

Техническим результатом использования изобретения является выраженный эффект сохранения подвижности значительного количества сперматозоидов при использовании предложенного состава для криоконсервации, а также существенное уменьшение себестоимости предложенного состава по сравнению с себестоимостью, например, состава среды для криоконсервации сперматозоидов фирмы COOK SYDNEY IVF.

Состав для криоконсервации сперматозоидов формируют следующим образом: в 100 мл дистиллированной воды последовательно, тщательно перемешивая, вносят 590-660 мг глицерина (химическая формула C₃H₅(OH)₃) (см., например, http://ru.wikipedia.org/wiki/%D0%93%D0%BB%D0%B8%D1%86%D0%B5%D0%B5%D1%80%D0%B8%D0%BD), 2-3 г сырого яичного желтка, 0,4-0,6 мг сухого полигена (Polygenum siccum) (см., например, http://www.vettorg.net/pharmacy/25/787/), 1-10 мг альбумина человека (Albumin Human) (см., например, http://www.vidal.ru/poisk_preparatov/albumin-human~27215.htm), 0,1-0,4 мг глутатиона восстановленного (химическая формула C₁₀H₁₇N₃O₆) (см., например, http://ru.wikipedia.org/wiki/%D0%93%D0%BB%D1%83%D1%82%D0%B0%D1%82%D0%B8%D0%BE%D0%BD), 0,04-0,06 мкг мексидола (2-этил-6-метил-3 гидроксипиридина сукцинат, химическая формула C₈H₁₁NO) (см., например, http://ru.wikipedia.org/wiki/%D0%AD%D1%82%D0%B8%D0%BB%D0%BC%D0%B5%D1%82%D0%B8%D0%BB%D0%B3%D0%B8%D0%B4%D1%80%D0%BE%D0%BA%D1%81%D0%B8%D0%BF%D0%B8%D1%80%D0%B8%D0%B4%D0%B8%D0%BD%D0%B0_%D1%81%D1%83%D0%BA%D1%86%D0%B8%D0%BD%D0%B0%D1%82), 4,3-11,3 г трис-фруктозо-цитратной смеси, содержащей 2,5-6,0 г триса (гидроксиметил-пропан-1,3-диол, химическая формула C₄H₁₁NO₃) (см., например, http://ru.wikipedia.org/wiki/%D0%A2%D1%80%D0%B8%D1%81), 0,6-1,5 г фруктозы (химическая формула C₆H₁₂O₆) (см., например, http://ru.wikipedia.org/wiki/%D0%A4%D1%80%D1%83%D0%BA%D1%82%D0%BE%D0%B7%D0%B0) и 1,2-3,8 г цитрата (лимонная кислота, химическая формула C₆H₈O₇) (см., например, http://ru.wikipedia.org/wiki/%D0%9B%D0%B8%D0%BC%D0%BE%D0%BD%D0%BD%D0%B0%D1%8F_%D0%BA%D0%B8%D1%81%D0%BB%D0%BE%D1%82%D0%B0).

После приготовления состав смешивают с эякулятом в соответствующих равных объемах и замораживают в микропробирках.

Заявляемый состав был апробирован (см. таблицу 1) в лаборатории андрологии ФГБУ «НИИ урологии» Минздрава России.

Процедура криоконсервации состояла в следующем.

Образцы эякулята от пациентов с различными нарушениями репродуктивной функции после разжижения разливали в микропробирки по 300 мкл, причем каждый образец эякулята распределяли по парам микропробирок, в которые затем вносили одинаковые с количеством эякулята объемы состава для криоконсервации - в одну заявленного состава, а в другую соответственно состава фирмы COOK SYDNEY IVF.

При проведении процедуры криоконсервации микропробирки с составами вначале в течение 5-10 мин держали над кюветой, заполненной жидким азотом в 2-3 см от уровня криоагента, после чего их помещали в сосуд Дьюара и выдерживали при температуре - 196°С.

Оттаивание производили в режиме, обратном процедуре замораживания.

В таблице 1 приведены результаты экспериментальных исследований использования заявленного состава для криоконсервации сперматозоидов и соответствующего состава фирмы COOK SYDNEY IVF.

Полученные результаты показали, что подвижность сперматозоидов после замораживания в заявленном составе для криоконсервации и размораживания по ряду показателей превосходила таковые после проведения соответствующей процедуры с использованием состава для криоконсервации фирмы COOK SYDNEY IVF.

При этом следует указать, что себестоимость заявленного состава для криоконсервации оказалась на порядок меньше себестоимости состава для криоконсервации фирмы COOK SYDNEY IVF, что подтверждает конкурентоспособность заявленного состава на рынке сред для криоконсервации.