Результат интеллектуальной деятельности: СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ РИСКА РАЗВИТИЯ ПАТОЛОГИЧЕСКИХ ИЗМЕНЕНИЙ В ТКАНЯХ ПАРОДОНТА И СЛЮННЫХ ЖЕЛЕЗАХ У ЖЕНЩИН ПРИ ЭСТРОГЕНДЕФИЦИТНЫХ СОСТОЯНИЯХ

Изобретение относится к медицине, а именно к стоматологии, и может быть использовано при лечении заболеваний пародонта.

Известен способ определения состояния слизистой оболочки полости рта и тканей пародонта, см. патент РФ №2158426, опубл. 27.10.2000 г., включающий взятие соскоба эпителиоцитов с внутренней поверхности щеки, их отмывание, приготовление мазка, его фиксации и окрашивания, подсчета среднего количества адгезированных бактериальных клеток на одном эпителиоците, определение индекса колонизации буккального эпителия (ИКБЭ) в баллах, при этом при ИКБЭ от 0 до 9 состоянию слизистой присваивают 0 баллов и оценивают как предрасположенность к воспалительным заболеваниям, при ИКБЭ от 10 до 59 - 1-2 балла - состояние как нормальное, при ИКБЭ от 60 до 89 - 3 балла - группа риска, при ИКБЭ от 90 до 119-4 балла - как компенсированное, при ИКБЭ от 120 до 159-5 баллов - как субкомпенсированное, при ИКБЭ от 160 и выше - 6-10 баллов - как декомпенсированное состояние слизистой оболочки полости рта и тканей пародонта. Способ позволяет выделить группу стоматологических пациентов с предрасположенностью к кариесу и воспалительным заболеваниям слизистой оболочки полости рта и тканей пародонта, а также группу риска по данным заболеваниям.

К недостаткам известного способа можно отнести его ограниченные возможности, заключающиеся в отсутствии возможности прогнозирования риска патологических изменений пародонта по полученным параметрам и низкой надежности полученных результатов.

Известен способ определения состояний пародонта, см. заявку на изобретение РФ №2010108964, М. кл. G01N 33/48, включающий определение количества десневой жидкости в зубодесневой бороздке зубов, при этом определяют количество десневой жидкости в зубодесневой бороздке или пародонтальном кармане в области всех имеющихся зубов, сравнивают полученные величины с выявленной закономерностью и делают вывод о тяжести и распространенности патологического процесса в целом и(или) в области того или иного зуба, после чего проводят показанные лечебные мероприятия и повторно определяют количество десневой жидкости в области имеющихся зубов, сравнивают полученные величины с исходными данными и выявленной закономерностью, после чего делают вывод о влиянии мероприятия на пародонт пациента, изменение распространенности и тяжести заболевания.

К недостаткам известного способа можно отнести невысокую надежность выводов о тяжести и распространенности патологического процесса лишь по одному из многочисленных параметров и характеристик заболевания.

Известен способ определения уровня эстрадиола в плазме крови, используемый в акушерстве и гинекологии для диагностики эндокринных заболеваний, включающий определение в плазме стероидных гормонов (эстрадиола) при использовании метода твердофазного фермент-связанного иммуно-сорбентного анализа (ИФА) с помощью вертикального фотометра Multiscan фирмы Labsystem (Финляндия) и специального набора реактивов фирмы DRG Diagnostics (Германия). Примененный метод базируется на принципе конкурентного связывания абсорбированными на дне и стенках ячеек микропланшет поликлональными антителами соответствующих гормонов сыворотки (стандартного раствора) и таковых стабильного раствора стероид-пероксидазного конъюгата с последующим определением активности, связанной с ячейками пероксидазы по окислению ее хромоген-субстрата. При этом концентрация измеряемого стероида в тестируемой пробе обратно пропорциональна фотоколориметрически измеряемой оптической плотности (Ratcliffe W.A., Carter G.D., et al. Oestradiol: assays: applications and guidelines for the provision of a clinical biochemistry service. / Ratcliffe W.A. et al. // Ann Clin Biochem. Periodontal. - 1988. - Vol. 25. - P. 466-483).

При определении плазменной концентрации Е₂ (эстрадиола) в одну из ячеек микропланшеты микропипеткой вводится аликвота сыворотки крови, а в группу других ячеек - равный объем стандартного раствора эстрадиола с концентрациями 25, 100, 250 и 500 нмоль/л стероида. Затем в каждую ячейку добавляется определенное количество тест-раствора, содержащего коньюгат эстрадиола с пероксидазой хрена. После 2 часов инкубации при комнатной температуре все ячейки микропланшет трехкратно промывают специальным раствором и высушивают фильтровальной бумагой для удаления оставшихся капель. В последующем в каждую ячейку добавляют раствор субстрата пероксидазы ТМБ-HS и через 15 минут второй инкубации реакция останавливают с помощью стоп-раствора (4М H₂SO₄), после чего быстро проводят фотоколориметрирование проб при длине волны 450±10 нм. Расчет концентрации эстрадиола в тестируемой сыворотке проводят по кривой, построенной из данных стандартных растворов, который выражается в нмоль/л.

К недостаткам известного способа можно отнести низкую чувствительность плазмы крови к снижению концентрации в ней эстрадиола и инвазивный способ диагностики.

Известен неинвазивный способ определения уровня эстрадиола в слюне пациента, основанный на методе твердофазного иммуноферментного «сэндвич»-анализа - прототип включающий забор слюны, определение концентрации в смешанной слюне эстрогенов (гормонов) (тест IBL salivaryEstradiol ELISA см. Рытикова Н.С., Смирнова М.А., Уголькова Н.В., Силина И.А. и др. Каталог БиоХимМак (обзоры по всем вопросам). - группа компаний «БИОХИММАК», 2007. - С. 147-150). В тест-системе используются антитела, иммобилизированные на дне лунок микропланшета, которые связываются со специфичными антигенными детерминантами молекулы эстрадиола. В покрытых антителами лунках инкубируются аликвоты тестируемых образцов, содержащие эстрадиол, и ферментный конъюгат. Ферментный конъюгат - это антитела к эстрадиолу, конъюгированные с пероксидазой хрена. После инкубации (2 часа) для удаления несвязанного конъюгата лунки планшета промывают. После промывки в лунки микропланшета добавляют субстрат/хромоген, что при наличии ферментного комплекса приводит к развитию желтого окрашивания, интенсивность которого обратно пропорциональна концентрации эстрадиола в тестируемом образце.

К недостаткам известного метода определения уровня эстрадиола в слюне можно отнести узконаправленное назначение полученных результатов, связанное с его применением только в гинекологической практике для диагностики и лечения гормонально обусловленных заболеваний половых органов, а также для оценки функции плаценты при осложнениях беременности.

При проведении научно-исследовательских работ, связанных с определением уровня эстрадиола в слюне пациентов, была установлена зависимость изменения уровня эстрадиола в слюне женщин при различных эстрогендефицитных состояниях, в частности при гормонально обусловленных заболеваниях половых органов и при оценке функции плаценты при осложнениях беременности.

Используя обнаруженную зависимость можно более точно и в более раннем периоде избежать осложнений, по динамике снижения эстрадиола определить патологические изменения в тканях пародонта и слюнных железах у женщин при эстрогендефицитных состояниях, что и является техническим результатом предлагаемого изобретения. Поставленный технический результат достигается сочетанием общих известных признаков, включающих забор слюны, определение концентрации в слюне эстрогенов (гормонов) и новых признаков, заключающихся в том, что операцию определения концентрации эстрогенов в смешанной слюне дополняют индексной оценкой изменения состояния органов и тканей полости рта, скоростью саливации слюны и ее вязкостью, оценивают состояние микроциркуляторного русла слизистой оболочки полости рта и тканей пародонта методом лазерной допплеровской флоуметрии_, после чего по уровню снижения концентрации эстрогенов прогнозируют риск развития патологических изменений в тканях пародонта и слюнных железах женщин при эстрогендефицитных состояниях, при этом при концентрации эстрогенов больше 10,7±1,2 пг/мл риск патологических изменений незначительный, при концентрации эстрогенов от 10,7±1,2 пг/мл до 1,95±0,4 пг/мл средний, при концентрации эстрогенов меньше 1,95±0,4 пг/мл - высокий.

Изменения индексной оценки состояния органов и тканей полости рта определяют по кровоточивости десен, интенсивности и распространенности воспалительного процесса в деснах и комплексного пародонтального индекса.

Измерение и оценку состояния микроциркуляторного русла осуществляют при нахождении пациента в спокойном состоянии, по меньшей мере, в течение 15 минут, в пяти точках: область резцового сосочка, вершина альвеолярного бугра верхней челюсти, середина слизистого бугорка в позадимолярной области, межзубной сосочек между центральным и латеральным резцами и межзубной сосочек между первым и вторым премолярами, при этом определяют показатель регуляторного влияния на тканевой кровоток в виде произведения среднеквадратичной скорости движения эритроцитов в зондируемой области (Vcp) и количества эритроцитов (Nэр):ПМ=Nэр*Vср.

Забор слюны для определения скорости саливации определяют через 90-120 минут после приема пищи в течение 5-15 минут, при этом исключают действие дополнительных раздражителей, способных повлиять на скорость ее секреции: жевание, питье, полоскание рта, чистка зубов, курение и т.п., после чего скорость саливации определяют по формуле:

где СС - скорость саливации слюны;

V - объем выделенной слюны, мл;

T_v - время сбора слюны, мин.

Вязкость смешанной слюны определяют путем калибрования стандартной микропипетки дистиллированной водой на истекание в течение 5 секунд, затем определяется объем истекания слюны за 5 секунд, при этом вязкость слюны определяют по формуле:

где V_в - объем истекшей воды, мл;

V_c - объем истекшей слюны, мл;

В_с - вязкость слюны, отн. ед.;

В_в - вязкость воды, отн. ед.

Новизной предложенного способа является проведение операции определения концентрации эстрогенов в смешанной слюне и ее дополнение индексной оценкой изменения состояния органов и тканей полости рта, скоростью саливации слюны и ее вязкостью, оценивают состояние микроциркуляторного русла слизистой оболочки полости рта и тканей пародонта методом лазерной допплеровской флоуметрии, после чего по уровню снижения концентрации эстрогенов прогнозируют риск развития патологических изменений в тканях пародонта и слюнных железах женщин при эстрогендефицитных состояниях, при этом при концентрации эстрогенов больше 10,7±1,2 пг/мл риск патологических изменений незначительный, при концентрации эстрогенов от 10,7±1,2 пг/мл до 1,95±0,4 пг/мл средний, при концентрации эстрогенов меньше 1,95±0,4 пг/мл - высокий.

Так, проведение операции определения концентрации эстрогенов в смешанной слюне и ее дополнение индексной оценкой изменения состояния органов и тканей полости рта, скоростью саливации слюны и ее вязкостью, оценка состояния микроциркуляторного русла слизистой оболочки полости рта и тканей пародонта методом лазерной допплеровской флоуметрии позволяют достаточно полно и с высокой точностью осуществлять прогноз риска развития патологических изменений в тканях пародонта и слюнных железах у женщин при эстрогендефицитных состояниях.

Признаки изменения индексной оценки состояния органов и тканей полости рта, определяемые по кровоточивости десен, интенсивности и распространенности воспалительного процесса в деснах и комплексного пародонтального индекса, измерение и оценка состояния микроциркуляторного русла при нахождении пациента в спокойном состоянии, по меньшей мере, в течение 15 минут, в пяти точках: область резцового сосочка, вершина альвеолярного бугра верхней челюсти, середина слизистого бугорка в позадимолярной области, межзубной сосочек между центральным и латеральным резцами и межзубной сосочек между первым и вторым премолярами с определением показателя регуляторного влияния на тканевой кровоток в виде произведения среднеквадратичной скорости движения эритроцитов в зондируемой области (Vcp) и количества эритроцитов (Nэр):ПМ=Nэр*Vcp, забор слюны для определения скорости саливации через 90-120 минут после приема пищи в течение 5-15 минут, при этом исключают действие дополнительных раздражителей, способных повлиять на скорость ее секреции: жевание, питье, полоскание рта, чистка зубов, курение и т.п., с определением скорости саливации по приведенной формуле, а также определение вязкости смешанной слюны, осуществляемой путем калибрования стандартной микропипетки дистиллированной водой на истекание в течение 5 секунд, затем определялся объем истекания слюны за 5 секунд и по математической формуле - являются признаками дополнительными, раскрывающими конкретное выполнение основных признаков и способствуют достижению поставленного предлагаемым изобретением технического результата.

Отслеживание изменения индексов состояния органов и тканей полости рта, включая: кровоточивость десен, интенсивность и распространенность воспалительного процесса, комплексный пародонтальный индекс, измерение объемной скорости кровотока, оценка состояния микроциркуляторного русла и скорость саливации слюны и ее вязкости, а также концентрации эстрогенов в смешанной слюне позволяют выявить риск развития патологических изменений в тканях пародонта и слюнных железах на более ранних этапах и определить пути их лечения.

Согласно проведенным патентно-информационным исследованиям сочетания известных и новых признаков предлагаемого изобретения в источниках патентной и научно-технической информации не обнаружено, что позволяет отнести признаки к обладающим новизной. Поскольку предложенное сочетание признаков не известно из существующего уровня техники и не вытекает из него явным образом, а позволяет получить более высокий и даже неожиданный результат, то предлагаемые существенные признаки и их сочетание можно считать имеющими изобретательский уровень. Описание осуществления предлагаемого способа, в том числе на конкретном примере, позволяет отнести его к промышленно выполнимым.

Предлагаемый способ осуществляется следующим образом.

В ходе обследования пациента проводят индексную оценку состояния тканей пародонта, оценивают состояния микроциркуляторного русла слизистой оболочки полости рта и тканей пародонта. Проводят забор смешанной слюны и измеряют скорость саливации слюны и ее вязкость. Затем, после оценки состояния, проводят твердофазный иммуноферментный «сэндвич»-анализ смешанной слюны для определения уровня эстрадиола.

При наличии в смешанной слюне уровня эстрадиола меньше физиологической нормы делают вывод о риске развития патологических изменений в тканях пародонта и слюнных железах.

Конкретный пример осуществления предлагаемого способа

Для определения состояния патологических изменений в тканях пародонта и слюнных железах у женщин при эстрогендефицитных состояниях были проведены сравнительные исследования, в которых индексную оценку состояния тканей пародонта, оценку состояния микроциркуляторного русла слизистой оболочки полости рта и тканей пародонта с забором смешанной слюны и измерением скорости саливации слюны и ее вязкости с последующей оценкой состояния, с проведением твердофазного иммуноферментного «сэндвич»-анализа смешанной слюны для определения уровня эстрадиола проводили как со здоровыми пациентами так и с имеющими патологические изменения

Пример 1.

Пациентка Α., 1968 г.р., направлена на консультацию на кафедру ортопедической стоматологии АГМУ врачом-гинекологом из климактерического центра с диагнозом «Климактерический синдром средней степени тяжести, гипоэстрогения».

Жалобы: на сухость в полости рта, вязкую слюну.

Пациентке проведено обследование, которое включало индексную оценку состояния тканей пародонта (Табл. 1), исследование микроциркуляторного русла слизистой оболочка рта и тканей пародонта (Табл. 2), регистрацию скорости секреции, вязкости и определение концентрации эстрогенов в смешанной слюне (Табл. 3).

Диагноз: Ксеростомия, обусловленная гипоэстрогенией, угроза развития заболеваний пародонта (уровень эстрадиола меньше 10,7±1,2 пг/мл - средний риск развития патологических изменений).

Пациентке врачом-гинекологом назначена заместительная системная гормональная терапия, врачом-стоматологом - санация полости рта и местно - спрей «Гипосаликс», стимулирующий слюноотделение. Контрольное обследование через 6 месяцев.

Через 6 месяцев обследование выявило: ухудшение значений пародонтологических индексов (Табл. 4) и гемодинамических показателей микроциркуляторного русла (Табл. 5), увеличение скорости секреции смешанной слюны, уменьшение ее вязкости на фоне стабильно сниженной концентрации эстрадиола (Табл. 6).

Заключение: для данной пациентки характерны развитие нарушений физиологических и физико-химических показателей смешанной слюны на фоне выраженной гипоэстрогении и реализовавшийся риск возникновения заболеваний пародонта. Таким образом, на фоне снижения уровня эстрадиола в смешанной слюне проведенные лечебные мероприятия системной заместительной гормональной терапии, поддерживающей необходимый уровень эстрадиола, и локальное стоматологическое лечение привели к стабилизации основных показателей смешанной слюны, но не смогли в полной мере устранить прогнозируемые патологические изменения в тканях пародонта, что проявлялось ухудшением микроциркуляции в пародонтальных тканях, усилением распространенности воспалительного процесса (индекс РМА), увеличением его интенсивности (проба Шиллера-Писарева), повышение кровоточивости десен (индекс Мюллемана-Коуэлла) и, как итог - комплексное ухудшение состояния тканей пародонта (индекс КПИ), уровень эстрадиола у пациентки меньше 10,7±1,2 пг/мл - средний риск развития патологических изменений реализовался.

Пример 2.

Пациентка Р., 1961 г.р., обратилась на кафедру ортопедической стоматологии АГМУ.

Жалобы: на периодически возникающую кровоточивость десен при чистке зубов и приеме жесткой пищи.

Анамнез: ранее у пародонтолога не наблюдалась.

Пациентке проведены клиническое обследование, которое включало индексную оценку состояния тканей пародонта (Табл. 7), исследование состояния микроциркуляторного русла слизистой оболочка рта (Табл. 8), определение скорости секреции, вязкости смешанной слюны и концентрацию в ней эстрадиола (Табл. 9), ортопантомография (для уточнения клинического диагноза).

Для уточнения клинического диагноза проведено рентгенологическое исследование (ортопантомография), которое не выявило резорбции костной ткани.

Диагноз: Хронический локализованный катаральный гингивит легкой степени тяжести в стадии обострения.

Поскольку у пациентки выявлен риск развития патологических изменений в тканях пародонта и слюнных железах (уровень эстрадиола в смешанной слюне меньше 10,7±1,2 пг/мл - средний риск развития патологических изменений), то ей предложено контрольное обследование через 6 мес.

Повторное клиническое обследование, проведенное через 6 месяцев, выявило: усиление кровоточивости десен, увеличение интенсивности и распространенности их воспаления (Табл. 10), ухудшение гемодинамических показателей микроциркуляторного русла (Табл. 11), снижение скорости секреции слюны, повышение ее вязкости и еще более низкий уровень эстрадиола в смешанной слюне (Табл. 12).

Диагноз: Хронический катаральный гингивит средней степени тяжести в стадии обострения.

Заключение: для данной пациентки прогнозируемое ухудшение состояния тканей пародонта и слюнных желез на фоне прогрессирующего снижения уровня эстрадиола в смешанной слюне (уровень эстрадиола меньше 10,7±1,2 пг/мл - средний риск развития патологических изменений) реализовалось.

Пациентке рекомендованы консультация врача-гинеколога и пародонтологическое лечение.

В настоящее время на кафедре ортопедической стоматологии АГМУ по предлагаемому способу было проведено обследование 33 пациенток, из которых у 29 при прогрессирующем снижении уровня эстрадиола в смешанной слюне выявлялось ухудшение основных клинических индексов, характеризующих пародонтальный статус, определялось снижение скорости секреции слюны на фоне повышения ее вязкости, регистрировалось ухудшение гемодинамических параметров тканевого кровотока в исследуемых областях. В итоге это приводило к появлению патологических изменений в тканях пародонта и слюнных железах у относительно здоровых пациенток, а также способствовало более выраженному проявлению изменений у пациенток с уже имеющейся патологией.

Использование предлагаемого способа позволяет точно диагностировать патологические изменения в тканях пародонта и слюнных железах у женщин при различных эстрогендефицитных состояниях, выявить эти изменения на ранней стадии при начальных клинических проявлениях.