Результат интеллектуальной деятельности: СПОСОБ ПРОФИЛАКТИКИ ВАРИАБЕЛЬНОГО ИММУНОДЕФИЦИТА, С ПРЕОБЛАДАНИЕМ НАРУШЕНИЙ ИММУНОРЕГУЛЯТОРНЫХ Т-КЛЕТОК, У ДЕТЕЙ СТАРШЕ 3 ЛЕТ, ПОТРЕБЛЯЮЩИХ ПИТЬЕВУЮ ВОДУ С ОСТАТОЧНЫМИ КОЛИЧЕСТВАМИ ПРОДУКТОВ ГИПЕРХЛОРИРОВАНИЯ

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для предупреждения развития вариабельного иммунодефицита, с преобладанием нарушений иммунорегуляторных Т-клеток (D83.1) в отношении детского населения, потребляющего питьевую воду с остаточными количествами продуктов гиперхлорирования (хлороформ, тетрахлорметан, дихлорэтан, дихлорбромметан и дибромхлорметан), с суммарным превышением, по критерию суммы отношений обнаруженных концентраций к величине предельно-допустимой концентрации (ПДК), выше 1,0 и наличием неприемлемого риска развития вариабельного иммунодефицита.

Актуальность предлагаемого способа определяется тем, что повышенный уровень продуктов гиперхлорирования в воде может явиться причиной патологии иммунной системы, причем может быть преимущественно клеточного звена иммунитета, или гуморального, или с поражением клеток моноцитарно-макрофагальной системы иммунитета. На территориях с неудовлетворительным качеством питьевой воды, содержащей остаточные количества продуктов гиперхлорирования (при оценке по критерию суммы отношений обнаруженных концентраций к величине ПДК от 1,46 до 2,53), риск развития заболеваний, в том числе с вовлечением иммунных механизмов, превышает приемлемый уровень (индекс опасности HQ=1,8). По данным Фонда обязательного медицинского страхования детей в возрасте 3-14 лет, проживающих на таких территориях, обращаемость за медицинской помощью по поводу вариабельного иммунодефицита в 4,01 раза выше среднекраевого уровня.

Из уровня техники известен ряд патентов, касающихся коррекции клеточного звена иммунитета, т.е. с преобладанием нарушений иммунорегуляторных Т-клеток.

Из авторского свидетельства СССР №1659856 известен способ коррекции клеточного звена системы иммунитета, путем предварительного (2-3 дня) введения а-токоферол-ацетата (0,5-1,0 мг/кг массы) с последующим введением иммуномодуляторов: левамизола или спленина, по обычной схеме. Положительный эффект наблюдается после 2-3 курсов лечения.

Также близок к этому известному способу коррекции и способ, описанный в авторском свидетельстве №1806775 «Способ лечения недостаточности Т-клеточного иммунитета у детей», согласно которому после однократного приема левамизола проводят через 2-2,5 ч гальванизацию области тимуса. В результате проведенного лечения у 18 часто болеющих детей с Т-клеточной недостаточностью иммунитета удалось достичь трехкратного снижения частоты ОРВИ в течение года. Благодаря использованию способа сроки лечения и курсовая доза левамизола сокращены соответственно в 4 и 8 раз, уменьшен риск побочных явлений, связанных с применением препарата.

Однако указанные известные способы являются недостаточно безопасными, т.к. сопряжены с использованием препарата левамизол, обладающего широким спектром побочных действий на органы желудочно-кишечного тракта, нервную систему и органы чувств, сердечно-сосудистую систему и кровь, способного вызывать аллергические реакции.

Также известен способ иммунокоррекции клеточного и гуморального звена иммунитета у детей при папилломавирусной инфекции кожи (Заявка на патент РФ №2011125957), при котором детям в возрасте от 3 до 7 лет и детям от 8 до 11 лет в составе комплексной терапии дополнительно вводят иммуномодулятор «Генферон Лайт» в возрастной дозировке 125 000 ME и 250 000 ME соответственно по 1 суппозиторию 2 раза в день с 12-часовым интервалом в течение 10 дней после деструкции. Его недостатком является не комфортный для детей путь введения препарата, возможны местные аллергические реакции (ощущение зуда и жжения в прямой кишке).

Также из уровня техники известен Способ профилактики и коррекции нарушений в системе иммунитета при воздействии феноксигербицидов (Заявка на патент РФ №98102592) путем перорального приема комплекса витаминов A и E, обладающих свойством коррекции функций и повышения жизнеспособности фагоцитирующих клеток. Также, как и в предлагаемом способе, речь идет о коррекции иммунодефицита при воздействии на организм человека химического токсиканта - феноксигербицида. Однако указанные в известном решении препараты не обеспечат профилактику вариабельного иммунодефицита с преобладанием нарушений иммунорегуляторных Т-клеток у детей, потребляющих питьевую воду с остаточными количествами продуктов гиперхлорирования.

При этом из уровня техники не были выявлены известные способы профилактики вариабельного иммунодефицита с преобладанием нарушений иммунорегуляторных Т-клеток у детей, возникшего из-за потребления питьевой воды с остаточными количествами продуктов гиперхлорирования, поэтому сделать выбор ближайшего аналога к заявляемому объекту не представляется возможным.

Технический результат, достигаемый предлагаемым изобретением, заключается в обеспечении эффективности предупреждения развития у детей старше 3 лет вариабельного иммунодефицита с преобладанием нарушений иммунорегуляторных Т-клеток (D83.1), связанного с остаточными количествами токсикантов - продуктов гиперхлорирования, поступающих в организм из питьевой воды, и в повышении при этом резистентности организма к указанным токсикантам.

Указанный технический результат достигается предлагаемым способом профилактики вариабельного иммунодефицита, с преобладанием нарушений иммунорегуляторных Т-клеток, у детей старше 3 лет, потребляющих питьевую воду с остаточными количествами продуктов гиперхлорирования, согласно которому осуществляют сочетанное применение курсом 2 раза в год лекарственных средств: Имунорикс перорально по 400 мг - 1 флакон, 2 раза в сутки вне приема пищи в течение 10 дней; Эслидин перорально в возрасте от 3 до 7 лет - по 1 капсуле 2 раза в сутки, старше 7 лет - по 1 капсуле 3 раза в сутки, в течение 21 дня.

Поставленный технический результат достигается за счет следующего.

Для понимания существа вопроса следует пояснить. По результатам идентификации опасности установлено, что повышенный уровень продуктов гиперхлорирования в воде может явиться причиной патологии иммунной системы. На территориях с неудовлетворительным качеством питьевой воды, содержащей остаточные количества продуктов гиперхлорирования (при оценке по критерию суммы отношений обнаруженных концентраций к величине ПДК от 1,46 до 2,53), риск развития заболеваний, в том числе с вовлечением иммунных механизмов, превышает приемлемый уровень (коэффициент опасности HQ=1,8). Среди показателей качества воды ведущее место по величине коэффициента опасности (HQ) занимает хлороформ (HQ для него до 1,28).

В процессе наших исследований были установлены причинно-следственные связи между уровнем загрязнения воды системы хозяйственно-питьевого водоснабжения хлорорганическими соединениями (хлороформ, тетрахлорметан, дихлорэтан, дихлорбромметан и дибромхлорметан) и показателями заболеваемости детей болезнями иммунной системы (доказательством этому служат данные: показатель отношения шансов OR=3,78; его 95% доверительный интервал DI=1,12-4,27).

Повышенная частота регистрации вариабельного иммунодефицита у детей в условиях несоответствия питьевой воды гигиеническим нормативам обусловлена особенностями воздействия остаточных количеств продуктов гиперхлорирования на функционирование иммунной системы. При комбинированном воздействии хлорорганических соединений в концентрациях, превышающих гигиенические нормативы до 1,5 раз, наблюдается иммуносупрессия по Т-клеточному типу, а при повышении концентраций указанных химических соединений более 1,5 раз - угнетение как клеточного, так и гуморального звеньев иммунной системы. Ранним эффектом при комбинированном действии хлороформа, тетрахлорметана, дихлорэтана, дихлорбромметана и дибромхлорметана является иммуносупрессия по Т-клеточному типу, проявляющаяся снижением содержания активированных Т-лимфоцитов (CD25⁺) и маркеров апоптоза (CD95⁺).

Помимо прямого иммунотоксического действия хлорорганических соединений, реализуются и опосредованные эффекты иммуносупрессии, связанные с формированием гепатоцеллюлярных нарушений (снижение активности глутатионпероксидазы и глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы, повышение активности глутатион-S-трансферазы, нарушение синтеза белков и незаменимых аминокислот, необходимых для синтеза иммуноглобулинов - IgG и IgA, интерферона (б, в, г), антител, витаминов).

Иммуносупрессивное действие хлорорганических соединений усугубляется нарушением работы антиоксидантных систем (снижение антиоксидантной активности сыворотки крови, повышение уровня малонового диальдегида плазмы, гидроперекисей липидов).

У детей с вариабельным иммунодефицитом, ассоциированным с употреблением питьевой воды с остаточными количествами продуктов гиперхлорирования, доказаны достоверные причинно-следственные связи нарушений иммунного ответа (снижение уровня Т-лимфоцитов, супрессия CD25⁺ и CD95⁺), дисбаланса окислительных и антиоксидантных процессов (повышение/снижение антиоксидантной активности сыворотки крови, повышение уровня малонового диальдегида плазмы, гидроперекиси липидов) и нарушения ферментативной активности клеток (снижение активности глутатионпероксидазы и глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы, повышение активности глутатион-S-трансферазы), развития синдрома цитолиза (увеличение уровня аспартатаминотрансферазы - АСАТ, и аланин-аминотрансферазы - АЛАТ), наличия ультразвуковых признаков реактивных изменений печени с повышением содержания в крови хлороформа, тетрахлорметана, дихлорэтана, дихлорбромметана и дибромхлорметана (доля дисперсии зависимой переменной составила: R²=0,16-0,48; p≤0,01-0,0001).

Благодаря сочетанному применению лекарственных средств, рекомендуемых предлагаемым способом, обеспечивается высокая эффективность профилактики вариабельного иммунодефицита с поражением, преимущественно, клеточного звена иммунитета с преобладанием нарушений иммунорегуляторных Т-клеток, у детей старше 3 лет, потребляющих питьевую воду с остаточными количествами продуктов гиперхлорирования.

«Эслидин» - комбинированный препарат, основой фармакологического действия которого являются эссенциальные фосфолипиды и метионин. Обладая взаимно потенцирующим действием, эссенциальные фосфолипиды и метионин восстанавливают целостность мембран поврежденных клеток печени, активируя их фосфолипидзависимые ферменты и нормализуя, тем самым, проницаемость мембран. Эссенциальные фосфолипиды и метионин улучшают функциональное состояние гепатоцитов и усиливают дезинтоксикационный и экскреторный потенциал клеток печени. Эслидин® - действующие вещества - липоид ППЛ-400 300 мг, метионин 100 мг - капс.; бл. 10 кор. 3 шт.; ЛСР - 001048/08 от 26.02.2008; производитель: ЗАО «МАКИ3-ФАРМА» (Россия).

«Имунорикс» (Pidotimod)) - иммуностимулирующий препарат, обладающий в условиях иммунодефицита целенаправленным действием на клеточный (прежде всего Т-лимфоцитарное звено) и гуморальный (увеличивает продукцию цитокинов) иммунитет. Его активная основа - пидотимод, усиливает активность факторов неспецифической резистентности (фагоцитоз).

Опытным путем было установлено, что только использование комплексной схемы применения вышеуказанных лекарственных препаратов обеспечивает синергизм в достижении поставленного технического результата. Использованием их по отдельности не достигается увеличение сроков ремиссии, не обеспечивается максимально возможное воздействие на клеточное звено иммунитета с преобладанием нарушений иммунорегуляторных Т-клеток.

При реализации предлагаемого способа осуществляют следующие операции в нижеуказанной последовательности:

1. производят выбор территории, имеющей повышенное содержание в воде остаточных количеств продуктов гиперхлорирования, и формирующих неприемлемый риск развития вариабельного иммунодефицита (неудовлетворительное качество питьевой воды по содержанию остаточных количеств продуктов гиперхлорирования: хлороформ, тетрахлорметан, дихлорэтан, дихлорбромметан и дибромхлорметан, с суммарным превышением по критерию суммы отношений обнаруженных концентраций к величине ПДК выше 1,0, на территории проживания детей (ребенка) или размещения учреждений дошкольного/школьного образования);

2. производят отбор детей с этой территории для проведения у них профилактических мероприятий. Модель пациента: дети в возрасте старше 3 лет, с наличием вариабельного иммунодефицита с преобладанием нарушений иммунорегуляторных Т-клеток (D83.1 - Международная классификация болезней (МКБ-10), сайт в интернете: http://www.rlsnet.ru/mkb_index_id_1990.htm) с содержанием в крови и моче продуктов гиперхлорирования (хлороформ, тетрахлорметан, дихлорэтан, дихлорбромметан и дибромхлорметан и др.) выше референсного уровня более чем в 1,5 раза. О том, что у отобранных детей имеется вариабельный иммунодефицит с поражением, преимущественно, клеточного звена иммунитета, используют следующие медико-биологические критерии, приведенные в таблице 1.

3. осуществляют клинико-лабораторное обследование указанных детей с определением: нормативных соотношений субпопуляций Т-лимфоцитов, их функциональной активности (CD8+; CD16+, CD25+, CD95+), уровня продукции лимфоцитами периферической крови гуморальных медиаторов клеточного иммунитета (цитокинов: интерферонов, интерлейкинов), баланса окислительных и антиоксидантных процессов на клеточном уровне (антиоксидантной активности крови, уровня малонового диальдегида плазмы); ферментативной активности клеток (активности глутатионпероксидазы и/или глюкозо-6-фосфатдегид-рогеназы, активности глутатион-S-трансферазы), биохимии крови (АСАТ - аспартатаминотрансфераза и АЛАТ - аланин-аминотрансфераза).

Объем исследований включает показатели, выполненные унифицированными общеклиническими, биохимическими и иммуноферментными методами, позволяющими оценить состояние и функции органов и систем с использованием диагностического оборудования:

- спектрофотометр ПЭ-5300 в (Россия, г. С-Петербург) (ОАО Экохим) (антиоксидантная активность крови, малоновый диальдегид);

- автоматический биохимический анализатор "Konelab 20" (Финляндия) (ThermoFisher), регистрационный номер ФС N 2006/2924 (аспарагиновая и аланиновая аминотрансферазы);

- анализатор иммуноферментный микропланшетный автоматический «Infinite F50», (Tecan, Австрия) №1008007750 (гидроперекиси липидов, глутатионпероксидаза, глюкозо-6-фосфатдегидрогеназа, глутатион-S-трансфераза);

- аппаратно-программный комплекс на базе газового хроматографа «Хроматэк-Кристалл-5000.2», (США), с галогенселективным детектором (детектор электронного захвата), для идентификации хлорорганических соединений в крови и моче. Регистрационный номер в Государственном реестре № ФСР 2009/04091, ТУ 9443-004-12908609-99;

- изучение маркеров клеточной дифференцировки методом проточной цитофлуориметрии с определением популяций и субпопуляций лимфоцитов (CD3+, CD4+, CD8+, CD19+, CD16+CD56+, CD25+, CD95+) на проточном цитометре "FACSCalibur" фирмы «Becton Dickinson» с использованием универсальной программы "CellQuestPrO".

- ультразвуковое сканирование печени сканером Toshiba «APLIO XG» и Toshiba «Viamo SSA-640A» с использованием линейных датчиков частотой от 7,5 до 13 МГц (ФС №2006/2522, РОСС JP. ИМ 02. В 14629. ГОСТ Р 50460 - 92) по стандартной методике.

В качестве критериев оценки отклонений лабораторных показателей используются возрастные физиологические уровни, а для содержания хлороформа, тетрахлорметана, дихлорэтана, дихлорбромметана и дибромхлорметана в крови и моче - референтные уровни.

Далее осуществляют математическую обработку доказательной базы оценки эффективности рекомендуемого способа с помощью непараметрических методов статистики с построением и анализом двумерных таблиц сопряженности, метода однофакторного дисперсионного анализа, методов линейного и нелинейного регрессионного анализа. Для оценки достоверности полученных результатов используют критерий Фишера (оценка адекватности моделей), критерий Стьюдента (сравнение групп по количественным признакам), критерий xI-квадрат (сравнение структуры признаков). Сравнительную оценку вероятностной взаимосвязи между признаками в группах оценивают по показателю отношения шансов (odd ratio - OR) с анализом доверительного интервала (ДI). Различия полученных результатов считают статистически значимыми при p<0,05.

4. проводят профилактику отобранным в результате вышеприведенного обследования детям старше 3 лет с целью достижения допустимого уровня риска развития общего вариабельного иммунодефицита с преобладанием нарушений иммунорегуляторных Т-клеток, связанного с экспозицией остаточных количеств продуктов гиперхлорирования питьевой воды, путем комплексного назначения двух лекарственных средств по схеме, приведенной в таблице 2.

Пример конкретного осуществления:

1. Выбор территории проживания. Наиболее значимыми компонентами остаточных количеств продуктов гиперхлорирования, присутствующих в питьевой воде в концентрациях выше одного ПДК: хлороформ - в 2,5 раза; тетрахлорметан - в 1,8 раза; дихлорэтан - в 1,3 раза; дихлорбромметан - в 1,2 раза; и дибромхлорметан - в 1,5 раза.

2. Обследовано 243 человека, в возрасте от 3 до 14 лет, у 48 из которых (из них девочки - 23 чел., мальчики - 25 чел.) диагностирован вариабельный иммунодефицит, с преобладанием нарушений иммунорегуляторных Т-клеток (D83.1).

Клинические и анамнестические критерии при отборе детей приведены в таблице 1.

У детей с нарушением Т-клеточного звена иммунитета, обусловленного воздействием продуктов гиперхлорирования, доказаны достоверные причинно-следственные связи нарушений иммунного ответа (снижение уровня Т-лимфоцитов, супрессия CD25+ и CD95+), дисбаланса окислительных и антиоксидантных процессов (повышение/снижение антиоксидантной активности сыворотки крови, повышение уровня малонового диальдегида плазмы, гидроперекиси липидов) и нарушения ферментативной активности клеток (снижение активности глутатионпероксидазы и глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы, повышение активности глутатион-S-трансферазы), развития синдрома цитолиза (увеличение уровня аспартатаминотрансферазы - АСАТ, и аланин-аминотрансферазы - АЛАТ), наличия ультразвуковых признаков реактивных изменений печени с повышением содержания в крови хлороформа, тетрахлорметана, дихлорэтана, дихлорбромметана и дибромхлорметана (доля дисперсии зависимой переменной составила: R²=0,16-0,48; p≤0,01-0,0001).

Указанные данные показывают, что отобранные в соответствии с критериями по таблице 1 дети (вышеуказанные 48 детей) с нарушением Т-клеточного звена иммунитета характеризуются развитием вариабельного иммунодефицита, ассоциированными именно с воздействием остаточных продуктов гиперхлорирования. Поэтому в дальнейшем они и проходили курс профилактики, согласно предлагаемому способу, схема реализации которого приведена в таблице 2.

Данные по эффективности профилактики предлагаемым способом детей с вариабельным иммунодефицитом с поражением, преимущественно, клеточного звена иммунитета, ассоциированным с остаточными количествами продуктов гиперхлорирования в питьевой воде, приведены ниже (по данным катамнеза через 12 месяцев) и сопровождаются:

- иммуномодулирующим эффектом (восстановление у 38-63% детей сниженного уровня Т-лимфоцитов, активацией CD25+ и CD95+),

- нормализацией баланса окислительных и антиоксидантных процессов (антиоксидантной активности сыворотки крови, малонового диальдегида плазмы, гидроперекиси липидов) у 42-65%,

- и восстановлением ферментативной активности клеток (повышение активности глутатионпероксидазы и глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы, нормализация глутатион-S-трансферазы) у 39-43% детей,

- снижением активности синдрома цитолиза (нормализация уровня АСАТ и АЛАТ) у 31-58%,

- уменьшением на 39-41% числа детей с наличием ультразвуковых признаков умеренного (реактивного) диффузного поражения печени;

- снижение количества случаев ОРВИ за год у 51-73% детей.

Для доказательства синергизма воздействия в заявляемом способе именно двух предлагаемых лекарственных средств ниже приводим таблицу 3, отражающую клиническую эффективность в катамнезе (через год) при различных схемах приема лекарств.

Как показали исследования и данные, приведенные в таблице 3, эффект предлагаемого способа не является следствием простого действия используемых препаратов, а имеет место выраженный положительный синергизм лекарственных средств по профилактике вариабельного иммунодефицита у детей старше 3 лет, потребляющих питьевую воду с остаточными количествами продуктов гиперхлорирования (сумма эффектов отдельных препаратов в тех же дозах дает эффект существенно менее выраженный, чем при их сочетанном применении).

Кроме того, повысилась резистентность организма к накоплению остаточных продуктов гиперхлорирования: произошло снижение содержания хлороформа, тетрахлорметана, дихлорэтана, дихлорбромметана и дибромхлорметана через 12 мес на 28-42%, несмотря на то, что дети, прошедшие лечение, продолжали проживать на той же территории.

Таким образом, предложенный способ сочетанного применения Имунорикса и Эслидина у детей с нарушением Т-клеточного звена иммунитета и контаминацией биосред промышленными токсикантами - хлороформом, тетрахлорметаном, дихлорэтаном, дихлорбромметаном и дибромхлорметаном, поступающих в организм ребенка с питьевой водой, способствует улучшению общей иммунорезистентности, повышает уровень и восстанавливает функциональную активность Т-лимфоцитов, снижает активность синдрома цитолиза, нормализует баланс окислительных и антиоксидантных процессов.

Примечание: Курс сочетанного применения указанных лекарственных средств осуществляют 2 раза в год.