×
20.04.2015
216.013.435c

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ О-(2,3-ДИГИДРО-2,2-ДИМЕТИЛ-7-БЕНЗОФУРАНИЛ)-N-МЕТИЛКАРБАМАТА В БИОЛОГИЧЕСКОМ МАТЕРИАЛЕ

Вид РИД

Изобретение

Юридическая информация Свернуть Развернуть
Краткое описание РИД Свернуть Развернуть
Аннотация: Изобретение относится к биологии, токсикологической и аналитической химии, а именно к способам определения O-(2,3-дигидро-2,2-диметил-7-бензофуранил)-N-метилкарбамата в биологическом материале, и может быть использовано в практике санэпидстанций, химико-токсикологических, экспертно-криминалистических и ветеринарных лабораторий. Способ осуществляется следующим образом: биологический материал, содержащий O-(2,3-дигидро-2,2-диметил-7-бензофуранил)-N-метилкарбамат, измельчают, трижды обрабатывают смесью этилацетата и ацетона, взятых в соотношении 1:1 по объему, каждый раз в течение 30 минут, полученные извлечения объединяют, экстрагент испаряют, остаток растворяют в ацетонитриле, полученный раствор разбавляют водой в соотношении 1:4 по объему, дважды экстрагируют этилацетатом при соотношении объемов водной и органической фаз 1:1 на каждом этапе экстракции, этилацетатные экстракты объединяют, упаривают до сухого остатка, остаток растворяют в ацетонитриле, к раствору прибавляют воду до достижения объемного соотношения между ацетонитрилом и водой 4:6, полученный раствор вносят в колонку сорбента «Силасорб С-18», процесс хроматографирования осуществляют, используя двухкомпонентную подвижную фазу ацетонитрил-вода в соотношении 4:6 по объему, фракции элюата, содержащие O-(2,3-дигидро-2,2-диметил-7-бензофуранил)-N-метилкарбамат, объединяют, элюент испаряют, остаток растворяют в метаноле и проводят определение физико-химическим методом, которым является хромато-масс-спектрометрия, в капиллярной колонке DB-5 MS EVIDEX длиной 25 м и внутренним диаметром 0,2 мм с неподвижной фазой, представляющей собой 5%-фенил-95%-метилполисилоксан, при толщине пленки неподвижной фазы 0,33 мкм, используя газ-носитель гелий, подаваемый со скоростью 0,6 мл/мин, и масс-селективный детектор, работающий в режиме электронного удара, начальная температура термостата колонки составляет 70°C, данная температура выдерживается в течение 3 минут, в дальнейшем температура повышается от 70°C до 290°C со скоростью 20°C в минуту, конечная температура колонки выдерживается в течение 16 минут, температура инжектора составляет 250°C, температура квадруполя 150°C, температура интерфейса детектора 300°C, регистрируют интенсивность сигнала, обусловленного заряженными частицами, образующимися при бомбардировке анализируемого вещества, вышедшего из капиллярной колонки и попавшего в источник ионов, ионизирующим пучком электронов с энергией 70 эВ, регистрируют масс-спектр по полному ионному току и вычисляют количество O-(2,3-дигидро-2,2-диметил-7-бензофуранил)-N-метилкарбамата по площади хроматографического пика. Способ обеспечивает повышение чувствительности. 4 табл., 3 пр.
Основные результаты: Способ определения O-(2,3-дигидро-2,2-диметил-7-бензофуранил)-N-метилкарбамата в биологическом материале, заключающийся в том, что биологический объект измельчают, неоднократно обрабатывают смесью этилацетата и ацетона, взятых в соотношении 1:1 по объему, каждый раз в течение 30 минут, полученные извлечения объединяют, экстрагент испаряют, остаток растворяют, раствор вносят в колонку с сорбентом, процесс хроматографирования осуществляют, используя двухкомпонентную подвижную фазу, фракции элюата, содержащие O-(2,3-дигидро-2,2-диметил-7-бензофуранил)-N-метилкарбамат, объединяют, элюент испаряют, остаток растворяют и проводят определение физико-химическим методом в колонке с неподвижной фазой, отличающийся тем, что обработку биологического объекта смесью этилацетата и ацетона проводят трижды, после испарения экстрагента остаток растворяют в ацетонитриле, полученный раствор разбавляют водой в соотношении 1:4 по объему, дважды экстрагируют этилацетатом, этилацетатные экстракты объединяют, упаривают до сухого остатка, остаток растворяют в ацетонитриле, к раствору прибавляют воду до достижения объемного соотношения между ацетонитрилом и водой 4:6, раствор вносят в колонку с сорбентом, в качестве которого используется «Силасорб С-18», двухкомпонентной подвижной фазой является смесь растворителей ацетонитрил-вода в соотношении 4:6 по объему, после испарения элюента остаток растворяют в метаноле, в качестве физико-химического метода используется хромато-масс-спектрометрия, определение проводят в капиллярной колонке DB-5 MS EVIDEX длиной 25 м и внутренним диаметром 0,2 мм с неподвижной фазой, представляющей собой 5%-фенил-95%-метилполисилоксан, при толщине пленки неподвижной фазы 0,33 мкм, используя газ-носитель гелий, подаваемый со скоростью 0,6 мл/мин, и масс-селективный детектор, работающий в режиме электронного удара, начальная температура термостата колонки составляет 70°C, данная температура выдерживается в течение 3 минут, в дальнейшем температура повышается от 70°C до 290°C со скоростью 20°C в минуту, конечная температура колонки выдерживается в течение 16 минут, температура инжектора составляет 250°C, температура квадруполя 150°C, температура интерфейса детектора 300°C, регистрируют интенсивность сигнала, обусловленного заряженными частицами, образующимися при бомбардировке анализируемого вещества, вышедшего из капиллярной колонки и попавшего в источник ионов, ионизирующим пучком электронов с энергией 70 эВ, регистрируют масс-спектр по полному ионному току и вычисляют количество O-(2,3-дигидро-2,2-диметил-7-бензофуранил)-N-метилкарбамата по площади хроматографического пика.
Реферат Свернуть Развернуть

Изобретение относится к биологии, токсикологической и аналитической химии, а именно к способам определения O-(2,3-дигидро-2,2-диметил-7-бензофуранил)-N-метилкарбамата в биологическом материале, и может быть использовано в практике санэпидстанций, химико-токсикологических, экспертно-криминалистических и ветеринарных лабораторий. Способ относится к числу массовых.

Известен способ определения производных карбаминовой кислоты (1-нафтил-N-метилкарбамата) в биологических объектах путем измельчения биологической ткани, ее обработки гексаном в присутствии безводного сульфата натрия в течение 2-3 часов, отделения гексанового извлечения, упаривания до сухого остатка, растворения остатка в смеси вода-метанол, взятых в объемном отношении 3:2, прибавления к водно-метанольному раствору хлорида натрия, экстракции раствора хлороформом, отделения хлороформного экстракта, упаривания до сухого остатка, растворения остатка в гексане с последующим хроматографированием в тонком слое силикагеля на пластинах «Силуфол» с использованием подвижной фазы гексан-ацетон в соотношении 3:1 по объему и проявлением хроматограмм путем последовательной обработки водно-этанольным раствором гидроксида калия и раствором соли диазония (Лабораторные исследования в ветеринарии. Химико-токсикологические методы / Под ред. Б.И. Антонова. - М.: Агропромиздат, 1989. - С.160-162).

Способ характеризуется недостаточно высокой степенью извлечения O-(2,3-дигидро-2,2-диметил-7-бензофуранил)-N-метилкарбамата, относительно низкими точностью и чувствительностью определения.

Известен способ определения O-(2,3-дигидро-2,2-диметил-7-бензофуранил)-N-метилкарбамата в биологическом материале, заключающийся в том, что биологическую пробу измельчают, обрабатывают хлороформом в течение 20 минут, хлороформную вытяжку отделяют, фильтруют через безводный сульфат натрия, хлороформ из фильтрата испаряют до сухого остатка, остаток растворяют в воде, полученный раствор экстрагируют дважды хлороформом, экстракты объединяют, фильтруют через слой безводного сульфата натрия, фильтрат упаривают при 80°C до незначительного объема, хроматографируют в тонком слое силикагеля на пластинках «Силуфол» с применением подвижной фазы гексан-ацетон в соотношении 3:2 по объему, а полученные хроматограммы проявляют путем последовательной обработки водно-этанольным раствором гидроксида калия и раствором соли диазония (Методы определения микроколичеств пестицидов в продуктах питания, кормах и внешней среде. T.1. - М.: Колос, 1992. - С.402-406).

Способ характеризуется недостаточно высокими чувствительностью и точностью.

Наиболее близким является способ определения O-(2,3-дигидро-2,2-диметил-7-бензофуранил)-N-метилкарбамата в биологическом материале, заключающийся в том, что биологический объект измельчают, неоднократно (дважды) обрабатывают смесью этилацетата и ацетона, взятых в соотношении 1:1 по объему, каждый раз в течение 30 минут, полученные извлечения объединяют, экстрагент испаряют, остаток растворяют в диэтиловом эфире, полученный раствор вносят в колонку с сорбентом, в качестве которого используется силикагель, растворитель испаряют, процесс хроматографирования осуществляют, используя двухкомпонентную подвижную фазу, которой является смесь растворителей гексан-ацетон (9:1), фракции элюата, содержащие O-(2,3-дигидро-2,2-диметил-7-бензофуранил)-N-метилкарбамат, объединяют, элюент испаряют, остаток растворяют в смеси растворителей ацетонитрил-вода в соотношении 5:5 по объему и проводят определение физико-химическим методом, которым является метод ВЭЖХ, в колонке с неподвижной фазой «Новопак С-18» с применением подвижной фазы ацетонитрил-вода в соотношении 5:5 по объему и детектора на основе фотодиодной матрицы (Патент 2269780 Российская Федерация, МПК G01N 33/50 (2006.01) / Способ определения O-(2,3-дигидро-2,2-диметил-7-бензофуранил)-N-метилкарбамата в биологическом материале / Шорманов В.К., Коваленко Е.А., Иванов В.П., Королев В.А., Дурицын Е.П., Пистунович Е.В.; заявители и патентообладатели Шорманов В.К., Коваленко Е.А., Иванов В.П., Королев B.A. (RU) - №2004117514/15; Заяв. 08.06.2004; Опуб. 10.02.2006 // Изобретения (Заявки и патенты). - 2006. - №4. - 9 с.).

Способ характеризуется недостаточно высокой чувствительностью определения.

Техническим результатом настоящего изобретения является повышение чувствительности определения.

Технический результат достигается тем, что биологический объект измельчают, неоднократно (трижды) обрабатывают смесью этилацетата и ацетона, взятых в соотношении 1:1 по объему, каждый раз в течение 30 минут, полученные извлечения объединяют, экстрагент испаряют, остаток растворяют в ацетонитриле, полученный раствор разбавляют водой в соотношении 1:4 по объему, дважды экстрагируют этилацетатом при соотношении объемов водной и органической фаз 1:1 на каждом этапе экстракции, этилацетатные экстракты объединяют, упаривают до сухого остатка, остаток растворяют в ацетонитриле, к раствору прибавляют воду до достижения объемного соотношения между ацетонитрилом и водой 4:6, полученный раствор вносят в колонку сорбента «Силасорб С-18», процесс хроматографирования осуществляют, используя двухкомпонентную подвижную фазу, которой является смесь растворителей ацетонитрил-вода в соотношении 4:6 по объему, фракции элюата, содержащие O-(2,3-дигидро-2,2-диметил-7-бензофуранил)-N-метилкарбамат, объединяют, элюент испаряют, остаток растворяют в метаноле и проводят определение физико-химическим методом, которым является хромато-масс-спектрометрия, в капиллярной колонке DB-5 MS EVIDEX длиной 25 м и внутренним диаметром 0,2 мм с неподвижной фазой, представляющей собой 5%-фенил-95%-метилполисилоксан, при толщине пленки неподвижной фазы 0,33 мкм, используя газ-носитель гелий, подаваемый со скоростью 0,6 мл/мин, и масс-селективный детектор, работающий в режиме электронного удара, начальная температура термостата колонки составляет 70°C, данная температура выдерживается в течение 3 минут, в дальнейшем температура повышается от 70°C до 290°C со скоростью 20°C в минуту, конечная температура колонки выдерживается в течение 16 минут, температура инжектора составляет 250°C, температура квадруполя 150°C, температура интерфейса детектора 300°C, регистрируют интенсивность сигнала, обусловленного заряженными частицами, образующимися при бомбардировке анализируемого вещества, вышедшего из капиллярной колонки и попавшего в источник ионов, ионизирующим пучком электронов с энергией 70 эВ, регистрируют масс-спектр по полному ионному току и вычисляют количество O-(2,3-дигидро-2,2-диметил-7-бензофуранил)-N-метилкарбамата по площади хроматографического пика.

Способ осуществляется следующим образом: биологический объект, содержащий O-(2,3-дигидро-2,2-диметил-7-бензофуранил)-N-метилкарбамат, измельчают, неоднократно (трижды) обрабатывают смесью этилацетата и ацетона, взятых в соотношении 1:1 по объему, каждый раз в течение 30 минут, полученные извлечения объединяют, экстрагент испаряют, остаток растворяют в ацетонитриле, полученный раствор разбавляют водой в соотношении 1:4 по объему, дважды экстрагируют этилацетатом при соотношении объемов водной и органической фаз 1:1 на каждом этапе экстракции, этилацетатные экстракты объединяют, упаривают до сухого остатка, остаток растворяют в ацетонитриле, к раствору прибавляют воду до достижения объемного соотношения между ацетонитрилом и водой 4:6, полученный раствор вносят в колонку сорбента «Силасорб С-18», процесс хроматографирования осуществляют, используя двухкомпонентную подвижную фазу ацетонитрил-вода в соотношении 4:6 по объему, фракции элюата, содержащие O-(2,3-дигидро-2,2-диметил-7-бензофуранил)-N-метилкарбамат, объединяют, элюент испаряют, остаток растворяют в метаноле и проводят определение физико-химическим методом, которым является хромато-масс-спектрометрия, в капиллярной колонке DB-5 MS EVIDEX длиной 25 м и внутренним диаметром 0,2 мм с неподвижной фазой, представляющей собой 5%-фенил-95%-метилполисилоксан, при толщине пленки неподвижной фазы 0,33 мкм, используя газ-носитель гелий, подаваемый со скоростью 0,6 мл/мин, и масс-селективный детектор, работающий в режиме электронного удара, начальная температура термостата колонки составляет 70°C, данная температура выдерживается в течение 3 минут, в дальнейшем температура повышается от 70°C до 290°C со скоростью 20°C в минуту, конечная температура колонки выдерживается в течение 16 минут, температура инжектора составляет 250°C, температура квадруполя 150°C, температура интерфейса детектора 300°C, регистрируют интенсивность сигнала, обусловленного заряженными частицами, образующимися при бомбардировке анализируемого вещества, вышедшего из капиллярной колонки и попавшего в источник ионов, ионизирующим пучком электронов с энергией 70 эВ, регистрируют масс-спектр по полному ионному току и вычисляют количество O-(2,3-дигидро-2,2-диметил-7-бензофуранил)-N-метилкарбамата по площади хроматографического пика. Способ иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1

Определение O-(2,3-дигидро-2,2-диметил-7-бензо-фуранил)-N-метилкарбамата в ткани печени

К 10 г мелкоизмельченной ткани печени прибавляют 10 мг O-(2,3-дигидро-2,2-диметил-7-бензофуранил)-N-метилкарбамата, тщательно перемешивают биологическую ткань с веществом и оставляют на сутки при температуре 18-20°C. По истечении указанного времени биологический объект, содержащий анализируемое вещество, неоднократно (трижды) обрабатывают смесью этилацетата и ацетона, взятых в соотношении 1:1 по объему, каждый раз в течение 30 минут. При этом биологический объект заливают 20 г смеси этилацетата и ацетона, взятых в соотношении 1:1 по объему, и оставляют на 30 минут при перемешивании. Извлечение отделяют, операцию настаивания повторяют в вышеописанных условиях еще дважды. Все полученные извлечения объединяют, встряхивают с 7 г безводного сульфата натрия, фильтруют через стеклянный фильтр диаметром 4 см со слоем безводного сульфата натрия толщиной 1-1,5 см, сульфат натрия и фильтр дополнительно промывают 20 г смеси этилацетат-ацетон в соотношении 1:1 по объему, фильтрат и промывную жидкость объединяют, экстрагент испаряют в токе воздуха при 18-20°C до полного удаления растворителя, остаток растворяют в 10 мл ацетонитрила, полученный раствор разбавляют водой в соотношении 1:4 по объему, прибавляя 40 мл воды, образующийся раствор дважды экстрагируют порциями этилацетата по 50 мл каждая, обеспечивая соотношение объемов водной и органической фаз 1:1 на каждом этапе экстракции. Отдельные этилацетатные экстракты объединяют, упаривают в токе воздуха при температуре 18-20°C до получения сухого остатка.

Остаток растворяют в 0,8 мл ацетонитрила, к раствору прибавляют 1,2 мл воды до достижения объемного соотношения между ацетонитрилом и водой 4:6, полученный раствор вносят в хроматографическую макроколонку размерами 490×11 мм, заполненную 7,5 г сорбента «Силасорб С-18» с размером частиц 30 мкм, предварительно промытую смесью растворителей ацетонитрил-вода в соотношении 4:6 по объему. Процесс хроматографирования осуществляют, используя двухкомпонентную подвижную фазу, которой является смесь растворителей ацетонитрил-вода в соотношении 4:6 по объему. Элюат собирают отдельными фракциями по 2 мл каждая. Фракции элюата с 9 по 13 включительно, содержащие O-(2,3-дигидро-2,2-диметил-7-бензофуранил)-N-метилкарбамат, объединяют, элюент испаряют при 18-20°C вначале в токе воздуха до объема 0,5-1 мл, а затем - в токе азота до полного удаления растворителя.

Остаток растворяют в 10 мл метанола (раствор А). 2,0 мл раствора А вносят в мерную колбу вместимостью 25 мл, доводят метанолом до метки (раствор Б) и проводят определение физико-химическим методом, которым является хромато-масс-спектрометрия.

В процессе определения 4 мкл раствора Б вводят в хромато-масс-спектрометр.

Определение проводят, используя газовый хроматограф фирмы Agilent Technologies (США) модели 6850 Network GC System с квадрупольным масс-селективным детектором модели 5973 Network этой же фирмы.

Хроматографирование осуществляют в капиллярной колонке DB-5 MS EVIDEX длиной 25 м, внутренним диаметром 0,2 мм с неподвижной фазой, представляющей собой 5%-фенил-95%-метилполисилоксан, при толщине пленки неподвижной фазы 0,33 мкм.

Начальная температура термостата колонки составляет 70°C, данная температура выдерживается в течение 3 минут, в дальнейшем температура повышается от 70°C до 290°C со скоростью 20°C в минуту, конечная температура колонки выдерживается в течение 16 минут, температура инжектора составляет 250°C, температура квадруполя 150°C, температура интерфейса детектора 300°C, регистрируют интенсивность сигнала, обусловленного заряженными частицами, образующимися при бомбардировке анализируемого вещества, вышедшего из капиллярной колонки и попавшего в источник ионов, ионизирующим пучком электронов с энергией 70 эВ, регистрируют масс-спектр по полному ионному току и вычисляют количество O-(2,3-дигидро-2,2-диметил-7-бензофуранил)-N-метилкарбамата по площади хроматографического пика.

В качестве газа-носителя используется гелий. Подача газа-носителя производится со скоростью 0,6 мл/мин. Режим с делением потока 1:2. Масс-селективный детектор работает в режиме электронного удара (70 эВ). Регистрация масс-спектра проводится по полному ионному току с задержкой 3,5 минуты. Диапазон сканирования составляет 40-500 m/z.

Пик на хроматограмме с временем удерживания 9,68 мин соответствует O-(2,3-дигидро-2,2-диметил-7-бензофуранил)-N-метил-карбамату. В масс-спектре данного соединения, снятом по полному ионному току, обнаруживаются сигналы ряда характеристических заряженных частиц с массовыми числами 41, 51, 77, 91, 103, 122, 131, 149, 164, 221. Наиболее интенсивной является частица с массовым числом 164, интенсивность которой принимается за 100%.

O-(2,3-дигидро-2,2-диметил-7-бензофуранил)-N-метилкарбамат идентифицируют по сочетанию времени удерживания в неподвижной фазе колонки и специфического набора сигналов характеристических заряженных частиц в его масс-спектре.

По площади хроматографического пика, полученного при регистрации интенсивности по полному ионному току, определяют количественное содержание O-(2,3-дигидро-2,2-диметил-7-бензофуранил)-N-метилкарбамата, используя уравнение градуировочного графика, и пересчитывают на навеску анализируемого вещества, внесенную в биологический материал.

Построение градуировочного графика

В ряд мерных колб вместимостью 25 мл вносят 0,02, 0,1, 0,5, 2,0 мл 0,125% раствора и 1,0, 5,0 и 10,0 мл 1,25% раствора O-(2,3-дигидро-2,2-диметил-7-бензофуранил)-N-метилкарбамата в метаноле и доводят объем содержимого каждой колбы до метки метанолом.

4 мкл каждого из полученных растворов вводят в хромато-масс-спектрометр.

Определение проводят, используя газовый хроматограф фирмы Agilent Technologies (США) модели 6850 Network GC System с квадрупольным масс-селективным детектором модели 5973 Network этой же фирмы.

Хроматографирование осуществляют в капиллярной колонке DB-5 MS EVIDEX длиной 25 м, внутренним диаметром 0,2 мм с неподвижной фазой, представляющей собой 5%-фенил-95%-метилполисилоксан, при толщине пленки неподвижной фазы 0,33 мкм.

Начальная температура термостата колонки составляет 70°C, данная температура выдерживается в течение 3 минут, в дальнейшем температура повышается от 70°C до 290°C со скоростью 20°C в минуту, конечная температура колонки выдерживается в течение 16 минут, температура инжектора составляет 250°C, температура квадруполя 150°C, температура интерфейса детектора 300°C, регистрируют интенсивность сигнала, обусловленного заряженными частицами, образующимися при бомбардировке анализируемого вещества, вышедшего из капиллярной колонки и попавшего в источник ионов, ионизирующим пучком электронов с энергией 70 эВ, регистрируют масс-спектр по полному ионному току и вычисляют количество O-(2,3-дигидро-2,2-диметил-7-бензофуранил)-N-метилкарбамата по площади хроматографического пика.

В качестве газа-носителя используется гелий. Подача газа-носителя производится со скоростью 0,6 мл/мин. Режим с делением потока 1:2. Масс-селективный детектор работает в режиме электронного удара (70 эВ). Регистрация масс-спектра проводится по полному ионному току с задержкой 3,5 минуты. Диапазон сканирования составляет 40-500 m/z.

По результатам измерений на хромато-масс-спектрометре строят график зависимости площади пика от концентрации определяемого вещества. График линеен в интервале концентраций 2·10-9-1,0·10-5 г.

Методом наименьших квадратов рассчитывают уравнение градуировочного графика, которое в данном случае имеет вид:

S=5326·C+3036,

где S - площадь хроматографического пика; C - концентрация определяемого вещества в хроматографируемой пробе, нг.

Результаты количественного определения O-(2,3-дигидро-2,2-диметил-7-бензофуранил)-N-метилкарбамата в ткани печени представлены в таблице 1.

Пример 2

Определение O-(2,3-дигидро-2,2-диметил-7-бензо-фуранил)-N-метилкарбамата в ткани легких

К 10 г мелкоизмельченной ткани легких прибавляют 10 мг O-(2,3-дигидро-2,2-диметил-7-бензофуранил)-N-метилкарбамата, тщательно перемешивают биологическую ткань с веществом и оставляют на сутки при температуре 18-20°C. По истечении указанного времени биологический объект, содержащий анализируемое вещество, неоднократно (трижды) обрабатывают смесью этилацетата и ацетона, взятых в соотношении 1:1 по объему, каждый раз в течение 30 минут. При этом биологический объект заливают 20 г смеси этилацетата и ацетона, взятых в соотношении 1:1 по объему, и оставляют на 30 минут при перемешивании. Извлечение отделяют, операцию настаивания повторяют в вышеописанных условиях еще дважды. Все полученные извлечения объединяют, встряхивают с 7 г безводного сульфата натрия, фильтруют через стеклянный фильтр диаметром 4 см со слоем безводного сульфата натрия толщиной 1-1,5 см, сульфат натрия и фильтр дополнительно промывают 20 г смеси этилацетат-ацетон в соотношении 1:1 по объему, фильтрат и промывную жидкость объединяют, экстрагент испаряют в токе воздуха при 18-20°C до полного удаления растворителя, остаток растворяют в 10 мл ацетонитрила, полученный раствор разбавляют водой в соотношении 1:4 по объему, прибавляя 40 мл воды, образующийся раствор дважды экстрагируют порциями этилацетата по 50 мл каждая, обеспечивая соотношение объемов водной и органической фаз 1:1 на каждом этапе экстракции. Отдельные этилацетатные экстракты объединяют, упаривают в токе воздуха при температуре 18-20°C до получения сухого остатка.

Остаток растворяют в 0,8 мл ацетонитрила, к раствору прибавляют 1,2 мл воды до достижения объемного соотношения между ацетонитрилом и водой 4:6, полученный раствор вносят в хроматографическую макроколонку размерами 490×11 мм, заполненную 7,5 г сорбента «Силасорб С-18» с размером частиц 30 мкм, предварительно промытую смесью растворителей ацетонитрил-вода в соотношении 4:6 по объему. Процесс хроматографирования осуществляют, используя двухкомпонентную подвижную фазу, которой является смесь растворителей ацетонитрил-вода в соотношении 4:6 по объему. Элюат собирают отдельными фракциями по 2 мл каждая. Фракции элюата с 9 по 13 включительно, содержащие O-(2,3-дигидро-2,2-диметил-7-бензофуранил)-N-метилкарбамат, объединяют, элюент испаряют при 18-20°C вначале в токе воздуха до объема 0,5-1 мл, а затем - в токе азота до полного удаления растворителя.

Остаток растворяют в 10 мл метанола (раствор А). 2,0 мл раствора А вносят в мерную колбу вместимостью 25 мл, доводят метанолом до метки (раствор Б) и проводят определение физико-химическим методом, которым является хромато-масс-спектрометрия.

В процессе определения 4 мкл раствора Б вводят в хромато-масс-спектрометр.

Определение проводят, используя газовый хроматограф фирмы Agilent Technologies (США) модели 6850 Network GC System с квадрупольным масс-селективным детектором модели 5973 Network этой же фирмы.

Хроматографирование осуществляют в капиллярной колонке DB-5 MS EVIDEX длиной 25 м, внутренним диаметром 0,2 мм с неподвижной фазой, представляющей собой 5%-фенил-95%-метилполисилоксан, при толщине пленки неподвижной фазы 0,33 мкм.

Начальная температура термостата колонки составляет 70°C, данная температура выдерживается в течение 3 минут, в дальнейшем температура повышается от 70°C до 290°C со скоростью 20°C в минуту, конечная температура колонки выдерживается в течение 16 минут, температура инжектора составляет 250°C, температура квадруполя 150°C, температура интерфейса детектора 300°C, регистрируют интенсивность сигнала, обусловленного заряженными частицами, образующимися при бомбардировке анализируемого вещества, вышедшего из капиллярной колонки и попавшего в источник ионов, ионизирующим пучком электронов с энергией 70 эВ, регистрируют масс-спектр по полному ионному току и вычисляют количество O-(2,3-дигидро-2,2-диметил-7-бензофуранил)-N-метилкарбамата по площади хроматографического пика.

В качестве газа-носителя используется гелий. Подача газа-носителя производится со скоростью 0,6 мл/мин. Режим с делением потока 1:2. Масс-селективный детектор работает в режиме электронного удара (70 эВ). Регистрация масс-спектра проводится по полному ионному току с задержкой 3,5 минуты. Диапазон сканирования составляет 40-500 m/z.

Пик на хроматограмме с временем удерживания 9,68 мин соответствует O-(2,3-дигидро-2,2-диметил-7-бензофуранил)-N-метил-карбамату. В масс-спектре данного соединения, снятом по полному ионному току, обнаруживаются сигналы ряда характеристических заряженных частиц с массовыми числами 41, 51, 77, 91, 103, 122, 131, 149, 164, 221. Наиболее интенсивной является частица с массовым числом 164, интенсивность которой принимается за 100%.

O-(2,3-дигидро-2,2-диметил-7-бензофуранил)-N-метилкарбамат идентифицируют по сочетанию времени удерживания в неподвижной фазе колонки и специфического набора сигналов характеристических заряженных частиц в его масс-спектре.

По площади хроматографического пика, полученного при регистрации интенсивности по полному ионному току, определяют количественное содержание O-(2,3-дигидро-2,2-диметил-7-бензофуранил)-N-метилкарбамата, используя уравнение градуировочного графика, и пересчитывают на навеску анализируемого вещества, внесенную в биологический материал.

Построение градуировочного графика

Построение градуировочного графика и его уравнение приводятся в примере 1.

Результаты количественного определения O-(2,3-дигидро-2,2-диметил-7-бензофуранил)-N-метилкарбамата в ткани легких представлены в таблице 2.

Пример 3

Определение O-(2,3-дигидро-2,2-диметил-7-бензо-фуранил)-N-метилкарбамата в ткани корнеплодов сахарной свеклы

К 10 г мелкоизмельченной ткани корнеплодов сахарной свеклы прибавляют 10 мг O-(2,3-дигидро-2,2-диметил-7-бензофуранил)-N-метилкарбамата, тщательно перемешивают биологическую ткань с веществом и оставляют на сутки при температуре 18-20°C. По истечении указанного времени биологический объект неоднократно (трижды) обрабатывают смесью этилацетата и ацетона, взятых в соотношении 1:1 по объему, каждый раз в течение 30 минут. При этом биологический объект заливают 20 г смеси этилацетата и ацетона, взятых в соотношении 1:1 по объему, и оставляют на 30 минут при перемешивании. Извлечение отделяют, операцию настаивания повторяют в вышеописанных условиях еще дважды. Все полученные извлечения объединяют, встряхивают с 7 г безводного сульфата натрия, фильтруют через стеклянный фильтр диаметром 4 см со слоем безводного сульфата натрия толщиной 1-1,5 см, сульфат натрия и фильтр дополнительно промывают 20 г смеси этилацетат-ацетон в соотношении 1:1 по объему, фильтрат и промывную жидкость объединяют, экстрагент испаряют в токе воздуха при 18-20°C до полного удаления растворителя, остаток растворяют в 10 мл ацетонитрила, полученный раствор разбавляют водой в соотношении 1:4 по объему, прибавляя 40 мл воды, образующийся раствор дважды экстрагируют порциями этилацетата по 50 мл каждая, обеспечивая соотношение объемов водной и органической фаз 1:1 на каждом этапе экстракции. Отдельные этилацетатные экстракты объединяют, упаривают в токе воздуха при температуре 18-20°C до получения сухого остатка.

Остаток растворяют в 0,8 мл ацетонитрила, к раствору прибавляют 1,2 мл воды до достижения объемного соотношения между ацетонитрилом и водой 4:6, полученный раствор вносят в хроматографическую макроколонку размерами 490×11 мм, заполненную 7,5 г сорбента «Силасорб С-18» с размером частиц 30 мкм, предварительно промытую смесью растворителей ацетонитрил-вода в соотношении 4:6 по объему. Процесс хроматографирования осуществляют, используя двухкомпонентную подвижную фазу, которой является смесь растворителей ацетонитрил-вода в соотношении 4:6 по объему. Элюат собирают отдельными фракциями по 2 мл каждая. Фракции элюата с 9 по 13 включительно, содержащие O-(2,3-дигидро-2,2-диметил-7-бензофуранил)-N-метилкарбамат, объединяют, элюент испаряют при 18-20°C вначале в токе воздуха до объема 0,5-1 мл, а затем - в токе азота до полного удаления растворителя.

Остаток растворяют в 10 мл метанола (раствор А). 2,0 мл раствора А вносят в мерную колбу вместимостью 25 мл, доводят метанолом до метки (раствор Б) и проводят определение физико-химическим методом, которым является хромато-масс-спектрометрия.

В процессе определения 4 мкл раствора Б вводят в хромато-масс-спектрометр.

Определение проводят, используя газовый хроматограф фирмы Agilent Technologies (США) модели 6850 Network GC System с квадрупольным масс-селективным детектором модели 5973 Network этой же фирмы.

Хроматографирование осуществляют в капиллярной колонке DB-5 MS EVIDEX длиной 25 м, внутренним диаметром 0,2 мм с неподвижной фазой, представляющей собой 5%-фенил-95%-метилполисилоксан, при толщине пленки неподвижной фазы 0,33 мкм.

Начальная температура термостата колонки составляет 70°C, данная температура выдерживается в течение 3 минут, в дальнейшем температура повышается от 70°C до 290°C со скоростью 20°C в минуту, конечная температура колонки выдерживается в течение 16 минут, температура инжектора составляет 250°C, температура квадруполя 150°C, температура интерфейса детектора 300°C, регистрируют интенсивность сигнала, обусловленного заряженными частицами, образующимися при бомбардировке анализируемого вещества, вышедшего из капиллярной колонки и попавшего в источник ионов, ионизирующим пучком электронов с энергией 70 эВ, регистрируют масс-спектр по полному ионному току и вычисляют количество O-(2,3-дигидро-2,2-диметил-7-бензофуранил)-N-метилкарбамата по площади хроматографического пика.

В качестве газа-носителя используется гелий. Подача газа-носителя производится со скоростью 0,6 мл/мин. Режим с делением потока 1:2. Масс-селективный детектор работает в режиме электронного удара (70 эВ). Регистрация масс-спектра проводится по полному ионному току с задержкой 3,5 минуты. Диапазон сканирования составляет 40-500 m/z.

Пик на хроматограмме с временем удерживания 9,68 мин соответствует O-(2,3-дигидро-2,2-диметил-7-бензофуранил)-N-метил-карбамату. В масс-спектре данного соединения, снятом по полному ионному току, обнаруживаются сигналы ряда характеристических заряженных частиц с массовыми числами 41, 51, 77, 91, 103, 122, 131, 149, 164, 221. Наиболее интенсивной является частица с массовым числом 164, интенсивность которой принимается за 100%.

O-(2,3-дигидро-2,2-диметил-7-бензофуранил)-N-метилкарбамат идентифицируют по сочетанию времени удерживания в неподвижной фазе колонки и специфического набора сигналов характеристических заряженных частиц в его масс-спектре.

По площади хроматографического пика, полученного при регистрации интенсивности по полному ионному току, определяют количественное содержание O-(2,3-дигидро-2,2-диметил-7-бензофуранил)-N-метилкарбамата, используя уравнение градуировочного графика, и пересчитывают на навеску анализируемого вещества, внесенную в биологический материал.

Построение градуировочного графика

Построение градуировочного графика и его уравнение приводятся в примере 1.

Результаты количественного определения O-(2,3-дигидро-2,2-диметил-7-бензофуранил)-N-метилкарбамата в ткани корнеплодов сахарной свеклы представлены в таблице 3.

Предлагаемый способ по сравнению с прототипом в 6 раз повышает чувствительность определения в детектируемой пробе и в 3 раза - в биологическом материале.

Сравнительные характеристики предлагаемого и известного способов представлены в таблице 4.

Таблица 1
Результаты определения O-(2,3-дигидро-2,2-диметил-7-бензофуранил)-N-метилкарбамата в ткани печени (n=5; P=0,95)
Внесено О-(2,3-дигидро-2,2-диметил-7-бензофуранил)-N-метилкарбамата, мг в 10 г ткани печени Найдено Метрологические характеристики, %
площадь пика на хроматограмме, усл. ед. мг в хроматографируемой пробе мг в пересчете на навеску, внесенную в биоматериал % от внесенной в биоматериал навески
1 10,00 768190 1,437·10-4 8,979 89,79
2 10,00 770832 1,442·10-4 9,010 90,10 S=2,83
3 10,00 826563 1,546·10-4 9,664 96,64
4 10,00 784211 1,467·10-4 9,167 91,67
5 10,00 800743 1,498·10-4 9,361 93,61

Таблица 2
Результаты определения O-(2,3-дигидро-2,2-диметил-7-бензофуранил)-N-метилкарбамата в ткани легких (n=5; P=0,95)
Внесено О-(2,3-дигидро-2,2-диметил-7-бензофуранил)-N-метилкарбамата, мг в 10 г ткани легких Найдено Метрологические характеристики, %
площадь пика на хроматограмме, усл. ед. мг в хроматографируемой пробе мг в пересчете на навеску, внесенную в биоматериал % от внесенной в биоматериал навески
1 10,00 852725 1,595·10-4 9,971 99,71
2 10,00 800743 1,498·10-4 9,361 93,61 S=2,80
3 10,00 837727 1,567·10-4 9,795 97,95
4 10,00 836534 1,565·10-4 9,781 97,81
5 10,00 799891 1,496·10-4 9,351 93,51

Таблица 3
Результаты определения O-(2,3-дигидро-2,2-диметил-7-бензофуранил)-N-метилкарбамата в ткани корнеплодов сахарной свеклы (n=5; P=0,95)
Внесено О-(2,3-дигидро-2,2-диметил-7-бензофуранил)-N-метилкарбамата, мг в 10 г ткани корнеплодов сахарной свеклы Найдено Метрологические характеристики, %
площадь пика на хроматограмме, усл. ед. мг в хроматографируемой пробе мг в пересчете на навеску, внесенную в биоматериал % от внесенной в биоматериал навески
1 10,00 781314 1,461·10-4 9,133 91,33
2 10,00 825796 1,545·10-4 9,655 96,55 S=2,33
3 10,00 830228 1,553·10-4 9,707 97,07
4 10,00 808242 1,512·10-4 9,449 94,49
5 10,00 822558 1,539·10-4 9,617 96,17

Таблица 4
Сравнительная характеристика предлагаемого и известного способов (на примере исследования ткани корнеплодов сахарной свеклы)
Показатели Предлагаемый способ Известный способ
Чувствительность (открываемый минимум)
а) в 100 г биоматериала 2·10-8 г 6·10-8 г
б) в детектируемой пробе 1·10-9 г 6·10-9 г
Интервал линейности градуировочного графика (г в детектируемой пробе) 2·10-9-1·10-5 г 6·10-9-4·10-6 г

Способ определения O-(2,3-дигидро-2,2-диметил-7-бензофуранил)-N-метилкарбамата в биологическом материале, заключающийся в том, что биологический объект измельчают, неоднократно обрабатывают смесью этилацетата и ацетона, взятых в соотношении 1:1 по объему, каждый раз в течение 30 минут, полученные извлечения объединяют, экстрагент испаряют, остаток растворяют, раствор вносят в колонку с сорбентом, процесс хроматографирования осуществляют, используя двухкомпонентную подвижную фазу, фракции элюата, содержащие O-(2,3-дигидро-2,2-диметил-7-бензофуранил)-N-метилкарбамат, объединяют, элюент испаряют, остаток растворяют и проводят определение физико-химическим методом в колонке с неподвижной фазой, отличающийся тем, что обработку биологического объекта смесью этилацетата и ацетона проводят трижды, после испарения экстрагента остаток растворяют в ацетонитриле, полученный раствор разбавляют водой в соотношении 1:4 по объему, дважды экстрагируют этилацетатом, этилацетатные экстракты объединяют, упаривают до сухого остатка, остаток растворяют в ацетонитриле, к раствору прибавляют воду до достижения объемного соотношения между ацетонитрилом и водой 4:6, раствор вносят в колонку с сорбентом, в качестве которого используется «Силасорб С-18», двухкомпонентной подвижной фазой является смесь растворителей ацетонитрил-вода в соотношении 4:6 по объему, после испарения элюента остаток растворяют в метаноле, в качестве физико-химического метода используется хромато-масс-спектрометрия, определение проводят в капиллярной колонке DB-5 MS EVIDEX длиной 25 м и внутренним диаметром 0,2 мм с неподвижной фазой, представляющей собой 5%-фенил-95%-метилполисилоксан, при толщине пленки неподвижной фазы 0,33 мкм, используя газ-носитель гелий, подаваемый со скоростью 0,6 мл/мин, и масс-селективный детектор, работающий в режиме электронного удара, начальная температура термостата колонки составляет 70°C, данная температура выдерживается в течение 3 минут, в дальнейшем температура повышается от 70°C до 290°C со скоростью 20°C в минуту, конечная температура колонки выдерживается в течение 16 минут, температура инжектора составляет 250°C, температура квадруполя 150°C, температура интерфейса детектора 300°C, регистрируют интенсивность сигнала, обусловленного заряженными частицами, образующимися при бомбардировке анализируемого вещества, вышедшего из капиллярной колонки и попавшего в источник ионов, ионизирующим пучком электронов с энергией 70 эВ, регистрируют масс-спектр по полному ионному току и вычисляют количество O-(2,3-дигидро-2,2-диметил-7-бензофуранил)-N-метилкарбамата по площади хроматографического пика.
Источник поступления информации: Роспатент

Showing 1-10 of 62 items.
10.03.2013
№216.012.2eac

Способ определения н-бутилового эфира 2-[4-(5-трифторметилпиридил-2-окси)фенокси]пропионовой кислоты в биологическом материале

Настоящее изобретение относится к биологии, экологии, токсикологической и санитарной химии и описывает способ определения н-бутилового эфира 2-[4-(5-трифторметилпиридил-2-окси)фенокси]пропионовой кислоты в биологическом материале, заключающийся в том, что анализируемую пробу измельчают,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002477479
Дата охранного документа: 10.03.2013
10.04.2013
№216.012.346b

Способ определения дельтаметрина и лямбда-цигалотрина в биологическом материале

Изобретение относится к токсикологической химии, а именно к способу определения дельтаметрина и лямбда-цигалотрина в биологическом материале, и может быть использовано в практике различных лабораторий. Биологический материал измельчают, дважды по 1 часу настаивают с диоксаном, извлечения...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002478962
Дата охранного документа: 10.04.2013
10.10.2013
№216.012.7448

Способ извлечения азатиоприна из биологических жидкостей

Изобретение относится к токсикологической и аналитической химии, а именно к способу извлечения азатиоприна из биологических жидкостей, заключающийся в том, что анализируемую пробу обрабатывают осаждающим белки реагентом, в качестве которого используется ацетон, извлечение отделяют от выпавшего...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002495425
Дата охранного документа: 10.10.2013
10.06.2014
№216.012.d01d

Способ определения 4-нитроанилина в биологическом материале

Изобретение относится к биологии, экологии, токсикологической и санитарной химии, а именно к способам определения 4-нитроанилина в биологическом материале, и может быть использовано в практике санэпидстанций, химико-токсикологических и экологических лабораторий. Биологический объект, содержащий...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002519048
Дата охранного документа: 10.06.2014
20.09.2014
№216.012.f5bc

Применение пептида актг (4-7)-пгп гепатопротекторного воздействия

Изобретение относится к биотехнологии, конкретно к терапевтическим пептидам, и может быть использовано в медицине. В качестве гепатопротектора применяют пептид АКТГ (4-7)-ПГП (Семакс), имеющий формулу Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro. Применения указанного пептида с целью гепатопротекции в условиях...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002528741
Дата охранного документа: 20.09.2014
27.09.2014
№216.012.f852

Способ анатомо-хирургического моделирования наружной ротационной контрактуры тазобедренного сустава в эксперименте

Изобретение относится к медицине, а именно к ортопедии, биомеханике, оперативной хирургии и топографической анатомии, анатомии, антропологии. На невостребованном трупе выполняют задний доступ к тазобедренному суставу типа Кохера-Лангенбека. Отсепаровывают наружные ротаторы бедра от места их...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002529407
Дата охранного документа: 27.09.2014
20.12.2014
№216.013.105e

Способ ультразвуковой диагностики воспалительных изменений печени и селезенки при туберкулезе у детей

Группа изобретений относится к медицине, а именно к лучевой диагностике, фтизиатрии и педиатрии. В первом варианте изобретения выполняют ультразвуковое исследование печени. Сопоставляют измеренный косопоперечный размер правой доли печени с индивидуальным нормативным значением, вычисляемым по...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002535613
Дата охранного документа: 20.12.2014
27.12.2014
№216.013.15e8

Применение дельта-сон индуцирующего пептида для гепатопротекторного воздействия при хроническом эмоционально-болевом стрессе

Изобретение относится к медицине, а именно к гепатологии, и может быть использовано для гепатопротекторного воздействия в условиях хронического эмоционально-болевого стресса. Сущность изобретения заключается в применении дельта-сон индуцирующего пептида, имеющего формулу...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002537032
Дата охранного документа: 27.12.2014
27.12.2014
№216.013.1641

Способ определения n-(4-нитро-2-феноксифенил)-метансульфонамида в биологическом материале

Изобретение относится к биологии и токсикологической химии и может быть использовано в практике химико-токсикологических, экспертно-криминалистических и клинических лабораторий. Способ осуществляется следующим образом: биологический объект, содержащий...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002537121
Дата охранного документа: 27.12.2014
27.12.2014
№216.013.1645

Способ определения замещенных 2-метоксигидроксибензола в биологическом материале

Изобретение относится к биологии и токсикологической химии и может быть использовано в практике санэпидстанций, химико-токсикологических, экспертно-криминалистических и ветеринарных лабо-раторий. Биологический материал, содержащий замещенное 2-метоксигидроксбензола, дважды (каждый раз в течение...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002537125
Дата охранного документа: 27.12.2014
Showing 1-10 of 64 items.
20.02.2014
№216.012.a399

Способ фармакологической коррекции ишемии скелетной мышцы l-норвалином

Изобретение относится к экспериментальной фармакологии и хирургии и может быть использовано для коррекции ишемии скелетной мышцы. Для этого крысам моделируют ишемию мышц голени на вторые сутки проводимого эксперимента. Для коррекции ишемии с первых суток эксперимента внутрижелудочно вводят...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002507596
Дата охранного документа: 20.02.2014
20.04.2014
№216.012.bb13

Способ увеличения выживаемости кожного лоскута в условиях редуцированного кровообращения l-норвалином

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии, и может быть использовано для коррекции ишемии в условиях редуцированного кровообращения. Для этого лабораторным животным моделируют кожный лоскут на вторые сутки эксперимента. L-норвалин вводят внутрижелудочно в...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002513619
Дата охранного документа: 20.04.2014
27.05.2014
№216.012.c851

Способ профилактики воспалительных осложнений при абдоминальном родоразрешении

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству, и может быть использовано для профилактики воспалительных осложнений при абдоминальном родоразрешении. Для этого используют направленный транспорт антибактериального препарата в зону воспаления путем однократного применения...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002517047
Дата охранного документа: 27.05.2014
20.09.2014
№216.012.f5bc

Применение пептида актг (4-7)-пгп гепатопротекторного воздействия

Изобретение относится к биотехнологии, конкретно к терапевтическим пептидам, и может быть использовано в медицине. В качестве гепатопротектора применяют пептид АКТГ (4-7)-ПГП (Семакс), имеющий формулу Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro. Применения указанного пептида с целью гепатопротекции в условиях...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002528741
Дата охранного документа: 20.09.2014
27.09.2014
№216.012.f852

Способ анатомо-хирургического моделирования наружной ротационной контрактуры тазобедренного сустава в эксперименте

Изобретение относится к медицине, а именно к ортопедии, биомеханике, оперативной хирургии и топографической анатомии, анатомии, антропологии. На невостребованном трупе выполняют задний доступ к тазобедренному суставу типа Кохера-Лангенбека. Отсепаровывают наружные ротаторы бедра от места их...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002529407
Дата охранного документа: 27.09.2014
20.12.2014
№216.013.105e

Способ ультразвуковой диагностики воспалительных изменений печени и селезенки при туберкулезе у детей

Группа изобретений относится к медицине, а именно к лучевой диагностике, фтизиатрии и педиатрии. В первом варианте изобретения выполняют ультразвуковое исследование печени. Сопоставляют измеренный косопоперечный размер правой доли печени с индивидуальным нормативным значением, вычисляемым по...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002535613
Дата охранного документа: 20.12.2014
27.12.2014
№216.013.15e8

Применение дельта-сон индуцирующего пептида для гепатопротекторного воздействия при хроническом эмоционально-болевом стрессе

Изобретение относится к медицине, а именно к гепатологии, и может быть использовано для гепатопротекторного воздействия в условиях хронического эмоционально-болевого стресса. Сущность изобретения заключается в применении дельта-сон индуцирующего пептида, имеющего формулу...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002537032
Дата охранного документа: 27.12.2014
27.12.2014
№216.013.1641

Способ определения n-(4-нитро-2-феноксифенил)-метансульфонамида в биологическом материале

Изобретение относится к биологии и токсикологической химии и может быть использовано в практике химико-токсикологических, экспертно-криминалистических и клинических лабораторий. Способ осуществляется следующим образом: биологический объект, содержащий...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002537121
Дата охранного документа: 27.12.2014
27.12.2014
№216.013.1645

Способ определения замещенных 2-метоксигидроксибензола в биологическом материале

Изобретение относится к биологии и токсикологической химии и может быть использовано в практике санэпидстанций, химико-токсикологических, экспертно-криминалистических и ветеринарных лабо-раторий. Биологический материал, содержащий замещенное 2-метоксигидроксбензола, дважды (каждый раз в течение...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002537125
Дата охранного документа: 27.12.2014
27.12.2014
№216.013.167b

Способ определения прокаина в плазме крови

Изобретение относится к биологии, токсикологической и аналитической химии, а именно к способам определения прокаина в плазме крови. В плазму крови, содержащую прокаин, вводят фторид натрия для создания концентрации 10 мг/мл, полученную смесь обрабатывают ацетоном, извлечение отделяют от...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002537179
Дата охранного документа: 27.12.2014
+ добавить свой РИД