×
20.02.2015
216.013.2ac6

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ ФАКТОРА D КОМПЛЕМЕНТА ЧЕЛОВЕКА

Вид РИД

Изобретение

Юридическая информация Свернуть Развернуть
Краткое описание РИД Свернуть Развернуть
Аннотация: Изобретение относится к области медицинской иммунологии и предназначено для определения функциональной активности фактора D комплемента человека по его действию на инфузории в бескальциевой среде, содержащей ионы магния. В измерительные ячейки прибора для автоматизированного подсчета числа живых инфузорий вносят суспензию клеток Tetrahymena pyriformis, реагент RD, представляющий собой пул не менее 10 сывороток здоровых доноров, лишенный фактора D с сохранением активностей остальных компонентов и факторов комплемента в результате хроматографической сорбции фактора D на колонке с CM-сефадексом C-50, и испытуемый образец, содержащий определяемый фактор D, с последующим определением числа живых клеток в каждую минуту. Совпадение динамики изменения числа живых клеток во времени для испытуемого образца и контрольного, представляющего пул 10 сывороток здоровых доноров, предполагает равенство активностей фактора D комплемента в этих образцах. Изобретение обеспечивает эффективный способ расчета функциональной активности комплемента, пригодный при диагностике ряда заболеваний. 1 з.п. ф-лы, 1 ил., 1 пр.
Реферат Свернуть Развернуть

Изобретение относится к медицинской иммунологии, а именно к способам определения функциональной активности комплемента в сыворотке крови организма при диагностике ряда заболеваний. Активация комплемента может происходить по трем путям: классическим, альтернативным и лектиновым. Первые компоненты и факторы, участвующие в запуске соответствующего пути активации - разные, а мембраноатакующий концевой комплекс для всех путей один и тот же. Различаются также и условия среды: для запуска классического и лектинового пути требуются ионы кальция и магния. А для альтернативного пути - только магния. Главными отличительными факторами запуска активации по альтернативному пути являются факторы B и D. Эти факторы в других путях комплемента не участвуют.

Традиционный способ определения функциональной активности компонентов комплемента человека классического пути активации основан на способности комплемента лизировать в присутствии ионов кальция и магния клетки-мишени, каковыми являются эритроциты барана, сенсибилизированные кроличьими антителами к поверхностным антигенам эритроцитов. Для определения функциональной активности отдельных факторов альтернативного пути комплемента в тестируемом образце исследуют гемолиз эритроцитов кролика в присутствии ионов магния в бескальциевой среде, а также в присутствии реагента RX (где X - тестируемый фактор: B или D), характеризующийся отсутствием тестируемого фактора, но избыточным содержанием остальных компонентов, необходимых для осуществления лизиса. Размер фиксируемого гемолиза в этом случае определяется количеством функционально активного тестируемого фактора, находящегося в образце [1]. Для определения функциональной активности фактора D в качестве реагента RD используется пул не менее 10 сывороток здоровых доноров, лишенный фактора D с сохранением активностей остальных компонентов и факторов комплемента в результате хроматографической сорбции фактора D на колонке с CM-сефадексом С-50 [1].

Недостатком гемолитического метода является необходимость наличия свежих эритроцитов кролика, что сопряжено с необходимостью содержания животного, а также зачастую индивидуального подбора подходящего животного-донора.

Преодолеть эти недостатки можно, используя другую мишень для тестирования активности комплемента. Из литературы известно [2], что комплемент морской свинки способен обездвиживать инфузории Tetrahymena pyriformis. В работе, однако, не было изучено, какой из наблюдаемых эффектов: набухание микроорганизма, обездвиживание или дальнейший лизис мог бы послужить в дальнейшем критерием для определения активности комплемента, а также какой из путей активации комплемента участвует в этом процессе. Кроме того, не было известно, можно ли такой подход использовать для определения активности отдельных факторов альтернативного пути активации комплемента. Получение необходимых для осуществления способа клеток Tetrahymena pyriformis существенно удобнее и дешевле, чем получение или приобретение эритроцитов кролика.

Задачей заявленного изобретения является разработка способа определения функциональной активности фактора D комплемента человека с использованием доступной мишени для действия активного комплемента.

Поставленная задача достигается путем разработки способа определения функциональной активности фактора D комплемента человека по измерению его воздействия в присутствии реагента RD на инфузории Tetrahymena pyriformis, с использованием прибора для биологических исследований БиоЛаТ-3 [3]. Было обнаружено, что при действии комплемента на инфузории в бескальциевой среде, специфичной для альтернативного пути, через определенный промежуток времени, зависящий от количества активного комплемента, начинается процесс обездвиживания инфузорий, протекающий со скоростью, также зависящей от количества активного комплемента. Скорость перехода подвижных инфузорий в неподвижные может быть использована для расчета количества функционально активного комплемента.

Способ определения предусматривает внесение в измерительные ячейки прибора суспензии инфузорий в буферном растворе, добавление в ячейки сыворотки крови в необходимом количестве, как источника фактора D, и реагента RD, как источника остальных, кроме фактора D, компонентов комплемента, и автоматический циклический подсчет оставшихся подвижными клеток во времени.

Метод расчета основан на определении константы скорости гибели клеток, которую удобно рассчитывать по тангенсу угла наклона зависимости логарифма числа подвижных клеток от времени в период наблюдаемого падения числа живых клеток. Величина константы скорости падения числа живых клеток, зависящая от количества активного фактора D комплемента, сравнивается с активностью фактора D комплемента в пуле не менее 10 сывороток здоровых людей, что выбирается в качестве стандарта. Тем самым достигается определение функциональной активности фактора D комплемента методом, пригодным для стандартизации.

Техническим результатом заявленного изобретения является разработка способа определения функциональной активности фактора D комплемента человека с использованием доступной мишени для действия комплемента, каковой являются инфузории Tetrahymena pyriformis.

Пример 1. Определение функциональной активности фактора D комплемента человека. В измерительные ячейки прибора БиоЛаТ-3 вносят 200 мкл суспензии приблизительно 800 клеток инфузории Tetrahymena pyriformis в вероналовом буферном растворе, pH 7,4, содержащим 0,05 М NaCl, 0,83 мМ Mg2+ и 3,3 мМ этиленгликоль-бис(β-аминоэтиловый эфир)-N,N,N',N' - тетрауксусную кислоту (ЭГТА), и 100 мкл того же буфера, содержащего от 1 до 6 мкл испытуемой пробы и от 5 до 15 мкл реагента RD, представляющего собой пул не менее 10 сывороток здоровых доноров, лишенный фактора D с сохранением активностей остальных компонентов и факторов комплемента в результате хроматографической сорбции фактора D на колонке с CM-сефадексом С-50 [1]. С помощью прибора БиоЛаТ-3 и совмещенного с ним компьютера определяют число живых клеток в ячейках каждую минуту. На основании динамики падения числа живых клеток во времени рассчитывают константу скорости реакции первого порядка, определяя тангенс угла наклона зависимости логарифма числа подвижных клеток от времени в период наблюдаемого падения числа живых клеток. Калибровочную кривую получают, измеряя падение числа живых клеток во времени для пула сывороток, выбранного в качестве стандарта (рис.1). На рис.1, представлен калибровочный график зависимости константы скорости обездвиживания инфузорий от количества активного фактора D (R2=0.99).

Содержание активного фактора D в стандартной сыворотке принято за 2 мкг/мл [4].

Литература

1. Козлов Л.В., Соляков Л.С. Возможность участия зимогенных форм факторов B и D в активации альтернативного пути системы комплемента. Биоорганическая химия. 1982. Т.8. №3. С.342-348.

2. Sinclair I.J.B. The role of complement in the immune reactions of Paramecium aurelia and Tetrahymena pyriformis. Immunology. 1958. V.1. P.291-299.

3. Черемных Е.Г., Покатаев A.C., Гридунова B.H. Прибор для биологических исследований. Патент РФ 2361913 опубл. 20.07.09. Бюл. №20.

4. Miyata Т., Oda О., Inagi R., Sugiyama S., Miyama A., Maeda K., Nakashima I., Yamanaka N. Molecular and functional identification and purification of complement component factor D from urine of patients with chronic renal failure. Mol. Immunol. 1990. V.27. №7. P.637-644.


СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ ФАКТОРА D КОМПЛЕМЕНТА ЧЕЛОВЕКА
Источник поступления информации: Роспатент

Showing 1-10 of 61 items.
20.02.2013
№216.012.27fc

Способ и набор для иммуноферментного определения функциональной активности с1 ингибитора по способности связываться с igal-протеазой

Группа изобретений относится к медицинской иммунологии, а именно к способу определения функциональной активности компонентов комплемента в сыворотке крови человека при диагностике ряда заболеваний и в биологических препаратах и набору для его осуществления. Способ определения предусматривает:...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002475756
Дата охранного документа: 20.02.2013
20.03.2013
№216.012.3024

Способ и набор для иммуноферментного определения функциональной активности с1 ингибитора по способности связываться с тромбином

Предложенная группа изобретений относится к медицинской иммунологии. Предложены способ и набор для иммуноферментного определения функциональной активности С1 ингибитора по способности связываться с тромбином. Способ определения предусматривает сорбцию в лунках микропанели тромбина, внесение...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002477859
Дата охранного документа: 20.03.2013
27.06.2013
№216.012.50aa

Полинуклеотид, кодирующий мутантную рекомбинантную iga1 протеазу neisseria meningitidis серогруппы в, рекомбинантная плазмидная днк, содержащая указанный полинуклеотид, клетка-хозяин, содержащая указанную плазмидную днк, рекомбинантная iga1 протеаза neisseria memingitidis серогруппы в, способ получения зрелой формы iga1 протеазы

Изобретение относится к области иммунологии и генной инженерии. Предложена ферментативно неактивная IgA1 протеаза с заменой Ser267Ala для применения в качестве компонента поливалентной вакцины, предназначенной для защиты человека от менингококковой инфекции и других микроорганизмов,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002486243
Дата охранного документа: 27.06.2013
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002491331
Дата охранного документа: 27.08.2013
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002491332
Дата охранного документа: 27.08.2013
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002491333
Дата охранного документа: 27.08.2013
27.08.2013
№216.012.6462

Консорциум бифидобактерий и лактобацилл, используемый для приготовления бактерийных препаратов и биологически активных добавок, предназначенных для коррекции микрофлоры детей в возрасте от 3-х до 14 лет, способ его получения, биологически активная добавка к пище и бактериальный препарат для лечения дисбиотических состояний желудочно-кишечного тракта в возрасте от 3-х до 14 лет

Консорциум бифидобактерий и лактобацилл содержит Bifidobacterium bifidum 19, В.bifidum 791, В.longum B379M, В.longum OV-20, В.breve OV-12, L.helveticus КЗШ24, L.helveticus NK-1, L.casei KHM-12, используется для приготовления бактерийных препаратов, биологически активных добавок, предназначенных...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002491335
Дата охранного документа: 27.08.2013
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002491336
Дата охранного документа: 27.08.2013
10.10.2013
№216.012.7323

Способ молекулярно-генетического типирования штаммов bordetella pertussis

Изобретение относится к области медицинской микробиологии, а именно к способу молекулярно-генетического типирования штаммов Bordetella pertussis. Способ включает выделение ДНК из штаммов B.pertussis, проведение полимеразной цепной реакции с одновременным введением специфических праймеров PF-PR...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002495132
Дата охранного документа: 10.10.2013
10.10.2013
№216.012.744f

Способ и набор для иммуноферментного определения функциональной активности компонента с4 комплемента человека

Группа изобретений относится к медицинской иммунологии, а именно к способу определения функциональной активности компонентов комплемента в сыворотке крови человека при диагностике ряда заболеваний и в биологических препаратах и набору для ее определения. Сущность способа в том, что в лунках...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002495432
Дата охранного документа: 10.10.2013
Showing 1-10 of 53 items.
20.02.2013
№216.012.27fc

Способ и набор для иммуноферментного определения функциональной активности с1 ингибитора по способности связываться с igal-протеазой

Группа изобретений относится к медицинской иммунологии, а именно к способу определения функциональной активности компонентов комплемента в сыворотке крови человека при диагностике ряда заболеваний и в биологических препаратах и набору для его осуществления. Способ определения предусматривает:...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002475756
Дата охранного документа: 20.02.2013
20.03.2013
№216.012.3024

Способ и набор для иммуноферментного определения функциональной активности с1 ингибитора по способности связываться с тромбином

Предложенная группа изобретений относится к медицинской иммунологии. Предложены способ и набор для иммуноферментного определения функциональной активности С1 ингибитора по способности связываться с тромбином. Способ определения предусматривает сорбцию в лунках микропанели тромбина, внесение...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002477859
Дата охранного документа: 20.03.2013
27.06.2013
№216.012.50aa

Полинуклеотид, кодирующий мутантную рекомбинантную iga1 протеазу neisseria meningitidis серогруппы в, рекомбинантная плазмидная днк, содержащая указанный полинуклеотид, клетка-хозяин, содержащая указанную плазмидную днк, рекомбинантная iga1 протеаза neisseria memingitidis серогруппы в, способ получения зрелой формы iga1 протеазы

Изобретение относится к области иммунологии и генной инженерии. Предложена ферментативно неактивная IgA1 протеаза с заменой Ser267Ala для применения в качестве компонента поливалентной вакцины, предназначенной для защиты человека от менингококковой инфекции и других микроорганизмов,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002486243
Дата охранного документа: 27.06.2013
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002491331
Дата охранного документа: 27.08.2013
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002491332
Дата охранного документа: 27.08.2013
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002491333
Дата охранного документа: 27.08.2013
27.08.2013
№216.012.6462

Консорциум бифидобактерий и лактобацилл, используемый для приготовления бактерийных препаратов и биологически активных добавок, предназначенных для коррекции микрофлоры детей в возрасте от 3-х до 14 лет, способ его получения, биологически активная добавка к пище и бактериальный препарат для лечения дисбиотических состояний желудочно-кишечного тракта в возрасте от 3-х до 14 лет

Консорциум бифидобактерий и лактобацилл содержит Bifidobacterium bifidum 19, В.bifidum 791, В.longum B379M, В.longum OV-20, В.breve OV-12, L.helveticus КЗШ24, L.helveticus NK-1, L.casei KHM-12, используется для приготовления бактерийных препаратов, биологически активных добавок, предназначенных...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002491335
Дата охранного документа: 27.08.2013
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002491336
Дата охранного документа: 27.08.2013
10.10.2013
№216.012.7323

Способ молекулярно-генетического типирования штаммов bordetella pertussis

Изобретение относится к области медицинской микробиологии, а именно к способу молекулярно-генетического типирования штаммов Bordetella pertussis. Способ включает выделение ДНК из штаммов B.pertussis, проведение полимеразной цепной реакции с одновременным введением специфических праймеров PF-PR...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002495132
Дата охранного документа: 10.10.2013
10.10.2013
№216.012.744f

Способ и набор для иммуноферментного определения функциональной активности компонента с4 комплемента человека

Группа изобретений относится к медицинской иммунологии, а именно к способу определения функциональной активности компонентов комплемента в сыворотке крови человека при диагностике ряда заболеваний и в биологических препаратах и набору для ее определения. Сущность способа в том, что в лунках...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002495432
Дата охранного документа: 10.10.2013
+ добавить свой РИД