ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ, ВКЛЮЧАЮЩАЯ АГОНИСТ GLP-1, ИНСУЛИН И МЕТИОНИН

Объектом данной заявки является жидкая композиция, включающая агонист GLP-1 или/и его фармакологически приемлемую соль, инсулин или/и его фармакологически приемлемую соль и, необязательно, по меньшей мере одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество, причем данная композиция отличается тем, что содержит метионин.

Следующим объектом является композиция по изобретению для лечения сахарного диабета. Еще одним объектом является применение композиции по изобретению для получения лекарственного средства для лечения сахарного диабета. Следующим объектом данной заявки является способ получения композиции по изобретению, включающей композицию агониста GLP-1 или/и его фармакологически приемлемой соли с инсулином или/и его фармацевтически приемлемой солью, метионином и, необязательно, по меньшей мере одним фармацевтически приемлемым вспомогательным веществом. Следующим объектом является способ лечения пациентов композицией по изобретению, включающий введение композиции пациентам.

Обычно композиции инсулина и GLP-1-соединений содержат средство, обеспечивающее изотоничность, буферный раствор для доведения значения pH и консервант. Следующим часто применяемым компонентом композиций инсулина является цинк, который образует с инсулином комплекс. Таким образом, достигают замедленного действия инсулина.

WO 2003/02021 (Eli Lilly) относится к жидкой предварительно приготовленной композиции, включающей соединение GLP-1 и базальный инсулин. Одна конкретная композиция содержит Val⁸-GLP-1 или эксендин-4, инсулин NPH, глицерин в качестве средства, обеспечивающего изотоничность, м-крезол, фенол в качестве консерванта и фосфатный буфер с pH 7,6 или 8. Другая композиция содержит эксендин-4 или Val⁸-Glu²²-GLP-1(7-37)OH, инсулин-гларгин (лантус), цинк, глицерин и маннитол в качестве средства, обеспечивающего изотоничность, м-крезол в качестве консерванта, ацетат натрия и цинка, pH 4.

В WO 2004/035623 (Zealand Pharmaceuticals) описана жидкая композиция, включающая стабилизированный эксендин, 50 мМ гистидина, от 100 до 200 мМ сахарозы, маннитол или другой приемлемый сахар, 20 мМ метионина, 20 мМ аспаргин-глютамина или Asp с pH 5,3. Стабилизации достигают определенной модификацией аминокислотных остатков эксендина-4(1-39), например, в положениях Gln13, Met14, Trp25 или Asn28. Данная композиция не содержит инсулина.

В WO 2005/046716 (Novo Nordisk) описывают жидкую композицию, которая содержит лираглютид и инсулин аспарт, буферный раствор с pH 7,7, полоксамер 188 в качестве поверхностно-активного вещества, фенол, пропиленгликоль и необязательно цинк. Без полоксамера 188 данная композиция является нестабильной. Стабилизации можно достичь с помощью полисорбата 20.

WO 2006/029634 (Novo Nordisk) относится к жидкой фармацевтической композиции, которая содержит инсулинотропный пептид (Агонист GLP-1), инсулиновый пептид и лиганд His^B10 (лиганд His в положении 10 В-цепи инсулина). Композиция может в качестве ПАВ содержать полисорбат 20 или полоксамер 188. Конкретная описанная в данном документе композиция содержала инсулин человека или B28-Asp-инсулин человека (инсулин аспарт), лираглютид (агонист GLP-1), глицерин в качестве средства, обеспечивающего изотоничность, ацетат цинка с pH 7,4 или 7,9. В зависимости от количества применяемого инсулина или лираглютида данная композиция была частично нестабильна уже после 15 дней хранения при комнатной температуре. Стабильности данной композиции достигали добавлением лиганда His^B10. Следующие композиции состояли из лираглютида, инсулина аспарта или детемира, пропиленгликоля, фенола и фосфатного буфера, pH 7,7. Данные композиции практически сразу были нестабильными. Добавление полоксамера 188 или полисорбата 20 и лиганда His^B10 приводило к стабилизации.

В WO 2006/051103 (Novo Nordisk) описана жидкая композиция, которая содержит детемир (базальный инсулин), лираглютид (соединение GLP-1) и полоксамер 188 или полисорбат 20 в качестве ПАВ. Дополнительно содержатся фенол, NaCl, пропиленгликоль, ацетат цинка и натрий-фосфатный или глицилглициновый буфер (pH 7,7). В некоторых композициях содержится м-крезол. Данные композиции можно стабилизировать добавлением полоксамера 188 или полисорбата 20.

WO 2008/124522 (Biodel) относится к композициям, которые содержат инсулин, цинк-халатирующий агент (например, EDTA или EGTA) и аналог GLP-1.

Во всем мире около 120 млн человек страдают сахарным диабетом. Среди них примерно 12 млн диабетиков I типа, для которых замещение недостающей эндокринной секреции инсулина является в настоящее время единственной возможной терапией. Заболевшие нуждаются пожизненно, как правило, несколько раз в день в инъекциях инсулина. В противоположность I типу диабета, при диабете II типа не обязательно существует недостаток инсулина, однако во множестве случаев, прежде всего в прогрессирующей стадии, лечение инсулином необязательно в комбинации с оральными антидиабетическими средствами рассматривают как самую благоприятную форму терапии.

У здорового человека высвобождение инсулина поджелудочной железой строго связано с концентрацией глюкозы в крови. Повышенный уровень глюкозы в крови, который образуется после еды, вскоре компенсируется соответствующим повышением секреции инсулина. В состоянии натощак уровень инсулина падает до самого низкого значения, которого хватает, чтобы обеспечивать непрерывное снабжение чувствительных к инсулину органов и тканей глюкозой и поддерживать выработку глюкозы в печени ночью на низком уровне. Возмещением физиологической секреции инсулина экзогенным, в большинстве случаев подкожным введением инсулина, как правило, не достигают вышеописанного качества физиологического регулирования уровня глюкозы в крови. Часто доходит до бесконтрольного повышения или понижения уровня глюкозы в крови, которые могут вызывать угрозу для жизни в самых тяжелых формах. Однако наряду с этим повышенный в течение многих лет уровень глюкозы в крови без первоначальных симптомов также представляет значительный риск для здоровья. Крупномасштабное DCCT-исследование в США (The Diabetes Control and Complications Trial Research Group (1993) N. Engl. J. Med. 329, 977-986) однозначно подтвердило, что хронически повышенный уровень глюкозы в крови в значительной мере отвечает за развитие поздних осложнении диабета. Поздние осложнения диабета представляют собой микро- и макрососудистые повреждения, которые проявляют себя при известных обстоятельствах как ретинопатия, нефропатия или невропатия и могут приводить к потере зрения, почечной недостаточности, а также к потере конечностей и, кроме того, сопровождаются повышенным риском для сердца и связанными с нарушением кровообращения болезнями. Из этого следует, что улучшение лечения диабета должно быть нацелено в первую очередь на то, чтобы удерживать уровень глюкозы в крови по возможности ближе к физиологическому диапазону. После программы усиленного инсулинового лечения вышеуказанной цели необходимо достигать неоднократными ежедневными инъекциями быстро- и замедленно действующих препаратов инсулина. Быстродействующие формы принимают перед приемом пищи для того, чтобы выравнивать возникающий после приема пищи подъем уровня глюкозы в крови. Замедленно действующий базальный инсулин должен обеспечивать основное снабжение инсулином, в частности, ночью для исключения гипогликемии.

Инсулин представляет собой полипептид из 51 аминокислоты, которые распределены на 2 аминокислотных цепи: цепь A из 21 аминокислоты и цепь B из 30 аминокислот. Цепи связаны друг с другом 2-мя дисульфидными мостиками. Препараты инсулина много лет применяют для лечения диабета. При этом применяют инсулин не только природного происхождения, а в последнее время также производные инсулина и его аналоги.

Аналоги инсулина представляют собой аналоги инсулина природного происхождения, а именно инсулина человека или инсулина животных, которые отличаются от, соответственно, в остальном такого же инсулина природного происхождения заменой по меньшей мере одного аминокислотного остатка природного происхождения остатком другой аминокислоты и/или добавлением/удалением по меньшей мере одного аминокислотного остатка. При этом речь может идти также об аминокислотах, которые не являются природными.

Производные инсулина представляют собой производные инсулина природного происхождения или аналоги инсулина, которые получены химическим модифицированием. Химическое модифицирование может состоять, например, в добавлении одной или нескольких определенных химических групп к одной или нескольким аминокислотам. Как привило производные инсулина и аналоги инсулина оказывают по сравнению с человеческим инсулином немного измененное действие.

Аналоги инсулина с ускоренным наступлением действия описаны в EP 0214826, EP 0375437 и EP 0678522. EP 0124826 относится к замещению B27 и B28. EP 0678522 описывает аналоги инсулина, которые в положении B29 имеют различные аминокислоты, предпочтительно пролин, но не глютаминовую кислоту. EP 0375437 охватывает аналоги инсулина с лизином или аргинином в B28, которые опционально могут быть модифицированы в B3 и/или A21.

В EP 0419504 описаны аналоги инсулина, которые защищены от химической модификации, в которых заменены аспарагин в B3 и по меньшей мере одна дополнительная аминокислота в положениях A5, A15, A18 или A21.

В WO 92/00321 описаны аналоги инсулина, у которых по меньшей мере одна аминокислота в положениях B1-B6 заменена лизином или аргинином. Данные инсулины имеют согласно WO 92/00321 продленное действие. Замедленное действие также имеют описанные в EP-A 0368187 аналоги инсулина.

Имеющиеся в продаже препараты инсулина из инсулина природного происхождения для инсулин-заместительной терапии различаются в происхождении инсулина (например, инсулин крупного рогатого скота, инсулин свиньи, инсулин человека), а также составом, что может оказывать влияние на профиль действия (начало действия и время воздействия). Благодаря комбинации различных препаратов инсулина можно достигать различных профилей действия и устанавливать как можно более физиологические значения сахара в крови. В настоящее время технология рекомбинантных ДНК делает возможным получение данных модифицированных инсулинов. К ним причисляют инсулин гларгин (Gly(A21)-Arg(B31)-Arg(B32)-инсулин человека, лантус) с длительным временем воздействия. Инсулин гларгин вводят в виде кислого чистого раствора, и затем он вследствие его свойств растворения в физиологической области pH выпадает в подкожной ткани в виде стабильных ассоциатов гексамеров. Инсулин гларгин вводится один раз в день и отличается от других инсулинов длительного действия равномерным профилем в жидкой фазе и связанным с этим уменьшением опасности ночных гипогликемий (Schubert-Zsilavecz et al., 2:125-130(2001)).

Специальный препарат инсулина гларгина, который приводит к удлиненному времени воздействия, отличается тем, что представляет собой прозрачный раствор с кислым значением рН.

Эксендины представляют собой группу пептидов, которые могут снижать концентрацию сахара в крови. Эксендины имеют схожую последовательность с GLP-1(7-36) (53%, Goke et al. J. Biol Chem 268, 19650-55). Эксендин-3 и эксендин-4 стимулируют подъем выработки cAMP в клетках ацинуса поджелудочной железы морских свинок посредством взаимодействия с рецепторами эксендина (Raufman, 1996, Reg. Peptides 61:1-18). Эксендин-3 в противоположность к эксендину-4 вызывает подъем высвобождения амилазы в клетках ацинуса поджелудочной железы. Эксендины действуют как агонисты GLP-1.

Глюкагоноподобный пептид 1 (GLP-1) представляет собой гормон внутренней секреции, который повышает инсулиновый ответ после орального приема глюкозы или жиров. В общем GLP-1 снижает концентрацию глюкагона, замедляет опорожнение желудка, стимулирует биосинтез про-инсулина, повышает чувствительность к инсулину и стимулирует независимый от инсулина биосинтез гликогена (Holst (1999), Curr. Med. Chem 6:1005, Nauck et al. (1997) Exp Clin Endocrinol Diabetes 105:187, Lopez-Delgado et al. (1998) Endocrinology 139:2811). GLP-1 человека имеет 37 остатков аминокислот (Heinrich et al., Endocrinol. 115:2176 (1984), Uttenthal et al., J Clin Endocrinol Metabol (1985) 61:472). Активные фрагменты GLP-1 включают GLP-1(7-36) и GLP-1(7-37).

Эксендин-3, эксендин-4 и агонисты эксендина предлагают для лечения сахарного диабета и предупреждения гипергликемии, при этом уменьшаются подвижность и опорожнение желудка (US 5424286 и WO 98/05351). Аналоги эксендина могут отличаться замещенными аминокислотами и/или оканчивающимися C-обрывами природной последовательности эксендина-4. Подобные аналоги эксендина описаны в WO 99/07404, WO 99/25727 и WO 99/25728.

Твердофазный синтез AVE0010 описан в WO 01/04156 A1. AVE0010 имеет последовательность: desPro³⁶эксендин-4(1-39)-Lys₆-NH₂. Данное вещество обнародовано в WO 01/04156 как SEQ ID NO:93:

H-G-E-G-T-F-T-S-D-L-S-K-Q-M-E-E-E-A-V-R-L-F-I-E-W-L-K-N-G-G-P-S-S-G-A-P-P-S-K-K-K-K-K-K-NH₂ (SEQ ID NO:1).

Эксендин-4 (39 AS) имеет последовательность:

H-G-E-G-T-F-T-S-D-L-S-K-Q-M-E-E-E-A-V-R-L-F-I-E-W-L-K-N-G-G-P-S-S-G-A-P-P-P-S-NH₂ (SEQ ID NO:2).

Эксендин-3 имеет последовательность (J. Bio. Chem., 267, 1992, 7402-7405):

H-His-Ser-Asp-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Lys-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-NH₂ (SEQ ID NO: 3).

GLP-1 имеет последовательность:

H-A-E-G-T-F-T-S-D-V-S-S-Y-L-E-G-Q-A-A-K-E-F-I-A-W-L-V-K-G-R-NH₂ (SEQ ID NO: 4).

Задача данного изобретения состоит в том, чтобы повысить стабильность жидких композиций, включающих агонист GLP-1 и инсулин. В частности, необходимо улучшить физическую и химическую целостность. Данную задачу решают с помощью того, что агонист GLP-1 и инсулин комбинируют с метионином.

Было обнаружено, что метионин может улучшать стабильность при хранении композиций, включающих агонист GLP-1, такой как AVE0010, и инсулин, такой как инсулин гларгин. Метионин не оказывает влияния на физическую целостность данных композиций.

Стабильность фармацевтически эффективных полипептидов может ухудшаться по различным причинам. К данным причинам принадлежат влияние pH, температуры, света и определенных компонентов.

В контексте данного изобретения было обнаружено, что ряд общепринятых компонентов композиций инсулина или композиций агониста GLP-1 отрицательно сказываются на химической или/и физической целостности и стабильности при хранении композиций, которые содержат инсулин и агонист GLP-1. Данными компонентами являются, например, ацетат, полисорбат 20, полисорбат 80, полоксамер 188, хлорид бензалкония и лизин. Поэтому композиции по изобретению предпочтительно не содержат указанных компонентов.

Объектом данного изобретения является жидкая композиция, включающая агонист GLP-1 или/и его фармакологически приемлемую соль, инсулин или/и его фармакологически приемлемую соль и, необязательно, по меньшей мере одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество, причем данная композиция отличается тем, что содержит метионин.

Композиция по изобретению содержит метионин предпочтительно в количестве от 0,5 мг/мл до 20 мг/мл, более предпочтительно в количестве от 1 мг/мл до 5 мг/мл, особенно предпочтительно в количестве 3,0 мг/мл. Метионин может применяться в D-форме. Также может применяться метионин в L-форме. Также может применяться смесь D- и L-формы в любых пропорциях.

В частности, композиция по изобретению не содержит ПАВ, такие как полиолы, частичные сложные и простые эфиры и сложные и простые эфиры жирных кислот и многоатомных спиртов, таких как глицерин и сорбитол. Композиции по изобретению, в частности, не содержат частичных сложных и простых эфиров и сложных и простых эфиров жирных кислот и глицерина и сорбитола, выбранных из группы, включающей Span^®, Tween^®, Myrj^®, Brij^®, Cremophor®. Далее, композиции не содержат, в частности, полиолов, выбранных из группы, включающей полипропиленгликоли, полиэтиленгликоли, полоксамеры, плюроники, тетроники. В частности, композиции по изобретению свободны от по меньшей мере полисорбата и полоксамера.

В частности, композиция по изобретению по существу не содержит, предпочтительно совсем не содержит полисорбат, такой как, например, полисорбат 20.

В частности, композиция по изобретению по существу не содержит, предпочтительно совсем не содержит полисорбат 80.

В частности, композиция по изобретению по существу не содержит, предпочтительно совсем не содержит полоксамер, такой как, например полоксамер 188.

В частности, композиция по изобретению по существу не содержит, предпочтительно совсем не содержит хлорид бензалкония.

В частности, композиция по изобретению по существу не содержит, предпочтительно совсем не содержит гистидин.

В частности, композиция по изобретению по существу не содержит, предпочтительно совсем не содержит EDTA, в частности натрий-EDTA.

В частности, композиция по изобретению по существу не содержит, предпочтительно совсем не содержит гистидин и натрий-EDTA.

Композиция по изобретению может содержать одно или несколько веществ, которые обычно применяют для буферизации значения pH (буферные вещества). Примерами подобных буферных веществ являются ацетаты, цитраты и фосфаты. В частности, композиция по изобретению может содержать одно или несколько веществ, которые обычно применяют для буферизации значения pH, в количестве, достаточном в качестве противоиона для агониста GLP-1 или/и инсулина. Композиция по изобретению может содержать одно или несколько буферных веществ, например, каждое в количестве до 1 мг/мл, до 0,5 мг/мл, до 0,1 мг/мл, до 0,05 мг/мл, до 0,02 мг/мл или до 0,01 мг/мл. Композиция по изобретению также может по существу не содержать буферных веществ. Предпочтительно композиция по изобретению не содержит буферных веществ.

Композиция по изобретению может содержать ацетат, например, в количестве до 1 мг/мл, до 0,5 мг/мл, до 0,1 мг/мл, до 0,05 мг/мл, до 0,02 мг/мл или до 0,01 мг/мл. Данное количество, например, является достаточным для того, чтобы быть противоионом для агониста GLP-1. Также композиция по изобретению может по существу не содержать ацетат. Предпочтительно композиция по изобретению не содержит ацетат.

Композиция по изобретению может содержать цитрат, например, в количестве до 1 мг/мл, до 0,5 мг/мл, до 0,1 мг/мл, до 0,05 мг/мл, до 0,02 мг/мл или до 0,01 мг/мл. Данное количество, например, является достаточным для того, чтобы быть противоионом для агониста GLP-1. Также композиция по изобретению по существу не содержит цитрат. Предпочтительно композиция по изобретению не содержит цитрат.

Композиция по изобретению может содержать фосфат, например, в количестве до 1 мг/мл, до 0,5 мг/мл, до 0,1 мг/мл, до 0,05 мг/мл, до 0,02 мг/мл или до 0,01 мг/мл. Данное количество, например, является достаточным для того, чтобы быть противоионом для агониста GLP-1. Также композиция по изобретению по существу не содержит фосфат. Предпочтительно композиция по изобретению не содержит фосфат.

Согласно данному изобретению фармацевтическая композиция может иметь значение pH в кислой или физиологической области. Кислая область pH лежит предпочтительно в интервале pH 1-6,8, pH 3,5-6,8 или pH 3,5-5. Физиологическая область pH лежит предпочтительно в интервале pH 2,5-8,5, более предпочтительно pH от 4,0 до 8,5, еще более предпочтительно pH от 6,0 до 8,5. Особенно предпочтительным является значение pH примерно 4,5. Для доведения значения pH пригодны физиологически безопасные разбавленные кислоты (обычно HCl) или соответственно щелочи (обычно NaOH).

Композиция по изобретению может содержать пригодный консервант. Пригодными консервантами являются, например, фенол, м-крезол, бензиловый спирт и/или сложный эфир п-гидроксибензойной кислоты. Предпочтительным является м-крезол. Однако также можно отказаться от применения консерванта.

Композиция по изобретению может содержать ионы цинка. Концентрация ионов цинка находится предпочтительно в области от 1 мкг/мл до 2 мг/мл, более предпочтительно от 5 мкг до 200 мкг цинка/мл, в частности максимум 0,06 мг/мл, особенно предпочтительно 0,06 мг/мл.

Далее, композиция по изобретению может содержать пригодное средство, обеспечивающее изотоничность. Пригодными являются, например, глицерин, декстроза, лактоза, сорбитол, маннитол, глюкоза, NaCl, соединения кальция или магния, такие как CaCl₂ и т.д. Концентрация глицерина, декстрозы, лактозы, сорбитола, маннитола и глюкозы находится обычно в области от 100-250 мМ, NaCl находится в концентрации до 150 мМ. Предпочтительным является глицерин. В частности, предпочтителен 85% глицерин в концентрации 20,0 мг/мл.

Далее, композиция по изобретению может содержать дополнительные добавки, например соли, которые замедляют высвобождение по меньшей мере одного инсулина. Предпочтительно композиция не содержит данных добавок.

В частности, данная композиция предусмотрена для парентерального введения. Композиция по изобретению предпочтительно представляет собой пригодную для введения инъекцией композицию, более предпочтительно пригодную для подкожных инъекций. В частности, композиция по изобретению пригодна для однократного ежедневного введения.

В частности, композиция по изобретению после хранения в течение 1 месяца, 2 месяцев, 4 месяцев или 8 месяцев при температуре +5°C или 25°C имеет активность по меньшей мере 80%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или по меньшей мере 98% от активности в исходный момент времени.

"Активность" в данной заявке может означать активность инсулина, который применяют в композиции по изобретению. Способы определения активности инсулина известны специалистам.

"Активность" в данной заявке может также означать активность агониста GLP-1, который применяют в композиции по изобретению. Способы определения активности агониста GLP-1 известны специалистам.

Композиция по изобретению, в частности, после хранения в течение 1 месяца, 2 месяцев, 4 месяцев или 6 месяцев имеет химическую целостность. Химическая целостность означает, в частности, то, что после хранения при температуре +5°C, 25°C или 40°C по меньшей мере 80%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или по меньшей мере 98% действующих веществ по отношению к исходному моменту времени находятся по существу в химически неизмененной форме.

Химическая целостность может означать химическую целостность агониста GLP-1. Агонист GLP-1 может содержать остаток метионина (например, в положении 14 в AVE0010). Химическая целостность агониста GLP-1 означает, в частности, то, что предотвращено окисление данного остатка метионина.

Химическая целостность может также означать химическую целостность инсулина.

Предпочтительно химическая целостность означает целостность инсулина и агониста GLP-1.

Композиция по изобретению, в частности, после хранения в течение 1 месяца, 2 месяцев, 4 месяцев или 6 месяцев имеет физическую целостность. Физическая целостность означает, в частности, то, что после хранения при температуре +5°C, 25°C или 40°С по меньшей мере 80%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или по меньшей мере 98% действующих веществ по отношению к исходному моменту времени по существу находятся в физически неизмененной форме.

Физическая целостность может означать физическую целостность агониста GLP-1. Также физическая целостность может означать физическую целостность инсулина. Физическая целостность означает, в частности, то, что агонист GLP-1 или/и инсулин не образуют агрегатов, таких как, например, фибриллы.

Предпочтительно физическая целостность означает физическую целостность инсулина и агониста GLP-1.

Агонист GLP-1 предпочтительно выбирают из группы, состоящей из эксендина-3 и его аналогов и производных, эксендина-4 и его аналогов и производных, при этом агонист GLP-1 более предпочтительно выбирают из группы, состоящей из AVE0010 и эксендина-4.

Эксендин-3, аналоги и производные эксендина-3, эксендин-4 и аналоги и производные эксендина-4 можно найти в WO 01/04156, WO 98/30231, US 5424286, в заявке EP 99610043.4 и в WO 2004/005342. Указанные документы включены в данную работу в виде ссылки. Описанные в указанных документах эксендин-3, эксендин-4 и их аналоги и производные могут быть синтезированы описанными в данной работе способами, причем при необходимости после окончания получения можно производить модификацию.

Последовательности AVE0010 (SEQ ID NO:1), эксендина-4 (SEQ ID NO:2) и эксендина-3 (SEQ ID NO:3) имеют высокую степень соответствия. Последовательности AVE0010 и эксендина-4 идентичны в положениях 1-37. Последовательность 1-39 эксендина-4 в 37 из 39 положений (94%) идентична последовательности эксендина-3 в положениях 48-88. Основываясь на данных последовательностях, специалисты могут приведенные здесь данные положений, которые относятся к определенной последовательности (например, к последовательности AVE0010 или эксендина-4), без затруднений применить к другим последовательностям.

Аналоги и производные эксендина-3 или/и эксендина-4 содержат, в частности, модифицированные последовательности аминокислот. Например, отдельные аминокислоты могут быть удалены (например, desPro36, desPro37, desAsp28, desMet(О)14 в эксендине-4 и соответствующие положения в эксендине-3). Также отдельные положения могут быть заменены (например, Met(O)¹⁴, Trp(О₂)²⁵, IsoAsp²⁸, Asp²⁸Pro³⁸ в эксендине-4 и соответствующие положения в эксендине-3), причем также можно применять неприродные аминокислоты, такие как Met(O) (метионинсульфоксид или метионинсульфон), Trp(О₂) (N-формилкинуренин) или/и IsoAsp (β-аспартат или изоаспартат). Ненатуральные аминокислоты можно без затруднений вводить в последовательность в форме соответствующих аминокислотных структурных элементов.

Далее, могут быть модифицированы C-конец или/и N-конец, например, с помощью дополнительных последовательностей, таких как -(Lys)-, -(Lys)₂-, -(Lys)₃-, -(Lys)₄-, -(Lys)₅-, -(Lys)₆-, -Asn-(Glu)₅-, при этом -(Lys)₄-, -(Lys)₅-, -(Lys)₆-, -Asn-(Glu)₅- являются предпочтительными. Карбоксильную группу C-конца предпочтительно модифицируют в группу амида кислоты (-NH₂). Необязательно модифицирование C-концов или/и N-концов проводят как дополнительную стадию технологического процесса после окончания синтеза.

Фармацевтически приемлемую соль можно получать на следующей стадии технологического процесса после окончания цикла синтеза согласно способу по изобретению. Способы получения фармацевтически приемлемых солей пептидов известны специалистам. Предпочтительной фармацевтически приемлемой солью является ацетат.

Агонист GLP-1 предпочтительно выбирают из группы, состоящей из эксендина-4, аналогов и производных эксендина-4 и их фармакологически приемлемых солей.

Следующим предпочтительным агонистом GLP-1 является аналог эксендина-4, который выбирают из группы, состоящей из:

H-desPro³⁶-эксендин-4-Lys₆-NH₂,

H-des(Pro^36,37)-эксендин-4-Lys₄-NH₂,

H-des(Pro^36,37)-эксендин-4-Lys₅-NH₂ и их фармакологически приемлемых солей.

Следующим предпочтительным агонистом GLP-1 является аналог эксендина-4, который выбирают из группы, состоящей из:

desPro³⁶[Asp²⁸]эксендин-4(1-39),

desPro³⁶[IsoAsp²⁸]эксендин-4(1-39),

desPro³⁶[Met(O)¹⁴,Asp²⁸]эксендин-4(1-39),

desPro36[Met(O)¹⁴,IsoAsp²⁸]эксендин-4(1-39),

desPro³⁶[Trp(O₂)²⁵,Asp²⁸]эксендин-2(1-39),

desPro³⁶[Trp(O₂)²⁵,IsoAsp²⁸]эксендин-2(1-39),

desPro³⁶[Met(O)¹⁴Trp(O₂)²⁵,Asp²⁸]эксендин-4(1-39),

desPro³⁶[Met(O)¹⁴Trp(O₂)²⁵,IsoAsp²⁸]эксендин-4(1-39) и их фармакологически приемлемых солей.

Следующим предпочтительным агонистом GLP-1 является аналог эксендина-4, который выбирают из группы, содержащей аналоги эксендина-4, к С-концам которых, как описано в предыдущей части, присоединен пептид -Lys₆-NH₂.

Следующим предпочтительным агонистом GLP-1 является аналог эксендина-4, который выбирают из группы, состоящей из:

H-(Lys)₆-desPro³⁶[Asp²⁸]эксендин-4(1-39)-Lys₆-NH₂,

desAsp²⁸Pro³⁶,Pro³⁷,Pro³⁸exendin-4(1-39)-NH₂,

H-(Lys)₆-desPro³⁶,Pro³⁷,Pro³⁸[Asp²⁸]эксендин-4(1-39)-NH₂,

H-Asn-(Glu)₅desPro³⁶,Pro³⁷,Pro³⁸[Asp²⁸]эксендин-4(1-39)-NH₂,

desPro³⁶,Pro³⁷,Pro³⁸[Asp²⁸]эксендин-4(1-39)-(Lys)₆-NH₂,

H-(Lys)₆-desPro³⁶,Pro³⁷,Pro³⁸[Asp²⁸]эксендин-4(1-39)-(Lys)₆-NH₂,

H-Asn-(Glu)5-desPro³⁶,Pro³⁷,Pro³⁸[Asp²⁸]эксендин-4(1-39)-(Lys)₆-NH₂,

H-(Lys)₆-desPro³⁶[Trp(O₂)²⁵,Asp²⁸]эксендин-4(1-39)-Lys₆-NH₂,

H-desAsp²⁸,Pro³⁶,Pro³⁷,Pro³⁸[Trp(O₂)²⁵]эксендин-4(1-39)-NH₂,

H-(Lys)₆-desPro³⁶,Pro³⁷,Pro³⁸[Trp(O₂)²⁵,Asp²⁸]эксендин-4(1-39)-NH₂,

H-Asn-(Glu)₅-desPro³⁶,Pro³⁷,Pro³⁸[Trp(O₂)²⁵,Asp²⁸]эксендин-4(1-39)-NH₂,

desPro³⁶,Pro³⁷,Pro³⁸[Trp(О₂)²⁵,Asp²⁸]эксендин-4(1-39)-(Lys)₆-NH₂,

H-(Lys)₆-desPro³⁶,Pro³⁷,Pro³⁸[Trp(O₂)²⁵,Asp²⁸]эксендин-4(1-39)-(Lys)₆-NH₂,

H-Asn-(Glu)₅-desPro³⁶,Pro³⁷,Pro³⁸[Trp(O₂)²⁵,Asp²⁸]эксендин-4(1-39)-(Lys)₆-NH₂,

H-(Lys)₆-desPro³⁶[Met(O)¹⁴,Asp²⁸]эксендин-4(1-39)-Lys₆-NH₂,

desMet(O)¹⁴Asp²⁸Pro³⁶,Pro³⁷,Pro³⁸эксендин-4(1-39)-NH₂,

H-(Lys)₆-desPro³⁶,Pro³⁷,Pro³⁸[Met(O)¹⁴,Asp²⁸]эксендин-4(1-39)-NH₂,

H-Asn-(Glu)₅-desPro³⁶,Pro³⁷,Pro³⁸[Met(O)¹⁴,Asp²⁸]эксендин-4(1-39)-NH₂,

desPro³⁶,Pro³⁷,Pro³⁸[Met(O)¹⁴,Asp²⁸]эксендин-4(1-39)-(Lys)₆-NH₂,

H-(Lys)₆-desPro³⁶,Pro³⁷,Pro³⁸[Met(O)¹⁴,Asp²⁸]эксендин-4(1-39)-Lys₆-NH₂,

H-Asn-(Glu)₅-desPro³⁶,Pro³⁷,Pro³⁸[Met(O)¹⁴,Asp²⁸]эксендин-4(1-39)-(Lys)₆-NH₂,

H-(Lys)₆-desPro³⁶[Met(O)¹⁴,Trp(O₂)²⁵,Asp²⁸]эксендин-4(1-39)-Lys₆-NH₂,

desAsp²⁸Pro³⁶,Pro³⁷,Rro³⁸[Met(O)¹⁴,Trp(O₂)²⁵]эксендин-4(1-39)-NH₂,

H-(Lys)₆-desPro³⁶,Pro³⁷,Pro³⁸[Met(O)¹⁴,Trp(O₂)²⁵,Asp²⁸]эксендин-4(1-39)-NH₂,

H-Asn-(Glu)₅-desPro³⁶,Pro³⁷,Pro³⁸[Met(O)¹⁴,Asp²⁸]эксендин-4(1-39)-NH₂,

desPro³⁶,Pro³⁷,Pro³⁸[Met(O)¹⁴,Trp(O₂)²⁵,Asp²⁸]эксендин-4(1-39)-(Lys)₆-NH₂,

H-(Lys)₆-desPro³⁶,Pro³⁷,Pro³⁸[Met(O)¹⁴,Trp(O₂)²⁵,Asp²⁸]эксендин-4(1-39)-(Lys)₆-NH₂,

4(1-H-Asn-(Glu)₅-desPro³⁶,Pro³⁷,Pro³⁸[Met(O)¹⁴,Trp(O₂)²⁵,Asp²⁸]эксендин-4(1-39)-Lys)₆-NH₂ и их фармакологически приемлемых солей.

Также можно выбирать агонист GLP-1 из GLP-1 и аналогов и производных GLP-1. Следующий предпочтительный агонист GLP-1 выбирают из группы, состоящей из Arg³⁴,Lys²⁶(N^ε(γ-glutamyl(N^α-гексадеканоил)))GLP-1(7-37) [Лираглютид] и его фармакологически приемлемой соли.

Следующим предпочтительным агонистом GLP-1 является AVE0010. AVE0010 имеет последовательность desPro³⁶эксендин-4(1-39)-Lys₆-NH₂ (SEQ ID NO:1). Также предпочтительны фармакологически приемлемые соли AVE0010.

Агонист GLP-1, например AVE0010, применяют, в частности, в количестве от 0,01 мг/мл до 0,5 мг/мл или от 0,05 мг/мл до 1,5 мг/мл.

В данной заявке понятие "инсулин" включает не только немодифицированный инсулин, а также аналоги инсулина, производные инсулина и метаболиты инсулина. Композиции по изобретению включают один или несколько компонентов, независимо друг от друга выбранных из группы, которая состоит из инсулина (например, немодифицированного инсулина), аналогов инсулина, производных инсулина, метаболитов инсулина и любых комбинаций указанных веществ.

По меньшей мере один инсулин может быть независимо выбран из группы, которая состоит из инсулина крупного рогатого скота, его аналогов, производных и метаболитов, инсулина свиньи, его аналогов, производных и метаболитов и инсулина человека, его аналогов, производных и метаболитов. Предпочтительно, по меньшей мере один инсулин независимо выбирают из инсулина человека, его аналогов, производных и метаболитов.

Далее, согласно данному изобретению инсулин можно независимо выбирать из немодифицированных инсулинов, в частности из инсулина крупного рогатого скота, инсулина свиньи и инсулина человека.

По меньшей мере один инсулин может быть независимо выбран из группы, состоящей из инсулина крупного рогатого скота, инсулина свиньи и инсулина человека. Более предпочтительно по меньшей мере один инсулин независимо выбирать из инсулина человека. Согласно данному изобретению инсулин может быть выбран из немодифицированного инсулина, в частности из инсулина крупного рогатого скота, инсулина свиньи и инсулина человека.

Согласно данному изобретению производные инсулина представляют собой производные полученного из натуральных источников инсулина или/и аналоги инсулина, которые получены с помощью химического модифицирования. Химическое модифицирование может, например, состоять в присоединении одной или нескольких определенных химических групп к одной или нескольким аминокислотам.

Аналоги инсулина, которые описаны в EP 0214826, EP 0375437, EP 0678522, EP 0419504, WO 92/00321, EP-A0368187 и W02009/063072, могут быть компонентами композиции по изобретению. Документы EP 0214826, EP 0375437, EP 0678522, EP 0419504, WO 92/00321, EP-A0368187 и WO 2009/063072 включены в данную работу в качестве ссылки.

Согласно данному изобретению предпочтительный аналог инсулина может быть выбран из группы, которая включает Gly(A21)-Arg(B31)-Arg(B32)-инсулин человека (инсулин гларгин), Lys(B3)-Glu(B29)-инсулин человека; Lys^В28Pro^В29инсулин человека (инсулин лизпро), B28Asp-инсулин человека (инсулин аспарт), инсулин человека, у которого пролин в положении B28 заменен Asp, Lys, Leu, Val или Ala и у которого в положении B29 Lys может быть заменен на Pro; AlaB26-инсулин человека; Des(B28-B30)инсулин человека; Des(B27)инсулин человека или B29Lys(ε-тетрадеканоил), des(B30)инсулин человека (инсулин детемир), N^εB29-тетрадеканоил des(B30)инсулин человека, N^εB29-(N^α-(HOOC(CH₂)₁₄CO)-γ-Glu)desB30 инсулин человека, Lys^B29(N^εлитохолил-γ-Glu)-des(B30)инсулин человека, N^εВ29-ω-карбоксипентадеканоил-γ-L-глютаиламид desB3O инсулин человека и N^εВ29-ω-карбоксипентадеканоил-γ-амино-бутаноил des(B30) инсулин человека.

Согласно способу по изобретению предпочтительное производное инсулина может быть выбрано из группы, которая включает B29-N-миристоил-des(B30)инсулин человека, B29-N-пальмитоил-des(B30)инсулин человека, B29-N-миристоил инсулин человека, B29-N-пальмитоил инсулин человека, B28-N-миристоил Lys^B28Pro^B29 инсулин человека, B28-N-пальмитоил-Lys^B28Pro^B29 инсулин человека, B30-N-миристоил-Thr^B29Lys^B30 инсулин человека, B30-N-пальмитоил-Thr^B29Lys^B30 инсулин человека, B29-N-(N-пальмитоил-Y-глютамил)des(B30)инсулин человека, B29-N-(N-литохолил-Y-глютамил)des(B30)инсулин человека, B29-N-(ω-карбоксигептадеканоил)des(B30)инсулин человека и B29-N-(ω-карбоксигептадеканоил)инсулин человека, N^εB29-тетрадеканоил des(B30)инсулин человека, N^εB29-(N^α-(HOOC(CH₂)₁₄CO)-γ-GIu)desB30 инсулин человека, Lys^B29(N^εлитохолил-γ-Glu)des(B30)инсулин человека, N^εB29-ω-карбоксипентадеканоил-γ-L-глютаиламид desB30 инсулин человека и N^εB29-ω-карбоксипентадеканоил-γ-амино-бутаноил des(B30)инсулин человека.

Согласно данному изобретению более предпочтительно производное инсулина выбирают из группы, состоящей из Gly(A21)-Arg(B31)-Arg(B32)-инсулина человека, Lys^В28Pro^В29инсулина человека (инсулин лизпро), B28Asp инсулина человека (инсулин аспарт), B29Lys(ε-тетрадеканоил), desB30 инсулина человека (инсулин детемир).

Композиции по изобретению содержат 60-6000 нмоль/мл, предпочтительно 240-3000 нмоль/мл инсулина, такого как его определяют в данной работе. Концентрация 240-3000 нмоль/мл соответствует в зависимости от применяемого инсулина примерно концентрации 1,4-35 мг/мл или 40-500 единиц/мл.

Одним особенно предпочтительным объектом по изобретению является композиция, такая как описано здесь, включающая по меньшей мере один инсулин, выбранный независимо из Lys^B28Pro^B29 инсулина человека (инсулин лизпро), B28Asp инсулина человека (инсулин аспарт), B29Lys(ε-тетрадеканоил), desB30 инсулина человека (инсулин детемир) и инсулина гларгина (Gly(A21)-Arg(B31)-Arg(B32)-инсулин человека), и включающая AVE0010 или/и его фармакологически приемлемую соль. Следующим особенно предпочтительным объектом является композиция, такая как описано здесь, включающая инсулин гларгин (Gly(A21)-Arg(B31)-Arg(B32)-инсулин человека) и AVE0010 (desPro³⁶эксендин-4(1-39)-Lys₆-NH₂) или/и его фармакологически приемлемую соль. Данные особенно предпочтительные композиции имеют предпочтительно кислый pH 1-6,8, более предпочтительно pH 3,5-6,8, еще более предпочтительно pH 3,5-4,5.

В особом варианте осуществления композиция по изобретению включает следующие компоненты:

(a) desPro³⁶эксендин-4(1-39)-Lys₆-NH₂,

(b) Gly(A21)-Arg(B31)-Arg(B32)-инсулин человека

(c) хлорид цинка,

(d) м-крезол,

(e) L-метионин,

(f) глицерин,

(g) соляная кислота в количестве? необходимом для установления значения pH примерно 4,5,

(h) раствор NaOH в количестве? необходимом для установления значения pH примерно 4,5, и

(i) вода.

В частности? композиция по изобретению состоит из указанных выше компонентов от (a) до (i). При необходимости можно отказаться от применения м-крезола. Тогда, соответственно, композиция по изобретению состоит из компонентов от (a) до (c) и от (e) до (i).

Следующим объектом данного изобретения является комбинация по меньшей мере двух композиций по изобретению. При этом в нее входят первая, вторая композиции и, необязательно, по меньшей мере одна следующая фармацевтическая композиция, каждая из которых содержит инсулин и агонист GLP-1.

Поэтому объектом данного изобретения является комбинация, включающая первую фармацевтическую композицию, вторую фармацевтическую композицию и, необязательно, по меньшей мере одну следующую фармацевтическую композицию, каждая из которых содержит по меньшей мере один инсулин и по меньшей мере один агонист GLP-1, и по меньшей мере один инсулин или/и по меньшей мере один агонист GLP-1 содержатся в различных массовых долях по отношению к общему весу композиций.

В данной заявке выражение «необязательно, по меньшей мере одну следующую фармацевтическую композицию» означает, что комбинация по изобретению наряду с первой и второй фармацевтической композицией может включать еще по меньшей мере одну следующую фармацевтическую композицию. Таким образом, комбинация по изобретению может включать, например, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или больше фармацевтических композиций по изобретению.

Предпочтительными являются комбинации, которые содержат первую и вторую фармацевтические композиции по изобретению.

Также предпочтительными являются комбинации, которые содержат первую, вторую и третью фармацевтические композиции по изобретению. Также предпочтительными являются комбинации, которые содержат первую, вторую, третью и четвертую фармацевтические композиции по изобретению.

Также предпочтительными являются комбинации, которые содержат первую, вторую, третью, четвертую и пятую фармацевтические композиции.

Массовые доли по меньшей мере одного инсулина и по меньшей мере одного агониста GLP-1 в первой фармацевтической композиции, второй фармацевтической композиции и, необязательно, в по меньшей мере одной дополнительной фармацевтической композиции могут быть выбраны таким образом, что фармацевтические композиции имеют различное отношение инсулина к агонисту GLP-1 в пересчете на массовые доли.

При этом первая композиция может иметь наименьшее соотношение, а вторая композиция следующее по величине соотношение. Если имеется по меньшей мере одна следующая композиция, она может иметь следующее по величине соотношение. Если имеется еще одна следующая композиция, она может иметь опять следующее по величине соотношение. Таким образом, композиции от первой до второй и необязательно до следующей композиции имеют возрастающее отношение инсулина к агонисту GLP-1 в пересчете на массовые доли.

Массовую долю одного из двух действующих веществ, то есть по меньшей мере одного инсулина или по меньшей мере одного GLP-агониста, в первой фармацевтической композиции, во второй фармацевтической композиции и необязательно в по меньшей мере одной дополнительной фармацевтической композиции предпочтительно выбирают таким образом, чтобы при введении определенного объема первой, второй или/и по меньшей мере одной дополнительной композиции могла быть введена назначенная доза данного действующего вещества. Особенно предпочтительно данное действующее вещество является по меньшей мере одним инсулином.

Массовую долю другого из двух действующих веществ, то есть по меньшей мере одного инсулина или по меньшей мере одного агониста GLP-1, в первой фармацевтической композиции, во второй фармацевтической композиции и необязательно в по меньшей мере одной следующей фармацевтической композиции предпочтительно выбирают таким образом, чтобы отношение инсулина к агонисту GLP-1 в пересчете на массовые доли возрастало от первой ко второй и необязательно имеющейся следующей композиции. Особенно предпочтительно данным действующим веществом является по меньшей мере один агонист GLP-1.

Кроме того, массовую долю второго из двух действующих веществ в фармацевтических композициях определяют таким образом, чтобы одну из фармацевтических композиций можно было выбирать таким образом, чтобы вводимая доза первого из двух действующих веществ и вводимая доза второго действующего вещества были даны в определенном объеме. Вместе с тем выбирают фармацевтическую композицию, которая содержит желаемое соотношение.

Теоретически фармацевтическая композиция могла бы предоставляться для каждого отдельного терапевтически желаемого соотношения массовых долей по меньшей мере одного инсулина и по меньшей мере одного агониста GLP-1 для того, чтобы достигать оптимальной отвечающей потребностям дозировки для обоих действующих веществ для каждого пациента.

В данном изобретении определенного количества фармацевтических композиций достаточно для того, чтобы охватывать необходимые на практике дозировки для обоих активных веществ. Определенную область дозировки в пределах терапевтически рационального интервала определяют для каждого пациента для каждого из обоих активных веществ. При этом вводимая доза должна для определенного пациента по существу колебаться в пределах данной области дозировки, чтобы не происходило передозировки или недостаточной дозировки.

Так как в первую очередь количество инсулина необходимо подбирать для каждого пациента и точно дозировать, область концентраций агониста GLP-1 способствует тому, что фармацевтическая композиция по изобретению, которая имеет определенное соотношение по меньшей мере одного инсулина и по меньшей мере одного агониста GLP-1, перекрывает терапевтическую область дозировок инсулина одновременно с относящимися к ним синергетическими количествами агониста GLP-1. Соотношение можно выбирать таким образом, чтобы каждой желаемой дозировке инсулина соответствовала дозировка по меньшей мере одного агониста GLP-1, которая находится в пределах желаемой области, например синергетической области. Как было сказано выше, соотношение компонентов в первой, второй и, необязательно, по меньшей мере одной следующей композиции лекарственного средства можно выбирать таким образом, что соотношение возрастает от первой ко второй и необязательно по меньшей мере одной следующей композиции. Если дозировка агониста GLP-1 при желаемой дозировке инсулина одной композиции (например, первой композиции) находится вне (как правило, выше) желаемой области дозировки агониста GLP-1, то выбирают для применения следующую композицию (например, вторую композицию) или следующую композицию с большим отношением по меньшей мере одного инсулина к по меньшей мере одному агонисту GLP-1, в которой количество агониста GLP-1 при желаемой дозировке инсулина находится в желаемой области. Данное соотношение в первой, второй и необязательно имеющейся по меньшей мере одной следующей композиции в комбинации можно выбирать таким образом, что области дозировок инсулина, которые соответствуют желаемым дозировкам по меньшей мере одного агониста GLP-1, примыкают друг к другу или/и перекрывают друг друга. Предпочтительно области перекрывают друг друга. Перекрывание означает, в частности, то, что можно выбрать по меньшей мере две композиции, которые при желаемой дозировке по меньшей мере одного инсулина содержат такое количество по меньшей мере одного агониста GLP-1, которое находится в пределах желаемой области дозировок.

Например, достаточно 3 композиций для того, чтобы подобрать дозу по меньшей мере одного инсулина для индивидуального пациента, выбранную из области от 15 до 80 единиц инсулина, и одновременно дозировать агонист GLP-1 в количестве в пределах области от 10 до 20 мкг (см. Фигуру 4).

Также можно предоставить комбинацию по изобретению, в которой соотношение выбирают таким образом, что каждой желаемой дозировке агониста GLP-1 соответствует дозировка по меньшей мере одного инсулина, которая находится в желаемой области. Далее, соотношение компонентов в первой, второй и, необязательно, по меньшей мере одной следующей композиции лекарственного средства можно выбирать таким образом, что области дозировок агониста GLP-1, которые соответствуют желаемым дозировкам по меньшей мере одного инсулина, примыкают друг к другу или/и перекрывают друг друга. Предпочтительно данные области перекрывают друг друга. Перекрывание в данном контексте означает, в частности, то, что можно выбрать по меньшей мере две композиции, которые при желаемой дозировке по меньшей мере одного агониста GLP-1 содержат такое количество по меньшей мере одного инсулина, которое находится в пределах желаемой области дозировок.

Предпочтительно комбинация по изобретению включает максимально 10 фармацевтических композиций, как описано выше, более предпочтительно максимально 5, максимально 4, максимально 3 или 2 фармацевтические композиции.

Композиции по изобретению могут содержать по меньшей мере один агонист GLP-1 в идентичных или различных массовых долях. Например, могут по меньшей мере две композиции по изобретению содержать по меньшей мере один агонист GLP-1 в по существу идентичных массовых долях.

Предпочтительно, чтобы первая, вторая и необязательно следующая/следующие композиции содержали по меньшей мере один агонист GLP-1 в по существу идентичных массовых долях и по меньшей мере один инсулин в различных массовых долях.

Однако композиции по изобретению могут содержать по меньшей мере один инсулин в идентичных или разных массовых долях. Например, могут по меньшей мере две композиции по изобретению содержать по меньшей мере один инсулин в по существу идентичных массовых долях.

Особенно предпочтительно, чтобы первая, вторая и необязательно следующая/следующие композиции содержали по меньшей мере один инсулин в по существу идентичных массовых долях, а по меньшей мере один агонист GLP-1 в различных массовых долях.

Первая предпочтительная композиция по изобретению включает:

Вторая предпочтительная композиция по изобретению включает:

Третья предпочтительная композиция по изобретению включает:

Четвертая предпочтительная композиция по изобретению включает:

Особенно предпочтительными являются комбинации, включающие по меньшей мере 2, 3 или 4 из приведенных выше первой, второй, третьей и четвертой предпочтительных композиций.

«Примерно» в данной заявке означает, что компоненты могут находиться в количестве, например, в пределах ±10, ±20 или ±30 от указанных числовых значений в композиции или/и комбинации по изобретению; предпочтительно ±10.

Если композиция или комбинация по изобретению включает больше одного инсулина, то данные инсулины выбирают независимо друг от друга.

Если композиция или комбинация по изобретению включает больше одного агониста GLP-1, то данные агонисты GLP-1 выбирают независимо друг от друга.

Комбинацию по изобретению, в частности, предоставляют в качестве лекарственного средства.

Следующим объектом данного изобретения является набор, содержащий комбинацию, включающую по меньшей мере одну, максимально четыре композиции по изобретению, а также необязательно Лантус^®. Набор по изобретению может быть предназначен для применения медицинским персоналом или не специалистами, в частности пациентами самостоятельно или помощниками, например родственниками. В наборе отдельные фармацевтические композиции, которые входят в комбинацию по изобретению, находятся в отдельных упаковках, так что пациент может выбирать композицию, подходящую к текущей потребности, и вводить отвечающее потребности количество. Набор по изобретению включает, например, комбинацию по изобретению в виде набора шприцов, стеклянных ампул или/и стержней, которые содержат по меньшей мере одну композицию по изобретению, необязательно в комбинации с композицией Лантуса^®.

Пригодной упаковкой являются шприцы или стеклянные сосуды с пригодным закрывающим элементом, из которых при необходимости можно извлекать отдельные терапевтически эффективные дозы. Также пригодными являются инъекционные стержни («стержни», «ручки») для введения инсулина, которые включают контейнер (например, патрон), который содержит фармацевтическую композицию по изобретению.

В частности, набор по изобретению может представлять собой инъекционный стержень, состоящий из двух отдельных контейнеров, из которых при необходимости можно извлекать отдельные терапевтические дозы. Также набор может представлять собой шприц с двумя контейнерами, в котором второй контейнер выполнен как резервуар с иглой (резервуар - игла).

В данном изобретении набор предпочтительно состоит из комбинации из первой композиции, которая содержит агонист GLP-1, инсулин, глицерин, хлорид цинка, необязательно м-крезол, L-метионин со значением pH 4,5 в воде, и второй композиции, которая предпочтительно содержит инсулин, глицерин, хлорид цинка и м-крезол со значением pH 4,5 в воде.

Первая композиция предпочтительно имеет следующий состав:

Вторая композиция предпочтительно имеет следующий состав:

Следующим объектом данного изобретения является способ лечения пациентов композицией по изобретению, включающий введение композиции пациентам.

Еще одним следующим объектом данного изобретения является способ лечения пациентов комбинацией по изобретению или набором по изобретению, таким как описано здесь. В частности, данный способ включает введение комбинации по изобретению, включающей первую фармацевтическую композицию, вторую фармацевтическую композицию и, необязательно, по меньшей мере одну следующую фармацевтическую композицию, каждая из которых содержит по меньшей мере один инсулин и по меньшей мере один агонист GLP-1, и по меньшей мере один инсулин или/и по меньшей мере один агонист GLP-1 содержатся в различных массовых долях по отношению к общей массе композиции, при этом способ включает:

(a) выбор дозы по меньшей мере одного инсулина, которую необходимо ввести,

(b) выбор дозы по меньшей мере одного агониста GLP-1, которую необходимо ввести,

(c) выбор композиции из первой, второй и, необязательно, по меньшей мере одной следующей композиции лекарственных средств, которая содержит дозы из (a) и (b) в таких концентрациях, что дозы из (a) и (b) находятся в одном и том же объеме, и

(d) определение и введение количества, которое соответствует дозам из (a) и (b).

Определение доз согласно стадии (a) или/и стадии (b) происходит в соответствии с индивидуальной потребностью пациента. Стадию (c) способа лечения по изобретению можно осуществить с помощью таблицы. Данная таблица может быть частью комбинации по изобретению, лекарственного средства по изобретению или набора по изобретению. Пример 2 содержит пример таблицы по изобретению.

Композиция по изобретению, комбинация по изобретению, лекарственное средство или/и набор по изобретению, в частности, предусмотрены для лечения сахарного диабета, в частности для лечения сахарного диабета I типа или II типа. Следующими возможными показаниями являются симптомы, которые связаны с сахарным диабетом. Предпочтительно композицию по изобретению применяют для регулирования концентрации глюкозы в плазме крови в состояниях натощак, после приема пищи или/и после всасывания, для улучшения переносимости глюкозы, для предотвращения гипогликемии, для предотвращения прекращения функционирования β-клеток поджелудочной железы, для снижения веса или/и для предотвращения увеличения веса.

Следующим объектом данного изобретения является применение композиции по изобретению, комбинации по изобретению или набора по изобретению для изготовления лекарственного средства для лечения сахарного диабета, в частности, I типа или II типа, или/и связанных с ними симптомов, как описано здесь.

Следующим объектом данного изобретения является способ изготовления композиции по изобретению, комбинации по изобретению или/и набора по изобретению, включающих состав агониста GLP-1 или/и его фармакологически приемлемой соли с инсулином или/и его фармацевтически приемлемой солью, метионином и, необязательно, по меньшей мере одним фармацевтически приемлемым вспомогательным веществом.

Следующим объектом данного изобретения является способ изготовления композиции по изобретению, включающей состав агониста GLP-1 или/и его фармакологически приемлемой соли с метионином и, необязательно, по меньшей мере одним фармацевтически приемлемым вспомогательным веществом.

Следующим объектом данного изобретения является применение композиции по изобретению совместно с введением метформина, инсулина гларгина или AVE0010, в частности, в дополнительной терапии к введению метформина, инсулина гларгина или AVE0010.

В частности, композиция содержит desPro³⁶эксендин-4(1-39)-Lys₆-NH₂ (AVE0010) и/или его фармакологически приемлемую соль, инсулин гларгин и/или его фармакологически приемлемую соль.

Особенно предпочтительно дополнительное лечение предпочтительной композицией пациентов с диабетом II типа, который не в достаточной мере контролируем с помощью инсулина гларгина и/или AVE0010. Также это относится к пациентам, которые моложе 50 лет и/или которые имеют индекс массы тела по меньшей мере 30.

В данном изобретении дополнительная терапия включает, в частности, лечение диабета II типа композицией по изобретению в качестве дополнительного к метформину, AVE0010 и/или инсулину гларгину. Композицию по изобретению можно применять с интервалом 24 ч (дозировка один раз в день). Метформин, инсулин гларгин и AVE0010 можно вводить различными способами введения. Метформин можно вводить орально, AVE0010 и инсулин гларгин подкожно.

Пациенты, которых можно лечить с помощью дополнительной терапии по изобретению, имеют HbA1c значение от 7% до 10%. Предпочтительно они имеют возраст от 18 до 50 лет.

Дополнительная терапия по изобретению, в частности, применима для пациентов, которые не могут в достаточной мере контролировать диабет II типа только с помощью метформина, AVE0010 или инсулина гларгина. Предпочтительно данную терапию применяют при недостаточном контроле с помощью инсулина гларгина или AVE0010.

Следующим объектом данного изобретения является применение композиции по изобретению в качестве дополнения к диете для того, чтобы контролировать уровень сахара в крови у пациентов с диабетом II типа, если показано применение инсулина гларгина и AVE0010.

В частности, метформин принимают по меньшей мере 1,0 г/день, предпочтительно по меньшей мере 1,5 г/в день в течение 3 месяцев.

Далее, данное изобретение разъясняется с помощью следующих фигур и примеров.

На фигуре 1 показано содержание окисленного метионина Met(ox) в AVE0010 после 1 месяца хранения при различных температурах относительно исходного момента времени. В рамке приведены значения для эталонных композиций AVE0010 номер 1 и 2.

На фигуре 2 показано содержание посторонних веществ в AVE0010 кроме Met(ox) после 1 месяца хранения при различных температурах относительно исходного момента времени.

В рамке приведены значения для эталонных композиций AVE0010 при 25°С и при 40°С.

На фигуре 3 показано содержание посторонних веществ в инсулине гларгине после 1 месяца хранения при различных температурах относительно исходного момента времени. В узкой рамке приведены значения для эталонной композиции инсулина гларгина при 25°C и при 40°С. В широкой рамке приведены композиции с самым низким содержанием посторонних веществ в AVE0010.

Фигура 4: Концепция «3 ручки покрывают все».

Пример 1

1. Предмет исследования

Испытывали физическую и химическую стабильность композиций, включающих агонист GLP-1 (AVE0010) и инсулин (инсулин гларгин, лантус).

2. Использованные композиции

В исследуемых композициях содержались вещества в следующих концентрациях/количествах.

Если в связи с компонентом композиции указан множитель (например, 1/2, 1/4, 2x, 3x, 5x, как например 1/2 ацетат, 5x лизин, 2x лантус и 3x лантус), то применяют концентрации соответствующих веществ, уменьшенные или увеличенные в указанное количество раз.

3. Способы испытаний

3.1 Физическая стабильность

3.1.1 THT-испытание

Тиофлавин T (THT) специфически связывается с фибриллами белков, что приводит к изменению флуоресценции THT. THT не связывается с AVE0010 или инсулином. Кинетика образования фибрилл может быть измерена в присутствии THT как измерение флуоресценции. Увеличение флуоресценции соответствует образованию фибрилл. Форма кривой позволяет сделать вывод о склонности композиции образовывать фибриллы.

Измерение флуоресценции производили на приборе для измерения флуоресценции Tecan Infinite 200. Для анализа кинетики образования фибрилл применяли микрофотографическое считывающее устройство для высокотемпературной флуоресценции Photomed FluoDia 770. Спектр флуоресценции тиофлавина-T определяли на приборе для измерения флуоресценции Tecan Infinite 200 при 23°C. 900 мкл инсулина смешивали с 10 мкл тиофлавина T (1 мМ в H₂0). Затем смесь распределяли в черный V-образный 96-луночный планшет от фирмы Biozym (100 мкл в каждую ячейку). Флуоресцентное излучение измеряли в интервале от 470 до 600 нм (величина шага 1 нм) после импульса при 450 нм с усилением 100, время накопления 200 мкс, 25 показаний при комнатной температуре.

Кинетику связывания тиофлавина T измеряли на микрофотографическом считывающем устройстве для высокотемпературной флуоресценции Photomed FluoDia 770. Данный инструмент состоит по существу из 50W-кварцевой галогеновой лампы для стимулирования, револьверной головки со светофильтрами для стимулирования и излучения, которая может включать до 4 наборов фильтров, и PMT-детектора. Обогревающая пластина для 96-луночного планшета позволяет достигать очень высокой точности температуры (больше ±0,3°C).

10 мкл раствора тиофлавина T (10,1 мМ в сверхчистой воде) добавляли к 1 мл композиции и легко перемешивали, вращая пробирки несколько раз. Затем смесь распределяли в черный V-образный 96-луночный планшет фирмы Biozym (100 мкл в каждую ячейку, 8 ячеек на каждый образец). Все измерения производили со следующими параметрами:

Число циклов: 181

Фильтр для стимулирования: 450 нм

Интервал: 1 мин

Фильтр для излучения: 486 нм

Время накопления: 20 мс

Контроль температуры: Стандартный режим контроля температуры

Число усреднений: 4

Заданная температура: 70°C

Ослабление: 4

Среднее значение флуоресценции определяли исходя из 8 параллельных измерений.

3.2 Химическая стабильность

Композиции на химическую стабильность испытывали после получения (t0) или после хранения в течение 1 месяца при 4°C, 25°C (60% относительная влажность) и 40°C (75% относительная влажность). Измерение проводили на приборе HPLC (ВЭЖХ) (тип альянс) для водных систем, при этом применяли способ 100%-площади пиков. Для отделения применяли градиент из 0,1% TFA и ацетонитрила в качестве подвижной фазы и C18-кислую обращенную фазу (Jupiter) в качестве твердой фазы. Для анализа композицию обрабатывали раствором ацетата цинка, что приводило к преципитации инсулина гларгина. Преципитат центрифугировали и анализировали только верхний уровень.

Посторонние вещества в инсулине гларгине: количество посторонних веществ определяли с помощью HPLC (водные сиситемы), при этом применяли способ 100%-площади пика. Для отделения применяли в качестве подвижной фазы буферизованный раствор фосфата натрия (pH 2,5) с градиентом NaCl и ацетонитрила. В качестве неподвижной фазы применяли C18-кислую обращенную фазу (Supersher).

4. Обобщение экспериментальных данных физической стабильности.

5. THT-испытание

Метионин не имеет влияния на склонность к образованию фибрилл.

Композиции имели значение флуоресценции как у эталонных композиций (номер 2 и 4). При значениях меньше примерно 6000 склонность к образованию фибрилл отсутствует.

Если AVE0010, лантус и метионин комбинируют с ацетатным буферным раствором с полисорбатом 20 или без него при pH 4, существует высокая склонность к образованию фибрилл:

Значения для композиций 13 и 14 находятся явно выше порога склонности к образованию фибрилл.

6.1 Результаты

Полисорбат 20 и Полисорбат 80 могут приводить к помутнению, которое может быть обнаружено в испытании при двойном преломлении света. Следовательно, оба данных вещества могут приводить к физической нестабильности композиций AVE0010 и инсулина. Добавление метионина не приводит к физической нестабильности.

7. Химическая стабильность

7.1 Стабильность в момент времени t0

Композиции, которые содержат метионин (с и без ацетата натрия), имеют самое низкое содержание посторонних веществ (в сумме примерно от 1,2 до 1,5%). Следующие композиции имеют низкое содержание посторонних веществ.

8 Состав лантуса, AVE0010, метионин, pH 4

9 Состав лантуса, AVE0010, 1/2 ацетатного буферного раствора, метионин, pH 4

11 Состав лантуса, AVE0010, полисорбат 20, метионин, pH 4

13 Состав лантуса, AVE0010, 1/2 ацетатного буферного раствора, Полисорбат 20, метионин, pH 4

14 Состав лантуса, AVE0010, ацетатный буферный раствор, полисорбат 20, метионин, pH 4

25 Состав лантуса, AVE0010, метионин, pH 4,5

26 Состав лантуса, AVE0010, 1/2 ацетатного буферного раствора, метионин, pH 4,5

28 Состав лантуса, AVE0010, полисорбат 20, метионин, pH 4,5

30 Состав лантуса, AVE0010, 1/2 ацетатного буферного раствора, полисорбат 20, метионин, pH 4,5

31 Состав лантуса, AVE0010, ацетатный буферный раствор, полисорбат 20, метионин, pH 4,5

Композиции, которые не содержат метионин, показали высокое содержание посторонних веществ.

Полисорбат 20 не имеет отрицательного влияния на химическую стабильность композиции.

Ацетатный буферный раствор не имеет отрицательного влияния на химическую стабильность, если его комбинируют с метионином и полисорбатом 20.

Если в композиции имеется лизин, то сумма посторонних веществ больше. Такой же результат дают композиции, которые содержат полисорбат 80, полоксамер 188 и хлорид бензалкония.

Определение посторонних веществ в инсулине гларгине показало, что все композиции имеют сравнительное количество посторонних веществ (от 0,3 до 0,4%).

7.2 Стабильность после 1 месяца

7.2.1 Посторонние вещества в AVE0010

В испытании определяли содержание окисленного метионина в композициях. Последовательность AVE0010 имеет в положении 14 остаток метионина. Последовательность инсулина гларгина не имеет остатков метионина. Поэтому содержание окисленного метионина указывает на окисление остатка метионина в AVE0010. Данные обобщены на фигуре 1. Суммарные данные показывают, что без метионина при значении pH 4,5 содержание Met(ox) выше, чем при pH 4,0. Без метионина в качестве компонента композиции содержание Met(ox) самое большое, если содержание инсулина гларгина повышено или содержание AVE0010 уменьшено.

В основном самое большое содержание Met(ox) было измерено после хранения при 40°C/75% относительной влажности. При этом самое небольшое содержание Met(ox)-AVE0010 (<1%) обнаружено в композициях 8, 9, 11, 13, 14, 25, 26, 28, 30 и 31. Значения для данных композиции находятся в области значений для эталонных композиций AVE0010 номер 1 и 2 (рамка на фигуре 1).

Посторонние вещества в AVE0010 после 1 месяца кроме Met(ox) представлены на фигуре 2. В рамке приведены значения для эталонной композиции AVE0010 при 25°C и при 40°C. Композиции, которые имеют такое же или лучшее значение содержания посторонних веществ, чем в эталонной композиции AVE0010, находятся внутри рамки или под ней. Это относится к композициям 24, 25, 26, 28, 29, 30, 31, 33 и 34 (40°C). Значения содержания посторонних веществ, которые находятся выше показателей содержания посторонних веществ эталонной композиции AVE0010, указывают на посторонние вещества в инсулине гларгине. В основном композиции с pH 4,5 имеют меньше посторонних веществ, чем с pH 4,0.

Следующие композиции имеют после хранения в течение одного месяца при 40°С самое меньшее содержание Met(ox) и одновременно низкое содержание других посторонних веществ (сравните фигуры 1 и 2). Они лучше или такие же как эталонная композиция AVE0010:

25 Состав лантуса, AVE0010, метионин, pH 4,5

26 Состав лантуса, AVE0010, 1/2 ацетатного буферного раствора, метионин, pH 4,5

28 Состав лантуса, AVE0010, Полисорбат 20, метионин, pH 4,5

30 Состав лантуса, AVE0010, 1/2 ацетатного буферного раствора, полисорбат 20, метионин, pH 4,5

Данные композиции также принадлежат к тем композициям, которые в момент времени t0 имели самое небольшое количество посторонних соединений в AVE0010. Все композиции содержат метионин. Полисорбат 20 не имеет отрицательного действия на содержание посторонних веществ.

Содержание посторонних веществ в инсулине гларгине представлено на фигуре 3. Композиции 3 и 4 являются эталонными композициями для инсулина гларгина. Значения для данных композиций приведены в узкой рамке. Все композиции, которые относительно содержания посторонних веществ в AVE0010 признаны лучшими композициями (широкая рамка, в частности, композиции 25, 26, 28 и 30), являются относительно содержания посторонних веществ в инсулине гларгине лучшими, чем эталонные композиции инсулина гларгина (примерно от 1,5 до 2,4% при 40°C).

Исходя из данного эксперимента можно сделать вывод, что метионин способствует улучшению стабильности при хранении композиции, включающей инсулин (например, лантус) и агонист GLP-1 (например, AVE0010). Добавка метионина способствует химической целостности данной композиции.

8. Выводы

Из приведенных выше данных можно сделать следующие выводы:

- метионин приводит к улучшению химической стабильности и не имеет отрицательного влияния на физическую стабильность композиции комбинации агониста GLP-1, в частности AVE0010, и инсулина, в частности лантуса. Поэтому метионин является благоприятным компонентом данной композиции;

- ацетат может приводить к физической нестабильности. Данная нестабильность возрастает с повышением концентрации ацетата. Поэтому композиции комбинации агониста GLP-1, в частности AVE0010, и инсулина, в частности лантуса, которые получены без ацетата, предпочтительны по сравнению с соответствующими композициями, которые содержат ацетат;

- полисорбат 20 не имеет отрицательного влияния на физическую и химическую стабильность композиции комбинации агониста GLP-1, в частности AVE0010, и инсулина, в частности лантуса. С помощью комбинации ацетата в небольшой концентрации (1/2 ацетата) с полисорбатом 20 можно частично компенсировать отрицательное влияние ацетата. В не содержащих ацетат композициях добавка полисорбата 20 не приводит к улучшениям. Поэтому следует производить композиции комбинации агониста GLP-1, в частности AVE0010, и инсулина, в частности лантуса, которые не содержат полисорбат;

- лизин (в нормальных и высоких концентрациях), хлорид бензалкония, полисорбат 80 и полоксамер 188 показывают уже в начале исследования (t0) химическую нестабильность. Для лизина это также относится к результатам THT-испытаний.

Пример 2

Концепция «3 ручки покрывают все» (Фигура 4)

- 3 премикс-стержня (премикс-ручки) с 3 различными заданными соотношениями:

(e) Смесь A: 100 U лантуса+66,66 мкг AVE0010 на мл

(f) Смесь B: 100 U лантуса+40 мкг AVE0010 на мл

(g) Смесь C: 100 U лантуса+25 мкг AVE0010 на мл

- Применение 3 премикс-стержней: Примерная таблица на фигуре 4 исходит из терапевтической области от 15 до 80 U на дозу лантуса и от 10 до 20 мкг AVE0010. Для конкретного пациента вводимая доза лантуса установлена или назначена. Назначенные дозы находятся в левом столбце. Если в столбце Смесь A-Смесь C соответствующая доза AVE0010 находится в области от 10 до 20 мкг, то выбирают соответствующую смесь, дозируют и вводят. Области перекрываются: например, при потребности от 26 до 30 U лантуса можно выбирать Смесь A или Смесь B (с более высокой дозой AVE0010). То же имеет место для Смеси B и C. Если, например, определена доза 50 U инсулина, то дозируют 0,5 мл Смеси B или Смеси C. Данная доза содержит 20 мкг (Смесь B) или 12,5 мкг (Смесь C) AVE0010.

- Вывод: Принимая во внимание, что вероятное действие AVE0010 достигается при дозе от 10 до 15 мкг, а терапевтическое действие при дозе от 15 до 22 мкг, почти все пациенты, которые принимают лантус в дозе 15-80 U, также получают терапевтические дозы AVE0010 от 10 до 20 мкг, если они применяют один из трех премикс-стержней, которые имеют различное соотношение лантус:AVE0010 (Смесь A, B или C). По причине широкой области возможных соотношений лантуса и AVE0010 можно подбирать соотношение в стержне таким образом, чтобы для каждой дозы лантуса по меньшей мере один стержень содержал желаемую дозу AVE0010.