Вид РИД
Изобретение
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ
Настоящее изобретение представляет собой изобретение в области фармацевтики и относится к инъекционной форме 5α-андростан-3β,5,6β-триола и способу ее получения.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
5α-андростан-3β,5,6β-триол (далее - YC-6) представляет собой недавно открытое нейропротекторное соединение. В настоящее время острый ишемический инсульт (ОИИ) в основном лечат с помощью тромболитической или нейропротекторной терапии. Нейропротекторные агенты могут уменьшать область инфаркта мозга и предотвращать геморрагические осложнения, которые могут возникать во время тромболитической или антикоагулянтной терапии. Кроме того, данное соединение можно применять даже в отсутствие какого-либо этиологического диагноза, что позволяет проводить раннее лечение. Поэтому нейропротекторные агенты привлекают все большее внимание при исследовании ОИИ.
Однако на сегодняшний день нейропротекторные агенты с доказанной безопасностью и эффективностью отсутствуют. Большое количество соединений, имеющих потенциальную ценность для клинического применения, находятся на стадии клинических испытаний, включая блокаторы кальциевых каналов (БКК), модуляторы кальциевых каналов, ингибиторы высвобождения глутамата, агонисты рецепторов γ-аминомасляной кислоты (ГАМК), ловушки свободных радикалов, антитела к факторам межклеточной адгезии и так далее.
Среди большого числа соединений все более привлекательными становятся нейроактивные стероиды благодаря их широкому спектру действия в отношении защиты нейронов. В частности, действие недавно открытого нейропротекторного химического соединения YC-6 не ограничивается защитой нейронов. Данное соединение эффективно не только против ишемии головного мозга, но также и против ишемии спинного мозга при ежедневной дозе 50-100 мг.
YC-6 нерастворим в воде. Хотя его растворимость возрастает в традиционных неводных растворителях или их смесях, эти растворители вызывают раздражение, а при разбавлении водой YC-6 может выпадать в осадок. Это негативно сказывается на эффективности и безопасности инъекций YC-6 и ограничивает возможность их применения.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Для преодоления недостатков, обсуждаемых выше, согласно настоящему изобретению предложены инъекционные формы YC-6 и способы их получения. Согласно настоящему изобретению применяют гидроксипропил-β-циклодекстрин в качестве солюбилизирующего агента для приготовления инъекционных форм YC-6. Раздражение, вызываемое неводными растворителями, успешно снижается при одновременном повышении растворимости YC-6.
Для достижения этого предложены инъекционные формы YC-6 в жидкой или твердой форме. Инъекционные формы содержат по меньшей мере одно растворимое вспомогательное вещество, включая гидроксипропил-β-циклодекстрин. Указанное по меньшей мере одно растворимое вспомогательное вещество может также содержать агент, регулирующий изотоничность, или наполнитель для сублимационной сушки.
Предпочтительно, YC-6 присутствует в массовом отношении 1~20:40~500 к гидроксипропил-β-циклодекстрину.
Инъекционные формы также могут быть получены с применением следующих компонентов (по массе): 1~20 частей YC-6, 40~500 частей гидроксипропил-β-циклодекстрина, 1~100 частей агента, регулирующего изотоничность, 0~200 частей наполнителя для сублимационной сушки и 0~2000 частей растворителя.
Агент, регулирующий изотоничность, выбран из группы, состоящей из хлорида натрия, глюкозы, маннита, лактозы, ксилита, сорбита, мальтита и их смесей.
Наполнитель для сублимационной сушки выбран из группы, состоящей из хлорида натрия, глюкозы, маннита, лактозы, ксилита, сорбита, мальтита и их смесей.
Для приготовления жидкой инъекционной формы растворитель выбран из группы, состоящей из пропандиола, этанола, полиэтиленгликоля 400, полиэтиленгликоля 200, глицерина, воды и их смесей.
Инъекционная форма согласно настоящему изобретению может быть получена способом, включающим стадии, согласно которым последовательно растворяют в воде для инъекций гидроксипропил-β-циклодекстрин, YC-6 и по меньшей мере одно растворимое вспомогательное вещество с получением исходного раствора; далее указанный исходный раствор последовательно подвергают обесцвечиванию, фильтрации и стерилизации с получением инъекционной формы согласно настоящему изобретению.
Лиофильно высушенный порошок получают путем наполнения ампул фильтратом, полученным на стадии фильтрации выше, и проведением сублимационной сушки.
Стерильный порошок получают путем распылительной сушки фильтрата, полученного на стадии фильтрации выше, с последующей фасовкой.
Обесцвечивание может быть осуществлено при помощи 0,1~0,3% активированного угля, а стерилизация может быть осуществлена при температуре 115°C в течение 30 мин или при 121°C в течение 15 мин.
Следует отметить, что YC-6 также может быть приготовлен в виде YC-6 для инфузий путем смешивания инъекционной формы YC-6 с традиционными растворами для инфузий без лекарственных средств, такими как глюкоза для инфузий, натрия хлорид для инфузий или глюкоза и натрия хлорид для инфузий.
Настоящее изобретение обеспечивает преимущества по сравнению с традиционными методиками. Применение гидроксипропил-β-циклодекстрина или неводных растворителей/смешанных растворителей повышает растворимость YC-6 таким образом, что YC-6 может быть получен в виде раствора для инъекций, стерильного порошка, лиофилизированного порошка, YC-6 для инфузий на основе глюкозы, хлорида натрия или глюкозы и хлорида натрия, что обеспечивает возможность внутривенного введения YC-6 в случае необходимости. Кроме того, при приготовлении в инъекционной форме согласно настоящему изобретению YC-6 имеет достаточную растворимость и эффективность, не вызывая раздражения. Процесс получения также прост и широко доступен.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Пример 1. Получение 200 ампул с инъекционной формой YC-6 (спецификация 5 мл: 50 мг)
Состав:
|
Приготовление: 2-гидроксипропил-β-циклодекстрин растворяют в 80% свежеприготовленной воды для инъекций и добавляют YC-6, затем перемешивают при комнатной температуре в течение 10~20 минут до полного растворения YC-6. Добавляют хлорид натрия и растворяют его при перемешивании, затем добавляют воду для инъекций до объема 1000 мл. В указанный выше раствор добавляют 0,1% активированного угля, перемешивают в течение 15 мин при 60°C, а затем охлаждают раствор естественным путем до комнатной температуры. Для фильтрации применяют 0,22 мкм микропористый мембранный фильтр. Фильтрат собирают и разливают с получением 5 мл инъекционной формы, затем стерилизуют при 121°C в течение 15 мин.
Пример 2. Получение 200 ампул YC-6 для инъекций (спецификация 10 мл: 80 мг)
Состав:
|
Приготовление: 2-гидроксипропил-β-циклодекстрин растворяют в 80% свежеприготовленной воды для инъекций и добавляют YC-6, затем перемешивают при комнатной температуре в течение 10~20 минут до полного растворения YC-6. Добавляют глюкозу и растворяют ее при перемешивании, затем добавляют воду для инъекций до объема до 2000 мл. В указанный выше раствор добавляют 0,1% активированного угля, перемешивают в течение 15 мин при 60°C, а затем охлаждают раствор естественным путем до комнатной температуры. Для фильтрации применяют 0,22 мкм микропористый мембранный фильтр. Фильтрат собирают и разливают с получением 10 мл инъекционной формы, затем стерилизуют при 121°C в течение 15 мин.
Пример 3. Получение 200 ампул YC-6 для инъекций (спецификация 5 мл: 100 мг)
Состав:
|
Приготовление: 2-гидроксипропил-β-циклодекстрин растворяют в 80% свежеприготовленной воды для инъекций и добавляют YC-6, затем перемешивают при комнатной температуре в течение 10~20 минут до полного растворения YC-6. Добавляют воду для инъекций до объема 1000 мл. В указанный выше раствор добавляют 0,1% активированного угля, перемешивают в течение 15 мин при 60°C, а затем охлаждают раствор естественным путем до комнатной температуры. Для фильтрации применяют 0,22 мкм микропористый мембранный фильтр. Фильтрат собирают и разливают с получением 5 мл инъекционной формы, затем стерилизуют при 115°C в течение 30 мин.
Пример 4. Получение 200 ампул со стерильным порошком YC-6 (спецификация 80 мг/ампула)
Состав:
|
Приготовление: 2-гидроксипропил-β-циклодекстрин растворяют в 80% свежеприготовленной воды для инъекций и добавляют YC-6, затем перемешивают при комнатной температуре в течение 10~20 минут до полного растворения YC-6. Добавляют хлорид натрия и растворяют его при перемешивании, затем добавляют воду для инъекций до объема 2000 мл. В указанный выше раствор добавляют 0,1% активированного угля, перемешивают в течение 15 мин при 60°C, а затем охлаждают раствор естественным путем до комнатной температуры. Для фильтрации применяют 0,22 мкм микропористый мембранный фильтр. Фильтрат сушат путем распылительной сушки и затем расфасовывают в 200 ампул.
Пример 5. Получение 200 ампул с лиофильно высушенным порошком YC-6 (спецификация 5 мл: 60 мг)
Состав:
|
Приготовление: 2-гидроксипропил-β-циклодекстрин растворяют в 80% свежеприготовленной воды для инъекций и добавляют YC-6, затем перемешивают при комнатной температуре в течение 10~20 минут до полного растворения YC-6. Добавляют глюкозу и растворяют ее при перемешивании, затем добавляют воду для инъекций до объема до 1000 мл. В указанный выше раствор добавляют 0,1% активированного угля, перемешивают в течение 15 мин при 60°C, а затем охлаждают раствор естественным путем до комнатной температуры. Для фильтрации применяют 0,22 мкм микропористый мембранный фильтр. Фильтрат разливают в 5 мл ампулы и затем лиофильно сушат.
Пример 6. Совместная стабильность инъекционной формы YC-6 и общепринятых растворов для инфузий.
Две ампулы инъекционной формы YC-6 (5 мл Х 2) из примера 1 добавляют в общепринятый раствор для инфузий для оценки совместной стабильности YC-6 в течение 8 часов. Показатели для оценки совместной стабильности включают цветность, прозрачность, pH и содержание YC-6. Результаты представлены в следующих таблицах.
|
|
|
|
Пример 7. Предварительная оценка безопасности YC-6
Мышей Куньмин помещали в клетку по массе и случайным образом делили на 5 групп. Каждая группа состояла из 10 мышей, половина самцов и половина самок. Инъекционную форму YC-6, полученную согласно примеру 3 (20 мг/мл), вводили внутривенно в хвостовую вену в различных дозах. Всех мышей умерщвляли после одной недели наблюдения. Токсическую реакцию и количество умерших животных регистрировали каждый день. Рассчитывали ЛД50 и 95% доверительный интервал. ЛД50 YC-6 составила более чем 400±121 мг/кг.
Клетки крови получали в соответствии с общепринятыми методами из свежей крови, полученной от новозеландских кроликов. Клетки крови разводили физиологическим раствором с получением 2% суспензии. Инъекционную форму YC-6, полученную согласно примеру 1, затем добавляли к 2% суспензии и инкубировали при 37°C в течение 3 часов. Коэффициент гемолиза определяли колориметрическим методом. Коэффициент гемолиза YC-6 для инъекций составил менее 1%.
Морских свинок-альбиносов подвергали анафилактическим испытаниям в соответствии с общепринятыми методиками. Анафилактической реакции после внутривенного введения инъекционной формы YC-6, полученной согласно примеру 1, не наблюдалось.
Новозеландских кроликов использовали для теста на раздражение сосудов при внутривенном введении инъекционной формы YC-6, полученной согласно примеру 1. Результаты показали, что изменения тканей краевой ушной вены в тестируемой группе и контрольной группе аналогичны. У каждого кролика были целые стенки сосудов краевой ушной вены и нормальное строение вен. Каких-либо патологических изменений, таких как повреждение клеток эндотелия или отек окружающих тканей, не наблюдалось.