Результат интеллектуальной деятельности: СПОСОБ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ ЯЗВЕННОЙ БОЛЕЗНИ ЖЕЛУДКА, ВЫЗЫВАЕМОЙ ПРИЕМОМ ЭТАНОЛСОДЕРЖАЩИХ ЖИДКОСТЕЙ

Изобретение относится к медицине, а именно к средствам профилактики и лечения язвенных поражений желудка, вызываемых пероральным употреблением жидкостей, содержащих этиловый спирт. Сущность изобретения состоит в использовании в качестве профилактического и терапевтического средства одного из производных 2-гидроксифенилтиоацетамидов общей формулы:

где R¹=H, R²=CH(Me)COOMe, CH(Me)COOH, CH₂CH₂CH₂CH₂CH(NH₂)COOH, CH₂CH₂CH₂CH(NH₂)COOH; R¹, R²=CH₂CH₂CH₂CH(COOMe); R¹, R²=CH₂CH₂CH₂CH(COOH). Для профилактического эффекта данные соединения вводят внутрибрюшинно, внутривенно или перорально в дозе 0.5-90 мг/кг, в частности в дозе 1-3 мг/кг, за 10-120 мин до приема этанолсодержащей жидкости, в частности за 30 мин до приема этанолсодержащей жидкости, что позволяет снизить площадь поражений слизистой оболочки желудка в 1.5-20 раз по сравнению с контрольной группой, получающей этанолсодержащую жидкость и не получившей заявляемых соединений. Для терапевтических целей данные соединения вводят внутрибрюшинно, внутривенно или перорально в дозе 0.5-90 мг/кг в день, в частности в дозе 1 мг/кг в день, в течение трех дней после возникновения поражений слизистой оболочки желудка, вызванных приемом этанолсодержащей жидкости, что позволяет снизить площадь поражений слизистой оболочки желудка в 1.5-2 раза по сравнению с контрольной группой, подвергнутой воздействию этанола и не получающей заявляемых соединений. Указанные производные 2-гидроксифенилтиоацетамидов могут использоваться для профилактики и лечения язвенной болезни желудка, вызываемой приемом этанолсодержащих жидкостей, в частности алкогольных напитков.

Этиловый спирт (спирт, алкоголь) является существенным пищевым компонентом, обладающим психофизическими и психотропными эффектами. Долговременный прием алкоголя в избыточных количествах вызывает зависимость у всех видов млекопитающих и приводит к повреждению тканей, включая нервную систему, сердечно-сосудистую систему, желудочно-кишечный тракт (ЖКТ) и т.д. Злоупотребление алкогольсодержащими напитками характерно для 10% взрослого населения западных стран и приближается к этому уровню в странах азиатского региона, прежде всего в Китае [Liu S., Hou W., Yao P., Zhang В., Sun S., Nussler А.К., Liu L. Quercetin protects against ethanol-induced oxidative damage in rat primary hepatocytes. // Toxicol, in Vitro. - 2010. - Vol.24. - P.516-522.]. В ЖКТ млекопитающих, включая человека, возникают первичные повреждения тканей, обусловленные пероральным приемом алкоголя [Franke A., Teyssen S., Singer M.V. Alcohol-related diseases of the esophagus and stomach. // Dig. Dis. - 2005. - Vol.23. - P.204-213], что обуславливает необходимость разработки лекарственных средств, обладающих профилактическим и терапевтическим эффектом на подверженные повреждению алкоголем и продуктами его метаболизма ткани ЖКТ, в том числе на слизистую оболочку желудка (СОЖ). Повреждения СОЖ трансформируются в язвенную болезнь, обладающую специфической этиологией в случае индуцирования этиловым спиртом.

Лекарственного средства, снижающего ульцерогенность этилового спирта и обладающего специфической терапевтической активностью по отношению к вызываемым алкоголем повреждениям СОЖ, не существует. Прототипами патентуемого способа профилактики и лечения язвенных поражений желудка, вызываемых приемом этанолсодержащих жидкостей, являются использования для указанных целей трипептида Pro-Gly-Pro [Изобретение патент RU 2217158 от 27.11.2003 «Способ профилактики и лечения язв желудка у животных», РФ, МПК A61K 38/03, A61P 1/04], а также L-цитруллина [Liu Y., Tian X., Gou L., Fu X., Li S., Lan N., Yin X. Protective effect of L-citrulline against ethanol-induced gastric ulcer in rats. // Enviroment. Toxicol. Pharmacol. - 2012. - Vol.34. - P.280-287.]. Несмотря на определенный профилактический эффект указанных способов, они характеризуются высокой дозировкой (L-цитруллин) и широким спектром биологического действия (Pro-Gly-Pro), что требует разработки более специфических, эффективных и направленных способов способа профилактики и лечения язвенной болезни желудка, вызываемой приемом этанолсодержащих жидкостей.

Техническим результатом, на достижение которого направлено данное изобретение, является уменьшение площади язвообразования, вызываемого пероральным приемом этанолсодержащих жидкостей, в частности алкогольных напитков, в слизистой оболочке желудка (СОЖ) млекопитающих как при профилактическом, так и при терапевтическом использовании заявляемых производных 2-гидроксифенилтиоацетамидов; увеличение растворимости заявляемых производных 2-гидроксифенилтиоацетамидов в водных средах за счет образования солей между фенольным и/или карбоксильным фрагментом и неорганическими и органическими основаниями.

Технический результат достигается тем, что используются производные 2-гидроксифенилтиоацетамидов общей формулы:

где R¹=H, R²=CH(Me)COOMe, CH(Me)COOH, CH₂CH₂CH₂CH₂CH(NH₂)COOH, CH₂CH₂CH₂CH(NH₂)COOH; R¹, R²=CH₂CH₂CH₂CH(COOMe); R¹, R² CH₂CH₂CH₂CH(COOH), обладающие гастропротекторной и язвозаживляющей активностями и значительно снижающие язвенные поражения слизистой оболочки желудка (СОЖ) млекопитающих, вызываемые приемом этанолсодержащих жидкостей, в частности алкогольных напитков.

Предлагаемое изобретение представлено химической структурой используемых соединений класса амидов 2-(2-гидроксифенилтио)уксусной кислоты общей формулы:

где R¹=H, R²=CH(Me)COOMe, CH(Me)COOH, CH₂CH₂CH₂CH₂CH(NH₂)COOH, CH₂CH₂CH₂CH(NH₂)COOH; R¹, R²=CH₂CH₂CH₂CH(COOMe); R¹, R² CH₂CH₂CH₂CH(COOH), обладающих гастропротекторной и язвозаживляющей активностями и значительно снижающих язвенные поражения слизистой оболочки желудка (СОЖ) млекопитающих, вызываемые приемом этанолсодержащих жидкостей, в частности алкогольных напитков.

Для заявляемых соединений была показана выраженная антиоксидантная активность и разработан метод синтеза [Изобретение патент RU 2473540 от 27.01.2013 «Амиды 2-(2-гидроксифенилтио)уксусной кислоты, обладающие антиоксидантной активностью, и способ их получения», РФ, МПК C07C 323/18, A61K 31/095, A61P 39/06]. Заявляемые соединения могут быть получены по указанному методу и представляют собой бесцветные или слабоокрашенные кристаллические вещества, хорошо растворимые в хлористом метилене, хлороформе, тетрагидрофуране, спирте, диметилсульфоксиде, воде. Улучшение растворимости в воде может быть достигнуто путем солеобразования с эквимолярными количествами неорганических (NaOH, KOH и др.) или органических (NaOMe, KOMe, триэтиламин, пиперидин и др.) оснований. Химическая структура и индивидуальность заявляемых соединений подтверждены элементным анализом, данными ЯМР ¹H, ЯМР ¹³C, тонкослойной хроматографии.

Технический результат достигается также тем, что производные фенилтиоацетамидов общей формулы:

R¹=H, R²=CH(Me)COOMe, CH(Me)COOH, CH₂CH₂CH₂CH₂CH(NH₂)COOH, CH₂CH₂CH₂CH(NH₂)COOH; R¹, R²=CH₂CH₂CH₂CH(COOMe); R¹, R²= CH₂CH₂CH₂CH(COOH), растворяют в водосодержащей среде (физиологический раствор, водный раствор диметилсульфоксида и т.д.) в концентрации 0.25-45.00 г/л, в частности в концентрации 0.50-1.50 г/л. Для получения профилактического эффекта полученный раствор одного из заявляемых фенилтиоацетамидов вводят внутрибрюшинно или внутривенно в дозе 0.5-90 мг/кг, в частности в дозе 1-3 мг/кг, за 10-120 мин до нанесения ульцерогенного фактора, в частности за 30 мин до нанесения ульцерогенного фактора. Последующее интрагастральное введение 96% этанола в объеме 1 мл на 200 г веса животного вызывает значительно меньшие язвенные поражения слизистой оболочки желудка (СОЖ) млекопитающих, по сравнению с особями, не получившими профилактических инъекций. Профилактический эффект проявляется при однократной инъекции или многократных периодических инъекциях одного из заявляемых соединений. Для получения терапевтического эффекта полученный раствор одного из заявляемых фенилтиоацетамидов вводят внутрибрюшинно в дозе 0.5-90 мг/кг, в частности в дозе 1-3 мг/кг, один раз в день в течение трех дней после индуцирования поражений СОЖ введением этанола. Также технический результат профилактического действия может быть достигнут пероральным введением заявляемых производных фенилтиоацетамидов в твердом виде или в виде раствора в водосодержащей среде (физиологический раствор, водный раствор диметилсульфоксида и т.д.) в дозе 0.5-90 мг/кг, в частности в дозе 1-3 мг/кг, за 10-120 мин до нанесения ульцерогенного фактора, в частности за 30 мин до нанесения ульцерогенного фактора. Технический результат лечебного действия может быть достигнут пероральным введением заявляемых производных фенилтиоацетамидов в твердом виде или в виде раствора в водосодержащей среде (физиологический раствор, водный раствор диметилсульфоксида и т.д.) в дозе 0.5-90 мг/кг, в частности в дозе 1-3 мг/кг, один раз в день в течение трех дней после индуцирования поражений СОЖ введением этанола.

Краткое описание чертежей (фигур).

На фиг.1 представлена диаграмма, иллюстрирующая профилактическое действие фенилтиоацетамида I (1 мг/кг, в/б) на поражения СОЖ, вызываемые приемом этанола.

На фиг.2 представлена диаграмма, иллюстрирующая профилактическое действие фенилтиоацетамида II (1 мг/кг, в/б) на поражения СОЖ, вызываемые приемом этанола.

На фиг.3 представлена диаграмма, иллюстрирующая профилактическое действие фенилтиоацетамида III (1 мг/кг, в/б) на поражения СОЖ, вызываемые приемом этанола.

На фиг.4 представлена диаграмма, иллюстрирующая профилактическое действие фенилтиоацетамида III (3 мг/кг, в/б) на язвенные поражения СОЖ, вызываемые приемом этанола.

На фиг.5 представлена диаграмма, иллюстрирующая лечебное действие фенилтиоацетамида II (1 мг/кг, в/б, один раз в день, в течение трех дней) на поражения СОЖ, вызываемые приемом этанола.

На фиг.6 представлена диаграмма, иллюстрирующая лечебное действие фенилтиоацетамида III (1 мг/кг, в/б, один раз в день, в течение трех дней) на поражения СОЖ, вызываемые приемом этанола.

Осуществление изобретения.

Пример 1. Экспериментальный метод исследования профилактического эффекта заявляемых соединений на поражения СОЖ, вызываемые приемом этанола.

Исследования проводили на белых лабораторных крысах линии Wistar (самцы весом 220-250 г). За сутки до проведения эксперимента животные были подвергнуты пищевой депривации со свободным доступом к воде. Использовали 21-28 крыс для изучения каждого соединения/каждой дозы соединения. Первая (I) группа из 7 животных представляла собой группу интактного контроля. Крысам I группы за 30 мин до умерщвления внутрибрюшинно (в/б) вводили 0.4 мл физиологического раствора (плацебо) на 200 г веса крысы. Вторая (II) группа из 7 животных представляла собой контрольную группу. Крысам II группы за 30 мин до ульцерогенного фактора (введение этанола) в/б вводили 0.4 мл физиологического раствора (плацебо) на 200 г веса крысы. Третья (III) группа из 7 животных представляла собой вторую контрольную группу. Крысам III группы за 30 мин до ульцерогенного фактора (введение этанола) в/б вводили 0.4 мл физиологического раствора, содержащего 1% диметилсульфоксида, (плацебо) на 200 г веса крысы. Четвертая (IV) группа из 7 животных являлась основной группой. Крысам IV группы за 30 мин до ульцерогенного фактора (введение этанола) в/б вводили растворы низкомолекулярных органических соединений в физиологическом растворе или физиологическом растворе, содержащем 1% диметилсульфоксида, в дозе 1-3 мг/кг, в объеме 0.4 мл на 200 г веса крысы. Поражения СОЖ крыс во второй, третьей и четвертой группах были вызваны внутрижелудочным введением 96% этанола в объеме 1 мл на 200 г веса животного [Ramesh S.T., Asad М., Dhamanigi S.S., Prasad V.S. Effect of central administration of ondansetron, a 5-hydroxytryptamine-3 receptor antagonist on gastric and duodenal ulcers. // Fundament. Clin. Pharmacol. - 2009. - Vol.23 - P.303-309.]. Через 1 ч после введения этанола животных умерщвляли при помощи летальной дозы наркоза (уретан, 3 г/кг, в/б) и анализировали состояние СОЖ. Для этого извлекали желудок, разрезали его по малой кривизне, выворачивали слизистой наружу и тщательно промывали физиологическим раствором. При помощи экспериментального оптического прибора при трансиллюминационном освещении исследовали состояние СОЖ при четырехкратном увеличении (лупа). В каждом изученном желудке рассчитывали количество и площадь гиперемий, язв и эрозий. После этого рассчитывали площадь гиперемий, язв и эрозий в среднем на один желудок в каждой группе крыс.

Пример 2. Экспериментальный метод исследования лечебного эффекта заявляемых соединений на поражения СОЖ, вызываемые приемом этанола.

Исследования проводили на белых лабораторных крысах линии Wistar (самцы весом 220-250 г). За сутки до проведения эксперимента животные были подвергнуты пищевой депривации со свободным доступом к воде. Использовали 21-28 крыс для изучения каждого соединения/каждой дозы соединения. Поражения слизистой оболочки желудка крыс во второй, третьей и четвертой группах были вызваны внутрижелудочным введением 96% этанола в объеме 1 мл на 200 г веса животного [Ramesh S.T., Asad М., Dhamanigi S.S., Prasad V.S. Effect of central administration of ondansetron, a 5-hydroxytryptamine-3 receptor antagonist on gastric and duodenal ulcers. // Fundament. Clin. Pharmacol. - 2009. - Vol.23 - P.303-309.]. Первая (I) группа из 7 животных представляла собой группу интактного контроля. Крысам I группы в течение трех дней один раз в день внутрибрюшинно (в/б) вводили 0.4 мл физиологического раствора (плацебо) на 200 г веса крысы. Вторая (II) группа из 7 животных представляла собой контрольную группу. Крысам II группы в течение трех дней после индуцирования поражений СОЖ (введение этанола) один раз в день в/б вводили 0.4 мл физиологического раствора (плацебо) на 200 г веса крысы. Третья (III) группа из 7 животных представляла собой вторую контрольную группу. Крысам III группы в течение трех дней после индуцирования поражений СОЖ (введение этанола) один раз в день в/б вводили 0.4 мл физиологического раствора, содержащего 1% диметилсульфоксида, (плацебо) на 200 г веса крысы. Четвертая (IV) группа из 7 животных являлась основной группой. Крысам IV группы в течение трех дней после индуцирования поражений СОЖ (введение этанола) один раз в день в/б вводили растворы низкомолекулярных органических соединений в физиологическом растворе или физиологическом растворе, содержащем 1% диметилсульфоксида, в дозе 1 мг/кг, в объеме 0.4 мл на 200 г веса крысы. На четвертые сутки животных умерщвляли при помощи летальной дозы наркоза (уретан, 3 г/кг, в/б) и анализировали состояние СОЖ. Для этого извлекали желудок, разрезали его по малой кривизне, выворачивали слизистой наружу и тщательно промывали физиологическим раствором. При помощи экспериментального оптического прибора при трансиллюминационном освещении исследовали состояние СОЖ при четырехкратном увеличении (лупа). В каждом изученном желудке рассчитывали количество и площадь гиперемий, язв и эрозий. После этого рассчитывали площадь гиперемий, язв и эрозий в среднем на один желудок в каждой группе крыс.

Пример 3. Статистические методы обработки биологических экспериментов.

Статистическую и математическую обработку результатов биологических исследований проводили с помощью методов вариационной статистики. Полученные результаты исследований проверяли на нормальность распределения с помощью W-теста Шапиро-Уилкоксона. Если данные не соответствовали закону нормального распределения, то сравнение двух несвязанных выборок производили по критерию Манна-Уитни. При нормальном распределении сравнение разницы между контрольными и опытными замерами проводили с помощью t-критерия Стьюдента для независимых выборок, уровень значимости p<0.05. Данные представляли в виде среднего значения (M) и ошибки среднего (m).

Пример 4. Профилактическое действие (S)-2-амино-6-(2-((2-гидроксифенил)тио)-ацетамидо)гексановой кислоты (I) на поражения СОЖ, вызываемые приемом этанола.

Фенилтиоацетамид I (R¹=H; R²=CH₂CH₂CH₂CH₂CH(NH₂)COOH) растворяли в физиологическом растворе и изучали в дозе 1 мг/кг в соответствии с экспериментальным методом исследования поражений желудка, вызываемых приемом этанола, изложенным в Примере 1. Площадь поражений в СОЖ у крыс II группы составила 190.1±13.7 мм². Профилактическое введение фенилтиоацетамида I в дозе 1 мг/кг оказывало выраженное защитное действие на СОЖ. Площадь поражений в СОЖ у крыс IV группы составила 116.7+31.8 мм², что на 38.6% (p<0.05) меньше, чем у II группы крыс (фиг.1).

Пример 5. Профилактическое действие метилового эфира (2-((2-гидроксифенил)тио)ацетил)-L-аланина (II) на поражения СОЖ, вызываемые приемом этанола.

Фенилтиоацетамид II (R¹=H; R²=CH(Me)COOMe) растворяли в физиологическом растворе, содержащем 1% диметилсульфоксида, и изучали в дозе 1 мг/кг в соответствии с экспериментальным методом исследования поражений желудка, вызываемых приемом этанола, изложенным в Примере 1. Площадь поражений в СОЖ у крыс II группы составила 190.1±13.7 мм². Площадь поражений в СОЖ у крыс III группы составила 219.1±28.6 мм². Профилактическое введение фенилтиоацетамида II в дозе 1 мг/кг оказывало выраженное защитное действие на СОЖ. Площадь поражений в СОЖ у крыс IV группы составила 126.1±25.6 мм², что на 33.7% (p<0.05) меньше, чем у II группы крыс, и на 42.4% (p<0.01) меньше, чем у III группы крыс (фиг.2).

Пример 6. Профилактическое действие метилового эфира (2-((2-гидроксифенил)тио)ацетил)-L-пролина (III) на поражения СОЖ, вызываемые приемом этанола.

Фенилтиоацетамид III (R¹, R²=CH₂CH₂CH₂CH(COOMe)) растворяли в физиологическом растворе, содержащем 1% диметилсульфоксида, и изучали в дозе 1 мг/кг в соответствии с экспериментальным методом исследования поражений желудка, вызываемых приемом этанола, изложенным в Примере 1. Площадь поражений в СОЖ у крыс II группы составила 190.1±13.7 мм². Площадь поражений в СОЖ у крыс III группы составила 219.1±28.6 мм². Профилактическое введение фенилтиоацетамида III в дозе 1 мг/кг оказывало выраженное защитное действие на СОЖ. Площадь поражений в СОЖ у крыс IV группы составила 134.8±24.3 мм², что на 29.1% (p<0.05) меньше, чем у II группы крыс, и на 38.5% (p<0.05) меньше, чем у III группы крыс (фиг.3).

Пример 7. Профилактическое действие метилового эфира (2-((2-гидроксифенил)тио)ацетил)-L-пролина (III) на язвенные поражения СОЖ, вызываемые приемом этанола.

Фенилтиоацетамид III (R¹, R²=CH₂CH₂CH₂CH(COOMe)) растворяли в физиологическом растворе, содержащем 1% диметилсульфоксида, и изучали в дозе 3 мг/кг в соответствии с экспериментальным методом исследования поражений желудка, вызываемых приемом этанола, изложенным в Примере 1. Площадь язвенных поражений в СОЖ у крыс II группы составила 39.7±19.8 мм². Площадь язвенных поражений в СОЖ у крыс III группы составила 64.2±44.1 мм². Профилактическое введение фенилтиоацетамида III в дозе 3 мг/кг оказывало выраженное защитное действие на СОЖ. Площадь язвенных поражений в СОЖ у крыс IV группы составила 2.2±1.4 мм², что на 94.5% (p<0.001) меньше, чем у II группы крыс, и на 96.6% (p<0.001) меньше, чем у III группы крыс (фиг.4).

Пример 8. Лечебное действие метилового эфира (2-((2-гидроксифенил)тио)ацетил)-L-аланина (II) на поражения СОЖ, вызываемые приемом этанола.

Фенилтиоацетамид II (R¹=H; R₂=CH(Me)COOMe) растворяли в физиологическом растворе, содержащем 1% диметилсульфоксида, и изучали в дозе 1 мг/кг в соответствии с экспериментальным методом исследования поражений желудка, вызываемых приемом этанола, изложенным в Примере 2. Площадь поражений в СОЖ у крыс II группы составила 119.8±26.5 мм². Площадь поражений в СОЖ у крыс III группы составила 123.5±22.1 мм². Трехкратное введение фенилтиоацетамида II в дозе 1 мг/кг оказывало выраженное лечебное действие на поражения СОЖ. Площадь поражений в СОЖ у крыс IV группы составила 66.1±9.7 мм², что на 44.8% (p<0.05) меньше, чем у II группы крыс, и на 46.4% (p<0.05) меньше, чем у III группы крыс (фиг.5).

Пример 9. Лечебное действие метилового эфира (2-((2-гидроксифенил)тио)ацетил)-L-пролина (III) на поражения СОЖ, вызываемые приемом этанола.

Фенилтиоацетамид III (R¹, R²=CH₂CH₂CH₂CH(COOMe)) растворяли в физиологическом растворе, содержащем 1% диметилсульфоксида, и изучали в дозе 1 мг/кг в соответствии с экспериментальным методом исследования поражений желудка, вызываемых приемом этанола, изложенным в Примере 2. Площадь поражений в СОЖ у крыс II группы составила 119.8±26.5 мм². Площадь поражений в СОЖ у крыс III группы составила 123.5±22.1 мм². Трехкратное введение фенилтиоацетамида III в дозе 1 мг/кг оказывало выраженное лечебное действие на поражения СОЖ. Площадь поражений в СОЖ у крыс IV группы составила 76.7±17.2 мм, что на 36.0% (p<0.05) меньше, чем у II группы крыс, и на 37.9% (p<0.05) меньше, чем у III группы крыс (фиг.6).