СПОСОБ МИКРОЧЕРЕНКОВАНИЯ ВИНОГРАДА in vitro

Изобретение относится к области сельского хозяйства, в частности к способам размножения растений, и может быть использовано в виноградстве для ускоренного размножения оздоровленных от вирусной инфекции перспективных сортов винограда путем снижения затрат на дорогостоящие препараты.

Известен способ размножения винограда, при котором проводят вычленение меристематических эксплантов, их высадку и культивирование (патент №2120739 от 27.10.1998 г. МПК A01H 4/00).

Однако в известном техническом решении для стимуляции микроэксплантов используют электромагнитное СВЧ-поле в комплексе с узкополосным лазерным лучом, что усложняет способ, повышает затраты.

Известен также способ микроклонального размножения, включающий расчленение пробирочных растений на питательной среде Мурасиге-Скуга с одновременным использованием биопрепаратов (патент №2265319 от 10.12.2005 г. МПК A01H 4/00).

Сложность известного технического решения заключается в том, что биопрепараты гиббереллиновой и цитокининовой пород выделяют из грибов, которые воздействуют на процессы роста и развития растений на этапе ввода меристем в культуру.

Однако экспланты для своего развития требуют дополнительного введения и других элементов для своего развития, что снижает эффективность способа и повышения затраты.

Наиболее близким техническим решением является способ, при котором проводят микроразмножение in vitro путем микрочеренкования пробирочных растений и высадку их на жидкую питательную среду с добавлением макроэлементов, витаминов и биопрепаратов (патент №2264706 от 27.112006 г. МПК A01H 4/00, A01N 25/00, C12N 5/00).

Однако в способе-прототипе для размножения микрочеренкования используют дорогостоящие препараты для формирования питательной среды, что усложняет способ, повышает себестоимость продукции.

Технический результат - снижение себестоимости продукции и повышение эффективности способа.

Техническое решение заявленного объекта, в отличие от известного, заключается в том, что из состава субстрата Мурасиге-Скуга исключают активированный уголь, снижают соли и кислоты в 2-4 раза, а добавляют Гумат+7B в количестве 5-10 мл/л.

Способ осуществляется следующим образом.

Гумат+7B хорошо растворим в воде, легко усваивается растениями, мобилизует его иммунную систему, стимулирует развитие мощной корневой системы, способствует усиленному поступлению питательных веществ, интенсифицирует обменные процессы в растительной клетке, снижает содержание нитратов в 2 раза, увеличивает содержание хлорофилла, витаминов, сахаров и других ценных веществ, стимулирует воздействие всех микроэлементов, применяемых в смеси с гуматом.

В отличие от известных видов гуматов предлагаемый Гумат+7B содержит 60-65% гуматов, микроэлементов (железо, медь, цинк, марганец, молибден, кобальт и бор). В таком сочетании с преимуществом бора (В) гумат при микрочеренковании винограда не применялся, бор необходим растениям для нормального роста и развития. Функции бора связаны с метаболизмом, переносом сахаров через мембраны, синтезом ДНК, РНК и фитогормонов, образованием клеточных стенок и развитием тканей. Недостаток бора в организме вызывает различные заболевания. Учитывая комплекс микро- и макроэлементов, применяемых в качестве питательной среды, Гумат+7B дополняет в качестве ценных веществ, сочетающих совместное положительное действие на результате опытов.

Пример. Растения-регенеранты размерами 8-10 см разрезали на фрагменты, включавшие узел с листом и почкой (нижняя часть междоузлия длиннее верхней на 1-1,5 см), полученные микрочеренки высаживали в биологические пробирки размером 40×120 мм на питательную среду. Пробирки закрывали фольгой и помещали их в культуральную комнату с соответствующими методике условиями.

Опыт был заложен на сорте винограда Августин в 5-ти вариантах, табл.1. В каждом варианте по 3 повторности. В каждой повторности по 6 пробирок с микрочеренками. Изучали влияние модифицированных питательных сред на период роста и развития растения винограда в условиях in vitro.

Технология черенкования пробирочных растений обычная. Дата черенкования 1.08.2012 г. Наблюдения за растениями проводились в течение 41 дня до 11.09.2012 г. - ежедневно, отмечая дату появления корней и листьев. Измерения высоты растений, подсчет листьев и основных корней провели через 41 день после черенкования.

Во всех вариантах начало образования корней отмечено на 8-й день после черенкования. На 13 день после черенкования укоренились все растения.

Отмечено, что рост корней в варианте 5 существенно увеличился и по количеству корней, которые превзошли контроль.

Образование листьев в варианте 5 началось на десятый день после черенкования, а на 13 день образование листьев началось на всех вариантах опыта.

Дальнейшие наблюдения за ростом и развитием растений показали, что экспланты в вариантах 2 и 3 на бедных питательных средах хотя и показали вначале неплохие результаты по укоренению, намного отставали в росте и развитии по сравнению с вариантами 1, 4, 5 (табл.2).

Существенные различия по количеству корней, листьев и по высоте растения наблюдаются в вариантах 4 и 5. У эксплантов, помещенных на эти среды, проходил более интенсивный рост растения в высоту и образование корней, по сравнению с контрольным вариантом (табл.2).

Лучшие результаты по росту и развитию растений показал вариант 5 на питательной среде №4. Введение в состав питательных сред, кроме минеральных солей, жидкого концентрированного органоминерального препарата Гумат+7B, оказало существенное значение для роста и развития экспланта в условиях in vitro.

Данные результаты сведены в таблицу 2, из которой следует, что питательная среда №4 наиболее оптимальная, обеспечивая за сравнительно короткий период увеличение количества основных корней, листьев и высоту растений.

В питательных средах №4 и №5 (табл.1) значительно снижается количество агар-агара, сахарозы, солей натрия, магния, калия и кальция, мезоинозита, сернокислой меди и хлористого никеля, никотиновой кислоты, пиридоксина, тиамина, сернокислого железа, трилона Б, активированного угля, за счет значительного сокращения этих элементов в питательной среде и добавлением Гумата+7B в количестве 5-10 мл/л.

Следовательно, в предлагаемом способе снижаются затраты на питательную среду и повышается его эффективность.

Влияние различных, питательных сред на рост и развитие растений винограда при микрочеренковании (метод in vitro)