Результат интеллектуальной деятельности: ПОДКИСЛЕННАЯ ПИТАТЕЛЬНАЯ СМЕСЬ

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к подкисленной питательной смеси с улучшенным вкусом и к способу изготовления такой питательной смеси.

Уровень техники

Материнское молоко рекомендовано для всех младенцев. Однако в некоторых случаях грудное вскармливание бывает недостаточным, или безуспешным, или нецелесообразным по медицинским показаниям, или же мать отказывается от кормления грудью. Для таких случаев разработаны смеси для питания младенцев.

Обычно смеси для питания младенцев предлагаются в продаже в порошкообразной форме, в виде жидкого концентрата или в готовой для употребления жидкой форме. Порошкообразные смеси для питания младенцев являются наиболее популярной формой, прежде всего благодаря их стоимости и питательным качествам. Ключевым недостатком, связанным с порошкообразными смесями для питания младенцев, является неудобство их приготовления. Порошкообразная смесь должна загружаться ложкой в стерилизованный сосуд для питья, после чего в этот сосуд приливается подвергнутая кипячению и затем охлажденная вода для восстановления нужной концентрации рецептуры, а затем сосуд для питья закупоривается и взбалтывается для обеспечения растворения порошка. Для избежания роста каких-либо бактерий смесь должна потребляться непосредственно после восстановления.

При приготовлении и потреблении таким способом порошкообразные смеси для питания младенцев обеспечивают безопасную и хорошую с питательной точки зрения замену материнского молоку в описанных выше ситуациях. Однако, вследствие, прежде всего, неудобства приготовления, многими родителями или осуществляющими уход лицами рецептуры не готовятся должным образом, что в результате подвергает младенцев рискам развития инфекций или другим рискам. Например, перед применением может не кипятиться вода, и в этом случае младенцу при кормлении могут попадать содержащиеся в воде патогенные организмы. В развитых странах водные источники обычно безопасны, однако это может не иметь повсеместного характера. В качестве варианта могут готовиться партии смеси для питания младенцев и затем храниться до момента надобности. К сожалению, в случае загрязнения смеси каким-либо патогенным организмом он при этом имеет время для того, чтобы размножиться.

Типичные бактериальные патогены, которые могут вызывать диарею у младенцев, включают, например, Escherichia coli, Salmonella и Shigella. Однако часто с диареей у младенцев также связываются вирусы (ротавирусы, кальцивирусы) и протозойные паразиты, такие как Cryptosporidium. Кормление рецептурой без тщательного соблюдения надлежащих инструкций по ее восстановлению может стать причиной увеличения риска таких желудочно-кишечных инфекций.

Одним из подходов к решению этой проблемы, как сообщается в WO 96/25054, является добавление специальных бактерицидных добавок. Следует, однако, избегать потребления младенцами бактерицидных добавок на регулярной основе по причине возможных повреждений печени и, помимо этого, вследствие того, что бактерицидные добавки часто демонстрируют нежелательные побочные эффекты.

Безопасным с пищевой точки зрения и эффективным способом ингибирования роста бактерий в восстановленной смеси для питания младенцев является подкисление. На рынке представлены различные порошкообразные смеси для питания младенцев, которые имеют в готовом виде относительно низкий pH, например, предлагающиеся под торговыми марками Pelargon®, Bionan® и Bioguigoz®. Однако способ, с помощью которого обеспечивается подкисление, является времяемким и дорогостоящим: основные ингредиенты смеси для питания младенцев подвергаются ферментации молочнокислыми бактериями до достижения определенного значения pH, ферментация прерывается, полученная жидкость пастеризуется и перерабатывается в порошок. Ферментация должна тщательно контролироваться, поскольку она сама по себе может обеспечить возможности для роста патогенных бактерий, а также бактериофагов, которые могут препятствовать процессу ферментации. Кроме того, pH таких рецептур не может регулироваться с высокой точностью или надежно стандартизироваться в соответствии с определенной величиной. Позднее, как описано в WO 2004/054371, был разработан способ подкисления питательных композиций, таких как смеси для питания младенцев, посредством прямого добавления L(+) - молочной кислоты с целью получения композиции, которая при восстановлении до готового к употреблению состояния имеет pH в диапазоне от 3,5 до 6, предпочтительно от 3,5 до 5,5, более предпочтительно в диапазоне от 4,0 до 5,3, еще более предпочтительно в диапазоне от 4,5 до 5,0, такой как, например, от 4,6 до 4,8. Однако вкус таких продуктов не является полностью удовлетворительным.

Сущность изобретения

В настоящее время был неожиданно найден способ увеличения pH непосредственно подкисляемых пищевых рецептур, улучшающий при этом их вкус и сохраняющий требуемую степень бактериостатической активности.

Вследствие этого, настоящее изобретение обеспечивает питательную смесь, имеющую в жидком состоянии величину pH в диапазоне от 4,8 до 5,2, при этом такая смесь содержит из расчета на сухую массу молочную кислоту в количестве не более 2,0% и по меньшей мере 0,5% соли молочной кислоты..

Известно, что слабые органические кислоты, такие как молочная кислота, могут ингибировать рост бактерий и грибков. Такие кислоты существуют в растворе в pH-зависимом равновесии между недиссоциированным и диссоциированным состояниями. Уменьшение величины pH смещает равновесие к не имеющему заряда, недиссоциированному состоянию кислоты, таким образом оптимальная ингибиторная активность достигается именно при низком pH, поскольку недиссоциированная кислота способна свободно проходить через плазменную мембрану и проникать в бактериальные клетки. Сталкиваясь внутри клетки с условиями повышенного pH, молекула затем диссоциирует, высвобождая заряженные анионы и протоны. Клетки используют метаболическую энергию для того, чтобы справиться со снижением pH, и таким образом ингибируют рост. Не претендуя на широту охвата, авторы настоящего изобретения полагают, что посредством восполнения концентрации лактата при данном pH увеличивается концентрация недиссоциированной молочной кислоты и, благодаря этому, бактериостатическое действие. Улучшенное бактериостатическое действие (по сравнению с не содержащим добавок раствором с таким же pH), как полагают, является следствием более высокой концентрации в растворе недиссоциированной кислоты. Таким образом, может быть обеспечен бактериостатический эффект, эквивалентный действию не содержащего добавок раствора при пониженном pH, со следующим из этого улучшением вкуса композиции. В этой связи следует принять во внимание, что, поскольку pH выражается в логарифмической шкале, даже весьма небольшие изменения величины pH порядка 0,1 или 0,2 оказывают значительное воздействие на вкус.

Исследование вкуса является сложным вопросом, требующим проведения многих испытаний. Например, в случае младенцев такое исследование, когда оно вообще является возможным, требует тщательного наблюдения испытуемых субъектов. Автор изобретения нашел, что на восприятие вкуса могут воздействовать и кислотность (pH), и буферная емкость композиции. Не претендуя на теоретическую глубину, предполагается, что данная конкретная композиция изобретения обеспечивает оптимальный в этом отношении баланс между pH и буферной емкостью. Более того, для настоящего изобретения представляется критическим как обеспечение необходимого уровня бактериостатической активности, так и сохранение вкуса, являющегося приемлемым для целевой группы потребителей, в частности, младенцев. Настоящее изобретение представляет тонкий баланс оптимального соотношения между этими двумя принципами. В одном воплощении такой баланс дополнительно усложняется необходимостью сохранения биоактивности и выживания пробиотика, который может присутствовать в композиции. Краткое описание чертежей

На Фигуре 1 сравнивается рост Е. sakazakii в различных смесях для питания младенцев в течение 6 часов при 30°C;

На Фигуре 2 сравнивается рост S. typhimurium в различных смесях для питания младенцев в течение 6 часов при 30°C;

На Фигуре 3 сравнивается рост S. aureus в различных смесях для питания младенцев в течение 6 часов при 30°C;

На Фигуре 4 сравнивается рост В. cereus в различных смесях для питания младенцев в течение 6 часов при 30°C;

На Фигуре 5 сравнивается рост P. aeruginosa в различных смесях для питания младенцев в течение 6 часов при 30°C;

На Фигуре 6 сравнивается рост Е. coli в различных смесях для питания младенцев в течение 6 часов при 37°C;

На Фигуре 7 сравнивается рост P. aeruginosa в различных смесях для питания младенцев в течение 6 часов при 37°C.

Раскрытие изобретения

В данном описании следующие термины имеют следующие значения.

«В жидком состоянии» означает питательную смесь, которая является готовой к употреблению, вне зависимости от того, изготавливается ли она и хранится в виде жидкости, или же восстанавливается водой или другой жидкостью притом, что изготавливается и хранится в виде порошка. Под pH порошка композиции изобретения подразумевается его значение, измеренное при восстановлении в виде жидкой композиции. Следовательно, измерения и величины pH относятся к жидкой композиции (либо исходно жидкой, либо восстановленной). Восстановление должно выполняться согласно обычным инструкциям по употреблению композиции. При отсутствии инструкций восстановление проводится с водой, взятой в пропорции, достаточной для достижения желательной плотности калорий.

«L(+) - молочная кислота» означает L(+)-2-гидроксипропионовую кислоту.

Все процентные содержания, если не оговаривается иного, представлены в массовых процентах.

Подходящие соли молочной кислоты включают лактат натрия, лактат калия и лактат кальция, но особенно предпочтительным является лактат кальция.

Питательная смесь может содержать от 1,00 до 1,20% молочной кислоты. Питательная смесь может содержать от 0,90 до 1,40% физиологически приемлемой соли молочной кислоты.

Общее содержание лактата (то есть включая ионы лактата, образующиеся и из молочной кислоты, и из соли молочной кислоты,) составляет в питательной смеси предпочтительно по меньшей мере 70% L(+)-лактата.

Питательная смесь может быть смесью для питания младенцев. Термины «питательная смесь» и «питательная композиция» используются здесь взаимозаменяемым образом в одном и том же значении.

Смесь для питания младенцев согласно настоящему изобретению может содержать источник белка в количестве от 1,8 г до 3,5 г белка на 100 ккал композиции. В одном воплощении питательная композиция изобретения содержит источник белка в количестве не более 2,0 г белка на 100 ккал композиции, предпочтительно от 1,8 до 2,0 г белка на 100 ккал. Тип белка в применении к настоящему изобретению не рассматривается как критически важный параметр при условии, что удовлетворяются минимальные требования по содержанию незаменимых аминокислот и обеспечивается удовлетворительный рост, хотя предпочтительно, чтобы более 50 масс.% источника белка являлось бы сывороткой. Так, могут использоваться источники белка, основанные на сыворотке, казеине и их смесях, а также источники белка, основанные на сое. В том, что касается сывороточных белков, источник белка может базироваться на кислой сыворотке, или сладкой сыворотке, или их смесях, и может включать альфа-лактальбумин и бета-лактоглобулин в любых желаемых соотношениях.

Белки могут быть интактными или гидролизованными, либо являться смесью интактных и гидролизованных белков. Может быть желательным обеспечение частично гидролизованными белками (степень гидролиза между 2 и 20%), например, в случае младенцев, которые рассматриваются как подверженные риску развития аллергии к коровьему молоку. Если необходимы гидролизованные белки, процесс гидролиза может быть осуществлен так, как желательно, и известным в данной области способом. Например, гидролизат сывороточного белка может готовиться ферментативным гидролизом сывороточной фракции в одну или несколько стадий. Обнаружено, что если используемая в качестве исходного материала сывороточная фракция является по существу не содержащей лактозы, белок претерпевает значительно меньшую степень блокирования лизина во время гидролиза. Это делает возможным снижение степени блокирования лизина от около 15 масс.% общего лизина до менее чем около 10 масс.% лизина, например, около 7 масс.% лизина, что значительно улучшает питательные качества источника белка.

Смесь для питания младенцев может содержать источник углеводов. Может использоваться любой обычно обнаруживаемый в смесях для питания младенцев источник углеводов, например, лактоза, сахароза, мальтодекстрин, крахмал и их смеси, хотя предпочтительным источником углеводов является лактоза. Предпочтительно вклад источников углеводов в полное энергосодержание рецептуры составляет 35-65%.

Смесь для питания младенцев может содержать источник липидов. Источник липидов может быть любым липидом или жиром, являющимся пригодным для применения в смесях для питания младенцев. Предпочтительные источники жиров включают пальмовый олеин, высокоолеиновое подсолнечное масло и высокоолеиновое сафлоровое масло. Также могут добавляться незаменимые жирные кислоты: линолевая и а-линоленовая кислоты, равно как и небольшие количества масел с высоким содержанием арахидоновой кислоты и докозагексаеновой кислоты, такие как рыбий жир или масла, получаемые с помощью микробиологических технологий. Общее содержание жира предпочтительно должно быть таким, чтобы его вклад в полное энергосодержание рецептуры составлял 30-55%. Источник жиров предпочтительно имеет величину отношения содержания n-6-жирных кислот к содержанию n-3-жирных кислот от около 5:1 до около 15:1; например, от около 8:1 до около 10:1.

Смесь для питания младенцев подкисляется с помощью молочной кислоты. В случаях, когда она предназначается для кормления младенцев младше трех месяцев, предпочтительно нахождение молочной кислоты в форме L(+)-энантиомера, поскольку столь маленьким детям давать D(-)-энантиомер или содержащие его смеси не рекомендуется.

Молочная кислота может добавляться к смеси для питания младенцев вместе с другими ингредиентами в периодическом режиме или в ходе непрерывного процесса, хотя предпочтительным является непрерывное добавление. Молочная кислота может добавляться в сухом виде (сухое смешивание), смешиваясь вместе с другими сухими ингредиентами, или же в жидкой форме примешиванием к сухой или к жидкой смеси ингредиентов. В одном воплощении молочная кислота добавляется как во время операций с сухой фазой, так и во время работ с влажной фазой. В одном воплощении молочная кислота может быть смешана в сухом виде с порошкообразной смесью для питания младенцев, но в этом случае необходимо применение молочной кислоты приемлемой микробиологической чистоты, поскольку никакой дальнейшей термической обработке такая смесь подвергаться не будет. Лактат кальция также предпочтительно добавляется посредством сухого смешивания. Подходящие для сухого смешивания молочная кислота и лактат кальция являются коммерчески доступными и предлагаются, например, компанией PURAC biochem, Arkelsedijk 46, Box 21, 4200 АА Gorinchem, Нидерланды.

Смесь для питания младенцев может также содержать в питательно значимых количествах все витамины и минеральные вещества, которые рассматриваются в качестве незаменимых в повседневном пищевом рационе. По некоторым витаминам и минеральным веществам были установлены минимальные требования. Примеры минеральных веществ, витаминов и других питательных веществ, возможно присутствующих в смеси для питания младенцев, включают витамин А, витамин В1, витамин В2, витамин В6, витамин В12, витамин Е, витамин К, витамин С, витамин D, фолиевую кислоту, инозитол, никотиновую кислоту, биотин, пантотеновую кислоту, холин, кальций, фосфор, йод, железо, магний, медь, цинк, марганец, хлор, калий, натрий, селен, хром, молибден, таурин и L-карнитин. Минеральные вещества обычно добавляются в виде солей. Наличие и количества конкретных минеральных веществ и других витаминов будут изменяться в зависимости от предназначения для той или иной группы младенцев.

В случае необходимости смесь для питания младенцев может содержать эмульгаторы и стабилизаторы, такие как лецитин сои, моно- и диглицеридные эфиры лимонной кислоты и т.п.

Смесь для питания младенцев может возможно содержать другие способные оказывать благоприятное воздействие вещества, такие как лактоферрин, нуклеотиды, нуклеозиды и т.п.

Питательная смесь согласно настоящему изобретению может быть приготовлена смешиванием в соответствующих соотношениях белка, источника углеводов и источника жиров. В случае их применения, на данном этапе могут быть включены эмульсификаторы. На данном этапе могут добавляться также витамины и минеральные вещества, но обычно они прибавляются позднее в целях избежания теплового разложения. Любые липофильные витамины, эмульсификаторы и т.п. могут быть перед смешиванием растворены в источнике жиров. Затем для получения жидкой смеси может примешиваться вода, предпочтительно вода, подвергнутая обработке обратным осмосом. Подходящая для содействия диспергированию ингредиентов температура воды составляет от около 50°C до около 80°C. Для получения жидкой смеси могут использоваться имеющиеся в продаже разжижители. Затем жидкая смесь может быть подвергнута гомогенизации.

Для снижения бактериальной нагрузки гомогенизированная жидкая смесь может быть подвергнута термической обработке, например, быстрым нагреванием до температуры в диапазоне от около 80°C до около 150°C в течение времени от около 5 секунд до около 5 минут. Это может быть осуществлено нагнетанием пара, автоклавированием или с помощью теплообменника, например, пластинчатого теплообменника.

Затем жидкая смесь может быть охлаждена до температуры в диапазоне от около 60°C до около 85°C, например, мгновенным охлаждением. К подвергнутому термической обработке раствору в непрерывном режиме при температуре окружающей среды может быть добавлена L(+)-молочная кислота, разведенная в воде в расчете на массу L(+)-молочной кислоты до концентрации 35-65%, предпочтительно 40-60%. pH может контролироваться, например, измерениями в непрерывном режиме, обеспечивая возможность регулировки pH в ходе непрерывного добавления с помощью механизма обратной связи.

Содержание сухих веществ в смеси может удобно регулироваться на данном этапе, сопровождаемом последующими стадиями термической обработки и гомогенизации, выполняемыми под описанными выше условиями.

Затем смесь поступает в подходящее сушильное устройство, такое как распылительная сушилка или установка для сублимационной сушки, и преобразуется в порошок. Порошок должен иметь влажность менее чем около 5 масс.%. С помощью сухого смешивания к порошку может быть добавлен лактат кальция. В одном из воплощений питательная смесь по изобретению содержит пробиотик или смесь различных пробиотиков. Предпочтительно выбирается пробиотик, который является устойчивым к действию задаваемого pH композиции, наиболее предпочтительно пробиотик способен выживать при заданном pH рецептуры в течение по меньшей мере 1 часа, по меньшей мере 2 часов, по меньшей мере 3 часов, по меньшей мере 5 часов, по меньшей мере 12 часов, по меньшей мере 24 часа или по меньшей мере 5 дней. Под «выживанием» подразумевается коэффициент выживания пробиотиков, определяемый как время, в течение которого наблюдается 50% снижение популяции пробиотика. Пробиотик может быть определен как содержащая живые микроорганизмы пищевая добавка, которая оказывает благотворное воздействие на организм животного-хозяина, улучшая его кишечный микробный баланс. Применяемый в настоящей композиции пробиотик может быть выбран из группы, содержащей микроорганизмы родов Bifidobacterium, Lactobacillus, Streptococcus, Enterococcus и Saccharomyces или их смеси, и предпочтительно выбирается из группы, состоящей из Bifidobacterium longum, Bifidobacterium lactis, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus paracasei, Lactobacillus johnsonii, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus salivarius, Lactobacillus reuteri, Enterococcus faecium, Streptococcus sp. и Saccharomyces boulardii или их смесей. Более предпочтительно пробиотик выбирается из группы, содержащей Lactobacillus rhamnosus CGMCC 1.3724 (краткое наименование NCC4007 и LPR), Bifidobacterium lactis CNCM I-3446, предлагаемые в продаже inter alia (в числе прочего) датской компанией Christian Hansen под торговой маркой Bb12 (краткое наименование NCC2818), Bifidobacterium longum АТСС ВАА-999, предлагаемый в продаже японской компанией Morinaga Milk Industry Co. Ltd. под торговой маркой ВВ536, Lactobacillus paracasei CNCM I-2116 (краткое наименование NCC2461 и ST11), Lactobacillus johnsonii CNCM I-1225 (краткое наименование NCC533 и La1), Lactobacillus fermentum VRI 003, предлагаемый в продаже компанией Probiomics (Австралия) под торговой маркой РСС, Bifidobacterium longum CNCM I-2170, Bifidobacterium longum CNCM I-2618, Bifidobacterium breve, предлагаемый в продаже компанией Danisco (Дания) под торговой маркой Bb-03, Bifidobacterium breve, предлагаемый в продаже компанией Morinaga (Япония) под торговой маркой M-16V, и штамм Bifidobacterium breve, предлагаемый Institut Rosell (Lallemand) (Канада) под торговой маркой R0070, Lactobacillus paracasei CNCM I-1292, Lactobacillus rhamnosus АТСС 53103, предлагаемый inter alia финской компанией Valio Оу под торговой маркой LGG, Enterococcus faecium SF 68 и их смеси. Предпочтительным пробиотиком является Lactobacillus rhamnosus CGMCC 1.3724. Другими предпочтительными пробиотиками являются Lactobacillus reuteri, особенно Lactobacillus АТСС 55730, АТСС РТА 6475, АТСС РТА 4659 и АТСС РТА 5289 и, более конкретно, Lactobacillus reuteri АТСС 55730 и L. reuteri DSM 17938, предлагаемые Biogaia АВ (Kungsbroplan 3А Стокгольм, Швеция). Предусматривается, что композиция настоящего изобретения может содержать более одного пробиотика, предпочтительно направленных на достижение различных эффектов воздействия на состояние здоровья, и наиболее предпочтительно синергическое усиление благотворного действия каждого из них на состояние здоровья. Обнаружено, что некоторые из выбранных пробиотиков способны как выживать при задаваемых показателях pH композиции, так и обеспечивать благотворное воздействие на состояние здоровья субъекта. В одном воплощении пробиотики подвергаются обработке с целью придания им способности лучше выдерживать задаваемый pH композиции. Такая обработка может включать нанесение на пробиотики покрытия.

Предпочтительно пробиотик присутствует в композиции в количестве, эквивалентном величине между 10³ и 10¹⁰ КОЕ/г сухой композиции. Это положение включает возможности того, что бактерии являются живыми, инактивированным или мертвыми, или даже присутствуют в виде фрагментов, таких как материалы клеточной оболочки или ДНК. Другими словами, количество бактерий, которые содержит смесь, вне зависимости от того, являются ли они на самом деле живыми, инактивированными, мертвыми или фрагментированными, или же представляют смесь любых из этих состояний, выражается в терминах способности данного количества бактерий образовывать колонии, как если бы все эти бактерии являлись бы живыми. Предпочтительно пробиотик присутствует в количестве, эквивалентном содержанию между 10⁴-10⁹ КОЕ/г композиции, еще более предпочтительно в количестве, эквивалентном содержанию между 10⁶ и 10⁸ КОЕ/г композиции.

В одном воплощении количество присутствующих в питательной композиции изобретения пробиотиков представлено низкой дозой. Под низкой дозой подразумевается содержание в композиции от 10² до 10⁵ КОЕ/г, предпочтительно от 10² до 10⁴ КОЕ/г. Предполагается, что низкая доза пробиотиков может оказывать такой же полезный эффект, как и большая доза пробиотиков, особенно в случае совсем маленьких детей.

Пример 1.

Подкисленная смесь для питания младенцев готовилась с использованием ингредиентов, представленных ниже в Таблице 1.

В соответствии с рекомендованными количествами были добавлены витамины и минеральные вещества.

При 50-60°C были смешаны с водой лактоза, мальтодекстрин, сыворотка и сухое обезжиренное молоко. Раствор был стандартизирован до общего содержания сухих веществ (TS) в 25%. К раствору были добавлены минеральные вещества, после чего он был охлажден до 8°C.

Затем раствор был нагрет до 50°C на масляной бане с двойной оболочкой и в непрерывном режиме к нему были добавлены пальмовое масло, кокосовое масло, рапсовое масло с низким содержанием эруковой кислоты, подсолнечное масло и соевый лецитин. Раствор был нагрет до 105°C, выдержан при такой температуре в течение 5 секунд и затем направлен в испаритель, где был подвергнут концентрированию до общего содержания сухих веществ в 40-50%. Концентрированный раствор направлялся в буферный резервуар. В воде при 4°C была разведена L(+)-молочная кислота до концентрации около 10% и разбавленная кислота была медленно добавлена к концентрированному раствору. Подкисленный концентрированный раствор подогревался до 75°C и гомогенизировался.

Гомогенизированный раствор высушивался распылением и полученный порошок в сухом виде смешивался с витаминами, оставшейся частью минеральных веществ, лактатом кальция и небольшой частью мальтодекстрина.

Полученная порошкообразная смесь для питания младенцев может быть восстановлена водой для получения смеси для питания младенцев, готовой к употреблению. pH восстановленной рецептуры равнялся 5,0.

В представляющем один из вариантов изобретения примере композиция примера 1 дополняется пробиотиком (Lactobacillus reuteri 1793, полученным от Biogaia, Швеция) в количестве 2,10⁷ КОЕ/г сухой композиции. Добавление выполнялась сухим смешиванием.

Пример 2. Микробиологические испытания.

Представленные ниже в Таблице 2 смеси для питания младенцев были подвергнуты микробиологическим провокационным тестам с микроорганизмами Salmonella typhimurium NCTC 12023, Escherichia coli NCTC 9001, Pseudomonas aeruginosa NCTC 10662, Staphylococcus aureus NCTC 651, Bacillus cereus NCTC 7464 и Enterobacter sakazakii FSM 263. Используемые в провокационных тестах организмы были поставлены Агентством по здравоохранению (The Health Protection Agency, Water EQA, Newcastle Laboratory, Institute of Pathology, General Hospital, Westgate Road, Newcastle upon Tyne, NE4 6BE).

Использовались среды для разбавления и выращивания Bacto Brain heart Infusion (BHI - BD237500), Maximum Recovery Diluent (MRD, Oxoid CM733), глюкозо-желчный агар с фиолетовым красным, агар с бриллиантовым зеленым, селективный агар для Bacillus cereus, агар для Pseudomonas (основа) и диск для выделения стафилококков.

Был выполнен засев образцов смеси, а затем проведен их анализ описанным ниже образом. Все смеси готовились посредством восстановления 139 г порошкообразной рецептуры в 900 мл стерилизованной деионизированной воды, нагретой до 40°C. Из каждого восстановленного образца 2×200 мл было асептическим образом распределено по стерильным бутылям Duran. По одной бутыли из каждой пары засевалось одним провокационным штаммом таким образом, чтобы достигнуть концентрации 10² КОЕ/мл

Различные засеянные смеси анализировались чашечным методом приготовлением 1 мл чашек с подходящей средой для выращивания. Чашки выдерживались в течение 24 часов при 37°C или 30°C, затем добавлялись засеянные образцы рецептуры и чашки выдерживались при 37°C или 30°C в течение еще 6 часов.

Подсчет в анализируемых образцах выполнялся спустя 2, 4 и 6 часов инкубации. Был измерен показатель pH остатка (незасеянной смеси).

Из Фигуры 1 видно, что для периода времени в 4 часа рост Е sakazakii при 30°C в смесях согласно изобретению А, В, С и D был ограничен уровнями, сопоставимыми с найденными в случае подкисленной смеси, содержащей только молочную кислоту и имеющей pH 4,6 и подкисленной смеси, имеющей pH 4,7.

Фигура 2 показывает действие четырех смесей на рост при 30°C С. typhimurium. Видно, что смеси согласно изобретению Е, F и G, соответственно, в течение 4 часов ограничивали рост патогенного микроорганизма до приемлемых уровней.

Фигура 3 показывает действие четырех смесей на рост при 30°C. aureus. Видно, что смеси согласно изобретению Е, F и G, соответственно, в течение 4 часов ограничивали рост патогенного микроорганизма до приемлемых уровней.

Фигура 4 показывает действие четырех смесей на рост при 30°C В. cereus. Видно, что смеси согласно изобретению Е, F и G, соответственно, в течение 4 часов ограничивали рост патогенного микроорганизма до приемлемых уровней.

Фигура 5 показывает действие четырех смесей на рост при 30°C P. aeruginosa. Видно, что смеси согласно изобретению Е, F и G, соответственно, в течение 6 часов ограничивали рост патогенного микроорганизма до приемлемых уровней.

Из Фигуры 6 видно, что в смесях согласно изобретению Н, I и J рост Е. coli при 37°C в течение 4 часов ограничивался уровнями, сопоставимыми с обнаруживаемыми в подкисленной смеси, содержащей только молочную кислоту и имеющей pH 4,8.

Из Фигуры 7 видно, что в смесях согласно изобретению Н, I и J рост Р. aeruginosa при 37°C в течение 4 часов ограничивался уровнями, сопоставимыми с обнаруживаемыми в подкисленной смеси, содержащей только молочную кислоту и имеющей pH 4,8.

Пример 3. Регулирование вкуса.

Две смеси согласно настоящему изобретению, одна экспериментальная смесь, приготовленная для сравнительных целей, и коммерчески доступная подкисленная смесь для питания младенцев, предлагаемая в продаже под торговой маркой NAN PELARGON®, были подвергнуты сравнительной сенсорной оценке, выполненной дегустационной комиссией из 13 квалифицированных экспертов. Смеси оценивались при 42°C под контролируемыми условиями на общие вкусоароматические качества и кислотность. Подробные данные по результатам испытаний данных смесей показаны в нижеследующей Таблице 3.

Все данные смеси готовились следующим образом. 1 литр деминерализованной воды был нагрет на водяной бане до 42°C в 1-литровой бутыли Duran. В 400 мл стеклянном лабораторном стакане было взвешено 139 г порошка смеси для питания младенцев. 900 г нагретой деминерализованной воды был влито в 200 мл стеклянный лабораторный стакан. Порошок добавлялся в воду и взбалтывался до полного диспергирования. Дисперсию переливалась обратно в бутыль Duran и выдерживалась на водяной бане при 42°C.

Относительная кислотность четырех смесей для питания младенцев оценивалась экспертами по шкале от 1 (наименее кислый) до 4 (наиболее кислый) с применением в качестве эталона 1 г молочной кислоты в 1 литре воды Evian® (раствор 50 масс.%). Затем к суммам рангов по каждому из продукт был применен критерий Фридмана с общем уровнем значимости 5%. Дегустационная комиссия воспринимала различия в кислотности между этими четырьмя смесями (p>0,0001). Смесь для питания младенцев с самым низким pH (сравнительная смесь) была воспринята как являющаяся наиболее кислой. Следующей по воспринимаемому уровню кислотности рецептурой была NAN PELARGON, затем экспериментальная смесь 1 и далее экспериментальная смесь 2.